定心方降低脂质运载蛋白-2表达抑制ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的研究

目的探讨定心方对动脉粥样硬化(AS)小鼠的防治作用及其机制。方法 50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠喂食高脂饲料并随机分为5组:定心方低、中、高剂量组分别给予定心方(DXR)9.375,18.75,37.5 g/(kg·d)灌胃;辛伐他汀组予辛伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃;模型组予等剂量生理盐水。另设10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料为对照组。14周后测小鼠血清脂质运载蛋白-2(LCN-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察主动脉组织病理形态学改变;Western blot检测主动脉LCN-2蛋白表达。结果DXR中、高剂量组及辛伐他汀组小鼠血清LCN-2、TNF-α、MCP-1及IL-6水平、主动脉LCN-2蛋白表达及主动脉AS斑块面积均显著低于模型组(P0.05或P0.01)。结论 DXR可能通过降低LCN-2表达,抑制炎症反应,显著减轻ApoE~(-/-)小鼠AS病变。     

香青兰总黄酮对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化病变中TGF-β1/Smad信号通路及基质金属蛋白酶表达的影响

研究香青兰总黄酮(TFDM)对高脂饮食诱导载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其相关机制。采用40只SPF级8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠予高脂饲料喂养,随机分为5组:香青兰总黄酮低、中、高剂量组分别给予21,42,84 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃;辛伐他汀组灌服辛伐他汀3.5 mg·kg~(-1)·d~(-1);模型组灌服等剂量生理盐水。另设8只相同基因背景和周龄的雄性C57BL/6J小鼠为对照组予普通饲料喂养。各组均灌胃干预12周,采用HE染色观察主动脉病理形态学变化;qRT-PCR法检测组织中TGF-β1,Smad2,Smad3,MMP-2和MMP-9基因的水平。实验结果显示:与模型组比较,HE染色观察TFDM给药组表现主动脉粥样硬化组织损伤明显减轻;TFDM不同剂量组可在一定程度上抑制高脂饲料诱导的ApoE~(-/-)小鼠主动脉TGF-β1,Smad2,Smad3,MMP-2,MMP-9 mRNA的表达,且呈现一定的剂量依赖关系趋势。提示TFDM具有减缓小鼠动脉粥样硬化形成的作用,其作用机制可能与干预TGF-β1/Smad信号转导有关。     

二氢杨梅素保护ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠的作用及其机制

目的探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对高脂诱导的ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的对抗作用及作用机制。方法取健康雄性ApoE~(-/-)小鼠30只,随机分为3组,即模型组、二氢杨梅素组[50 mg/(kg獉d)]和阿托伐他汀组[5 mg/(kg獉d)],每组10只;另取10只C57BL/6 J小鼠作为对照组。对照组与模型组小鼠予以0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,药物组小鼠灌以0.5%羧甲基纤维素钠溶液配制的药物混悬液,灌胃容积均为0.2 mL/10 g。同时所有小鼠均给予高脂饲料(0.3%胆固醇,20%脂肪)饲养。10周后,眼眶取血,分离血清,生化仪检测血脂4项水平,试剂盒检测血清氧化酶活性。取心脏油红O染色观察主动脉根部脂质沉积;免疫荧光检测斑块处巨噬细胞的堆积以及Caspase-3的表达;TUNEL试验检测主动脉瓣膜处巨噬细胞凋亡情况。结果连续灌胃10周后,与模型组相比,DHM组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著下降,主动脉瓣膜处粥样硬化斑块显著减少;DHM组血清MDA水平明显降低,CAT、GSH-Px和SOD活性明显提高;主动脉根部细胞Caspase-3表达明显降低;巨噬细胞在动脉粥样硬化斑块处的堆积减少,TUNEL实验结果显示DHM组斑块处巨噬细胞的凋亡明显降低。结论二氢杨梅素能够改善高脂饲料诱导的ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠脂质堆积,其机制可能与抑制巨噬细胞凋亡有关。     

