γ射线辐照外周血单个核细胞对肿瘤细胞杀伤作用的研究

目的:观察γ射线辐照外周血单个核细胞对培养人前列腺癌细胞系PC-3细胞的杀伤作用。方法:实验设PC-3P肿瘤细胞对照组、单纯外周血单个核细胞对照组、照射和未照射的外周血单个核细胞与肿瘤细胞共培养组,照射剂量为1Gy,吸收剂量率为17Gy/min。利用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光双染色法和MTT比色法,观察外周血单个核细胞对PC-3细胞的杀伤情况。结果:外周血单个核细胞在照射后体外培养至144h有大量细胞死亡,存活细胞明显少于未照射组,培养至240h时,照射与非照射组中存活的外周血单个核细胞均减少,但是在照射的各组中减少更为明显。在外周血单个核细胞与PC-3肿瘤细胞共培养时,照射组在培养至96h时,γ射线照射外周血单个核细胞对前列腺癌细胞的杀伤作用明显增强,杀伤活性明显增加。结论:γ射线辐照对某些外周血单个核细胞有损伤作用,但是γ射线辐照的外周血单个核细胞其杀伤肿瘤细胞活性增强。     

IL-2诱导外周血单个核细胞对肿瘤细胞的杀伤效应

目的　了解白细胞介素 2 (IL 2 )诱导外周血单个核细胞 (PBMC)对肿瘤细胞的杀伤效应 ,探讨其作用机制。方法　IL 2 ( 10 5IU/L)体外诱导PBMC 5d ,并与Raji细胞株共同培养 ,采用MTT法测定不同时间诱导后的PBMC对Raji细胞的杀伤效应 ;采用BAS ELISA法检测杀伤活性最大时的IFN γ、TNF α、sFasL的表达 ,采用流式细胞仪检测诱导后PBMC的FasL、穿孔素、颗粒酶B的表达。结果　IL 2 ( 10 5IU/L)体外诱导PBMC 5d时 ,都能明显增强对Raji细胞的杀伤活性 ,而且在培养的第 4天杀伤活性最高 (P <0 0 5 ) ,诱导PBMC 4d后 ,FasL、穿孔素、颗粒酶B的表达与B组相比 ,明显增加 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　IL 2 ( 10 5IU/L)体外诱导PBMC能明显增强对Raji细胞的杀伤活性 ,主要是通过诱导PBMC表达IFN γ、穿孔素、颗粒酶B和FasL的表达而发挥抗肿瘤细胞的作用     

钙离子载体A23187诱导人外周血单个核细胞生成树突状细胞

目的:研究钙离子载体(CI)A23187诱导健康人外周血单个核细胞(PBMNCs)生成树突状细胞(DCs),探索DCs扩增的新方法。方法:分离健康人PBMNCs,分别加入GM-CSF+IL-4,A23187。体外培养72 h后,于光镜、电镜下观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞的表面标志,MTT比色法检测其对同种异体T细胞的刺激增殖作用,ELISA法检测IL-12、IFN-γ的水平。结果:健康人PBMNCs在A23187的条件下培养72 h后,就可以看到典型的DCs形态,CD40、CD86、CD83分子的表达均明显增高,但CD1α分子的表达增高不明显。具有明显刺激同种异体T细胞增殖的能力。IL-12、IFN-γ的水平比其他组明显增高。结论:健康人PBMNCs在钙离子载体A23187作用下能更有效地诱导生成成熟DCs。     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞对丙型肝炎的影响

为了研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对丙型肝炎的影响,运用非同位素原位杂交法（ＮＩＳＨ）和链酶亲和素－生物素（ＳＡＢＣ）法分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ及其Ｔ淋巴细胞亚群,同时检测这些患者的肝功能指标。结果显示８例（４０．０％）ＨＣＶ患者的ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ呈阳性结果。ＨＣＶ－ＲＮＡ呈散在颗粒状或弥漫分布,主要位于胞浆中。ＨＣＶ－ＲＮＡ阳     

