氮、磷对丹参生长及丹参素和丹参酮Ⅱ_A积累规律研究

目的研究氮、磷肥对丹参生长发育及次生代谢物的影响。方法采用大田试验与室内分析相结合的方法。结果氮对丹参素及丹参酮ⅡA的积累表现了负面的效应，随施氮量的增加，丹参素及丹参酮ⅡA的质量分数逐渐减小。磷肥对于丹参素和丹参酮ⅡA的积累表现正效应。施用磷肥可以缓解施氮造成的丹参素和丹参酮ⅡA的下降。丹参酮Ⅱ。和丹参素的积累高峰值均出现在150d左右。结论施氮有利于丹参产量的增加，施磷有利于丹参素和丹参酮ⅡA的积累。     

丹参素和丹参酮ⅡA对大鼠肠系膜微循环障碍的影响

目的:探讨丹参素和丹参酮ⅡA对肠系膜微循环障碍的影响。方法:将SD大鼠40只,随机分成5组,分别为正常组、模型组、阳性药酚妥拉明组(10 mg·kg-1),丹参素组(30 mg·kg-1)和丹参酮ⅡA组(30 mg·kg-1)。通过向肠系膜滴加去甲肾上腺素(NA)造成局部微循环障碍,一次性经舌下静脉注入药物(丹参素、丹参酮ⅡA和酚妥拉明或者生理盐水),10 min后向将近回盲部的20 cm的肠系膜区域滴加0.05 g·L-1的NA溶液100μL,观察滴加NA后1,3,5,10,20,30 min时的大鼠肠系膜微动脉管径,并记录肠系膜微动脉血液流态镜下血液流态、毛细血管开放率和血流恢复时间。结果:与正常组比较,模型组NA对肠系膜微动脉有明显的收缩作用,血液流态分数明显增加,毛细血管开放率明显降低,血流恢复时间明显升高,均具有明显统计学意义(P0.01);与模型组比较,丹参素和丹参酮ⅡA能在一定程度减轻NA对肠系膜微动脉的收缩作用,改善血液流态,提高肠系膜毛细血管网交点开放率,缩短微循环障碍的恢复时间(P0.05,P0.01)。结论:丹参素和丹参酮ⅡA能改善NA引起的大鼠肠系膜微循环障碍。     

丹参中丹参酮Ⅱ_A和丹参酮Ⅰ的提取方法研究

目的:比较不同的提取方法对丹参中丹参酮ⅡA和丹参酮I含量测定的影响。方法:分别采用超声波提取、加热回流提取和索氏提取的方法提取丹参中的丹参酮ⅡA和丹参酮I,并采用高效液相法(HPLC)测定其含量。结果:对于丹参酮ⅡA来说,索氏提取法所测得的含量最高,超声提取最低;从丹参酮I含量来看,各提取方法所测得含量差异不大,加热回流略为偏低。结论:综合各提取方法所测得含量、操作难易及溶剂成本来考虑,索氏提取法优于超声和加热回流的提取方法。     

HPLC法测定丹参中丹参素、丹参酮ⅡA、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的含量

目的 :建立丹参中水溶性成分和脂溶性成分同时定量的方法。方法 :高效液相色谱法 ,采用Shim packVP ODS(15 0mm× 4 6mm)C1 8色谱柱 ,以甲醇 - 0 5 %冰醋酸溶液梯度洗脱 ,检测波长为 2 81nm ,柱温为 35℃ ,流速为 0 8ml min。结果 :丹参素、丹参酮ⅡA、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮回归方程的相关系数依次为 0 9997,0 9997,0 9999和 0 9994 ,四种成分精密度试验RSD <2 % ,2 4h内稳定性试验RSD <2 % ,加样回收率试验RSD <5 %。结论 :通过对河南卢氏县 14种丹参样品的含量进行测定 ,说明本方法切实可行、稳定可靠、且重现性好 ,为丹参的质量评价提供了依据。     