解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉 NF-кB与MMP-9表达的调控作用

目的 观察解毒活血中药配伍对载脂蛋白E基因敲除小鼠[apolipoprotein E knocked-out mice,ApoE(-/-)mice]主动脉核因子-кB(NF-кB)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的调控作用.方法 13周龄ApoE(-/-)小鼠分为高脂组(给予高脂饲料)和普通饲料组(给予普通饲料),同时设13周龄C57 BL/6J小鼠对照组(给予普通饲料).19周后进行干预,普通饲料模型组、C57BL/6J小鼠对照组灌服生理盐水,高脂组随机分为解毒组[灌服虎杖苷26.6 mg/(kg·d)],活血组[灌服芎芍胶囊110 mg/(kg·d)],解毒活血配伍高剂量组[灌服虎杖提取物53.2 mg/(kg·d),芎芍胶囊220 mg/(kg·d)];解毒活血配伍中剂量组[灌服虎杖提取物26.6 mg/(kg·d),芎芍胶囊110 mg/(kg·d)];解毒活血配伍低剂量组[灌服虎杖提取物13.3 mg/(kg·d),芎芍胶囊55 mg/(kg·d)],洛伐他汀组[灌服洛伐他汀3.3 mg/(kg·d)],高脂饲料模型组(灌服生理盐水).17周后,取主动脉做常规石蜡切片,免疫组化观察其NF-кB和MMP-9表达的程度.结果 模型组ApoE(-/-)小鼠主动脉及粥样斑块NF-кB和MMP-9表达明显增加,虎杖苷、芎芍胶囊、洛伐他汀及解毒活血配伍治则的虎杖苷与芎芍胶囊配伍均可降低其主动脉NF-кB和MMP-9表达(P＜0.01),且以解毒活血配伍高剂量组疗效最好(P＜0.01).结论 解毒活血配伍可降低ApoE(-/-)小鼠主动脉NF-кB和MMP-9表达,且优于单纯解毒和活血组.     

丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化小鼠脂质运载蛋白-2表达的干预研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化(AS)小鼠脂质运载蛋白-2(LCN-2)表达的干预作用。方法:将50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠喂食高脂饲料并随机分为5组:丹参酮ⅡA低、中、高剂量组分别给予丹参酮ⅡA灌胃(7.5,15,30 mg·kg~(-1)·d~(-1));辛伐他汀组予辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃;模型组予等剂量生理盐水。另设10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料为对照组。14周后测小鼠血清LCN-2、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察主动脉组织病理形态学改变;Western blot检测主动脉LCN-2蛋白表达。结果:各给药组小鼠血清LCN-2、IL-6、MCP-1及TNF-α水平、主动脉LCN-2蛋白表达均显著低于模型组(P<0.05),辛伐他汀组、丹参酮ⅡA中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积显著低于模型组(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可通过降低LCN-2表达,抑制炎症反应,显著减轻ApoE~(-/-)小鼠AS病变。     

从肠道菌群多样性探讨越鞠丸对ApoE~(-/-)小鼠血脂的影响

目的:观察治疗六郁的代表方越鞠丸对血脂的影响,为临床应用和实验研究提供参考依据。方法:采用高脂饲料饲养ApoE~(-/-)小鼠的方法建立动脉粥样硬化斑块模型,用越鞠丸和辛伐他汀分别对高脂饲料饲养的ApoE~(-/-)小鼠进行干预,ELISA法检测小鼠血清血脂含量,基于16S rDNA基因测序技术分析小鼠肠道菌群。结果:越鞠丸组、辛伐他汀组和模型对照组小鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量明显高于正常对照组,高密度脂蛋白(HDL-C)含量明显低于正常对照组;越鞠丸组小鼠TC和LDL-C含量明显低于模型对照组且与辛伐他汀组比较差异无统计学意义,TG和HDL-C含量与模型对照组比较差异无统计学意义。越鞠丸组与正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组小鼠粪便样本菌群存在显著性差异,模型对照组与辛伐他汀组小鼠粪便样本菌群比较差异无统计学意义。结论:越鞠丸能降低TC和LDL-C,其机制与辛伐他汀不同,越鞠丸可能通过抑制红蝽菌科等4类细菌和促进双歧杆菌科等5类细菌的生长来降低TC和LDL-C。     

