脂氧素A4对脂多糖攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar type Ⅱ penumonoeyte,ATⅡ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)5的影响.方法 对大鼠ATⅡ细胞进行分离、纯化,以1 μg/mL的LPS刺激ATⅡ 4 h建立LPS攻击ATⅡ细胞模型.将ATⅡ随机分为:空白对照(无血清的培养基不含任何药物)组;溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;LPS(1μg/mL)组;LXA4(1×107mol/mL)组;LPS+LXA4组.用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠ATⅡ中AQP5的信使核糖核酸(mRNA)的变化,免疫组织化学方法(IHC)检测ATⅡ中AQP5蛋白表达.结果 1μg/mL的LPs刺激ATⅡ4 h后,ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P<0.01),而LPS+LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS组明显增高(P<0.01),且LXA4组ATⅡ中AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也明显增高(P<0.01).结论 大鼠ATⅡ上表达有AQP5,LXA4能促进AQP5 mRNA和蛋白表达上调,提示LXA4可能通过上调AQP5的表达起到促进肺泡水肿液清除作用.     

脂氧素A4对肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白1,3,5的影响

目的 探讨脂氧素A4(LipoxirA4,LxA4)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)攻击的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡpenumonocyte,AT Ⅱ)水通道蛋白(aquaporin,AQP)1,3,5的影响.方法 每次取SPF级健康SD雄性大鼠,体质量200～250 g一只,对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,鉴定,得到纯度为≥90%的肺泡Ⅱ型上皮细胞,将细胞随机分为:①溶剂对照(乙醇,0.7μL/mL)组;②空白组(无血清的培养基不含任何药物);③LXA4(1×10-7moL/mL)组;④LPS(1μg/mL)组;⑤LPS+LXA4(1μg/mL LPS+1×10-7moL/mL LXA4)组.药物刺激4 h后用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA的表达,免疫组织化学方法(IHC)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5蛋白的表达.试验重复6次.采用方差分析进行统计学处理.结果 RT-PCR和免疫组织化学法结果显示,用1 μg/mL的LPS刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞4 h后ATⅡ上AQP1,AOP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组明显减低(P＜0.01),而LPS+LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较LPS模型组有明显增高(LPS+LXA4,AQP1:0.647±0.132,AQP3:0.900±0.856,AQP5:0.879±0.058;LPS.AQP1:0.297±0.133,AQP3:0.512±0.113,AQP5:0.647±0.110;P＜0.01),且LXA4组中ATⅡ上AQP1,AQP3和AQP5的mRNA和蛋白表达较空白组也有明显增高(LXA4,AQP1:0.539±0.142,AQP3:0.818±0.176,AQP5:0.841±0.066;Blank Control,AQP1:0.518±0.139;AQP3:0.138±0.136,AQP5:0.766±0.066;P＜0.01).结论 大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上表达有AQP1,AQP3和AQP5,LXA4能促进脂多糖攻击的肺泡Ⅱ型上皮细胞上AQP1,AQP3和AQP5mRNA和蛋白表达上调.     

Na+-K+-ATP酶γ亚基的研究进展

以往研究已发现Na+-K+-ATP酶含有α和β两种亚基,后来又发现了第3种亚基,即γ亚基.为了对γ亚基有一个较为全面的认识,现对γ亚基的发现过程、研究简况、生理功能、表达调节等基本情况作一综述.     

红细胞溶血液Na+-K+-ATP酶活力测定

目的建立利用红细胞溶血液测定红细胞Na+-K+-ATP酶活力测定方法.方法用蒸馏水将红细胞破坏,测其血红蛋白含量及红细胞Na+-K+-ATP酶活力,并与用红细胞膜酶测定法进行相关性比较.结果健康成人红细胞溶血液Na+-K+-ATP酶活力为4.345±1.175μmol Pi/gHb@h;两种方法的相关系数为0.685.结论利用红细胞溶血液进行红细胞Na+-K+-ATP酶活力测定具有操作简便,结果准确的特点,更适合于一般实验室开展.     