传统发汗法对丹参中丹参酮Ⅱ_A的影响

丹参为常用中药 ,野生资源渐少 ,各地纷纷引种栽培。丹参以色紫、粗状为质佳。传统加工方法发汗能使丹参颜色变紫 ,本文采用高效液湘色谱法和薄层色谱法相结合的方法 ,对发汗前后的野生丹参、栽培丹参中丹参酮 A 的含量高低进行了比较。以说明产地传统初加工的必要性。1　仪器与材料高效液湘色谱仪 (日本岛津 ) ,薄层层析板 (硅胶G板 ) ,甲醇为 GR级 ,其余化学试剂均为分析纯。丹参酮 A 由中国药品生物制品鉴定所提供。野生发汗、未发汗丹参 (采自江苏镇江郊区 ) ,栽培发汗、未发汗丹参 (来自江苏射阳 )。2　提取与分离栽培未发汗丹参粉…     

市售丹参饮片中丹参酮Ⅱ_A含量的考察

目的:应用高效液相色谱法对不同产地31批丹参饮片进行丹参酮ⅡA含量测定,为丹参饮片质量控制提供参考。方法:采用HPLC法,色谱柱:Scienhome Kromasil C18(4.6mm×200mm,5μm),流动相:甲醇-水(75∶25),流速:1.00mL·min-1,检测波长:270nm。结果:31批丹参饮片中丹参酮ⅡA含量0%~0.5%不等,其中有10批含量低于0.20%,1批为伪品。皮部颜色棕褐色或棕黄色,木部颜色灰白色或白色的丹参饮片,丹参酮IIA含量一定较低。结论:当前丹参饮片质量参差不齐,问题较大,应加强监管。外观性状可作为判断丹参饮片质量优劣的现场快速筛查方法。     

RP-HPLC法同时测定丹参中丹参酮Ⅱ_A和隐丹参酮的含量

目的 研究丹参药材中新的质控指标。方法 采用细胞膜色谱法对丹参中的有效成分进行筛选，在此基础上建立RP－HPLC法同时测定丹参中丹参酮ⅡA和隐丹参酮含量的方法。色谱条件为Lichrosorb C18色谱柱，流动相为甲醇－水（75：25）；270nm下检测；流速1.0mL/min，室温。药材用甲醇超声处理，过滤后直接进样分析。结果丹参酮ⅡA和隐丹参酮的回收率分别为101．74％和99．28％，RSD分别为3．68％和1．78％。重现性的RSD分别为1．88％和1．35％。所收集的12份丹参药材中丹参酮ⅡA含量为0．607％－0．148％，隐丹参酮为0．073％－0．021％。结论 该方法快速、简便、准确，当丹参用于治疗心血管疾病时，可以同时将丹参酮ⅡA和隐丹酮作为丹参药材及其制剂的质控指标。     

丹参中丹参酮Ⅱ_A含量的数据分布特征与差异原因分析

目的:探索丹参中丹参酮ⅡA的含量变化规律,寻找不同研究结果存在差异的原因。方法:结合本课题组的研究结果,并收集了1997年以来不同产地丹参酮ⅡA的含量测定数据,进行探索性数据分析和描述性统计分析。结果和结论:丹参野生药材中丹参酮ⅡA含量普遍高于栽培品,近50%栽培品丹参酮ⅡA低于0.2%;数据的统计模式存在较大的差异,引起数据差异较大,其中以四川产地的数据分歧最大;野生丹参的变异系数低于栽培品,不同产地栽培丹参的变异系数不同,反映出质量的均一性和稳定性不同;市购样品的变异系数大于自采样品;加热回流提取法得到丹参酮ⅡA结果偏低。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肥厚心肌血管紧张素受体STAT3的影响

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐对腹主动脉缩窄致高血压大鼠肥厚心肌血管紧张素Ⅱ受体 (AT1R) 基因、蛋白表达以及对 STAT3 蛋白表达的影响,探讨其延缓心肌肥厚的机制。方法 取 24 只9周龄 SD 大鼠,环扎其腹主动脉,制成高血压大鼠模型,随机分为模型组(n=8)、丹参酮ⅡA 磺酸钠组 (n=8)、缬沙坦组 (n=8);另取8只行假手术,作为假手术组。给药8周后测量大鼠的尾动脉收缩压 (SBP) 及左室质量指数 (LVMI),应用 HE 染色、VG 染色,检测心肌纤维直径 (MFD),采用 RT-PCR、Western blotting 方法分别检测 AT1 R 的 mRNA 和蛋白的表达水平以及 STAT3 蛋白的表达水平。结果：与假手术组比较,模型组的 SBP、LVMI、MFD 均显著增加;AT1R mRNA 和蛋白的表达水平明显增高,STAT3 的表达也明显升高 (P＜0.05)。与模型组相比,丹参酮ⅡA磺酸钠组大鼠 LVMI、MFD 均显著降低;AT1R mRNA、蛋白表达和 STAT3 的表达均受到一定程度的抑制,但作用不如缬沙坦明显 (P ＜0.05)。结论 丹参酮ⅡA磺酸钠有延缓心肌肥厚的作用,可能与一定程度上抑制 AT1R 以及 STAT3 的表达有关。     

