葛根素对胰岛素抵抗-高血压大鼠自由基损伤的拮抗作用

目的：观察葛根素对胰岛素抵抗一高血压大鼠自由基损伤的作用。 方法：①实验于2003—12／2004—03在广州市中医中药研究所药理教研室完成。选用出生6～8d的健康SD大鼠71只，雌雄不拘。②随机抽出20只为正常对照组，饮用蒸馏水和喂饲普通饲料；其余大鼠给予饮用50s／L蔗糖水和20s／L盐水及喂饲高脂高盐高糖饲料造成胰岛素抵抗一高血压病理模型。造模8周后，挑选血压和糖耐量异常的胰岛素抵抗一高血压造模成功大鼠51只，随机分为5组：模型组（n=11）、卡托普利组（n=10）、葛根素高剂量组（n=10）、葛根素中剂量组（n=10）、葛根素低剂量组（n=10）。各组均照上述方法继续造模4周。同时，正常对照组和模型组：肌肉注射500s／L丙二醇，0．8mL／kg，1次／d，共4周；卡托普利组：肌肉注射卡托普利注射液7mg／ks，1次／d，共4周；葛根素高、中、低剂量组：按华兴帮《大鼠穴位图谱的研制》及《实验动物与动物实验》中的取穴方法，选取大鼠双侧足三里（后三里）、脾俞、肾俞，按80，40，20mg／ks给予葛根素进行穴位注射，每天l组穴位，交替使用，1次／d，共4周。③分别给药4周后，用大鼠血压仪测定大鼠尾动脉收缩压；用ONETOUCH Ⅱ血糖仪测定大鼠血糖；采用生化分析仪测定血清一氧化氮水平及一氧化氮合酶、丙二醛、超氧化歧化酶活性和空腹血糖水平；用酶联免疫分析仪测定血浆胰岛素含量，计算胰岛素敏感指数[1／（空腹血糖&;#215;空腹胰岛素）1。④计量资料差异比较采用组间t检验（方差不齐，用t’检验）。 结果：SD大鼠71只均进入结果分析。①卡托普利组、葛根素高、中剂量组给药4周后血压明显低于模型组（P〈0．01）。卡托普利组和葛根素高、中剂量组血浆胰岛素水平明显低于模型组，胰岛素敏感指数明显高于模型组（P〈0．05～0．01）；而葛根素低剂量组上述指标与模型组比较，差异不明显（P〉0．05）。②模型组血清一氧化氮和丙二醛水平，一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活力明显高于正常对照组（P〈0．01）；超氧化物歧化酶活力明显低于正常对照组（P〈0．01）。卡托普利和葛根素高剂量组血清超氧化物歧化酶活力明显高于模型组（P〈0．05，0．01）；卡托普利组和葛根素高、中剂量组血清丙二醛水平均明显低于模型组（P〈0．05～0．01）；葛根素低剂量组上述指标与模型组比较，差异不明显（P〉0．05）。卡托普利组，葛根素高、中剂量组血清一氧化氮水平和一氧化氮合酶及诱导型一氧化氮合酶活力均明显低于模型组（P〈0．054）．01）；葛根素低剂量组血清诱导型一氧化氮合酶水平也明显低于模型组（P〈0．01），但一氧化氮水平及诱导型一氧化氮合酶活力与模型组相近（P〉0．05）。 结论：葛根素能增强胰岛素抵抗-高血压大鼠的抗氧化能力，减轻自由基损伤，降血压，改善胰岛素抵抗，增强胰岛素敏感性。     

骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤

目的:骨髓基质干细胞是存在于骨髓中的一类具有自我更新和增殖能力的干细胞,可以在体内和体外特定条件下转化为神经细胞,把骨髓基质干细胞植入损伤的脊髓组织中,能减轻神经功能的缺损程度,促进神经功能的恢复,故有望成为临床上脊髓损伤治疗的一种新方法。资料来源:应用计算机检索Medline1976-01/2004-03期间的关于骨髓基质干细胞的文章,检索词包括“BonemarrowMesenchymalStemCell;spinalcordinjury;transplantation”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国全文期刊数据库1994-01/2004-03期间的关于骨髓基质干细胞的文章,检索词“骨髓基质干细胞;脊髓损伤;移植”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选择与骨髓基质干细胞生物学特性、神经分化潜能、骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤实验研究相关的文章,然后筛除与以上要求无明显联系及重复性研究的文章。资料提炼:共收集到65篇关于骨髓基质干细胞的文献,涉及骨髓基质干细胞生物学特性的37篇,神经分化潜能的18篇,骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤实验研究的10篇,排除47篇,纳入与本文密切相关的18篇。资料综合:骨髓基质干细胞具有多向分化能力,不具有特异性标志物,无法用某种特异性标志对其进行鉴定和分离。但骨髓基质干细胞可以在体内转化为神经元样细胞。骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤主要有取材方便,培养简单,并可自体移植,无免疫排斥反应等优点。但移植后效果有待进一步观察和临床应用验证。结论:从骨髓中分离骨髓基质干细胞,经体外培养扩增后移植到脊髓损伤部位,强化神经组织的修复过程,是可行的治疗手段,这为脊髓损伤治疗提供了新的方法和途径。     

自体骨髓基质源干细胞在损伤脑区及其他脑区的分布

背景：近来骨髓基质细胞多向分化潜能的发现，特别是骨髓基质细胞向神经干细胞方向分化的成功，为干细胞移植治疗神经系统损伤提供了可能。目的：观察自体骨髓基质源干细胞对脑损伤的治疗作用。设计：以BrdU标记的自体骨髓基质源干细胞在模型动物损伤脑区和其他脑区的分布为观察对象的前瞻性研究。单位：北京军区总医院。材料：实验于1999-10／2002—02在北京军区总医院完成。取1．5～3．0岁成年家犬22只，雌雄不限，体质量（13&;#177;2）kg。随机分为假手术组6只，常规治疗组8只，骨髓基质源神经干细胞组8只。方法：对犬骨髓基质细胞进行采集、分离、体外扩增、标记和移植用细胞培养。假手术组仅做皮肤切口及颅骨锥孔，不致中脑损伤，于麻醉清醒后行正常进食。常规治疗组行中脑被盖区毁损后行三磷酸腺苷20mg，辅酶A50U，加入生理盐水中静脉滴注，2次／d，共3d。骨髓基质源神经干细胞组行中脑被盖区毁损，然后给予骨髓基质细胞源神经干细胞1mL和脑脊液1mL的混合液，注入脑室，1次／d，共3d。术后第1，7，14，28天4个时间点观察骨髓基质源干细胞在损伤脑区及其他脑区的分布情况。主要观察指标：观察骨髓基质源干细胞在损伤脑区及其它脑区的分布情况。结果：22只动物均进入结果分析。①在术后第28天：骨髓基质源神经干细胞组BrdU阳性细胞明显高于假手术组和常规治疗组[（15．4&;#177;2．4，0．5&;#177;0．5，0．5&;#177;0．5）个1。②骨髓基质源神经干细胞组术后第14天脑片BrdU阳性细胞数：中脑的伤侧明显高于对侧[（15．5&;#177;3．3，5．0&;#177;1．5）个]；额叶的伤侧高于对侧[（1．6&;#177;0．6，1．5&;#177;0．7）个]。结论：由于骨髓基质源神经干细胞移植组BrdU阳性细胞数在脑损伤区的分布明显多于对侧非伤区和两个对照组的同部位。提示骨髓基质源干细胞可向损伤脑区迁移，能对脑干损伤的恢复有一定促进作用。     

