慢性心衰大鼠心肌细胞内异常钙诱导钙释放的研究

目的研究慢性心衰大鼠心肌细胞内异常的钙诱导钙释放。方法将实验动物分为手术组和假手术组,运用全细胞膜片钳、激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹（Western-blot）等方法研究胞浆内钙诱导钙瞬变及钙调控相关蛋白L-型钙通道（LTCC）表达的变化。结果慢性心衰大鼠心肌细胞肌浆网内的钙瞬变（ΔF/F0=12.72±1.13）显著低于对照组大鼠心肌细胞肌浆网内的钙瞬变（ΔF/F0=28.87±2.02,P〈0.01）;慢性心衰大鼠心肌细胞内LTCC的表达较对照组下调。结论 LTCC表达下调所致心肌兴奋-收缩耦联的异常是导致心衰的原因之一。     

参附注射液保护阿霉素心肌毒性机理研究

目的:观察参附注射液保护阿霉素心脏毒性的作用机理.方法:急性分离单个心肌细胞,运用TILLVISION钙离子荧光成像及分析系统,观察不同组间单个心肌细胞内游离钙离子的浓度变化.结果:阿霉素可引起心肌细胞内钙离子水平显著升高(P＜0.01),参附注射液干预可显著降低异常心肌细胞内游离钙离子浓度;同时,参附注射液还可抑制咖啡因诱导的内钙释放.结论:参附注射液对阿霉素心脏毒性的保护作用可能是通过抑制肌浆网的内钙释放,避免心肌细胞内钙超载,从而维持细胞内钙离子水平,达到保护心肌的作用.     

虎杖苷抑制高糖引起新生鼠心肌细胞钙漏流的作用及其机制研究

目的研究虎杖苷(polydatin,PD)抑制高糖引起心肌细胞局部钙信号紊乱的机制,探讨其对糖尿病心肌病的保护作用。方法分离1~3 d SD大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为四组:对照组、高糖组、虎杖苷组和高糖+虎杖苷组。培养48 h后采用激光共聚焦显微成像技术检测局部钙释放单位钙火花发放频率及其形态;利用Western blot方法检测受磷蛋白PLB和肌浆网SERCA 2a蛋白的表达水平。结果高糖组心肌细胞钙自发钙火花发放水平显著增加(P0.01),且略微增加钙火花时程。在虎杖苷组中,高糖引起的高频钙火花发放显著抑制(P0.01)。与对照组相比,高糖增加心肌细胞内静息期细胞内钙离子水平,给予PD治疗则抑制高糖引起钙超载。PD抑制高糖引起的心肌细胞ROS水平增加。高糖下调PLB和SERCA 2a蛋白的表达。结论 PD通过降低细胞自发钙火花的频率,抑制肌浆网钙漏流、增加钙稳定性,调节PLB/SERCA 2a蛋白比例,从而有效纠正高糖所致心肌细胞局部钙调控紊乱。因此,PD可能在糖尿病心肌病患者中发挥着重要的心肌保护作用。     

马钱子碱抗血小板聚集及其对凝血酶诱导血小板内游离钙的变化

①以Born和O′Brien法进行血小板聚集实验,可见马钱子碱(Brucine,B)和士的宁(Strychnine,S)各10~(-5)～10~(-3)mol/L明显抑制ADP、Epi和Thrombin诱导的人血小板聚集作用,呈剂量依赖性。②用Fura-2/AM检测B对Thrombin诱导人血小板内游离钙[Ca~(2+)]i的变化。结果:静息[Ca~(2+)]i值为111.14±11.71nmol/L(n=12)。Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i峰值为1015±36.38nmol/L。B10~(-4)、10~(-3)mol/L分别使Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i值下降至328.68±17.81和94.17±4.9nmol/L。在EGTA螯合血小板外钙[Ca~(2+)]o情况下,Thrombin诱导的[Ca~(2+)]i峰值为218.55±56.2nmol/L与静息[Ca~(2+)]i相比具有非常显著差异(P<0.01),提示Thrombin促血小板内钙释放;B10~(-4)、10~(-3)mol/L分别使其[Ca~(2+)]i值下降至89.93±6.31和75.49±4.37nmol/L,上述结果提示:B抑制Thrombin的促外钙内流及内钙释放,呈剂量依赖性。     