脂氧素A4对内毒素性肺损伤小鼠的保护作用

目的探讨脂氧素A4对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤的影响。方法36只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组、脂氧素A4组、ZnPP组、内毒素组、脂氧素A4治疗组(LXA4 LPS)和ZnPP 脂氧素A4治疗组(ZnPP LXA4 LPS),每组6只。雾化吸入脂多糖8h后,测定肺泡灌洗液白细胞计数、中性粒细胞计数和TNF-α含量。测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、HO-1的蛋白表达和活性。结果与LPS组比较,脂氧素A4治疗组肺组织中性粒细胞浸润减少,MPO活性、TNF-α浓度均降低(P<0·01),肺组织损伤减轻,而HO-1的蛋白表达和活性明显升高,HO-1抑制剂ZnPP减弱脂氧素A4的保护作用。结论脂氧素A4能减轻内毒素诱导的急性肺损伤。     

脂氧素A4对内毒素诱导小鼠肺内炎症反应的影响

目的 探讨脂氧素A4对脂多糖诱导小鼠急性肺内炎症反应的影响。方法 36只雄性C57BL／6小鼠，随机分为对照组、脂氧素A4组、ZnPP组、内毒素组、脂氧素A4治疗组和ZnPP＋脂氧素A4治疗组，每组6只。雾化吸入脂多糖8h后，测定肺泡灌洗液总蛋白浓度和TNF—α含量，测定肺组织湿干质量比值、丙二醛（MDA）活性和一氧化氮（NO）浓度，免疫组化测定肺组织HO-1的蛋白表达。结果 与LPS组比较，脂氧素A4治疗组肺水肿减轻，肺泡灌洗液总蛋白浓度、TNF—α含量、肺组织MDA活性、NO含量均降低（P〈0.01），而HO-1的蛋白表达明显升高，肺组织损伤减轻。HO-1抑制剂ZnPP减弱脂氧素A4保护作用。结论 脂氧素A4能减轻内毒素诱导的肺部急性炎症反应，HO-1介导其保护作用。     

低能量He-Ne激光血管内照射对Na+-K+-ATP酶活力的影响

低能量He-Ne激光血管内照射已广泛应用于临床,它具有多方面的生物学效应.笔者采用此方法治疗患者25例,并观察了其红细胞膜Na+-K+-ATP酶活力的变化,且与正常健康人进行了对照,结果报道如下.     

内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞水通道蛋白5的影响

目的:观察内毒素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(typeⅡpenumonocyte)水通道蛋白5(aquaporin-5)的影响。方法:对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、纯化,用1μg/mL的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞4h,并将肺泡Ⅱ型上皮细胞随机分为正常对照组和LPS组。分别采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组织化学法(IHC)检测肺泡Ⅱ型上皮细胞中水通道蛋白5的表达。结果:RT-PCR结果显示LPS刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞后水通道蛋白5的信使核糖核酸(mRNA)水平明显低于正常对照组(P<0.01)。免疫组织化学法显示大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上水通道蛋白5呈阳性染色,且LPS刺激后肺泡Ⅱ型上皮细胞上水通道蛋白5阳性细胞率显著低于正常对照组(P<0.01)。结论:大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上存在水通道蛋白5,且水通道蛋白5表达减少可能与LPS引起的肺水肿有关。     

高氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Notch受体的影响

目的 检测Notch 1在肺泡Ⅱ型上皮细胞(ACEⅡ)与肺成纤维细胞共培养的高氧损伤模型中表达的变化,初步探讨Notch信号在高氧肺损伤中的作用,为临床防治新生儿急、慢性肺损伤提供理论的依据.方法 Spragne Dawkey雌鼠12只,体质量200～220 g,雄鼠3只,220～250 g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供.将共培养的AEC Ⅱ随机分为高氧组和对照组.高氧组按3L/nlin通入950 ml/L O2和250 ml/L CO2,10 min后,立即用封口胶密封培养板,置于37℃、50 ml/L CO2培养箱.于给氧后24、48、72、96 h,收获各组细胞,测氧仪检测培养瓶中的O2体积分数,将低于900mi/L O2的标本弃去.免疫组织化学法鉴定细胞,台盼蓝拒染实验计算细胞纯度,确认共培养造模成功.每24 h更换培养基并给氧.每一时间点同时设对照组,置于37℃、50 ml/L CO2培养箱中培养.NTT法检测AECⅡ增殖活力,绘制生长曲线;免疫组织化学法定位Notch1蛋白;荧光定量PCR检测noteh1 mRNA;流式细胞术双标记法检测AEC Ⅱ、AEC I细胞百分率.结果 免疫组织化学法显示高氧组Notch1活化人核受抑;高氧组各时间点Notch1 mRNA分别下降为对照组的0.43、0.29、0.11、0.03倍(置信限95%),通氧后AECⅡ百分率显著降低[24 h高氧组vs.对照组:(68.92±6.88)%vs.(90.35±4.01)%,P=0.006;48 h高氧组vs.对照组:(38.03±3.27)%、vs.(61.47±4.81)%,P=0.000;72 h高氧组vs.对照组:(20.13±4.45)%vs.(52.05±3.35)%,P=0.000;96 h高氧组vs.对照组:(8.17±1.99)%vs.(52.59±2.93)%,P:0.000].AEC I百分率除96 h外均增高[24 h高氧组vs.对照组:(0.1l±0.03)%vs.(0.01±0.01)%,P=0.006;48 h高氧组vs.对照组:(49.73±3.45)%vs.(16.13±2.13)%,P=0.000;72 h高氧组vs.对照组:(52.43±3.14)%vs.(5.98±0.95)%,P=0.000;96 h高氧组vs.对照组:(19.85±3.26)%vs.(29.03±3.16)%,P=0.0007].结论 高氧可抑制AECⅡNotch1受体的活化,引起AECⅡ增殖减弱,转分化异常.研究如何调控Notch信号通路将为修复肺泡上皮,恢复其正常生理功能打开新思路.     

男性不育患者AsAb及精液中No水平与Na+-K+-ATP酶检测的临床评价

目的探讨抗精子抗体(AsAb)及精液中一氧化氮(NO)水平Na+-K+-ATP酶活性与男性不育的关系。方法分别采用ELISA法、硝酸还原酶法、钼蓝分光光度法测定132名男性不育患者及56名正常生育男性血清AsAb(IgGI、gM、IgA),精液中NO水平及Na+-K+-ATP酶活性。结果男性不育组AsAb阳性率37.12%,显著高于正常生育组3.57%(P<0.0 1);男性不育组精液中N0水平151.6±29.7μmol/L,显著高于正常生育组78.9±23.5μmol/L(P<0.01);男性不育组精液中Na+-K+-ATP酶活性为24.42±8.47μmol Pi/mg(Prot).h-1,显著低于正常生育组46.63±9.41μmolPi/mg(Prot).h-1(P<0.05)。结论血清AsAb是男性不育的确诊指标之一,精液中高水平NO与低Na+-K+-ATP酶活性可能是导致男性不育的原因之一。     

次声作用后大鼠心肌细胞内钙离子变化与L型钙通道、Ca2＋-ATP酶及Na＋-K＋-ATP酶变化的关系

目的：观察不同时间次声作用后大鼠心肌细胞钙离子变化与L型钙通道、Ca^2＋-ATP酶及Na^＋-K^＋-ATP酶变化的关系. 方法：实验于2005-04/2006-08在解放军第四军医大学西京医院次声实验室完成.①实验分组：选择健康雄性SD大鼠32只,按随机数字表法分为4组,每组8只.次声暴露1,7,14 d组（大鼠置于5 Hz/130 dB次声舱中,次声作用2 h/次,1次/d）,正常对照组（不予次声暴露）.②实验评估：测定大鼠心肌细胞内钙离子荧光强度,作为反映钙离子浓度的指标;测定L型钙通道mRNA的表达;测定Ca^2＋-ATP酶及Na^＋-K^＋-ATP酶活性. 结果：①随着次声作用时间延长,大鼠心肌细胞钙离子浓度和L型钙通道mRNA的表达明显高于正常对照组（P＜0.01）.②次声暴露1 d组大鼠心肌细胞Ca^2＋-ATP酶及Na^＋-K^＋-ATP酶的活性显著高于正常对照组（P＜0.01）,次声暴露7 d与14 d组大鼠心肌细胞Ca^2＋-ATP酶及Na^＋-K^＋-ATP酶的活性显著低于正常对照组（P＜0.01）. 结论：5 Hz/130 dB次声引起大鼠心肌钙离子浓度的时间依赖性变化,这种变化可能与L型钙通道、Ca^2＋-ATP酶及Na^＋-K^＋-ATP酶的活性变化有关.     

