高压液相色谱法分离提纯囊虫抗原的研究

<正> 囊虫病的免疫及免疫诊断的重要问题之一是抗原问题,本文首次应用Beckman344M型高压液相色谱仪分离制备囊虫不同部位抗原物质,应用ELISA试验,检测所分离的各不同组分的抗原活性,其结果报告如下。 材料和方法 一、制备粗抗原 按常规收集囊液制备囊液粗抗原(简称CF_0Ag)再分别制出全囊虫粗抗原(CW_0Ag)和头节粗抗原(CS_0Ag),分别测其蛋白含量后-20℃保存。 二、高压液相色谱法分离制备抗原     

猪囊尾蚴液、固相多种抗原对囊虫病免疫诊断效果评价

目的　筛选适合多种寄生虫病流行区使用的特异性较高的囊虫病免疫诊断抗原。　方法　制备猪囊尾蚴各类型液相抗原和固相抗原 ,用ELISA或IEST检测囊虫病流行区患者阳性血清抗体 ,比较各种抗原的敏感性和特异性。　结果　猪囊尾蚴全囊及囊液尿素溶性抗原与水溶性纯化抗原ELISA检测囊虫抗体的特异性差异无显著性 (P >0 .0 5 )。固相抗原IEST有敏感性好、操作简易的特点。　结论　猪囊尾蚴全囊尿素溶性纯化抗原是较理想的囊虫病ELISA诊断抗原 ,有诊断应用价值。固相石腊切片抗原IEST较为适合流行区现场或基层应用。     

包虫和猪囊虫抗原免疫化学性质及酶联免疫印斑技术临床应用研究

用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶联免疫印斑技术分别对人源细粒棘球蚴囊液、棘球蚴砂、猪囊尾蚴囊液抗原组分进行分析研究,并对两种病血清学交叉反应进行了试验。结果显示包虫囊液抗原有29条蛋白区带,有两条糖蛋白带。猪囊虫囊液抗原显示36条蛋白带谱,两条糖蛋白带。棘球蚴砂显示23条蛋白带谱。包虫病人血清与印有包虫囊液抗原的硝酸纤维膜反应显示23条反应带,其中特异带为6条。包虫病人、猪囊虫病人血清与此膜反应显示4条共同反应带。包虫病人血清与棘球蚴砂抗原膜反应显示4条主要特异反应带,包虫病人血清、猪囊虫病人血清与此膜反应显示1条共同反应带。猪囊虫病人血清与猪囊虫囊液抗原膜反应显示22条反应带,其中有5条特异反应带;包虫病人和囊虫病人血清与此膜反应显示3条共同反应带。     

抗囊虫卵黄免疫球蛋白的提取

猪囊虫病是严重危害人体健康和养殖业发展的重要人兽共患病。医学和兽医科技工作者对检测猪囊尾蚴病进行了大量的研究 ,已取得了一定的进展。但在以卵黄IgY作为抗体方面尚未有人尝试。本试验旨在探索一个提取抗囊虫抗体的新方法。为囊虫病的防治及检测开辟一条新的途径。1　猪囊虫抗原的纯化1 1　材料　猪囊虫含生理盐水 15 0ml。1 2　方法1 2 1　囊液的收集　从新鲜囊虫猪肉摘取虫囊 ,然后将虫体取出置灭菌平皿中 ,用生理盐水洗涤 4次 ,吸干多余液体。用剪刀剪破囊壁使囊液自然流出 ,收集囊液于灭菌瓶内 ,置4℃过夜。次日将囊液做 30 0 0…     

包虫与囊虫间共同抗原的实验探讨

本文用E.gCF和C.cCF致敏血球检测了四种抗原(E.gCF、E.gPS、C.cCF和C.cSCW)免疫的小白鼠。结果发现:囊虫头节及囊壁不仅是囊虫特异性抗原的载体而且是与包虫发生交叉反应的共同抗原的主要来源;原头节共同抗原较少。包虫囊液特异性抗原性比囊虫囊液要强。     

ELISA检测脑囊虫病人脑脊液循环抗原

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑囊虫病人循环抗原(CAg)一些学者已做了不少工作。我们于1990年用 ELISA 检测瞄囊虫病人脑脊液 CAg 获得了较好的效果。一、材料与方法(一)抗原制备自新鲜病猪肉摘取囊尾蚴,抽取囊液,经离心和上清液透析后为抗原,保存于-20℃备用。(二)兔抗囊尾蚴抗体制备取囊尾蚴囊液抗原多点注射健康兔,效价在 ELISA 1∶5000时,取血分离血清,分装冰冻干燥,置于-20℃备用。(三)脑脊液(CSF) 脑囊虫病患者的 CSF 均采自本所根据临床症状、皮下结节活检及头颅 CT 扫描等确诊的住院病人,共68份。其他脑部疾病(病毒性脑炎、脊     

