槲皮素调控MAPK通路对绝经后骨质疏松大鼠骨形成的影响

目的 探讨槲皮素调节MAPK信号通路对绝经后骨质疏松大鼠模型骨形成的影响。方法 将SPF级SD雌性大鼠分为假手术组、模型组、槲皮素低、高剂量组及补佳乐组。通过ELISA法检测大鼠血清雌激素E2水平、骨代谢标志物CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC水平、炎性指标IL-6、TNF-α、IL-1β水平;HE染色观察大鼠骨组织形态学变化;TRAP染色观察N.Oc/BS;显微CT扫描大鼠股骨形态,测定大鼠股骨BMD、Tb.N、Tb.Th、Tb.Sp; WB检测MAPK信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠血清E2、CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC水平降低,IL-6、TNF-α、IL-1β水平增加,N.Oc/BS增加,BMD、Tb.N、Tb.Th降低,Tb.Sp增大(P<0.05);与模型组相比,槲皮素低、高剂量组及补佳乐组大鼠血清E2、CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC水平增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平降低,N.Oc/BS降低,BMD、Tb.N、Tb.Th增高,Tb.Sp减小(P<0.05)。假手术组骨组织形态结构正常;模型组骨皮质厚度变...     

中药骨康对去卵巢大鼠腰椎骨形态计量学的影响

目的 探讨中药骨康对卵巢切除大鼠骨质疏松症的治疗作用。方法 选择6m龄SD大鼠48只。随机分为假手术模型组（Sham）、手术模型组（OVX）、尼尔雌醇组（E2）、中药骨康组。切除大鼠卵巢3m后。大鼠骨质疏松症模型制备成功，分别给予尼尔雌醇、中药骨康灌胃治疗，并与Sham组和OVX组对照。治疗3m后，体内双荧光标记，取第2腰椎包埋切片。全自动图像分析及松质骨骨形态计量学软件处理。观察中药对骨形态计量学参数的影响。结果 卵巢切除后大鼠骨小梁面积百分数（％Tb．Ar）下降35．84％，骨小梁数量（Tb．N）下降16．60％，骨小梁宽度（Tb．Th）下降25．79％，表明绝经后骨质疏松症动物模型成立。骨康治疗3个月后，与OVX组相比，Oc．N／mm^2下降42．80％，有显著性差异（P〈0．01）；％Tb．Ar、Tb．Th、Tb．N和MAR有上升趋势（P〉0．05）；15．Sp，％L．Pm、BFR／BS、BFR／TV和Oc．N／mm，BFR／BV有下降趋势（P〉0．05）。结论 中药骨康具有降低骨转换以及促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用，说明中药骨康对骨质疏松有明显的治疗作用。     

骨质疏松症大鼠模型生物力学性能和OPG/RANKL/RANK信号通路研究

摘要：目的 研究针刺对骨质疏松症（osteoporosis，OP）模型大鼠生物力学性能和骨保护素（OPG）/核因子-κB受体活化因子（RANKL） /核因子-κB受体活化因子受体（RANK）信号通路的影响，探讨针刺防治OP的作用机制。方法 选取50只雌性SD大鼠，通过摘除卵巢建立OP大鼠模型，分为假手术组、模型组、针刺低剂量组、针刺高剂量组、阿仑膦酸钠组，每组10只。成功建立模型并对大鼠进行适应性喂养2个月后，连续灌胃给药12周，再进行腹主动脉取血并处死大鼠。通过双能X射线仪测定各组大鼠右侧下肢股骨骨矿含量；用酶联免疫吸附法测定法检测血清钙（Ca2+）、磷（P）和OPG、RANKL、RANK的水平；采用AG-IX万能实验机检测股骨的生物力学性能；采用蛋白质印迹法检测骨组织OPG、RANKL、RANK蛋白的表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠骨组织中骨矿含量、血清Ca2+、P、OPG的表达、股骨组织中OPG蛋白含量和股骨最大载荷、刚度及弹性模量均明显降低（P＜0.01）；血清RANKL和RANK的表达及股骨组织中RANKL、RANK蛋白含量明显升高（P＜0.01）。与模型组比较，针刺低剂量组和针刺高剂量组以及阿仑膦酸钠组上述指标均有明显改善（P<0.05或P<0.01），且针刺的作用具有剂量依赖性（P<0.05或P<0.01）。结论 针刺具有明显的抗OP作用，可能与其改善骨组织生物力学特性以及调控OPG/RANKL/RANK通路有关。     