有氧运动对大鼠骨骼肌线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶及线粒体肿胀的影响

背景:研究表明有氧运动可提高线粒体功能,但在不同时期的作用特点还不明确.目的:观察不同周期有氧运动对大鼠骨骼肌线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶以及线粒体肿胀的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常对照组,有氧运动2,4和6周组.正常对照组不进行有氧运动,其余3组则参照BedfordTG标准,采用跑台运动方式,建立有氧运动模型进行相应的运动周期锻炼.测定各组大鼠骨骼肌线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性以及线粒体肿胀程度.结果与结论:有氧运动2周组各指标与对照组比较无差异.有氧运动4和6周组线粒体Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性均增高(P<0.05),线粒体肿胀程度降低(P<0.05).实验结果表明,有氧运动可保护线粒体Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶的活性,提高线粒体功能,但需要一定的时间积累.     

谷氨酰胺抑制内毒素诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞TNF-α释放

目的 研究谷氨酰胺(Gin)调节内毒素(LPs)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)肿瘤坏死因子(TNF)-α分泌及谷胱甘肽(GSH)在其中的作用.方法 原代培养成年雄性SD大鼠AECⅡ细胞,原代培养24 h后,分为空白对照、10.0 mmol/L Gin,1 μg/mL LPS、LPS+(0.5、2.0和10.0 mmol/L)Gln六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,Gln在LPS刺激前8 h加入;另一组实验分为l μg/mL LPS,LPS+10.0 mmol/L Gln,LPS+100 μmol/L丁硫氨酸哑砜胺(BSO)、LPS+Gln+(1、10和100 μmol/L)BSO六组,每组3个孔.LPS刺激24 h,BSO和Gln在LPS刺激前8 h加入.以二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定细胞内GSH浓度,酶联免疫(ELISA)法测定细胞上清TNF-α水平.统计学方法用方差分析(LDS-t检验)比较各组间差异.结果 谷氨酰胺可以提高LPS诱导大鼠AECⅡ细胞的GSH浓度,降低TNF-α的水平,其作用随浓度的增加而增加,在10 mmol/L浓度最为显著,GSH水平从(50.69±3.04)pmol/mgcell上升到(126.74±7.13)pmol/mg cell(P<0.01),TNF-α水平从(1104.5±48.8)pg/mL下降到(329.67±48.27)pg/mL(P<0.01);同时,谷氨酰胺的作用可以被10 μmol/L以上浓度BSO显著阻断(P<0.01).结论 谷氨酰胺可以抑制LPS诱导的大鼠AECⅡ细胞TNF-α的释放,其作用可能是通过促进GSH的合成而实现的.     

蒿甲醚对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA的影响

目的:蒿甲醚除了具有良好的临床治疗作用外,对正常组织有极大的副作用。实验拟观察蒿甲醚对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响。方法:实验于2005-09-20/2007-03-10在山东省泰山医学院生命科学研究所、中心实验室和机能实验室完成。①实验材料:蒿甲醚购自昆明制药厂,分析纯,使用前先进行预处理,处理方法:研磨后用溶液配成1g/L的母液,超声助溶解后供实验用。Wistar大鼠70只,体质量(70±15)g,雌雄不拘,由山东大学医学院实验动物中心提供。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法:将大鼠随机分为普通饲料对照组(n=10)和实验组(n=60),实验组分6个亚组,分别在饲料中加入0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,3.2mg/kg的蒿甲醚。采用单细胞凝胶电泳技术观察大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA的改变。结果:70只大鼠,饲养过程中实验组死亡6只,死亡原因为饲料添加蒿甲醚造成。当饲料中的蒿甲醚浓度为0.1mg/kg时,大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA损伤率与对照组相比,差异无统计学意义;饲料中的蒿甲醚浓度超过0.2mg/kg时,大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞DNA损伤率明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义。且损伤程度与饲料中蒿甲醚含量呈正相关。结论:当饲料中的蒿甲醚浓度超过0.2mg/kg时,蒿甲醚可在一定程度上改变肺泡Ⅱ型上皮细胞的DNA生物学特性。且随着蒿甲醚浓度的升高,这种损害更为明显。     