ELISA法间接检测囊虫患者血清特异抗原的探讨

目的 探讨简便的检测囊虫抗原的方法。方法 囊液抗原包被酶标板，ELISA法检测待检血清与含ELISA法1：8( )的囊虫抗体兔血清的混合液的抗体，滴度低于1：2(#)为阳性。结果 囊虫患者阳性率在82．69％-85．37％之间。讨论囊液抗原间接检测囊虫患者血清特异抗原结果稳定，方法简便，临床符合率较高。     

人体囊尾蚴抗原在临床试验中应用价值的探讨

目前 ,在囊虫病的临床血清学诊断试验中所用的抗原均采自猪体囊尾蚴。为探讨人体囊尾蚴抗原在临床试验中的应用价值 ,我们进行了下列试验。材料和方法1　抗原的制备　在无菌条件下 ,切除已确诊的人体皮下囊虫结节 ,置生理盐水中 ,洗涤数次。用 1ml的皮试针吸取囊液放入离心管中 ,2 0 0 0 r/min离心 2 0 m in后收集上清液 ,放入透析囊内置 4℃ ,以生理盐水透析 48h。然后测其蛋白含量(4 0 2 μg/ml) ,放 - 2 0℃ ,保存备用。2　试验血清　囊虫病病人血清 10 1份 ,均经囊虫血凝和囊虫酶标反复筛选。正常人血清 145份 ,采自济宁师专学生。3　结…     

快速酶联免疫吸附试验检测脑囊虫病人血清抗体的实验观察

1986年我们在常规ELISA基础上进行改进,建立块速ELISA方法,一次试验仅需1h。在脑囊虫病临床诊断中,取得了满意结果。 材料和方法 一、抗原 抽取猪囊尾蚴囊液,经透析、离心、收集上清液,置低温冰箱保存备用。 二、试验血清 脑囊虫病人血清选择病史及临床症状可疑,间接血凝试验阳性者。阳性对照血清是用囊液抗原感染健康家兔制备出兔抗囊血清。阴性对照血清采自血库献血员。 三、酶结合物(一)酶标羊抗人IgG:自制。     

斑点ELISA和间接血凝试验诊断囊虫病的比较

我们应用Dot-ELISA和间接血凝试验(IHA)同时检测囊虫病患者血清。 材科和方法 抗原制备 猪囊尾蚴囊液先以3000rpm离心10min,再经10000rpm离心30min,上清液即为囊液粗抗原,蛋白含量为8.49mg/ml。     

猪囊虫体表抗原用于 ELISA 诊断囊虫病的研究

应用猪囊尾蚴体表抗原对66例临床确诊的囊虫病人用 ELISA 进行检测,同时以囊液粗抗原作比较观察。阳性率分别为95.5%和68.2%,两者差异非常显著(P<0.005)。两种抗原对同批血清的反应强度也呈现明显差异(P<0.05)。用囊虫体表抗原和囊液粗抗原同时检测50名健康人血清,假阳性率分别为2%与12%;两种抗原与10例包虫病人血清分别有8例和4例出现交叉反应。     

滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究

目的　建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法。方法　应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb) ,一株滴于硝酸纤维素膜上 ,另一株与胶体金结合为探针 ,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原 (CA)的滴金免疫测定法 ,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应 ,10min内即可用肉眼观察结果。对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测 ,确定本法的最低抗原检出量 (0 .4 5ng/ml)。将本法与ELISA作了比较。 结果　对 78例囊虫病患者血清进行检测 ,循环抗原阳性率为 87.18%。其中活动型脑囊虫病患者 5 2例 ,循环抗原阳性率为 98.0 8% ;非活动型脑囊虫病患者 2 0例 ,循环抗原阳性率为 6 5 .0 0 % ;单纯皮肌型囊虫病患者 6例 ,循环抗原阳性率为 6 6 .6 7%。 4 0份健康人血清仅有 1例 (2 .5 0 % )出现假阳性 ,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及 2 3例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应。该方法检出最低猪囊尾蚴囊液抗原量为 0 .4 5ng/ml。本法与ELISA的符合率为 98.19%。结论　DIGFA简便、快速 ,结果客观 ,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高 ,特异性强 ,值得进一步推广应用。     