葛根素对胰岛素抵抗-高血压大鼠自由基损伤的拮抗作用

目的:观察葛根素对胰岛素抵抗-高血压大鼠自由基损伤的作用。方法:①实验于2003-12/2004-03在广州市中医中药研究所药理教研室完成。选用出生6～8d的健康SD大鼠71只,雌雄不拘。②随机抽出20只为正常对照组,饮用蒸馏水和喂饲普通饲料;其余大鼠给予饮用50g/L蔗糖水和20g/L盐水及喂饲高脂高盐高糖饲料造成胰岛素抵抗-高血压病理模型。造模8周后,挑选血压和糖耐量异常的胰岛素抵抗-高血压造模成功大鼠51只,随机分为5组:模型组(n=11)、卡托普利组(n=10)、葛根素高剂量组(n=10)、葛根素中剂量组(n=10)、葛根素低剂量组(n=10)。各组均照上述方法继续造模4周。同时,正常对照组和模型组:肌肉注射500g/L丙二醇,0.8mL/kg,1次/d,共4周;卡托普利组:肌肉注射卡托普利注射液7mg/kg,1次/d,共4周;葛根素高、中、低剂量组:按华兴帮《大鼠穴位图谱的研制》及《实验动物与动物实验》中的取穴方法,选取大鼠双侧足三里(后三里)、脾俞、肾俞,按80,40,20mg/kg给予葛根素进行穴位注射,每天1组穴位,交替使用,1次/d,共4周。③分别给药4周后,用大鼠血压仪测定大鼠尾动脉收缩压;用ONETOUCHⅡ血糖仪测定大鼠血糖;采用生化分析仪测定血清一氧化氮水平及一氧化氮合酶、丙二醛、超氧化歧化酶活性和空腹血糖水平;用酶联免疫分析仪测定血浆胰岛素含量,计算胰岛素敏感指数[1/(空腹血糖×空腹胰岛素)]。④计量资料差异比较采用组间t检验(方差不齐,用t’检验)。结果:SD大鼠71只均进入结果分析。①卡托普利组、葛根素高、中剂量组给药4周后血压明显低于模型组(P<0.01)。卡托普利组和葛根素高、中剂量组血浆胰岛素水平明显低于模型组,胰岛素敏感指数明显高于模型组(P<0.05～0.01);而葛根素低剂量组上述指标与模型组比较,差异不明显(P>0.05)。②模型组血清一氧化氮和丙二醛水平,一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活力明显高于正常对照组(P<0.01);超氧化物歧化酶活力明显低于正常对照组(P<0.01)。卡托普利和葛根素高剂量组血清超氧化物歧化酶活力明显高于模型组(P<0.05,0.01);卡托普利组和葛根素高、中剂量组血清丙二醛水平均明显低于模型组(P<0.05～0.01);葛根素低剂量组上述指标与模型组比较,差异不明显(P>0.05)。卡托普利组,葛根素高、中剂量组血清一氧化氮水平和一氧化氮合酶及诱导型一氧化氮合酶活力均明显低于模型组(P<0.05～0.01);葛根素低剂量组血清诱导型一氧化氮合酶水平也明显低于模型组(P<0.01),但一氧化氮水平及诱导型一氧化氮合酶活力与模型组相近(P>0.05)。结论:葛根素能增强胰岛素抵抗-高血压大鼠的抗氧化能力,减轻自由基损伤,降血压,改善胰岛素抵抗,增强胰岛素敏感性。     

持续性压力培养环境对兔骨髓基质干细胞增殖的影响

背景:骨髓基质干细胞来源的成骨细胞是骨髓腔内主要的受力细胞,在人工关节置换病例中,其生命活动状况与假体传导压力有密切关系.目的:观察持续性压力培养环境对兔骨髓基质干细胞增殖的影响.揭示持续压力致假体松动下沉进展及其置换后活动影响的生物学机制.设计、时间及地点:随机分组设计,细胞学体外观察,于2004-02/2007-10在解放军第四军医大学骨科研究所完成.材料:出生1个月的新西兰幼兔1只,体质量0.5 kg,取其骨髓基质干细胞用于实验.方法:传代培养兔骨髓基质干细胞,将生长良好的第3代骨髓基质干细胞按1×104个/孔随机接种于7块24孔培养板,14 h后细胞完全贴壁,换新鲜含体积分数为10%胎生血清的DMEM.实验随机将4块培养板分为4组:对照组不予加压,20 kPa持续压力组,60 kPa持续压力组,100 kPa持续压力组分别在规定的时间内每天施以20,60,100 kPa的持续3 h压力.主要观察指标:四甲基偶氮唑盐法检测培养1,3,5,7 d各组骨髓基质干细胞的吸光度值变化.结果:除培养第1天外,第3,5,7天各压力组骨髓基质干细胞的吸光度值均低于对照组(P<0.01).其中第3天20 kPa持续压力组与60 kPa持续压力组吸光度值差异无显著性意义(P>0.05),但均高于100 kPa持续压力组(P<0.05).第5天不同持续压力组吸光度值两两比较差异具有显著性意义(P<0.05),压力越高,吸光度值越低.第7天100 kPa持续压力组吸光度值低于压力20 kPa持续压力组(P<0.05).结论:关节置换后早期患者不宜过早下地,否则将产生持续性应力,可以引起骨髓腔内骨髓基质干细胞的抑止,从而不利于骨质愈合,容易产生假体下沉和松动.     

