实验性矽肺病变中Ⅰ型及Ⅱ型胶原基因表达的研究

以斑点杂交法测定染石英尘后7、14、21、30及60天时大鼠肺组织中前胶原mRNA水平,与正常肺组织相比,显示在染尘后7天时,proα_1(Ⅱ)mRNA显著增加,14至21天时达高峰。30天后处于平稳增高水平。proα_1(Ⅰ)与proα_2(Ⅰ)mRNA在染尘后14天才开始显著增高,30天时达最高值。表明在砂肺病变中,Ⅰ、Ⅱ型胶原的基因表达都有增加,但在时相上有不同。一种自染石英尘大鼠肺泡巨噬细胞中提取的致纤维化因子可特异地刺激2BS细胞中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因的表达,对矽肺病变中胶原基因的表达有重要的调节作用。放线菌素D可抑制胶原基因的转录。     

矽肺大鼠和病人肺组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维的分布及相对含量的研究

免疫酶标法用于观察肺组织中胶原的分布。显微分光光度法用于研究大鼠与矽肺病人的纤维化组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原的相对含量。染色中应用大鼠及人的抗Ⅰ型与Ⅲ型胶原多克隆抗体。Ⅰ型胶原分布于正常肺泡间隔及间质中。Ⅲ型胶原也在相同的部位存在。在由石英所致的大鼠纤维化肺组织中,Ⅰ型与Ⅲ型胶原在极度扩展的间质中聚集。Ⅲ型胶原是早期纤维化肺中主要增生的胶原。Ⅰ型胶原是纤维化后期主要增生的胶原。在矽肺病人肺组织中也见到同样的现象。染电焊烟尘的大鼠肺,直至180天以前,Ⅲ型胶原为主要积聚的胶原,而在180天以后,Ⅰ型胶原的增加才占优势。     

川芎嗪对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的观察川芎嗪对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法将大鼠随机分为对照组、染矽尘组、川芎嗪组,采用一次性气管内注入矽尘法建立矽肺动物模型,川芎嗪组每日腹腔注射川芎嗪注射液50mg/kg。染尘后按不同时间点取大鼠肺组织制作石蜡切片,采用天狼猩红染色结合偏振光显微镜观察Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,ImageProPlus图像分析系统进行定量分析。结果染矽尘后第3天,Ⅲ型胶原开始增生,染矽尘后第7天,Ⅰ型胶原开始增生,直至染矽尘后第28天,这两种胶原进行性增加。与对照组相比,各时间点染矽尘组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原面积百分比均有不同程度增加,而川芎嗪组Ⅰ型胶原面积百分比在第7、14、28天,Ⅲ型胶原面积百分比在第28天时明显低于染矽尘组。结论矽尘可以诱导大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成增加,两型胶原出现增生的时相有所不同;川芎嗪可以抑制矽尘诱导的Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成。     

手掌参醇提取物处理染矽尘大鼠肺纤维化及肿瘤坏死因子-α表达的变化

目的研究手掌参醇提起物对染矽尘大鼠肺纤维化及组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法将120只Wistar大鼠随机分为对照组、染矽尘组和手掌参醇提取物与SiO2联合处理组(联合处理组)。采用气管暴露法给予染矽尘组和联合处理组大鼠气管内灌注矽尘,对照组大鼠气管内则给予灌注等量生理盐水。联合处理组自染尘后第1天起每日灌胃手掌参醇提取物2ml(10g/kg),对照组和染矽尘组则给予等量生理盐水每日灌胃直至大鼠处死。天狼猩红染色法结合偏振光显微镜观察肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成。制作大鼠肺组织芯片,用免疫组织化学PV法检测组织芯片TNF-α的表达。结果与染矽尘组比较,联合处理组的大鼠各时间点的肺系数明显降低(P<0.01)。与染矽尘组比较,联合处理组各时间点Ⅰ胶原低于染矽尘组(P<0.01);与染矽尘组比较,联合处理组各时间点Ⅲ胶原均低于染矽尘组,14天和21天差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。与染矽尘组比较,联合处理组各时间点肺组织TNF-α的积分光密度低于染矽尘组(P<0.01)。结论手掌参醇提取物可抑制矽尘诱导的大鼠肺纤维化和大鼠肺组织TNF-α蛋白的表达。     

