特发性肺纤维化患者血清外泌体microRNA表达谱的变化及临床意义

目的 探讨特发性肺纤维化(IPF)患者血清外泌体microRNA表达谱的变化及其临床意义。方法 选择2019年1月至2021年1月就诊于新乡医学院第一附属医院的24例初诊IPF患者作为IPF组,另选择24名年龄、性别与IPF组匹配的健康体检者为对照组。应用肺功能检测仪检测2组受试者肺总量(TLC)、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV₁%pred)、一氧化碳弥散量占预计值百分比(DLCO%pred)等肺功能指标。分离提取2组受试者血清外泌体进行microRNA高通量测序。分析IPF患者外泌体microRNA表达谱变化及其与肺功能的相关性。结果 IPF组患者的TLC、FEV₁%pred、DLCO%pred均显著低于对照组(P<0.05)。2组受试者间共有168种差异表达的microRNA,其中3种microRNA(miR-1-3p、miR-99a-5p、miR-411-5p)涉及磷脂酰肌醇激酶/丝氨酸/苏氨酸激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路且与IPF患者DLCO%pred呈正相关(r=0.575、0....     

SLE患者血清外泌体环状RNA的差异表达分析

目的 采用测序技术分析系统性红斑狼疮(SLE)患者血清外泌体中差异表达的环状RNA(circRNA),为进一步探索SLE发病机制以及环状RNA作为SLE诊断生物标志物奠定基础.方法 选取10例SLE患者(SLE组)及10例正常对照者(NC组)为研究对象,收集外周静脉血并分离血清,提取外泌体,然后提取外泌体中的circR...     

TNF-α刺激的IEC-6细胞源性外泌体miRNAs表达谱差异

目的:分析肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的IEC-6小肠上皮细胞源性外泌体miRNAs的表达差异.方法:以TNF-α(终浓度50 ng/mL)刺激IEC-6细胞4 h(TNF-α-exosome组)后收集上清液,外泌体提取试剂盒结合超速离心法分离提取上清液中的外泌体;...     

非小细胞肺癌外泌体的研究进展

外泌体是具有脂质双层膜结构的纳米囊泡,含有大量生物活性物质。非小细胞肺癌(NSCLC)的外泌体,通过与肿瘤微环境中的其他细胞相互作用,具有调节肿瘤病理进程、血管生成、转移和免疫逃逸等生物学功能。NSCLC外泌体中的特异性蛋白质和微RNA(miRNA)存在差异性表达,可作为诊断和预后的生物标志物,具有较大的潜在临床应用价值。目前,NSCLC外泌体中对肺癌发生、发展起关键作用的成分仍待明确,外泌体的应用标准化等问题是临床应用亟待解决的问题。     

二氧化硅刺激的巨噬细胞源性外泌体miRNA表达谱差异

目的：分析游离二氧化硅(silicon dioxide,SiO2)粉尘刺激的RAW264.7巨噬细胞源性外泌体miRNA的表达差 异。方法：以SiO2(200 mg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞48 h(exo_48 h组)后收集上清液,超速离心法提取上清中的外泌 体;使用透射电镜扫描、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术、蛋白质印迹法鉴定外泌体;提 取外泌体miRNA行高通量测序,比较exo_control组(以不含SiO2粉尘的培养基孵育RAW264.7巨噬细胞48 h)与exo_48 h 组外泌体miRNA表达差异;采用miRanda,TargetScan和starBase 3个软件进行差异miRNA的靶基因预测,对靶基因进行 GO(gene ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析,进一步分析基因的生物学功能。结果：在透 射电镜下,外泌体为不均匀分布的、圆形或椭圆形的、脂质膜包被的、直径30~100 nm的囊泡;粒径检测显示其体积 峰度集中在40~100 nm;蛋白质印迹法显示外泌体标志蛋白质TSG101表达阳性。高通量测序筛选出148个差异表达的 外泌体miRNA。与exo_control组相比,exo_48 h组miR-219c-3p,let-7d-3p,let-7a-1-3p,miR-328-3p,miR-365-3p,miR- 7219-3p等显著上调,miR-378d和miR-5106等显著下调。靶基因预测结果、GO和KEGG分析结果显示靶基因主要富集 在mTOR信号通路、Wnt信号通路、TGF-β信号通路等。结论：SiO2诱导的巨噬细胞产生的外泌体包含丰富的miRNA, 且其表达存在显著差异,这些差异的miRNA可能参与了肺成纤维细胞的活化、上皮间质转化等过程。     