雷公藤单体TZ93对人外周血单个核细胞表型的影响

研究雷公藤治疗系统性红斑狼疮的作用机制。以激活的正常人外周血单个核细胞（PBMC）为细胞模型，应用荧光激活细胞分类仪（FACS）分析雷公藤单体TZ93对PBMC细胞表型的影响。10名正常女性的PBMC分成3组：Ⅰ组PBMC，Ⅱ组PBMC＋PHA，Ⅲ组PBMC＋PHA＋TZ93，分别加入鼠抗人CD8、CD4、CD25、NK抗体。结果：FACS显示TZ93能显著抑制激活的PBMC中CD4＋、CD8＋、CD25＋的表达及NK活性。结论：TZ93能明显抑制PBMC表型的表达，是一种有效的细胞免疫抑制剂。     

SLE患者外周血单个核细胞凋亡的研究

目的 探讨ＳＬＥ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡率异常是否与其自身抗体产生高低有关。方法 采用碘化丙锭（ＰＩ）染色法,在流式细胞仪下宣检测２０例ＳＬＥ患者及１０名正常人ＰＢＭＣ体外凋亡情况,同时观察了ＳＬＥ患者自身抗体的表达及与凋亡率的关系。结果 ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ体外培养０、２４、４８、７２ｈ后凋亡率较正常人明显增高（Ｐ〈０．０５）,且活动期ＳＬＥ高于非活动期（Ｐ〈０．０５）。ＳＬＥ患者自身     

小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ频率年龄依赖性初探

目的通过检测不同日龄小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率，初步探讨小型猪免疫细胞功能的发育时限。方法分别取3日龄、2月龄、6月龄、1周岁及2周岁小型猪的外周血，提取单个核细胞，进行胞内细胞因子IFN-γ染色，流式细胞仪检测不同日龄小型猪外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率。结果3日龄、2月龄、6月龄、1周岁及2周岁小型猪的外周血单个核细胞产生IFN-γ的频率分别为2．73％、3．80％、10．00％、38．09％及41．03％。结论小型猪免疫细胞功能具有明显的发育时限。1周岁以上小型猪的免疫细胞功能发育基本成熟。     

CpG-ODN活化的外周血单个核细胞体外对肿瘤细胞杀伤效应的研究

目的探讨CpGODN体外活化的外周血单个核细胞（PBMC）后对肿瘤细胞的杀伤效应。方法CpG—ODN体外刺激人外周血单个核细胞（PBMC），将活化的PBMC与肿瘤细胞按50：1的比例共孵育72h后，以MTT和酶学检测活化的PBMC对肿瘤细胞的杀伤作用。结果CpC—ODN诱导活化的PBMC对肿瘤细胞的杀伤作用增强，而对正常肝细胞则无明显的杀伤作用。结论CpG—ODN可诱发机体免疫效应，提高对肿瘤细胞的杀伤作用。     

γ射线诱导下PUMA基因在人前列腺癌细胞中的作用

目的研究在γ射线诱导下PUMA基因(p53 up-regulated modulator of apoptosis)在人前列腺癌细胞(p53野生型LNCaP细胞、p53变异型PC-3细胞)中的作用效果。方法采用MTT方法检测在3、5、8Gy照射剂量的γ射线诱导下人前列腺癌细胞的抑制率;采用RT-PCR的方法检测在3、5、8Gy照射剂量的γ射线诱导下PUMA基因的表达情况。结果在γ射线诱导下LNCaP细胞抑制率较PC-3细胞抑制率高(P<0.01);随γ射线照射剂量的增加,LNCaP细胞中PUMA-mRNA的表达越明显(P<0.05)。结论γ射线诱导下PUMA基因可促使人前列腺癌LNCaP细胞凋亡。     