染石英及石棉尘大鼠肺灌洗液SDS-PAGE测定

目的探讨尘肺发病机理。方法采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）技术对染石英（２５ｍｇ／只）或石棉尘（５ｍｇ／只）大鼠支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）进行了测定,并在光镜下观察天狼星红染色肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原分布情况。结果染石英不同时间大鼠ＢＡＬＦ中存在５条分子量分别为９０,６６,６０,２５,１４ＫＤ的蛋白质条带。染石棉大鼠ＢＡＬＦ仅有一条带,分子量为６６ＫＤ。染石英两周时,大鼠肺组织细胞纤维性结节中即有少量Ⅰ型胶原沉积,２个月时Ⅰ型胶原明显增加、粗大。石棉组３个月时肺间质中有Ⅰ型胶原存在。两组均未见明显Ⅲ型胶原。结论染石英大鼠ＢＡＬＦ中不同分子量蛋白质的出现可能对矽肺的发生有一定的促进作用     

蔺草染土尘对染尘早期大鼠肺损伤的实验观察

目的研究蔺草染土尘对染尘早期大鼠肺脏的致纤维化作用。方法采用非暴露式气管注入技术对SD雄性大鼠进行染尘（50mg/只），于染尘后3、6个月取大鼠肺组织做病理观察。结果染尘组病理观察可见，肺泡Ⅱ型细胞增生、脱落，病灶内粉尘沉着，尘细胞、成纤维细胞聚集，可见Ⅰ，Ⅱ级矽结节和少量胶原纤维性变。结论蔺草染土尘对染尘早期大鼠肺部有轻度致纤维化作用。     

染矽尘大鼠血硅及尿硅含量与肺纤维化程度的关系

目的探讨染矽尘大鼠血、尿中硅含量与肺组织中羟脯氨酸、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原含量的关系。方法处理组采用气管灌注法注入矽尘混悬液建立大鼠矽肺模型,对照组采用同样处理但用生理盐水代替矽尘混悬液。两组取第28天大鼠的血液、尿液,经样品前处理后用原子吸收分光光度计检测;大鼠肺组织制作石蜡切片,采用天狼猩红染色法,用偏振光显微镜和图像分析系统对肺组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达进行分析;试剂盒检测肺组织羟脯氨酸含量。结果处理组大鼠血硅、尿硅、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原明显高于对照组(P<0.05),羟脯氨酸虽稍低于对照组,但无统计学意义(P>0.05);血硅、尿硅分别与Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原建立直线回归,有统计学意义(P<0.05),血硅、尿硅分别与羟脯氨酸建立直线回归,无统计学意义(P>0.05)。结论血硅、尿硅对早期矽肺纤维化程度可能有一定的指示意义。 更多还原     

汉防己甲素治疗的矽肺大鼠肺内酸溶性胶原的变化

本研究比较了正常大鼠、矽肺大鼠和汉防己甲素治疗矽肺大鼠肺内酸溶性胶原在含量、羧甲基纤维素柱层析和氨基酸组成等方面的差异。矽肺大鼠肺中总胶原和酸溶性胶原的含量都增高。在酸溶性胶原中出现了与α_1(Ⅰ)不同的α_1(Ⅰ)~b峰,它随肺纤维化的程度而增高。汉甲组的酸溶性胶原中含有大量被降解的胶原片段,包括α_1链的前体。对上述结果作了初步讨论,并试图解释汉甲抑制矽肺纤维化发生的原因。矽肺组织中胶原蛋白大量增加,但人们对其组成特点却了解甚少。不久前,久保等报道了矽肺组织中胶原蛋白的类型。我们对矽肺大鼠肺中胶原的组成也做了一些观察。本文报道对矽肺大鼠,经汉防己甲素(简称汉甲)治疗的矽肺大鼠和正常大鼠肺中酸溶性胶原的含量、类型、羧甲基纤维素柱层析行为及若干组份的氨基酸组成的研究结果。酸溶性胶原是组织中可为稀酸提取的胶原,其主要成份是Ⅰ型胶原[α_1(Ⅰ)]_2α_2,为两种α肽链组成的三链螺旋。期望此项工作能为阐明二氧化矽引起肺纤维化和汉甲抑制矽肺纤维化的机理提供线索。     