高通量测序筛查特发性牙龈纤维瘤和正常牙龈外泌体miRNAs差异表达

目的利用高通量测序技术筛选出特发性牙龈纤维瘤病牙龈成纤维细胞（IGF-GFs）与正常个体牙龈成纤维细胞（N-GFs）分泌的外泌体中差异表达的miRNAs,通过生物信息学分析预测靶基因和相关信号通路,进而为研究特发性牙龈纤维瘤病的发病机制奠定基础。方法原代培养IGF-GFs和N-GFs,收集细胞培养上清提取外泌体;使用IlluminaHiSeqTM2500测序平台对IGF-GFs和N-GFs来源外泌体中的miRNAs进行测序分析,使用Target Scan、miRDB、miRTar Base、miRWalk四款软件、KEGG数据库对部分表达差异显著的miRNAs进行靶基因预测和KEGG通路预测,并使用实时荧光定量PCR技术验证外泌体中差异性miRNAs的表达。结果 IGF-GFs和N-GFs来源的外泌体中miRNA分别占nc RNA中的0.74%、0.46%;高通量测序筛选出92个显著差异表达的miRNAs,挑选的12个miRNAs共预测出靶基因1304个以及多条信号通路,实时荧光定量PCR技术检测的3个miRNAs在IGF-GFs和N-GFs来源的外泌体中均有差异... 更多     

芯片技术分析卵巢子宫内膜异位症外泌体microRNA表达差异

目的：探讨卵巢子宫内膜异位症（ovarian endometriosis,OEM）外泌体微小RNA（microRNA,miRNA）的表达谱。方法：采用芯片技术对3例OEM患者及3例健康对照者的在位内膜间质细胞外泌体miRNA进行分析,筛选出组间差异miRNA。结果：获得存在差异表达miRNA共12条,其中hsa-miR-6829-5p、hsa-miR-5188、hsa-miR-4430、hsa-miR-584-5p、hsa-miR-4485-5p、hsa-miR-4257在实验组表达上调,hsa-miR-188-5p、hsa-miR-4741、hsa-miR-4516、hsa-miR-1229-5p、hsa-miR-7150、hsa-miR-5787表达下调。对表达差异较大的外泌体miRNA进行靶基因预测及其基因功能（gene ontology,GO）分析和信号通路（pathway）分析,发现靶基因聚集的生物学功能多数参与生物进展过程的调控。结论：OEM患者与健康对照者的在位内膜间质细胞外泌体miRNA存在着差异性表达。差异性表达的miRNA特异性很高,对进一步阐明该疾病的发病机制和寻找新的诊断标记物具有重要意义。     

外泌体微RNA治疗骨关节炎研究进展

骨关节炎是骨科常见的顽固性疾病之一,因其高发病率、高致残率,给患者和社会带来沉重的负担。随着组织工程领域的飞速发展,外泌体治疗骨关节炎的潜力已得到证实。其中,外泌体特异性微RNA（miRNA）可抑制软骨降解和滑膜炎症、促进软骨下骨重塑,从而缓解甚至逆转骨关节炎的病理改变。本文对外泌体miRNA治疗对骨关节炎患者软骨、滑膜、软骨细胞外基质及软骨下骨的影响进行综述,以期为临床上应用外泌体miRNA治疗骨关节炎提供参考。     

不同严重程度哮喘患者血清外泌体中微RNA-21的表达水平及其诊断价值

目的 研究血清外泌体中微RNA-21（miR-21）表达水平及其对哮喘严重程度的诊断效能。方法 以82例未经治疗的哮喘患者和80名健康人作为研究对象。将哮喘患者根据病情严重程度分为4组：间歇状态20例、轻度持续22例、中度持续22例、重度持续18例。用qPCR检测各组血清外泌体中miR-21的表达水平,并进行比较。用Spearman相关分析研究血清外泌体中miR-21表达水平与哮喘严重程度的相关性。通过受试者工作特征（ROC）曲线评价外泌体中miR-21表达水平对哮喘严重程度的诊断效能。结果 间歇状态、轻度持续、中度持续和重度持续的哮喘患者血清外泌体中miR-21表达水平均高于健康对照组,差异均有统计学意义（P均<0.01）,且哮喘患者各组间miR-21表达水平差异也有统计学意义（P均<0.01）。Spearman相关分析结果显示,血清外泌体中miR-21的相对表达量与哮喘严重程度呈正相关（r=0.974,P=0.016 7）。血清外泌体中miR-21对间歇状态、轻度持续、中度持续、重度持续哮喘患者诊断效能的ROC曲线下面积分别为0.657、0.769、0.847、0.916（P均<0.01）。结论 血清外泌体中miR-21表达水平对治疗前哮喘严重程度有较高的诊断效能,有望成为判断哮喘严重程度的一种无创性诊断标志物。     