自体骨髓基质源干细胞在损伤脑区及其他脑区的分布

背景:近来骨髓基质细胞多向分化潜能的发现,特别是骨髓基质细胞向神经干细胞方向分化的成功,为干细胞移植治疗神经系统损伤提供了可能。目的:观察自体骨髓基质源干细胞对脑损伤的治疗作用。设计:以BrdU标记的自体骨髓基质源干细胞在模型动物损伤脑区和其他脑区的分布为观察对象的前瞻性研究。单位:北京军区总医院。材料:实验于1999-10/2002-02在北京军区总医院完成。取1.5～3.0岁成年家犬22只,雌雄不限,体质量(13±2)kg。随机分为假手术组6只,常规治疗组8只,骨髓基质源神经干细胞组8只。方法:对犬骨髓基质细胞进行采集、分离、体外扩增、标记和移植用细胞培养。假手术组仅做皮肤切口及颅骨锥孔,不致中脑损伤,于麻醉清醒后行正常进食。常规治疗组行中脑被盖区毁损后行三磷酸腺苷20mg,辅酶A50u,加入生理盐水中静脉滴注,2次/d,共3d。骨髓基质源神经干细胞组行中脑被盖区毁损,然后给予骨髓基质细胞源神经干细胞1mL和脑脊液1mL的混合液,注入脑室,1次/d,共3d。术后第1,7,14,28天4个时间点观察骨髓基质源干细胞在损伤脑区及其他脑区的分布情况。主要观察指标:观察骨髓基质源干细胞在损伤脑区及其它脑区的分布情况。结果:22只动物均进入结果分析。①在术后第28天:骨髓基质源神经干细胞组BrdU阳性细胞明显高于假手术组和常规治疗组[(15.4±2.4,0.5±0.5,0.5±0.5)个]。②骨髓基质源神经干细胞组术后第14天脑片BrdU阳性细胞数:中脑的伤侧明显高于对侧[(15.5±3.3,5.0±1.5)个];额叶的伤侧高于对侧[(1.6±0.6,1.5±0.7)个]。结论:由于骨髓基质源神经干细胞移植组BrdU阳性细胞数在脑损伤区的分布明显多于对侧非伤区和两个对照组的同部位。提示骨髓基质源干细胞可向损伤脑区迁移,能对脑干损伤的恢复有一定促进作用。     

骨髓基质细胞对血小板生成的影响

骨髓基质细胞(BMSCs)是起源于胚胎发育的间充质干细胞(MSCs),是骨髓细胞中除去造血干细胞(非黏附细胞) 之外的黏附细胞部分,对造血干/祖细胞(HSC/HPC)增殖、分化、发育、成熟、迁移、定居、释放、凋亡等生理活动具有特殊作用.现综述BMSCs对特殊的一类血液细胞--血小板生成的影响.     