烟酸对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原形成的影响

目的 阐明饲料中添加烟酸对染矽尘大鼠早期Ⅰ型、Ⅲ型胶原形成的影响。方法 采用气管暴露法建立矽肺动物模型,高效液相色谱法测定血浆烟酸含量,天狼红染色法结合偏振光显微镜观察Ⅰ型、Ⅲ型胶原的形成,图像分析系统对胶原定量分析。结果 烟酸组不同时点血浆中烟酸含量明显升高,与对照组和矽尘组相比,差异均有显著性。染矽尘后第7天、第28天,与对照组比较,矽尘组大鼠肺组织Ⅰ型胶原阳性区域面积百分比显著增加,而烟酸组Ⅰ型胶原阳性区域面积百分比则明显低于矽尘组。染矽尘后第28天,Ⅲ型胶原阳性区域面积百分比显著高于对照组,而烟酸组Ⅲ型胶原阳性区域面积百分比则显著低于矽尘组。结论烟酸通过抑制Ⅰ型、Ⅲ型胶原的形成,而有效地阻断矽尘诱导的大鼠肺纤维化。     

稀土氧化钕粉尘染毒大鼠不同时间点Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量及IL-12表达的研究

目的探讨稀土氧化钕粉尘暴露对大鼠不同时间点肺组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-12(IL-12)表达的变化。方法选用125只SPF级成年SD雄性大鼠,体重(200±16)g,随机分为染尘组和对照组,采用气管非暴露插管灌注法建立模型,分别用稀土氧化钕粉尘悬液0.8 m L(50 mg/m L)和0.9%生理盐水0.8 m L进行一次性染尘。分别于染尘后第3、7、14、21和28 d各处死15只染尘组和10只对照组大鼠,收集BALF;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别测定染尘组和对照组大鼠BALF上清液中IL-12含量,肺组织分别进行HE染色、天狼猩红染色,运用Image-Pro Plus Version 4.5for Windows TM图象分析系统对肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量进行定量分析。结果稀土氧化钕粉尘致实验大鼠肺组织纤维化过程中可见Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的大量增生,染尘后早期主要以Ⅰ型胶原纤维增生为主。其中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的表达量明显增加,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺组织病理学观察证实,染尘大鼠早期肺组织以炎症反应为主,且随染尘时间的延长炎症反应程度呈现加重的趋势。染尘后不同时间点大鼠BALF上清液中IL-12出现先减少后增加,在第7 d达到最低值后又呈现增加趋势,但均高于对照组(P<0.05)。结论稀土氧化钕粉尘诱导大鼠肺纤维化过程中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量增多,且分布范围扩大。同时BALF上清液中IL-12出现高表达,表明IL-12的含量变化与稀土氧化钕粉尘致大鼠肺纤维化发生发展密切相关。     

稀土氧化钕粉尘染毒大鼠不同时间点Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量及IL-12表达的研究

目的 探讨稀土氧化钕粉尘暴露对大鼠不同时间点肺组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-12(IL-12)表达的变化。方法 选用125只SPF级成年SD雄性大鼠,体重(200±16)g,随机分为染尘组和对照组,采用气管非暴露插管灌注法建立模型,分别用稀土氧化钕粉尘悬液0.8 m L(50 mg/m L)和0.9%生理盐水0.8 m L进行一次性染尘。分别于染尘后第3、7、14、21和28 d各处死15只染尘组和10只对照组大鼠,收集BALF;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别测定染尘组和对照组大鼠BALF上清液中IL-12含量,肺组织分别进行HE染色、天狼猩红染色,运用Image-Pro Plus Version 4.5for Windows TM图象分析系统对肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量进行定量分析。结果 稀土氧化钕粉尘致实验大鼠肺组织纤维化过程中可见Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的大量增生,染尘后早期主要以Ⅰ型胶原纤维增生为主。其中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的表达量明显增加,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺组织病理学观察证实,染尘大鼠早期肺组织以炎症反应为主,且随染尘时间的延长炎症反应程度呈现加重的趋势。染尘后不同时间点大鼠BALF上清液中IL-12出现先减少后增加,在第7 d达到最低值后又呈现增加趋势,但均高于对照组(P<0.05)。结论 稀土氧化钕粉尘诱导大鼠肺纤维化过程中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量增多,且分布范围扩大。同时BALF上清液中IL-12出现高表达,表明IL-12的含量变化与稀土氧化钕粉尘致大鼠肺纤维化发生发展密切相关。     