依折麦布对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠骨微结构的影响

目的观察依折麦布对高脂饲料喂养的ApoE基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠骨微结构的影响。方法选取8只野生型C57BL6小鼠为野生正常组,将24只ApoE~(-/-)小鼠随机分为ApoE~(-/-)正常组、ApoE~(-/-)高脂组、ApoE~(-/-)高脂加依折麦布组(依折麦布组)。其中依折麦布组小鼠给予依折麦布10 mg/(kg·d)灌胃,其他各组小鼠给予等量去离子水灌胃。6周后取各组小鼠的股骨,分别利用HE染色和番红O/固绿染色观察骨微结构,利用质构仪测定骨生物力学,用免疫组化法测定Cathepsin K蛋白表达情况。结果依折麦布组小鼠骨微结构均明显改善,股骨的第一循环硬度和峰值压力均明显高于ApoE~(-/-)高脂组(P均<0.05),股骨Cathepsin K蛋白表达量均明显低于ApoE~(-/-)正常组和ApoE~(-/-)高脂组(P均<0.05)。结论依折麦布能明显改善高脂饲料喂养的ApoE~(-/-)小鼠骨微结构,提高骨强度,其作用机制与降低Cathepsin K表达量有关。     

天目琼花果实醇提物对高脂饮食诱导ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的抑制作用

目的:探讨天目琼花果实醇提物对高脂饮食诱导ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的抑制作用。方法:40只8周龄的ApoE~(-/-)小鼠高脂饮食诱导动脉粥样硬化动物模型,分为模型组、天目琼花果实组和辛伐他汀组,药物处理12 w。酶法检测血清中总胆固醇(TC)、非高密度脂蛋白(non-HDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)和甘油三酯(TG);Elisa法检测血清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和C-反应蛋白(CRP)。羟胺法和硫代巴比妥法(TBA)检测血清与肝组织中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)。Elisa法检测肝组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性与一氧化氮(NO)。酶法检测肝组织中的脂质沉积,并检测肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,天目琼花果实高剂量组血清TC、non-HDL-C、IL-6、CRP、TNF-α、MMP-9水平显著降低,HDL-C显著升高,肝组织中iNOS活性和NO含量显著降低,氧化应激水平亦得到抑制。结论:天目琼花果实可能通过调节胆固醇代谢与炎症反应、抑制氧化应激和保护血管内皮减轻了高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠的动脉粥样硬化。     

冠心康对ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠血清血脂及炎性微环境的影响

目的观察冠心康对ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠的血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨冠心康抗动脉粥样硬化的作用机制与炎性因子之间的关系。方法以ApoE~(-/-)小鼠给予高脂饲料建立动脉粥样硬化模型。30只ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、冠心康组、辛伐他汀组;10只同遗传背景的C57BL/6J小鼠作为正常组。冠心康组以冠心康煎剂灌胃,辛伐他汀组以辛伐他汀水溶液进行灌胃。各组干预12周时取材。每周检测小鼠体质量;生化仪检测血清血脂;酶联免疫吸附反应(ELISA)检测血清IL-6、IL-8、TNF-α蛋白的表达情况。免疫组化法检测小鼠主动脉CD68蛋白的检测。结果干预12周后,用药组的小鼠体质量均低于模型组(P0.05)。与模型组比较,冠心康组与辛伐他汀组的血清TC、TG、LDL-C下降(P0.05),HDL-C升高(P0.05)。用药组的血清IL-8、TNF-α表达比模型组均下降,差异有统计学意义(P0.05);IL-6表达则升高(P0.05)。与模型组比较,用药组的CD68蛋白表达下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论冠心康可能通过调节血清血脂及炎性因子的表达,降低血管内皮细胞的损伤,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

三七总皂苷对动脉粥样硬化小鼠M1型、M2型巨噬细胞极化的影响

目的 探讨三七总皂苷(panax notoginseng saponins, PNS)对小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)斑块及巨噬细胞极化的影响。方法 普通饲料喂养C57BL/6J小鼠10只作为对照组,高脂饲料喂养ApoE^-/-小鼠50只造AS模型,随机分为模型组、PNS低、中、高剂量组及辛伐他汀组,每组各10只。PNS低、中、高剂量组分别予PNS 30 mg/(kg·d)、60 mg/(kg·d)、120 mg/(kg·d),辛伐他汀组予辛伐他汀3.52 mg/(kg·d),模型组及对照组予等剂量生理盐水灌胃,连续给药8周。全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)水平变化,酶联免疫吸附法测定血清白介素-6(interlenkin-6,IL-...     