欧洲越桔和笃斯越桔对神经细胞氧化损伤的保护作用

目的：比较欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用，并观察其作用是否具有剂量依赖性。方法：实验于2004-10,2005-01在华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室进行。PC12细胞以含12．5，25，50mg／L的欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物的DMEM培养液预孵8h后，以500μmol／L的H2O2干预12h作为氧化应激损伤的模型，采用MTT比色法计算细胞死亡抑制率评估细胞存活情况（抑制率越高，存活细胞越多），DCFH—DA荧光染色法测定细胞内活性氧化物清除抑制率评估细胞内活性氧化物水平（抑制率越低，细胞内活性氧化物水平越低），Hoechst染色法观察细胞核形态学，流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：①细胞死亡抑制率：笃斯越桔标准提取物25，50mg／L组高于欧洲越桔标准提取物25，50mg／L组（27．78％，23．66％；46．05％，41．67％），两种药物均为剂量越大，其抑制率越高。②PC12细胞内活性氧化物清除抑制率：笃斯越桔标准提取物25，50mg／L组低于欧洲越桔标准提取物25，50mg／L组（67．58％，80．61％；41．86％，56．69％），且剂量越大，其抑制率越低。③细胞凋亡率：正常对照组为0．69％，500μmol／L H2O2作用12h后。为30．19％。预先给予欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物处理后，分别为9．45％，8．82％。结论：欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞均具有保护作用，笃斯越桔作用优于欧洲越桔，且具有剂量依赖性效应。其机制可能与其能降低细胞内活性氧化物水平，进而抑制神经细胞凋亡有关。     

膝关节半月板损伤与骨髓基质干细胞

背景：骨髓基质干细胞移植是解决软骨组织缺损最有前景的手段之一,骨髓基质干细胞也成为软骨组织修复应用较广泛的重要种子细胞。目的：分析骨髓基质干细胞在半月板损伤和软骨损伤方面的应用情况,为膝关节半月板损伤的修复和治疗提供理论参考。方法：由第一、二作者共同检索1997/2011PubMed数据库及清华同方数据库,中文关键词为＂骨髓间充质干细胞,膝关节半月板损伤＂,英文关键词为＂bone marrow stromal cells;knee joint meniscus injury＂。纳入骨髓基质干细胞修复膝关节半月板损伤的相关文献26篇进行分析。结果与结论：骨髓基质干细胞在治疗和修复膝关节半月板损伤方面具有独到的优势,包括其损伤面较小,方便易行,没有后遗症,并克服了切除半月板引起的形态和生物功能的改变,避免了因异体材料移植引起的膝载荷传导紊乱和晚期骨性关节炎发病的可能,与保留半月板修复其功能的临床治疗理念较为接近,并成为当前和今后治疗与修复膝关节半月板损伤的新思路。在其修复治疗的过程中,其关键问题在于一方面如何获得大量纯化的骨髓基质干细胞并在体外定向诱导为半月板软骨表型的细胞,另一方面是诱导分化的确切机制研究。     

施万细胞对骨髓基质干细胞向神经组织细胞分化诱导的作用

背景:骨髓基质干细胞具有向神经组织细胞分化的多潜能特性.以往实验以化学试剂作为诱导剂加入细胞培养液中,在体外成功地诱导出神经组织细胞.目的:观察大鼠施万细胞和骨髓基质干细胞体外共培养后,骨髓基质干细胞能否被诱导向神经组织细胞分化.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-09/2008-10在南通大学医学院组织学与胚胎学教研室及江苏省神经再生重点实验室完成.材料:SPF级新生1-3 d龄SD大鼠用于制备施万细胞,SPF级成年雄性SD大鼠用于制备骨髓基质干细胞,动物均由南通大学实验动物中心提供.方法:将传2代培养的骨髓基质干细胞和施万细胞分别以1×105和1×106的密度接种于transwell双层6孔细胞培养板的皿底和板底,两种细胞间隔以PET膜,其膜孔径为0.4 μm,于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中进行非接触性共培养14 d.另外,将施万细胞培养上清作为条件培养基,培养骨髓基质干细胞14 d.主要观察指标:光镜下观察共培养后骨髓基质干细胞的形态变化;MTT检测共培养前后骨髓基质干细胞的活性;免疫荧光染色鉴定共培养后骨髓基质干细胞S-100蛋白的表达,流式细胞仪测定S-100蛋白阳性率;免疫荧光染色检测条件培养基培养后骨髓基质干细胞S-100,P75,GFAP的表达.结果:共培养后的骨髓基质干细胞形态发生改变,原来宽大扁平的胞体开始收缩,细胞胞体呈梭形,部分细胞类似施万细胞呈线性排列.共培养前后及条件培养基培养后,骨髓基质干细胞的活力无明显差异(P>0.05).共培养14 d后,骨髓基质干细胞表达施万细胞表面标记S-100蛋白,阳性率达(22.54±2.36)%.条件培养基培养14 d后,骨髓基质干细胞表达施万细胞表面标记S-100蛋白,P75,GFAP.结论:施万细胞分泌因子可以诱导部分骨髓基质干细胞向神经组织细胞分化,并表达施万细胞表面标记.     