稀土氧化钕粉尘染毒大鼠不同时间点Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量及IL-12表达的研究

目的 探讨稀土氧化钕粉尘暴露对大鼠不同时间点肺组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素-12(IL-12)表达的变化。方法 选用125只SPF级成年SD雄性大鼠,体重(200±16)g,随机分为染尘组和对照组,采用气管非暴露插管灌注法建立模型,分别用稀土氧化钕粉尘悬液0.8 m L(50 mg/m L)和0.9%生理盐水0.8 m L进行一次性染尘。分别于染尘后第3、7、14、21和28 d各处死15只染尘组和10只对照组大鼠,收集BALF;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别测定染尘组和对照组大鼠BALF上清液中IL-12含量,肺组织分别进行HE染色、天狼猩红染色,运用Image-Pro Plus Version 4.5for Windows TM图象分析系统对肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量进行定量分析。结果 稀土氧化钕粉尘致实验大鼠肺组织纤维化过程中可见Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的大量增生,染尘后早期主要以Ⅰ型胶原纤维增生为主。其中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的表达量明显增加,与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。肺组织病理学观察证实,染尘大鼠早期肺组织以炎症反应为主,且随染尘时间的延长炎症反应程度呈现加重的趋势。染尘后不同时间点大鼠BALF上清液中IL-12出现先减少后增加,在第7 d达到最低值后又呈现增加趋势,但均高于对照组(P<0.05)。结论 稀土氧化钕粉尘诱导大鼠肺纤维化过程中Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维含量增多,且分布范围扩大。同时BALF上清液中IL-12出现高表达,表明IL-12的含量变化与稀土氧化钕粉尘致大鼠肺纤维化发生发展密切相关。     

过量氟对大鼠骨骼Ⅰ型胶原mRNA表达及纤维性状的影响

目的 观察过量氟对大鼠骨骼Ⅰ型胶原mRNA表达的影响和对大鼠骨骼中胶原纤维性状的作用。方法 将雄性Wistar大鼠随机分为6组，每组10只，分别为给氟0．5、1、2个月组及相应的对照组。给氟组饮用含221mg／LNaF的含氟水，对照组饮用蒸馏水。制备α1(Ⅰ)胶原cDNA探针，采用cDNA-mRNA原位杂交方法，检测大鼠骨组织中Ⅰ型胶原，mRNA的改变。采用苦味酸-天狼星红偏振光染色法对骨组织中胶原纤维进行观察。结果cDNA-mRNA原位杂交显示，大鼠给氟0．5个月后，Ⅰ型胶原mRNA水平上升，但在给氟1个月及2个月时，阳性信号减弱。苦味酸-天狼星红偏振光观察显示在肱骨、股骨、肋骨等骨组织中，胶原纤维发生断裂、变短、变细、排列紊乱，含量下降。结论过量氟对骨Ⅰ型胶原mRNA表达有短期增强作用，继而抑制Ⅰ型胶原mRNA合成。胶原mRNA水平下降可能是氟骨症胶原蛋白水平下降的原因之一。过量氟可导致大鼠Ⅰ型胶原纤维正常结构破坏，交联下降。     