猪肉和人皮下猪囊虫囊液抗原的免疫印迹分析

应用SPA-ELISA、SDS-PAGE和IB(免疫印迹)技术对猪肉及人皮下结节内猪囊虫囊液的抗原成份进行了分析比较。结果表明,凝胶中考马氏亮蓝和氨基黑染色所示的蛋白条带以及血清抗体所识别的特异性抗原成份中,取自猪肉中的囊虫囊液较取自人体的囊液含量高,免疫反应性强。两种抗原用于SPA-ELISA诊断未见有明显差异。     

猪囊尾蚴囊液抗原的免疫金电转移印斑技术分析

猪囊尾蚴囊液抗原的免疫金电转移印斑技术分析山东省寄生虫病防治研究所（济宁２７２１３３）刘玉冰，尹舜，张洪花，刘克义，李桂萍，葛凌云诊断用抗原的纯度严重影响着囊虫病免疫诊断的特异性及敏感性，为进一步寻找猪囊尾蚴囊液抗原的特异性部分，我们应用电转移印斑技...     

三种不同抗原做ELISA诊断人体囊虫病的研究

ELISA诊断人体囊虫病,是目前较敏感的血清学方法。然而,所用猪囊虫囊液抗原的制取较困难。为此,我们选择了猪带绦虫的成虫成节与未成节、孕节和囊虫全虫三种抗原组分,用间接ELISA的方法作了比较观察。试图找到一种敏感性和特异性较好、易於制取,可大量获得的抗原。     

免疫亲和层析法提取猪囊尾蚴抗原的鉴定及其在血清学诊断中的应用价值

本文采用免疫亲和层析法,提取与自然感染猪囊虫的猪血清IgG反应的猪囊虫抗原。所提取头节抗原、囊壁抗原和囊液抗原的Desc-PAGE区带分别为7、13和10条,其中囊液PAS染色显示3条阳性带(层析前为4条);SDS-PAGE区带分别为12、15和13条。相对分子量为65、53、40和30～29KDa的抗原含量最多,免疫原性最强。提取的抗原应用于免疫电泳,可提高其敏感性。     

猪囊尾蚴蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦分析

猪囊尾蚴粗抗原在进行人体囊虫病的免疫诊断中有比较好的效果。但猪囊尾蚴抗原成分复杂,为了进一步提高阳性率,减少交叉反应,需要纯化抗原,分离出特异的抗原组分。我们用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和薄层水平等电聚焦(IEF)对猪囊尾蚴的囊液、头节囊壁和全囊抗原蛋白质组分进行了比较分析。     

检测血清、脑脊液中循环抗原用于脑囊虫病诊断及疗效评估的研究

以猪囊尾蚴囊液抗原免疫家兔制备抗体,用常规ELISA法和斑点ELISA法(Dot-ELISA分别检测脑囊虫病人血清和脑脊液(CSF)中循环抗原(CAg),结果两法用于检测的敏感性与特异性相近。以Dot-ELISA法检测,脑囊虫病人血清和(CSF中CAg检出率分别为72.2％和77.7％,特异性为93.7％。吡喹酮治疗后,CSF中循环抗原消失较血清中明显缓慢,2疗程治疗后CSF中CAg检出率仍达74％,而血清中CAg检出率为40.7％,说明常规吡喹酮治疗后脑囊虫较外周组织中囊虫死亡缓慢,因此治疗后检测CSF中CAg更能判定疗效。     

金标特异抗原单克隆抗体斑点免疫金染色用于检测脑囊虫病循环抗原的研究

应用金标记猪囊尾蚴囊液抗原为探针,以抗猪囊尾蚴抗原的McAb为联桥,建立了非常规Dot-IGS用于检测脑囊虫病患者CAg的方法,用4G_2McAb检测84例脑囊虫病人脑脊液(CSF),CAg阳性率为88.09％。检测63例其他疾病患者,出现2例假阳性。以1F_(11)McAb检测14例脑囊虫病人,13例检出CAg,阳性率为92.86％。检测其他疾病患者36例,均为阴性。用4G_2与1F_(11),株McAb可分别检出最小抗原量为1ng/ml和0.25ng/ml。本法敏感、特异、操作简单,可用于脑囊虫病的诊断。     

猪囊尾蚴的表面蛋白及其抗原性的初步测定

近年来有关猪囊尾蚴抗原的研究证实,其抗原可分为虫体和囊液抗原,成分极为复杂。作者在对囊虫抗原进行纯化研究的过程中发现,囊虫体表存在一定量的蛋白质,可经漂洗后脱离虫体。为探讨这种“表面蛋白”的来源和性质,本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGESDS),对囊虫漂洗液蛋白进行初步分离鉴