神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆钙及钙瞬变的影响

目的观察神经肽Y（neuropeptideY，NPY）对静息状态下心肌细胞胞浆钙含量及兴奋-收缩耦联过程中心肌细胞钙瞬变的影响。方法用NPY（100nmol／L）刺激Sprague—Dawley乳鼠心肌细胞24h，用荧光染料Fluo 4-AM负载胞浆钙，记录静息状态下心肌细胞胞浆钙浓度，并用场刺激诱发胞浆钙瞬变。所有钙影像均由LeicaSP2激光共聚焦显微镜记录。结果NPY组心肌细胞胞浆钙含量明显高于对照组（P〈0.05）；场刺激诱导下NPY组心肌细胞胞浆钙瞬变幅度明显高于对照组（P〈0.01），NPY组钙瞬变恢复时间明显缩短（P〈0．01），钙瞬变上升时阍则无显著差别。结论长时间的NPY刺激可显著影响兴奋-收缩耦联过程中钙的动态活动，并导致胞浆内钙含量增加。     

U83836E对原代大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究

目的:观察U83836E对原代大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用并探讨其初步机制.方法:分离大鼠原代心肌细胞建立缺氧复氧(H/R)模型,细胞随机分为5组,观察不同剂量U83836E对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用.结果:与Control组比较,H/R组心肌细胞内钙离子浓度明显增高,肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2)表达显著减少.与H/R组比较,U83836E干预各组心肌细胞内游离钙离子浓度明显降低,且肌浆网钙泵的蛋白表达上调.结论:U83836E对缺氧复氧心肌细胞有保护作用,其可能与上调SERCA2的表达抑制细胞内钙超载有关.     

槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用机制的研究

目的 研究槐定碱对慢性心衰大鼠心肌保护作用的机制.方法 将60只雄性SD大鼠分为假手术组、心衰组、低（5 mg·kg-1）、中（10 mg·kg-1）、高（20 mg·kg-1）剂量槐定碱干预组（每组12只）,运用激光扫描共聚焦显微镜、蛋白印迹等方法研究各组心肌细胞胞浆内咖啡因诱导钙瞬变及钙泵（SERCA2a）表达的变化.结果 与假手术组相比较,心衰组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度显著下降（18.33±1.52与36.18±2.64,P＜0.05）;中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞肌浆网内钙瞬变幅度较心衰组明显升高（33.45±2.47、32.19±1.98与18.33±1.52,P＜0.05）;心衰组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较假手术组明显下调,中、高剂量药物干预组大鼠心肌细胞SERCA2a表达较心衰组均明显升高.结论 SERCA2a表达上调促使肌浆网内钙容量增加是槐定碱心肌保护作用的主要机制之一.     