松弛素在大鼠矽肺形成过程中肺组织的表达及作用

[目的]探讨松弛素（relaxin）在石英尘诱导矽肺形成中的潜在作用。[方法]建立矽肺体内动物模型和体外细胞模型,在动物模型中应用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR分析肺组织松弛素蛋白及基因表达,在细胞模型中通过酶联免疫法测人胚肺成纤维细胞（HFL-Ⅰ）Ⅰ型胶原分泌量。[结果]松弛素蛋白在大鼠正常肺组织中弱表达,主要定位于Ⅰ型肺泡细胞。大鼠染石英尘（DQ12）后肺组织松弛素蛋白和mRNA表达呈现先上升后下降的趋势,主要定位于Ⅰ型肺泡细胞和巨噬细胞;与对照组相比,染石英尘后第7天松弛素蛋白水平达到最高（P〈0.05）,第14天时无明显差异（P〉0.05）,第28天时明显减少（P〈0.05）。与DQ12组相比,松弛素处理组中HFL-Ⅰ细胞Ⅰ型胶原的生成明显减少（P〈0.05）。[结论]松弛素可以抑制石英尘诱导的肺成纤维细胞胶原合成,可能对石英尘诱导矽肺发生有影响。     

矽肺及汉防己甲素治疗的大鼠肺中——Ⅲ型胶原的免疫荧光研究

本文采用间接免疫荧光技术研究了矽肺大鼠和汉防已甲素(简称汉甲素)治疗矽肺的大鼠肺中Ⅲ型胶原的变化。Ⅲ型胶原分布于肺泡间隔中,在发生矽肺纤维化时,肺泡间隔中Ⅲ型胶原含量高于正常肺泡间隔,但增长程度低于Ⅰ型胶原。Ⅲ型胶原是矽肺胶原纤维组分之一,在胶原纤维之间也有分布。汉甲素治疗后,矽肺纤维化受到抑制。大细胞由矽结节外周向矽结节中心浸润,并吞噬降解Ⅲ型胶原,证明汉甲素有促进胶原分解代谢的作用。     

实验性茶尘肺的研究

实验大鼠经气管滴注含３０ｍｇ茶尘的混悬液，３个月和６个月时分两批处死动物，观察肺的病理改变，发现染尘３个月组的肺湿重均值和肺胶原含量都显著高于对照组，肺组织中可见０～Ⅰ级异物巨噬细胞团；６个月组肺湿重和胶原含量与３个月组比较，无显著差别，但镜下可见Ⅱ级少量胶原纤维增生。茶尘实验组的病理改变较滴注石英粉尘组轻微，且进展缓慢     

PDTC对百草枯致肺纤维化大鼠结缔组织生长因子及Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

目的 观察急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的动态变化及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预效果,探讨PQ致肺纤维化机制及PDTC干预作用.方法 SD大鼠随机分为对照组(6只)、PQ染毒组(56只)、PDTC干预组(46只).染毒组和干预组给予PQ(80 mg/kg)一次性灌胃后2h,染毒组给予等量生理盐水腹腔注射,PDTC干预组给予PDTC(100mg/kg)一次性腹腔注射;对照组给予生理盐水1 ml/kg灌胃后2h,给予等量生理盐水腹腔注射.于不同处理后1、3、7、14、25、56 d蛋白免疫印迹法(Western blot)测定大鼠肺组织CTGF蛋白表达;实时荧光定量多聚酶链式反应(real-time PCR)测定CTGF、Col Ⅰ、ColⅢmRNA表达水平;同时测定肺组织羟脯氨酸(hyp)含量,观察中毒大鼠的肺组织病理变化.结果 染毒组大鼠肺组织CTGF蛋白表达随时间延长而逐渐升高,3～14d升高幅度缓慢,28～56d增幅较大,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).染毒组大鼠肺组织CTGF mRNA表达水平于染毒后1d即明显升高,3～14d表达迅速升高,28～56 d维持在较高水平,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).染毒组染毒后1、3 d Col Ⅰ mRNA表达无明显变化,7d表达略微增强,14～56 d水平大幅度升高,与对照组比较,7～56 d mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);染毒组ColⅢmRNA水平于染毒后1d即开始升高,7d达到高峰,之后呈下降趋势,各时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);Masson染色可见染毒后14～28 d成纤维细胞大量增殖,胶原纤维数量逐渐增多.与染毒组比较,PDTC干预组大鼠肺组织CTGF蛋白表达降低、CTGF、Col Ⅰ、ColⅢmRNA表达下调,相应时点的差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 CTGF表达持续增高;可能通过上调Col Ⅰ、ColⅢ转录水平,增加胶原分泌和基质合成,在PQ所致肺纤维化中起重要作用;PDTC抑制了上述因子的表达,可以减轻PQ中毒大鼠的肺损伤.     