灵异胶囊对糖尿病大鼠坐骨神经Na+-K+ATP酶活性的影响

目的观察中药灵异胶囊对糖尿病大鼠坐骨神经Na+-K+ATP酶活性的影响及作用机制。方法采用链脲酶素(STZ)诱发的迟发型糖尿病大鼠作为动物模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、灵异胶囊组和西药弥可保组,并以正常大鼠作为对照,治疗10周。结果模型组大鼠坐骨神经Na+-K+ATP酶活性明显降低,同时血液流变学(全血粘度、血浆粘度、纤维蛋白原)亦明显异常。治疗后灵异胶囊组Na+-K+ATP酶活性明显增加,血液流变学明显改善,其疗效优于西药弥可保(P<0.05)。结论中药灵异胶囊可改善局部血液动力学,提高神经组织Na+-K+ATP酶活性,改善局部神经的能量代谢和营养代谢。     

骨骼肌肌浆网Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性在不同训练条件下的变化

背景:Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶存物质运送、能量转换以及信息传递方面具有重要作用.肌浆网在肌肉兴奋-收缩耦联过程中起关键作用,与运动性骨骼肌疲劳的发生密切关.目的:通过建立SD大鼠有氧和无氧训练模型,观察不同训练负荷条件对大鼠骨骼肌肌浆网Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性的影响.方法:参照Bedford TG标准,建立有氧和无氧运动大鼠跑台训练模型,有氧运动组采用递增负荷训练,无氧运动组采用高速间歇训练,正常对照组大鼠正常笼内生活,不运动.各组动物训练结束后用超速离心法提取大鼠骨骼肌肌浆网,紫外分光光度汁检测大鼠骨骼肌肌浆网Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性.结果与结论:训练4周后,两个运动组大鼠骨骼肌肌浆网Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性逐渐升高(P<0.05);训练6周,仅有氧运动组升高(P<0.05),无氧运动组则活性降低(P<0.05).结果提示有氧训练更有利十保护大鼠骨骼肌肌浆网Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性,但需要一定的时间累积.     

肺泡Ⅱ型上皮细胞形态与功能的研究进展

肺泡 型上皮细胞 (type alveolarepithelial cell or type pneumocyte,AT )是一种多功能细胞 ,对维持肺泡结构和功能有重要意义。其主要功能有 :1增殖功能 :它是 型、 型上皮细胞的祖细胞 〔1 ,2〕,在正常细胞更新和损伤修复过程中 ,AT 可以分化为 型细胞 ,也可通过有丝分裂补充自身的数量 ,因此被认为是肺泡上皮的干细胞〔3,4〕 ;2合成和分泌肺表面活性物质 (pulm onarysurfactant,PS) ;3维持肺泡内外液体平衡 ;4近年还发现 AT 具有免疫调节的作用 〔5〕。AT 的位置比较特殊 ,容易受到来自空气和血液两方面的损害。空气中的各种有…     

高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及降钙素基因相关肽的保护作用

目的 观察高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用.方法 将原代分离培养的孕19 d早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,实验随机分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21%的空气和60%的氧气中暴露24 h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP;高氧CGRP受体拮抗剂组在高氧CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP 8-37).培养24 h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SPC)的mRNA表达.结果 与空气组比较,高氧组ROS、MDA水平及细胞凋亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均显著降低(P均<0.01).与高氧组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞凋亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均明显增高(P均<0.01).高氧CGRP受体拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 暴露于60%氧24 h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SPC mRNA表达下降;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SPC mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