福善美调控软骨下骨骨重塑保护关节软骨的机制研究

目的 探讨福善美调控软骨下骨骨重塑保护关节软骨的机制.方法 以清洁级健康雌性SD大鼠为动物模型,分为Sham组、模型组和福善美组.通过切除双侧卵巢并切断右侧膝交叉韧带建立骨关节炎动物模型,术后第4周开始灌服福善美,模型组、Sham组灌服等量的生理盐水,分别于术后8、12、16周取材,采用骨关节炎软骨病理变化评价系统(OARSI)评价关节软骨的病变,对软骨下骨进行骨形态计量学分析.结果 术后8、12、16周,模型组较Sham组OARSI评分差异有显著意义(P＜0.01),福善美组较模型组OARSI评分差异有显著意义(P＜0.05).软骨下骨组织形态计量学参数测量显示模型组较Sham组骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)、骨小梁宽度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、每毫米破骨细胞数(Oc.N/mm)差异有显著性(P＜0.01);模型组荧光周长百分率(%L.Pm)、矿化沉积率(MAR)、骨形成率(BFR/BV)、骨形成率(BFR/BS)低于Sham组,差异有显著性(P＜0.05).结论 软骨下骨在骨关节炎发生发展中起重要作用,骨吸收抑制剂福善美可作为治疗骨关节炎有潜力的药物.     

淫羊藿总黄酮与己烯雌酚合用对去卵巢大鼠子宫和骨的影响

目的：观察淫羊藿总黄酮（epimedium pubescens flavonoids，EF）能否抑制己烯雌酚（diethylstibestrol，DES）刺激子宫不良反应，及对DES抗骨质疏松作用的影响。方法：50只4个月龄SD雌性大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组）；去卵巢组（OVX组）；己烯雌酚组（DES组）；淫羊藿总黄酮组（EF组）；联合用药组（EF＋DES组）。实验12周，通过测量子宫内膜厚度及子宫湿重分析用药对子宫的刺激作用，测量骨小梁面积百分率（％Tb．Ar）、荧光周长百分数（％L．Pm）及破骨细胞数量（Oc．N）反映骨量、骨形成及骨吸收的变化。结果：DES组与OVX组比，子宫湿重及内膜厚度都显著增加，％Tb．Ar增加，％L．Pm、Oc．N减少；EF组与OVX组比，子宫湿重及内膜厚度、％Tb．Ar、Oc．N均无显著性差异；EF＋DES与DES组比，内膜厚度显著降低，％Tb．Ar增加；与假手术组比各参数无显著性差异。结论：淫羊藿总黄酮可有效抑制己烯雌酚对子宫内膜刺激作用并增强其防治骨质疏松作用。     