麦冬皂苷D对高脂饲养ApoE~(-/-)小鼠血脂及肠道菌群的影响

目的研究麦冬皂苷D(ophiopogonin D,OP-D)对高脂饲养ApoE~(-/-)小鼠血脂及肠道菌群的影响。方法选取6周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠24只,随机均分为对照组、模型组、OP-D组[0.5 mg/(kg·d)]和辛伐他汀组[5 mg/(kg·d)];雄性C57BL/6小鼠6只为空白组。造模12周后,连续给药12周。给药结束后收集小鼠新鲜粪便,检测菌群情况;分离小鼠血清检测血脂水平,制备肝脏切片染色观察损伤情况。结果 OP-D能够降低小鼠因高脂饮食引起的体质量增加,抑制总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)升高,改善肝脂肪变性,并多种水平上调控肠道菌群失调。结论 OP-D可能通过改善高脂饲养的ApoE~(-/-)小鼠肠道菌群失调影响其血脂水平和肝脂肪变性。     

田蓟苷对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠抗动脉粥样硬化活性及作用机制

目的探讨田蓟苷对高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠抗动脉粥样硬化活性及作用机制研究。方法将ApoE~(-/-)小鼠60只随机分为普通饮食组,高脂饮食组,田蓟苷低、中、高剂量组(40、120、200 mg/kg)和阿托伐他汀给药组(15 mg/kg),1次/d,连续给药12周后,收集小鼠血清,检测其中TC(总胆固醇)、TG(甘油三酯)、HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白胆固醇)、ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、TBA(总胆汁酸)和FBG(空腹血糖)水平。通过油红O染色对各组小鼠主动脉进行染色,并计算主动脉斑块面积占总血管面积之比。采用Western blot检测各组小鼠肝脏组织中PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)、p-PI3K、AKT(蛋白激酶B)、p-AKT、SREBP-2(固醇调节元件结合蛋白2)、LDLR(低密度脂蛋白受体)蛋白表达。结果与普通饮食组比较,高脂饮食组ApoE~(-/-)小鼠血清中TC、TG、LDL-C和FBG水平均升高,而HDL-C和TBA水平降低,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。与高脂饮食组比较,田蓟苷高剂量组和阿托伐他汀组ApoE~(-/-)小鼠血清TC水平降低,田蓟苷高剂量组血清TG水平降低,田蓟苷低、中、高剂量组和阿托伐他汀组血清LDL-C水平均降低、主动脉斑块的沉积减少,田蓟苷高剂量组和阿托伐他汀给药组小鼠肝脏组织中p-PI3K、p-AKT、SREBP-2和LDLR蛋白表达升高,差异具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论田蓟苷可降低高脂饮食ApoE~(-/-)小鼠血脂代谢水平,减少主动脉斑块沉积,可能与调节肝脏中SREBP-2和LDLR蛋白表达有关,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