羟嘌呤醇对衰竭心肌蛋白氧化和心肌收缩力的长期效果

目的 研究黄嘌呤氧化酶(XO)抑制剂--羟嘌呤醇(Oxy)增强缺血后心力衰竭心肌收缩力的长期效果,并初步探讨其作用机制.方法 将120只SV120小鼠随机分为心肌梗死(MI)对照组、假手术组和Oxy治疗组.通过结扎冠状动脉左前降支(LAD)建立小鼠缺血后心力衰竭模型.Oxy治疗组口服1 mmol/L Oxy.9-11个月后,对三组小鼠进行心脏超声检查;取右心室束状肌分析其心肌兴奋-收缩耦联的变化.应用激光光栅衍射测定肌节长度;应用离子渗透微注射法向样本心肌细胞内注入Fura-2荧光染料,测量心肌细胞质内游离Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i);通过应用ryanodine和增加刺激频率的方法使心肌达到强直收缩,即心肌纤维与Ca~(2+)的相互作用处于稳定状态,分析在稳定状态下心肌收缩力-细胞内钙关系;应用Western blotting测定肌丝蛋白的氧化情况.结果 长期口服Oxy能明显改善心力衰竭小鼠的心脏收缩功能,减小室壁厚度;明显改善心肌细胞的兴奋-收缩耦联过程,有效地增强心肌收缩力,显著提高稳态时心肌细胞钙激活的最大收缩力(F_(max)).Western blotting检测显示,与MI对照组心肌肌丝蛋白相比,Oxy治疗组中的肌动蛋白氧化修饰受到明显抑制.结论 长期服用Oxy能够有效改善衰竭心肌的工作状态,改善/促进兴奋-收缩耦联过程,增强心肌收缩力.这种长期作用的机制是抑制心肌肌丝中肌动蛋白的氧化修饰,从而增强肌丝对钙的敏感性,增加收缩力.Oxy由于对[Ca~(2+)]_i的增加较小,能够减轻细胞内Ca~(2+)负担及其所带来的负作用,具有更好的临床应用前景.     

Thapsigargin对心肌细胞钙释放和肌浆网钙容量的时间效应

[目的]肌浆网钙泵抑制剂 thapsigargin (TG)常被用于耗减肌浆网( sarcoplasmic reticulum, SR)的钙容量.本课题旨在探讨 TG (100 nmol· L-1) 对源自 SR的胞内钙释放和 SR钙容量耗减的时间效应以及 SR内钙对 SR钙释放的调节机理.[方法]局部场刺激作用于成年大鼠心肌细胞,使其产生动作电位,进而诱发胞内钙瞬变( action-potential-induced Ca2 transients, ACT).由 ACT可估测胞内钙释放.SR钙容量可由咖啡因 (20 mmol· L-1)诱发的钙瞬变( caffeine-induced Ca2 transients, CCT)估测.实验结果用激光共聚焦显微镜系统记录.[结果] TG对 ACT峰值(可衡量钙瞬变的大小)的时间效应如下: 0 min, 5.55± 0.28 (单位为标准钙荧光强度即 F/F0, F0为静息钙荧光强度 ); 10 min, 4.89± 0.36; 17 min, 2.58± 0.38; 25 min, 2.11± 0.19; 35 min, 2.22± 0.17; 50 min, 2.27± 0.27.TG对 CCT峰值的时间效应如下: 0 min, 6.73± 0.17; 10 min, 6.60± 0.59; 17 min, 6.24± 0.44; 25 min, 3.99± 0.28; 35 min, 2.24± 0.37; 50 min, 1.14± 0.01.以 CCT为自变量, ACT为因变量的曲线呈" J"形.[结论] TG对心肌胞内钙释放和 SR钙容量呈非线性的时间依赖效应.SR内钙部分耗减即可明显减少钙释放,说明 SR内钙对胞内钙释放具有重要的调节作用.     

丙泊酚对新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

目的　观察不同浓度丙泊酚对氯化钾和咖啡因诱发的新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的可能机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的新生大鼠或急性分离的成年大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动态观察使用丙泊酚前及丙泊酚 (5 0 ,2 5 0 μmol/L)预处理后 ,氯化钾和咖啡因诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果　丙泊酚 5 0 μmol/L使氯化钾诱发的新生或成年大鼠心肌细胞内钙荧光强度的峰值下降 ,较对照组有明显差异 (P <0 .0 1 ) ,对新生大鼠心肌细胞的抑制作用较成年大鼠明显。丙泊酚 2 5 0 μmol/L使细胞内钙荧光强度峰值进一步降低。但两种浓度的丙泊酚对咖啡因诱发的两种心肌细胞钙荧光强度的升高均无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　丙泊酚浓度依赖地降低心肌细胞内钙离子浓度 ,与其抑制细胞外钙内流有关 ,它对新生大鼠心肌细胞的抑制作用更强。提示临床上使用丙泊酚作为麻醉剂 ,尤其对小儿麻醉时应有足够重视。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。