外源性外泌体在细胞凋亡中的调控作用

外源性外泌体是一种纳米级的生物膜结构,由多种细胞分泌,广泛分布于唾液、血浆、乳汁等体液中, 可直接或间接参与受体细胞及其微环境的生物信息转录。它可通过多种方式高效参与细胞凋亡的发生、发展,在病 毒感染性疾病、肿瘤的发生和发展等生物进程中发挥着重要的作用。     

血清外泌体miR-27a在胃癌中的表达及其临床意义

目的 外泌体近年来成为肿瘤研究中关注的热点，外泌体中的miRNA已经证实在多种肿瘤中发挥重要作用。本研究旨在探讨胃癌患者血清外泌体microRNA-27a的表达变化及其临床意义。 方法 收集40例在2015年1月—2017年12月间就诊于安徽医科大学第二附属医院普外科且前期没有接受过任何治疗的胃癌患者术前术后血清标本，收集同期20例体检健康者血清标本，分离血清外泌体，同时进行RNA提取。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清外泌体miR-27a水平的相对定量含量，比较胃癌组与正常组之间的差异，并比较胃癌组术前、术后外泌体miR-27a表达的差异。对40例胃癌患者血清外泌体miR-27a水平以及临床病理表现(性别、年龄以及肿瘤分级)进行分析，在参照随访资料的基础上，分析患者外泌体miR-27a表达与预后间的联系。 结果 胃癌患者术前血清外泌体miR-27a水平为0.153±0.092，健康体检者为0.823±0.125，两者比较差异有统计学意义(P＜0.001)；胃癌患者术后血清外泌体miR-27a水平为0.505±0.143，与术前比较明显升高(P<0.05)。肿瘤患者血清外泌体miR-27a表达量与肿瘤分级成负相关，Ⅰ/Ⅱ期患者术前相对表达量为0.179±0.102，Ⅲ/Ⅳ期为0.102±0.076(P<0.05)。 结论 胃癌患者血清外泌体中miR-27表达量明显降低，其表达量与肿瘤分级负相关，对于早期筛查胃癌和胃癌的治疗有一定的临床价值。      

外泌体治疗骨关节炎作用机制的研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)系由多种原因引起关节软骨的退行性变及关节边缘骨赘形成,并最终发展为关节功能障碍的关节疾病。目前对于OA的治疗方法主要包括消炎镇痛药物、玻璃酸、针灸理疗、人工关节置换等,但这些方法疗效有限,未取得令人满意的疗效。近年来,随着细胞工程技术的发展,外泌体研究的深入为OA治疗带来了新的希望。外泌体在免疫调节、组织损伤修复、抗炎方面发挥着不可替代的作用,有望成为治疗OA的新策略。本文就外泌体治疗OA相关机制研究进展进行综述。     

外泌体来源RNA在细胞通讯中的作用

细胞间的通信有多种方式,包括接触式和非接触式。外泌体在细胞通讯中发挥重要作用,其介导的细胞间通信并不需要细胞接触,从而可以产生相对较长距离的影响。外泌体包含RNA成分、mRNA和微小RNA,通过外泌体的双层脂质膜包裹,使得其中的RNA信息可以通过循环系统传递至较远的距离。外泌体的mRNA成分与母细胞的mRNA成分大不相同,而微小RNA的成分却在一定程度上反应母细胞微小RNA的水平。本文综述外泌体在细胞通讯方面的作用,侧重于其携带的RNA。     

外泌体PD-L1在非小细胞肺癌患者血清中的表达及其临床意义

目的 探讨外泌体PD-L1 (ePD-L1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达及其临床意义。方法 收集82例NSCLC患者和同期20例健康对照者作为研究对象,对其临床资料进行分析,应用超速离心法提取外泌体,并用透射电镜及径粒检测法鉴定外泌体;提取外泌体总蛋白,并用Western-Blot法检测外泌体中PD-L1的蛋白表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者及健康对照者血清中ePD-L1水平;同时采用ePD-L1与外泌体总蛋白的比值校正ePD-L1 (ePD-L1/pro)浓度。结果 NSCLC患者血清中存在ePD-L1,肿瘤患者血清ePD-L1的蛋白表达及表达浓度均高于健康对照者。血清ePD-L1表达在性别、病理类型上差异均无统计学意义(均P> 0.05);但在年龄、吸烟、肿瘤大小(T分期)、淋巴结转移(N分期)、远处转移(M分期)及肿瘤INM分期中差异均有统计学意义(均P <0.05)。血清ePD-L1/pro表达在年龄、性别、病理类型及吸烟上差异均无统计学意义(均P> 0.05);在T分期、N分期、M分期及肿瘤INM分期中差异均有统计学意义(均P...     