血清对骨髓基质干细胞分化的影响

目的　探讨血清对骨髓基质干细胞 (MSCs)向神经元样细胞分化的影响。方法　采用percoll液分离大鼠MSCs,体外扩增 ,单独应用BHA或BHA加血清定向诱导MSCs分化为神经元样细胞。结果　BHA诱导 1 5h后加入血清 ,细胞的形态不再分化为神经元 ,而是逐渐变回原来的MSCs样形态 ,加入血清后 2d所有细胞均恢复MSCs形态。结论　血清可阻碍BHA使MSCs定向分化为神经元     

芒果苷对缺氧损伤骨髓间充质干细胞的保护作用

背景：研究表明骨髓间充质干细胞移植在临床治疗方面具有广阔的应用前景。然而,移植细胞的死亡限制了组织再生,寻找新的抗自由基和保护骨髓间充质干细胞的药物有着重要意义。目的：研究芒果苷对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤的保护作用。方法：采用氯化钴（CoCl 2）建立体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤模型。将细胞分为正常对照组、氯化钴缺氧损伤组、氯化钴加芒果苷20,40,80,160μmol/L组。缺氧损伤12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞培养上清液中超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶水平。缺氧损伤3,6,12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞内活性氧变化。结果与结论：芒果苷能明显提高缺氧损伤的骨髓间充质干细胞的存活率,提高细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性,降低细胞内丙二醛、活性氧水平,有效保护缺氧损伤下的骨髓间充质干细胞。芒果苷具有较强的抗氧化能力及缺氧保护作用,可明显减轻骨髓间充质干细胞的氧化应激损伤。     

永生化的骨髓基质细胞移植对损伤脊髓的保护作用

目的:观察永生化的骨髓基质细胞(Bone marrow stem cells,BMSCs)移植对损伤脊髓的保护作用。方法:将脊髓横断伤SD大鼠模型,随机分为损伤对照组(A组)、BMSCs移植组(B组)、神经营养因子(Nerve growth fac-tor,NGF)、脑源性神经生长因子(Brain Derived nerve growth factor,BDNF)基因修饰后永生化的BMSCs移植组(C组)和正常对照组(D组)。术后24 h后每组8只动物取脊髓伤段标本,测水离子含量。其余动物第6、12周,每组8只动物进行爬坡试验,评价下肢运动功能及运动诱发电位(MEP)检测。结果:脊髓损伤(SCI)后组织水肿,Na 、Ca2 离子浓度升高,K 、Mg2 离子浓度降低。NGF、BDNF基因修饰后永生化的骨髓基质细胞脊髓内移植后显著改善这些变化,且使SCI后神经功能有显著恢复。结论:NGF、BDNF基因修饰后永生化的BMSCs脊髓内移植对SCI有保护作用。其机制可能与减少神经细胞离子失衡,改善细胞内环境有关。     

骨髓基质细胞基因治疗的研究进展

骨髓基质细胞在体外易培养和扩增,在体内更新率低而代谢活力较高,所以成为基因治疗理想的靶细胞。间充质干细胞的发现为骨髓基质细胞基因治疗提供了重要的理论依据。目前的研究集中在血友病、间叶组织疾病的治疗和放、化疗后造血、免疫功能的改善等方面,仍处于临床前试验阶段。     