BEMF对卵巢切除骨质疏松大鼠治疗作用的骨形态计量学研究

目的观察BEMF对OVX—OP大鼠骨形态计量学指标的影响，探讨BEMF对卵巢切除致骨质疏松大鼠的治疗作用及机制。方法6个月龄雌性未孕Wistar大鼠40只，按体质量随机分为卵巢切除组（OVX）、假手术组（Sham）、仿生电磁场治疗组（EM）、雌激素治疗组（E）。术后8周，E组苯甲酸雌二醇肌肉注射，0．5mg／kg，1次，2周。EM组大鼠暴露于仿生电磁场治疗，1h·次^-1·d^-1，OVX、Sham组不予以任何处理，作为对照组。治疗10周后处死各组大鼠，取左侧胫骨进行骨形态计量学测定。结果治疗10周后，EM组大鼠％Tb．Ar、Tb．Th、Tb．N较OVX组显著增加（P〈0．01），Tb．sp显著降低（P〈0．01），与E组变化相似。E组、EM组大鼠成骨细胞数（％L．Pm）低于OVX组（P〈0．01）；EM组、E组仍高于Sham组（P〈0．01）；EM组高于E组（P〈0．01）。E组、EM组破骨细胞数（N．Oc）低于OVX组（P〈0．01）；EM组、E组仍高于Sham组，（P〈0．01）；EM组高于E组，差异非常显著（P〈0．01）。结论BEMF具有增加骨量、改善骨结构的作用；与雌激素的治疗作用存在不同机制。     

曲古抑菌素A促进去卵巢大鼠钛植入物骨整合

目的 探讨TSA对去卵巢大鼠TI骨整合的影响。方法 将30只健康3月龄雌性SD大鼠随机分为Sham组（n=5）和OVX组（n=25）。正常饲养3个月后,两组各选取5只大鼠处死,取股骨远端样本行Micro-CT和HE染色以鉴定是否成功建立骨质疏松模型。随后在OVX组剩余大鼠双侧股骨干骺端植入直径1.5 mm TI,并将其分为2组：Control组（n=10）和TSA组（n=10）。连续给药4周。给药结束后处死全部大鼠并取股骨样本行Micro-CT扫描、HE染色以及Masson染色,ELISA法检测,拔钉实验。结果 与Sham组对比,Micro-CT显示OVX组BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N降低（P<0.05）,而Tb.Sp、SMI升高（P<0.05）,HE染色显示OVX组骨小梁数量明显降低。与Control组对比,Micro-CT显示TSA组BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N 、Conn.D均升高（P<0.05）,而Tb.Sp、SMI降低（P<0.05）,HE染色、Masson染色显示TSA组骨小梁数量、新生骨数量均升高,ELISA法检测结果显示TSA组OCN、BMP2均升高,拔钉实验显示TSA组TI轴向拔出力增大。结论 TSA通过上调OCN、BMP2等成骨相关蛋白,促进骨小梁形成和新骨形成,进而改善去卵巢大鼠TI骨整合。     

六味地黄汤对PMOP模型大鼠股骨MAPK通路动态干预研究

目的 研究六味地黄汤对PMOP模型大鼠股骨 MAPK 信号通路中p38、ERK1/2 磷酸化蛋白及mRNA表达的动态干预作用及其机理。方法 将6~8 月龄未孕雌性 SD 大鼠（SPF 级）编号、称重后随机分为 5 组，除空白组外，其余各组均采用去卵巢法造模。造模后第5天开始，连续给药 90 d。分别在术后 30、60、90 d，双能 X 线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度；蛋白免疫印迹法（ Western blot ）法检测各组大鼠股骨中 p-p38及p-ERK1/2 表达；实时荧光定量PCR（ RT-qPCR ）法检测各组大鼠股骨中 p38、ERK1/2 mRNA 表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠的股骨骨密度值在60、90d时下降（P<0.05）；与模型组比较，六（酒）可上调PMOP术后 30、60、90 d模型大鼠股骨中 p-p38、p-ERK1/2及ERK1/2 mRNA表达（P<0.05、P＜0.01）以及术后 60、90d 模型大鼠股骨p38 mRNA表达（P＜0.01），而六（生）仅能调整术后 90 d 模型大鼠股骨中p-p38及p-ERK1/2及 mRNA 表达（P<0.05、P＜0.01）及术后 30、60 d 模型大鼠股骨中 p-ERK1/2 表达（P＜0.05）。结论 六（酒）、六（生）均可干预绝经后骨质疏松症，其机理可能与该汤通过调控MAPK通路中 p38 及 ERK1/2 两个蛋白，并使其发生磷酸化修饰，激活成骨相关因子，升高BMD，改善PMOP有关；其中六（酒）的干预作用从绝经早期、中期开始。     