芦荟多糖对肝癌细胞及外周血单个核细胞作用的研究

目的：探讨芦荟多糖抑制肝癌细胞生长的作用机制。方法：采用四氮唑盐法（MTT）法检测不同浓度的芦荟多糖对体外培养的原发性肝癌细胞（PHCC）与自体外周血单个核细胞（PBMC）生长的影响。结果：芦荟多糖可不同程度地抑制肝癌细胞的生长，促进外周血单个核细胞的生长，并且呈浓度依赖性。结论：芦荟多糖可提高机体的免疫力以达到抑制肿瘤生长的作用，并在一定程度上可直接抑制体外肿瘤细胞的生长。     

BCG-DNA对哮喘患者外周血单个核细胞IFN-γ和IL-4产生的作用

目的:研究免疫活性物质卡介苗基因组DNA(BCG-DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC) IFN-γ和IL-4产生的影响.方法:分离哮喘患者PBMC,分别加入BCG-DNA、地塞米松刺激培养,ELISA检测培养上清中IFN-γ及IL-4含量,RT-PCR检测PBMC IFN-γ mRNA及IL-4 mRNA的表达量,并与空白对照组相比较.结果:地塞米松在体外对哮喘患者PBMC产生的IFN-γ mRNA和蛋白、IL-4 mRNA和蛋白均有抑制作用;BCG-DNA抑制哮喘患者PBMC IL-4 mRNA和蛋白的分泌,而促进IFN-γ mRNA和蛋白的分泌,与对照组比较差异显著(P<0.01),且在体外对PBMC无毒性.结论:BCG-DNA不仅具有和地塞米松相同的下调IL-4表达的作用,而且还具有地塞米松所没有的诱导IFN-γ表达的作用,利于纠正哮喘患者体内存在的Th1/Th2比例失衡状态,起到治疗作用.     

急性肾炎患儿外周血单个核细胞NF-KB的表达

目的:探讨NF-KB在肾炎发生和发展中的作用。方法:采用MMLV-步法RT-PCR法,检测急性肾炎患儿疾病期外周血单个核细胞NF-KB的表达。结果:急性肾炎患儿外周血单个核细胞NF-KB表达高于正常对照组。结论:外周血单个核细胞NF-KB可作为肾炎发生时炎症反应指标。     

外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系的研究

目的 建立外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系,探讨不同培养基及效靶比对共培养体系的影响.方法 分离正常人外周血单个核细胞,加人植物血凝素(PHA),置于不同的培养基(DMEM,RPMI1640)中进行培养,采用不同效靶比((5:1、10:1、20:1、40:1)构建PBMCs与HepG2.215细胞共培...     

乙肝患者外周血单个核细胞乙肝病毒DNA的检测及临床意义

目和：研究乙肝患者外周血单个核细胞乙肝病毒ＤＮＡ检测的临床意义。方法：用聚合酶链反应技术检测６０例乙肝患者外周血单个核细胞及血清中乙肝病毒ＤＮＡ。结果：６０例乙肝患者血单个核细胞及血清中乙肝病毒ＤＮＡ的阳性率分别为４３．３％，４５％，同时检测血清中ＨＢｅＡｇ，其阳性率为２８．２％，外周血单个核细胞乙肝病毒ＤＮＡ的阳性检测率与血清乙肝病毒ＤＮＡ具有一致性；急性肝炎患者外周血单个核细胞乙肝病毒ＤＮＡ的     