不同醇沉工艺对丹参中丹参酮ⅡA含量的影响

本文探讨了丹参合理的醇沉工艺。以丹参酮ＩＡ为检测指标，采用薄层扫描法，考察了不同醇沉浓度时丹参酮ＩＡ含蝗的影响。实验结果表明，采用５０％醇沉工艺，丹参酮ＩＡ损失较小。     

丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A在大鼠体内的代谢物研究

该文采用UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨质谱技术分析鉴定丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA在大鼠体内的代谢产物。灌药后,收集大鼠血浆和尿液。经固相萃取法处理生物样品后,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm,1.7μm）色谱柱和0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）流动相系统进行梯度洗脱;在正离子模式下对含药血浆、尿液及空白组样品进行分析。最终通过分析精确质量数据、多级质谱信息与文献报道结果比对,共从大鼠生物样品中初步检测鉴定出26个代谢产物。其中7个为丹参酮Ⅰ的代谢产物,主要代谢途径为葡萄糖醛酸化、羟基化、还原反应、去甲基化反应、甲基化、硫酸酯化以及它们的复合反应等;19个为丹参酮ⅡA的代谢产物,其主要代谢途径为羟基化、还原反应、甲基化、硫酸酯化、葡萄糖结合、葡萄糖醛酸化以及它们的复合反应。结果表明,应用UHPLC-LTQ-Orbitrap高分辨液质联用技术可以较为全面地阐明丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA在大鼠体内的代谢情况,可为进一步的药效学和毒理学再研究以及药物二次研发提供物质基础。     

丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液对大鼠急性心肌缺血预处理VEGF的影响

目的:观察丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液对大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤缺血预处理后血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)表达的影响。方法:16只健康大鼠随机分为缺血/再灌注组、丹参酮预处理组,丹参酮预处理组经尾静脉注射1%丹参酮Ⅱ_A磺酸钠注射液,缺血/再灌注组给予等体积生理盐水预处理。于预处理14 d后采用结扎左侧冠状动脉前降支30 min再复灌30 min的方法建立大鼠急性心肌缺血/再灌注损伤模型。检测缺血预处理前后静脉血超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性及缺血心肌组织丙二醛(Malondialdehyde,MDA),心肌缺血区组织VEGF及VEGF-mRNA、缺氧诱导因子-1a(Hypoxia Inducible Factor-1a,HIF-1a)及HIF-1a mRNA、受体胎肝激酶-1(Fetal Liver Kinase 1,FLK-1)及FLK-1mRNA表达。结果:与缺血/再灌注组比较,丹参酮预处理组VEGF及VEGF-mRNA、FLK-1、FLK-1mRNA、HIF-1a、HIF-1amRNA的表达均明显增强,SOD及CAT活性明显提高,MDA降低(P0.05)。结论:丹参酮Ⅱ_A磺酸钠预处理可提高VEGF表达及超氧化物歧化酶活性,对急性心肌缺血/再灌注损伤大鼠心肌有一定的保护作用。     

重组水蛭素抗栓及抗弥漫性血管内凝血作用的实验研究

水蛭素 (ｈｉｒｕｄｉｎ)为中医活血化淤药水蛭的主要有效成分 ,系由 6 5个氨基酸组成的单链多肽 ,是迄今作用最强的特异性凝血酶抑制剂 ,具有很强的抗凝、抗栓活性 ,对多种血栓疾病具有预防和治疗效果。目前国内外采用基因重组技术研制水蛭素取得了令人瞩目的进展。重组水蛭素 (ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒ ｈｉｒｕｄｉｎ ,ｒＨ)产品中仅变异体Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ具有抗凝活性 ,简称ＨＶ1,ＨＶ2和ＨＶ3。国内有关单位采用甲基营养型汉逊酵母真核表达系统研制出的ｒＨ与天然水蛭素ＨＶ1不同之处除ｒＨ 6 3位酪氨酸脱硫酸基外 ,还有Ｎ…     