二氢杨梅素对高脂诱导ApoE~(-/-)小鼠肝脏损伤的保护作用及机制

目的本研究探讨二氢杨梅素对高脂诱导的非酒精性脂肪肝小鼠的保护作用及作用机制。方法取健康雄性ApoE~(-/-)小鼠40只,随机分为4组,即模型组,二氢杨梅素低、高剂量组,双环醇组,每组10只;另取10只C57小鼠作为对照组。对照组与模型组予以0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃0.2 m L/10 g,二氢杨梅素分别以50、100 mg/(kg·d)混悬液灌胃,双环醇组以140 mg/(kg·d)混悬液灌胃。高脂饲料(0.3%胆固醇,20%脂肪)持续饲养12周后,测量各组小鼠的体质量,眼眶取血,分离血清。生化仪检测血脂四项、AST、ALT水平。HE染色观察肝脏病理学改变,油红O染色观察肝细胞内脂质沉积状况;试剂盒检测氧化酶的表达;TUNEL实验检测肝脏细胞凋亡情况,应用免疫组化检测肝脏Bcl-2和Caspase-3的表达。Western评价肝脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平。结果连续灌胃12周后,与对照组相比,模型组小鼠表现出肝脏脂肪变性并伴肝脏氧化损伤;同时TUNEL阳性细胞数增多,肝脏中Caspase-3表达升高且Bcl-2含有量减少;肝组织内AMPK磷酸化水平显著升高。与模型组比较,二氢杨梅素高、低剂量组和双环醇组可改善AST和ALT水平,减轻各治疗组小鼠肝脏脂肪变性,调控氧化酶的表达,降低TUNEL阳性细胞数,提高肝脏中Bcl-2和减少Caspase-3的表达,降低肝组织内AMPK磷酸化水平。结论二氢杨梅素能够降低肝脏脂质沉积,保护肝损伤从而改善高脂饲料诱导的ApoE~(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝,其机制可能与其通过下调AMPK磷酸化水平进而抑制肝细胞凋亡有关。     

邓老冠心方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块内新生血管及VEGF信号通路的影响

目的研究邓老冠心方防治动脉粥样硬化(AS)不稳定斑块发生发展的可能作用机制。方法以高脂饲料喂养雄性ApoE~(-/-)小鼠13周,复制AS小鼠模型。将模型小鼠随机分成模型组、邓老冠心方高剂量组、低剂量组、辛伐他汀组,分别给予蒸馏水、邓老冠心方和辛伐他汀干预12周。胸主动脉组织切片免疫组化观察斑块内新生血管标志物白细胞分化抗原(CD)34阳性表达,检测各组血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、缺血诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的表达水平。结果与模型组比较,邓老冠心方高低剂量组及辛伐他汀组对CD34阳性染色的新生血管含量均较模型组减少(P 0.05),大剂量组、辛伐他汀组与小剂量组比较有统计学意义(P 0.05)。与正常对照组比较,模型组小鼠血管壁VEGF、VEGFR2-2、HIF-1α mRNA表达水平明显升高(P 0.001);各药物处理组和模型组相比较表达均显著下降(P 0.01),其中高剂量组下降最明显与辛伐他汀组及低剂量组比较有统计学意义(P 0.05)。结论邓老冠心方可抑制Apo E-/-小鼠AS斑块内的血管新生,并具有剂量依赖性,其机制可能与影响斑块内VEGF、VEGFR-2、HIF-1α mRNA的表达有关。     

基于代谢组学探究清血消脂方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的干预作用

目的采用基于氢谱的核磁共振代谢组学(~1H-nuclear magnetic resonance,~1H-NMR)技术,从整体代谢网络调控角度阐释化痰活血复方清血消脂方干预ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型的作用机制。方法高脂饮食9周建立ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型,将造模成功的小鼠随机分为3组:模型组、清血消脂方组(4.541 g/kg)、阿托伐他汀钙组(0.003 g/kg),每组15只,另取正常饮食同周龄小鼠15只作为空白对照组。于第9～18周连续给药,给药组每日2次灌胃给药,空白对照组及模型组分别给予等体积的蒸馏水。给药9周后,观察各组小鼠主动脉组织结构及病理改变;采用酶直接法微量测定血脂水平、化学发光微粒子免疫检测法测定血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)含量;采用~1H-NMR代谢组学技术对小鼠血浆样本中的内源性物质进行了相对含量测定。结果清血消脂方对高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型糖脂、氨基酸等代谢紊乱有明确的治疗作用,通过代谢组学及主成分分析可得出,空白对照组与模型组显著分离,清血消脂方组与阿托伐他汀组处于模型组与空白对照组之间,并且向空白对照组靠近。数据分析处理发现其改善ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型的糖脂代谢紊乱以及氨基酸代谢异常与同型半胱氨酸、胆碱/磷脂酰胆碱、氧化三甲胺(trimethylamine-n-oxide,TMAO)、胆汁酸、短链脂肪酸等28个代谢物有关。结论化痰活血复方清血消脂方通过改善ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型体内的糖脂代谢、TMAO、同型半胱氨酸及胆碱/磷脂酰胆碱、胆汁酸、丁酸等代谢产物水平延缓动脉粥样硬化的进展。     