矽肺大鼠和病人肺组织中Ⅰ型胶原的电镜观察

本实验是以电镜观察矽肺大鼠和煤矽肺病人肺坦织中Ⅰ型胶原纤维的结构,並各与其相对照的未纤维化肺中胶原纤维做比较,结果表明:正常鼠肺组织中Ⅰ型胶原分子的长度为270nm,矽肺大鼠结节中的Ⅰ型胶原分子的长度范围为240～270nm,后者与正常胶原分子比,有缩短的趋势。未纤维化的人肺中Ⅰ型胶原分子长度为280～300nm,而煤矽肺病人肺Ⅰ型胶原分子长度为230～280nm,这与在大鼠肺胶原中所见到的结果相类似。说明发生矽肺纤维化病变以后,Ⅰ型胶原在结构上发生了变化。     

雷帕霉素对染尘大鼠肺组织胶原蛋白表达的影响

目的探讨雷帕霉素对染矽尘大鼠肺组织胶原蛋白表达的影响。方法对50只SPF级健康雄性大鼠建立肺纤维化模型,随机分为模型组和雷帕霉素组,两组均一次性气管灌注二氧化硅(250 mg/kg);同时,分别腹腔注射生理盐水和雷帕霉毒[2μg/(kg·d)],均隔天给药,持续28 d,分别于第7、14、28、60、90天,用酶联免疫法测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)含量,用Massson染色观察大鼠肺组织病理组织学变化,用q RT-PCR法测定肺组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原m RNA含量。结果大鼠肺组织Massson染色结果显示,雷帕霉素组大鼠肺纤维化较模型组严重。随着时间的延长,模型组大鼠血清中TNF-α和TGF-β逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05)。雷帕霉素组大鼠血清中TNF-α和TGF-β随着时间的延长而升高,在60 d时降低,90 d时再次升高;除60 d外,其他时间均高于模型组(P0.05)。随着时间的延长,模型组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA逐渐升高,且差异有统计学意义(P0.05)。雷帕霉素组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原m RNA表达随各时间点呈降低-升高波动趋势,其中Ⅰ型胶原m RNA表达在除60 d外的各时间点均高于模型组,Ⅲ型胶原m RNA表达在7、28、90 d高于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论雷帕霉素后期给药可能通过抑制m TOR信号通路而加重染尘大鼠的肺组织纤维化程度。     

脂多糖对增生性瘢痕患者正常皮肤成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达的影响

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对皮肤成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达的影响,以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用。方法取正常皮肤按黄勇等方法行成纤维细胞培养后,分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为0.005、0.010、0.050、0.100、0.500和1.000μg/ml大肠杆菌LPS(E.coli055:B5)培养,对照组为DMEM培养。分别通过MTT比色法及细胞计数法观察各组1～9d吸光度(A)值和细胞数量的变化;并对刺激后细胞进行传代,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达,并以同一个体相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照。结果与对照组比较,0.005～0.500μg/ml组A值增加,于5～9d差异有统计学意义(P<0.05);1.000μg/ml组A值降低,于3～9d差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,0.005～0.500μg/ml组细胞数量显著增加,于1～6d差异有统计学意义(P<0.05);1.000μg/ml组细胞数量显著降低,于2～9d差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,0.005～0.500μg/ml组促进细胞胶原合成,且0.100μg/ml组作用达高峰(P<0.05),1.000μg/mlLPS抑制细胞胶原合成(P<0.05)。LPS刺激浓度在0.005~0.100μg/ml时,促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,抑制胶原酶mRNA表达,且呈一定的剂量依赖性;当LPS刺激浓度为0.500μg/ml,上述作用下降;而当LPS刺激浓度到达1.000μg/ml时,抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,促进胶原酶mRNA表达。LPS刺激浓度在0.100μg/ml时,成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达与同一个体增生性瘢痕组织成纤维细胞近似。结论 LPS对正常人皮肤成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达的直接调节可能是其参与增生性瘢痕形成的重要机制。