XW630对去势大鼠骨组织力学性能及骨小梁结构参数的影响

目的 探讨抗骨质疏松新药XW630对去势大鼠骨组织力学性能及骨小梁结构参数的影响。方法 3月龄SD雌性大鼠36只，随机分为Sham组、OVX组、OVX＋CFT组和OVX＋XW630组，每组3只。取左侧股骨作三点弯曲力学强度测试，左侧胫骨作骨小梁结构参数测定。结果 整个观察期内，OVX组股骨三点弯曲强度呈下降趋势，与Saham组存在显性差异（P＜0．01），两个治疗组骨强度则呈上升趋势，与OVX组存在显性差异（P＜0．05或P＜0．01）。胫骨骨小梁结构参数测定结果显示，OVX组骨形成参数（Vx、Tb.Th、Tb.N）逐渐下降，而骨吸收参数（Tb.Sp)逐渐增加，呈骨量丢失状态，而两个治疗组骨形成参数逐渐增加，骨吸收参数逐渐下降，与OVX组之间存在显性差异（P＜0．05和P＜0．01）。两个治疗组同期各项测定结果无显性差异（P＞0．05）。结论 XW630能有效地促进去势大鼠骨组织的成骨和预防骨质疏松性骨折的发生，显示出良好的应用前景。     

NGF介导Fabp4/LCN-2蛋白对骨质疏松大鼠骨微结构及骨强度的影响

目的 探讨NGF通过介导血清脂质运载蛋白2（Fabp4/LCN-2）的表达进而改善骨质疏松(osteoporosis，OP)大鼠骨微结构，增加骨强度的作用。方法 60只大鼠随机被分为正常组、OP组、NGF组和干预对照组，每组15只，OP组、NGF组及干预对照组大鼠均采用维甲酸混悬液连续灌胃，每日一次，每次70 mg/kg，连续灌胃4周后建立骨质疏松症大鼠模型。建模成功后，对NGF组及干预对照组分别行腹腔注射NGF、MSCs，剂量为2.0 μ/kg ，正常组及OP组均经腹腔注射等体积的PBS生理盐水，每日一次，连续注射3 d。通过ELISA检测血清中生化指标；分离股骨组织采用HE染色检测组织病理形态；通过micro CT测量股骨骨微结构观察组织形态指标水平；通过Hologic双能X线骨密度仪测量股骨组织骨强度；运用免疫印迹法检测股骨组织Fabp4/LCN-2蛋白含量。结果 OP组大鼠血清BGP、ALP及TRAP表达水平均升高，和正常组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），NGF组及干预对照组大鼠血清上述指标水平低于OP组，组间比较差异具有统计学意义（P＜0.05）；正常组大鼠股骨骨小梁呈现红紫色，粗细均匀、排列紧致，OP组大鼠股骨组织骨小梁断裂及骨髓腔表变大，NGF组和干预对照组骨小梁数目增多，分布较规则，结构和正常组相似；OP组大鼠股骨组织TB·Th、TB·N、BMD及BMC含量降低，TB·Sp含量升高，与正常组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），NGF组和干预对照组上述指标水平，和OP组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），其余组别无差异（P＞0.05）；OP组大鼠股骨组织中Fabp4蛋白水平为1.80±0.33（升高），LCN-2蛋白水平为1.06±0.26（降低），与正常组Fabp4蛋白水平（1.39±0.15）及LCN-2蛋白水平（2.06±0.55）比较存在差异（P＜0.05），NGF组Fabp4蛋白为1.52±0.20（降低），LCN-2蛋白为1.80±0.33（升高），与OP组比较存在差异（P＜0.05），Fabp4抑制剂组Fabp4蛋白为1.36±0.18（降低），与NGF组比较存在差异（P＜0.05）。结论 骨质疏松大鼠腹腔注射NGF能够改善大鼠股骨微结构，增加骨小梁占比而提高骨强度，研究机制可能与NGF激活LCN-2表达、抑制Fabp4进而发挥抗骨质疏松的作用有关。