脂氧素A4对小鼠巨噬细胞钙池操纵的钙通道及活性氧的影响

目的 研究脂氧素A4对LPS诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞钙池操纵的钙通道活化及活性氧产生的影响,探讨脂氧素A4保护内毒素性肺损伤的具体机制.方法 小鼠RAW 264.7巨噬细胞,随机分为对照组、LPS组、Thapsigargin组、脂氧素A4+LPs组、脂氧素A4+Thaosigargin组、2-Aminoethoxydiphenylborate+Thapsigargin组.采用细胞内钙离子特异性荧光探针Fluo3/AM和活性氧特异性荧光探针DCFH-DA标记小鼠巨噬细胞.激光共聚焦显微镜动态观察巨噬细胞游离钙浓度变化,流式细胞仪测定活性氧产生变化.结果 脂多糖呈剂量依赖升高细胞内游离钙浓度和活性氧的产生.脂氧素A4抑制脂多糖引起的钙内流(抑制率为93%),脂氧素A4同时可抑制Thapsigargin激活钙池操纵的钙通道引起的钙内流(抑制率为75%).脂多糖诱导巨噬细胞产生大量活性氧(阳性细胞百分比为28.87%±4.5%),脂氧素A4抑制脂多糖诱导巨噬细胞产生活性氧(阳性细胞百分比11.16%±2.5%,P<0.05).结论 脂多糖通过促进内钙释放而开放钙池操纵的钙通道,大量细胞外钙内流引起钙超载,活性氧大量产生,组织细胞损伤.脂氧素A4可能通过抑制钙池操纵的钙通道,使外钙内流减少,保持细胞钙稳态,减少活性氧的生成而起到抗炎促炎症消退作用.     

短时间高氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体活性氧产生及相关通路的影响

目的探讨短时间高氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）线粒体Ca²⁺ /烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD⁺）/沉默信息调节因子3（SIRT3）/超氧化物歧化酶2（SOD2）通路及活性氧的影响。 方法将RLE-6TN细胞株细胞分为对照组、高氧组及线粒体钙通道拮抗剂组（拮抗剂组）。对照组细胞置于常规细胞培养箱中,高氧组细胞置于氧浓度为90%的培养箱中,拮抗剂组细胞加入钌红（2 μmol / L）后置于氧浓度为90%的培养箱中,各组均持续培养4 h。随后,对各组细胞线粒体内Ca²⁺、活性氧、NAD⁺、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）含量进行检测,并计算NAD⁺ / NADH比值;同时,采用实时荧光定量PCR检测SIRT3和SOD2信使RNA（mRNA）水平。 结果各组间细胞线粒体内Ca²⁺、活性氧、NAD⁺、NADH、NAD⁺ / NADH比值及SIRT3 mRNA、SOD2 mRNA表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 183.500、135.900、32.140、51.520、128.300、59.970、45.020,P均< 0.001）。且与对照组及拮抗剂组比较,高氧组细胞线粒体内Ca²⁺[（19.5 ± 0.8）、（17.2 ± 0.7）、（24.3 ± 0.3）nmol / L]、活性氧[（491 ± 9）、（480 ± 5）、（530 ± 6）相对荧光单位]及NADH[（0.85 ± 0.03）、（0.87 ± 0.04）、（1.06 ± 0.06）nmol / 10⁴ cells]含量均明显升高,而NAD⁺含量[（3.30 ± 0.12）、（3.24 ± 0.14）、（2.58 ± 0.29）nmol / 10⁴ cells]、NAD⁺ / NADH比值[（3.89 ± 0.15）、（3.71 ± 0.15）、（2.44 ± 0.27）]、SIRT3 mRNA[（1.01 ± 0.11）、（0.96 ± 0.08）、（0.45 ± 0.09）]及SOD2 mRNA[（1.01 ± 0.14）、（1.05 ± 0.11）、（0.48 ± 0.10）]表达水平均显著降低（P均< 0.05）。 结论短时间高氧可通过AECⅡ线粒体内Ca²⁺ / NAD⁺ / SIRT3 / SOD2通路导致活性氧蓄积。