定心方上调ApoE-/-小鼠PTEN表达抑制动脉粥样硬化形成的分析

目的:探讨定心方(DXR)对Apo E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠人第十号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同系物(PTEN)的影响,以及DXR抗AS的可能机制。方法:将50只ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组,辛伐他汀组,DXR低、中、高剂量组,另取10只C57/BL6J小鼠作为正常组。分别给予DXR低、中、高组按剂量9.25,18.59,37.18 g·kg-1·d~(-1)DXR药液ig,辛伐他汀组按剂量0.005 g·kg-1·d~(-1)ig辛伐他汀,高脂饲料喂养16周后处死,苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉斑块面积,检测小鼠血脂以及血清中丙二醛(MDA),总超氧化物歧化酶(T-SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),总抗氧化能力(T-AOC)水平。蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测胸主动脉PTEN蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血脂及MDA明显升高(P0.05),T-SOD,GSH-Px,T-AOC水平降低,胸主动脉PTEN蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,DXR中、高剂量组能明显降低ApoE~(-/-)小鼠血脂水平,升高T-SOD,GSH-Px,T-AOC水平,并降低MDA水平(P0.05),且能上调ApoE~(-/-)小鼠主动脉PTEN蛋白表达水平(P0.05)。DXR各剂量组斑块面积较模型组明显缩小(P0.05)。结论:DXR可通过调节ApoE~(-/-)小鼠血脂代谢,抑制氧化应激,上调PTEN蛋白表达,进而抑制ApoE~(-/-)小鼠AS的发生发展。     

化瘀祛痰方对载脂蛋白E基因敲除小鼠肝脏脂质过氧化及p53、GPX4、xCT表达的影响

目的探讨化瘀祛痰方治疗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法 24只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠随机分为模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,8只C57BL/6J小鼠作为空白组。除空白组外,其他各组给予高脂饲料喂养制备AS模型。化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方20g/(kg·d)灌胃;辛伐他汀组给予辛伐他汀2.275mg/(kg·d)灌胃,空白组与模型组均给予0.5ml生理盐水灌胃。各组均灌胃4周后,检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平,肝脏铁死亡相关因子p53、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)蛋白及mRNA表达;观察肝脏组织形态学改变。结果与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高,肝脏组织内ROS、MDA水平显著升高,SOD活性显著下降,肝脏组织p53蛋白及mRNA的表达增高,GPX4、xCT蛋白和mRNA水平显著降低(P0.01),HE染色显示肝细胞肿胀明显且胞浆内含有大量脂肪空泡蓄积。与模型组比较,化瘀祛痰组及辛伐他汀组小鼠血清TC、TG和LDL-C水平显著降低,肝脏组织内ROS、MDA水平显著降低,SOD活性显著升高,p53蛋白及mRNA的表达降低,GPX4、xCT蛋白和mRNA水平显著升高(P0.05或P0.01);肝细胞形态恢复或者部分恢复,胞浆内脂滴含量明显减少。结论化瘀祛痰方可能通过调控p53/xCT通路影响肝细胞铁死亡,减轻肝脏脂质过氧化损伤,从而防治AS。     