乙肝疫苗刺激后慢性乙肝患者外周血单个核细胞分泌γ-IFN和IL-4水平及临床意义

目的:探讨慢性乙肝(CHB)患者血清及经乙肝疫苗刺激后外周血单个核细胞(PBMCs)培养上清γ干扰素(γ-IFN)和白细胞介素-4(IL-4)水平及临床意义.方法:分离13例CHB患者及10名正常人PBMCs.PBMCs体外单独培养或与乙肝疫苗共培养48小时后,检测血清及培养上清中γ-IFN和IL-4水平.结果:在血清、空白处理的PBMCs培养上清,以及乙肝疫苗处理后的PBMCs培养上清中,慢性乙肝患者的IL-4水平均较对照组高,而γ-IFN水平均比对照组低;同时,经乙肝疫苗处理后病例组和对照组PBMCs培养上清中IL-4水平都较空白处理组显著增高,尤以病例组明显;经乙肝疫苗处理后,病例组和对照组PBMCs培养上清中γ-IFN水平无明显增高.结论:慢性乙肝患者Th1和Th2应答失衡,以Th2应答为优势;重组乙肝疫苗能够增强慢性乙肝患者Th2应答;慢性乙肝患者血清中可能存在抑制免疫应答的物质;重组乙肝疫苗可能不包含能够刺激Th1应答的表位.     

尼古丁对体外培养人外周血单个核细胞分泌TNF的影响

OBJECTIVE: To observe the effect of nicotine on the secretion of TNF of human peripheral blood mononuclear cells (PBMC) in vitro, and explore the possible mechanism of the high level of TNF caused by smoking. METHODS: Twenty-one non-smokers and 19 smokers were studied. The PBMCs isolated from each volunteer's blood sample were distributed to three groups, and cultured for 72 hours in supplemented RMPI 1640 alone or in supplemented RPMI 1640 containing 50 ng.ml-1 nicotine or 500 ng.ml-1 nicotine respectively. The level of TNF in supernate was quantified with the immuno-radioassay, and PBMC proliferation was observed. RESULTS: The level of TNF spontaneously secreted by PBMCs in smokers was significantly higher than that in non-smokers (P < 0.05). When the concentrations of nicotine were 50 ng.ml-1 and 500 ng.ml-1, the level of TNF increased significantly in non-smokers (P < 0.05, P < 0.01). In smokers, the level of TNF significantly increased when the concentration of nicotine was 50 ng.ml-1; however, the level of TNF significantly decreased (P < 0.05), and the proliferation of PBMCs was inhibited when the concentration of nicotine was 500 ng.ml-1 (P < 0.05, P < 0.05). The level of TNF was positively correlated to the multiple of PBMC proliferation (r = 0.93, P < 0.05). The linear regression equation was Y = 2.913X - 2.955. CONCLUSION: Nicotine can induce PBMCs to secrete more TNF, and the magnitude of the effect is strongly related to the dosage of nicotine, but a great dose of nicotine will inhibit the production of TNF.     

辛伐他汀对IFN-γ诱导的人外周血单个核细胞CD40表达的影响

目的:探讨经IFN-γ刺激后,人外周血单个核细胞表达CD40的变化,以及经辛伐他汀干预后不同基因型单个核细胞表达CD40的影响。方法:随机选择42例健康志愿者,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞并原代培养,用100μg/LIFN-γ及20μmol/L辛伐他汀对单个核细胞进行干预,流式细胞术检测单个核细胞培养24h后表达CD40的水平。聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测这42位志愿者CD40-1C/T基因多态性,分析不同基因型个体外周血单个核细胞表达CD40的水平。结果:基础状态下单个核细胞培养24h后,CD40表达水平升高,且CC、CT、TT基因型单个核细胞CD40表达水平无显著差异(P>0.05);IFN-γ刺激状态下,单个核细胞CD40表达水平显著升高,且CC基因型升高的幅度显著高于CT、TT基因型(P<0.05);辛伐他汀和IFN-γ共同作用下,辛伐他汀可显著抑制IFN-γ诱导的CD40表达,但对CC、CT、TT基因型单个核细胞的抑制率没有统计学意义(P>0.05)。结论:CD40-1C/T多态性可以影响单个核细胞CD40表达水平,辛伐他汀可显著抑制IFN-γ刺激后CD40的表达,但对不同基因型单个核细胞的保护作用无显著性差异。