丹参酮Ⅱ_A的分离纯化

目的:用大孔吸附树脂层析技术分离丹参酮ⅡA。方法:通过HPD-100树脂对丹参酮ⅡA的吸附穿透曲线与静态实验所得饱和吸附量来确定上样量,进行乙醇梯度洗脱,用高效液相色谱检测丹参酮ⅡA,初步确定树脂的洗脱条件进而分析出分离的优化方案。结果:丹参酮ⅡA的分离纯化提取工艺为:丹参酮提取液,用HPD-100大孔吸附树脂,80%乙醇洗脱。结论:该工艺可以将丹参酮ⅡA的浓度由提取液中的17%左右富集到42%左右,浓度提高了2.5倍左右。     

丹参酮ⅡA对压力超负荷大鼠肥厚心肌血管紧张素受体的影响

目的 通过研究丹参酮ⅡA（丹参酮）对腹主动脉缩窄的高血压大鼠肥厚心肌血管紧张素Ⅱ受体（ATR）基因表达及细胞内游离钙离子浓度（〔Ca2+〕i）的影响,探讨其抑制高血压左心室肥厚的分子生物学机制。 方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为手术对照组、丹参酮低剂量组〔10 mg/(kg·d)腹腔注射〕、丹参酮高剂量组〔20 mg/(kg·d)腹腔注射〕及缬沙坦组〔10 mg/(kg·d)灌胃〕,另有8只SD大鼠作为假手术组。用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数（LVMI）、病理切片HE染色测量心肌纤维直径（MFD）;采用逆转录－聚合酶链式反应（RT-PCR）、免疫印迹法（Western blot）分别检测AT1R、AT2R的mRNA和蛋白的表达水平。利用激光共聚焦显微镜测定心肌细胞内〔Ca²⁺〕i的变化。 结果 （1）低、高剂量的丹参酮均对升高的血压无影响,仍显著高于假手术组和缬沙坦组（P<0.01,P<0.05）。（2）丹参酮低、高剂量组和缬沙坦组的LVMI、MFD高于假手术组（P<0.05）,显著低于手术对照组（P<0.01）。(3)低、高剂量的丹参酮和缬沙坦均下调手术大鼠心肌的AT1R mRNA和蛋白的表达（P<0.05）;丹参酮低、高剂量对AT1R的影响不及缬沙坦（P<0.05）。(4)缬沙坦组的AT2R mRNA和蛋白表达水平较其他各组升高（P<005）,其他各组之间差异无统计学意义（P>0.05）。(5)丹参酮低、高剂量与缬沙坦均可使肥厚心肌的〔Ca ^2+_)i显著降低,高剂量丹参酮对〔Ca ²⁺ 〕i 的影响明显超过缬沙坦组（P<0.05）。 结论 丹参酮ⅡA对心肌肥厚的抑制作用是非血压依赖性的,其对高血压心肌肥厚的抑制作用可能与抑制心肌细胞AT1R的mRNA、蛋白表达、阻止心肌细胞的钙离子内流有关;AT2R有可能参与了缬沙坦降低血压、逆转心肌肥厚的作用。     

HPLC法测定丹参益坤口服液中丹参酮Ⅱ_A、丹参酮Ⅰ及隐丹参酮的含量北大核心CSCD

目的：建立丹参益坤口服液中丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ及隐丹参酮含量的HPLC测定方法。方法：采用Wonda Sil C18-WR（200 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（65∶35）为流动相;流速为1.0 m L/min;柱温为30℃;检测波长为274 nm。结果：丹参酮ⅡA在0.28～5.60μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r1=0.9999,平均加样回收率为99.12%,RSD为0.52%;丹参酮Ⅰ在0.29～5.80μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r2=0.9996,平均加样回收率为99.36%,RSD为0.63%;隐丹参酮在0.218～4.36μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r3=0.9992,平均加样回收率为99.02%,RSD为0.68%。结论：所建立的测定方法简单,易于操作,重现性好,可作为丹参益坤口服液质量控制标准。