外泌体微小RNA在骨质疏松症中的研究进展

骨质疏松症对老年人的身心健康有巨大的损害,而对于骨质疏松症的诊疗措施具有一定的局限性,目前有较多的研究发现外泌体微小RNA(miRNA)在骨质疏松症的预测、诊断和治疗中具有巨大的潜力。文章对骨髓间充质干细胞,外周血,巨噬细胞,脐带间充质干细胞,血管内皮细胞和脂肪细胞来源等来源外泌体miRNA通过影响成骨,破骨细胞从而调控骨质疏松症的研究进展进行综述。     

血浆外泌体源性miRNA在复发性流产患者中的表达初探

目的：通过提取复发性流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）患者与正常妊娠女性血浆外泌体中miRNA,运用miRNA测序技术筛选出差异表达的miRNA,以探讨其在复发性流产患者中的表达情况。方法：复发性流产患者及年龄、停经天数相匹配的早期妊娠行人工流产女性各3例,收集其清宫术后的肘前静脉血,提取血浆,对血浆外泌体中的 miRNA进行提取、测序,分析miRNA表达谱,并对表达差异较大的miRNA进行靶基因预测及功能分析和信号通路分析。结果：复发性流产患者与正常妊娠女性相比,血浆外泌体中有24个miRNA存在差异表达,其中表达下调的miRNA有11个,表达上调的miRNA有13个。生物功能分析表明这些差异表达miRNA的靶基因可能参与某些妊娠过程从而发挥其功能。结论：复发性流产患者的血浆外泌体中表达的miRNA种类及数量与正常妊娠相比存在差异,此可作为RSA预防诊治中的分子标记物之一,得进一步研究。     

青春期抑郁样行为小鼠脑组织外泌体miRNA测序分析

  目的  探索青春期抑郁样行为小鼠脑组织外泌体微RNA（microRNA, miRNA）差异表达情况。  方法  实验组为慢性社交挫败实验应激模型（chronic social defeat stress, CSDS）敏感型青春期小鼠,采用糖水偏好和旷场实验评估抑郁样行为。使用超速离心法提取脑组织外泌体,经透射电子显微镜、纳米流式检测技术以及蛋白质印记对外泌体形态、粒径大小和表面标志蛋白进行鉴定。采用高通量测序技术评估实验组和对照组小鼠脑组织外泌体miRNAs表达,基于生物信息学进行GO和KEGG通路富集分析。  结果  外泌体颗粒大小在50～100 nm之间、呈典型圆盘状的囊泡结构,检测到外泌体阳性蛋白TSG101和Syntenin。CSDS诱导抑郁样行为的青春期小鼠脑组织外泌体中有13个miRNA显著上调,4个miRNA显著下调,差异表达的miRNA在PI3K-Akt信号通路、轴突导向以及缺氧反应等显著富集。  结论  本研究发现脑组织外泌体miRNA可能参与胰岛素抵抗、神经可塑性、缺氧反应等生物过程调控大脑功能,从而产生抑郁样行为。     

干细胞源外泌体及改良外泌体在治疗急性心肌梗死中的研究进展

干细胞疗法可缩小急性心肌梗死的梗死面积,而干细胞源外泌体可能是干细胞发挥心肌保护作用的主要载体,外泌体内包含脂质、蛋白质、信使RNA、微RNA等,是细胞间传递信息的重要载体,可通过抗凋亡、抗纤维化、抗炎、促进内皮细胞增殖和血管生成在急性心肌梗死中发挥生物学作用.近年来通过各种方法改良干细胞源外泌体,提高了体内移植后外泌...     

外泌体微RNA与肾脏疾病的相关研究

外泌体是由细胞向外界分泌的一种细胞外囊泡,其能抵抗外界的破坏而稳定存在于人体体液中,并参与细胞间的相互交流和信号转导。近年来,外泌体微RNA(miRNA)成为肾脏疾病的研究热点之一,其可作为多种肾脏疾病(原发性肾小球肾炎、糖尿病肾病和狼疮肾病等)诊断和预后的生物标志物。随着研究的不断深入,外泌体miRNA在肾脏疾病的发病机制和治疗方面也表现出潜在的研究价值。但外泌体miRNA在肾脏疾病的诊断和治疗方面仍存在很多不足,未来需进一步研究。