四妙勇安汤对ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠IL-6和MCP-1的影响

目的:研究四妙勇安汤对高脂饲料喂养的ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化炎症反应的干预作用。方法:采用高脂饲料喂养ApoE~(-/-)小鼠14周制备动脉粥样硬化模型,成模后随机分为5组:模型组,阳性药组(阿托伐他汀,2.57 mg·kg~(-1)),四妙勇安汤高剂量组(34.9 g·kg~(-1))、四妙勇安汤中剂量组(23.14 g·kg~(-1))和四妙勇安汤低剂量组(11.61 g·kg~(-1)),分别灌胃给药12周,同时以C57BL/6小鼠为正常对照组,给予去离子水灌胃12周。采用生化仪检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;HE染色观察主动脉血管形态,并测量主动脉内膜厚度(IT)、中膜厚度(MT)、血管管腔面积(LA)、粥样斑块面积(PA)、内中膜厚度比(IT/MT)、管腔狭窄率(PA/LA);采用流式高通量多因子检测技术检测血清中白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)炎症细胞因子表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C明显提高,HDL-C明显降低,PA、IT及IT/MT明显升高(P0.01)。与模型组比较,四妙勇安汤能够明显降低ApoE~(-/-)小鼠主动脉PA、IT及IT/MT(P0.01),并明显降低IL-6及MCP-1表达(P0.01、P0.05),但对血脂水平无明显的影响。结论:四妙勇安汤可以通过抑制炎症反应防治动脉粥样硬化,而不依赖血脂水平的变化。     

马黛通络饮对小鼠动脉粥样硬化血管内皮损伤的保护作用

目的:研究马黛通络饮对动脉粥样硬化(AS)小鼠模型血管内皮损伤的保护作用机制。方法:选取5周龄雄性AopE-/-鼠48只,随机分为模型组、辛伐他汀组和马黛通络饮高、低剂量组,相同遗传背景C57BL/6J雄性小鼠为正常对照组,共5组,每组12只。除正常对照组外,其余各组给予高脂饲料喂养4周造模,马黛通络饮高、低剂量组每天给予马黛通络饮煎剂20 g/(kg·d)、10 g/(kg·d)灌胃,辛伐他汀组每天给予辛伐他汀稀释液0.01 g/(kg·d)灌胃,正常对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水。连续灌胃8周后,采用ELISA法检测各组小鼠主动脉组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、内皮源型一氧化氮合酶(eNOS)水平,Western blot法检测核转录因子-κB(NF-κB)的水平。结果:与正常对照组比较,模型组、辛伐他汀组、马黛通络饮低剂量组、马黛通络饮高剂量组小鼠主动脉组织中的TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、NF-κB水平显著升高,eNOS显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,辛伐他汀组、马黛通络饮低剂量组、马黛通络饮高剂量组小鼠主动脉组织中的TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、NF-κB显著降低,eNOS显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:马黛通络饮通过抑制NF-κB信号通路的活性,降低Apo E基因敲除小鼠主动脉内TNF-α、IL-6、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1等炎性因子、黏附分子、趋化因子水平,增加了eNOS的表达,达到抑制炎症浸润、保护血管内皮的作用。     

鱼腥草挥发油对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

[目的]观察鱼腥草挥发油对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及探讨其作用机制。[方法]SPF级C57BL/6小鼠120只,雌雄各半,随机分为假手术组、模型组、辛伐他汀阳性对照组,鱼腥草挥发油高、中、低剂量组,每组20只。造模前连续灌胃给药14 d,其中辛伐他汀阳性对照组灌胃给药20 mg/(kg·d),鱼腥草挥发油低、中、高剂量组分别灌胃给药5、10、20 mg/(kg·d),假手术组、模型组灌胃给予等量生理盐水。末次给药1 h后,除假手术组外,其它各组构建小鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)模型,观察各组小鼠行为学、脑梗死面积、脑水含量和脑海马齿状回的变化,检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、总超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量。[结果]与模型组比较,鱼腥草挥发油低、中、高剂量组明显改善行为学评分和脑海马齿状回神经元的形态学变化,降低脑梗死率、脑水含量和血清TNF-α、IL-8含量(P0.05),升高血清SOD活性(P0.05),降低MDA含量(P0.05),且呈剂量依赖性。辛伐他汀阳性对照组也明显改善上述指标。[结论]鱼腥草挥发油对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用且呈剂量依赖性,其作用机制可能与减轻炎症和抗过氧化损伤有关。