欧洲越桔和笃斯越桔对神经细胞氧化损伤的保护作用

目的:比较欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用,并观察其作用是否具有剂量依赖性。方法:实验于2004-10/2005-01在华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室进行。PC12细胞以含12.5,25,50mg/L的欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物的DMEM培养液预孵8h后,以500μmol/L的H2O2干预12h作为氧化应激损伤的模型,采用MTT比色法计算细胞死亡抑制率评估细胞存活情况(抑制率越高,存活细胞越多),DCFH-DA荧光染色法测定细胞内活性氧化物清除抑制率评估细胞内活性氧化物水平(抑制率越低,细胞内活性氧化物水平越低),Hoechst染色法观察细胞核形态学,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:①细胞死亡抑制率:笃斯越桔标准提取物25,50mg/L组高于欧洲越桔标准提取物25,50mg/L组(27.78%,23.66%;46.05%,41.67%),两种药物均为剂量越大,其抑制率越高。②PC12细胞内活性氧化物清除抑制率:笃斯越桔标准提取物25,50mg/L组低于欧洲越桔标准提取物25,50mg/L组(67.58%,80.61%;41.86%,56.69%),且剂量越大,其抑制率越低。③细胞凋亡率:正常对照组为0.69%,500μmol/LH2O2作用12h后,为30.19%。预先给予欧洲越桔标准提取物和笃斯越桔标准提取物处理后,分别为9.45%,8.82%。结论:欧洲越桔和笃斯越桔对氧化应激损伤PC12细胞均具有保护作用,笃斯越桔作用优于欧洲越桔,且具有剂量依赖性效应。其机制可能与其能降低细胞内活性氧化物水平,进而抑制神经细胞凋亡有关。     

骨髓基质细胞基因治疗的研究进展

骨髓基质细胞在体外易培养和扩增,在体内更新率低而代谢活力较高,所以成为基因治疗理想的靶细胞。间充质干细胞的发现为骨髓基质细胞基因治疗提供了重要的理论依据。目前的研究集中在血友病、间叶组织疾病的治疗和放、化疗后造血、免疫功能的改善等方面,仍处于临床前试验阶段。     

老年人股骨近端骨髓基质干细胞成骨分化功能的研究

目的：通过对来自干全髋置换术中的股骨近端骨髓基质干细胞生物特性尤其是成骨分化潜能的研究，以期为将其应用于骨、软骨损伤修复和老年人骨关节疾患发病机理的研究提供细胞生物学依据。方法：运用 Ficoll密度梯度离心分离得到骨髓基质干细胞。分别在含10％FBS的LG—DMEM和含10％FBS的DMEM（10^-8M地塞米松，50μg／ml维生素C，10mMβ-甘油磷酸钠）中培养。用Von Kossa染色、四环素荧光染色证实特征性骨结节的形成，用ALP染色来区分MSC中向成骨细胞分化的细胞，收集处于不同分化时期的细胞和上清液，应用PNPP法测定碱性磷酸酶活性、放免法检测骨钙素活性，RT—PCR检测骨髓基质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞分化的基因的表达情况。结果：股骨近端来源的骨髓基质干细胞增殖迅速，在成骨诱导液中表现出更强的成骨分化能力。培养至13天时，ALP染色强阳性；普通培养液中培养至35天时，相差显微镜下可见细胞结节形成，继续培养则形成肉眼可见结节，直径达1mm。经Van Kossa染色、四环素荧光标记进一步证实为钙盐沉积、特征性骨结节。随着细胞诱导时间的延长，碱性磷酸酶活性逐渐增强，至12天时活性最大；骨钙素活性也是逐渐增强，至15天时最大。骨髓基质干细胞在诱导条件下，成骨细胞和脂肪细胞的特异性基因在mRNA水平没有明显随着诱导时间变化。结论：股骨近端来源的骨髓基质干细胞取材方便、在体外培养增殖迅速，在地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠诱导下细胞向成骨细胞的分化能力增强，和正常成人髂骨来源的骨髓基质干细胞成骨分化时相一致。为股骨近端骨髓基质干细胞的进一步应用提供了细胞生物学依据。     

脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞的体外分化能力

背景:脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞具有很多相似的生物学特性。目的:比较脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞与受损PC12细胞分别共培养后定向分化能力的差异。方法:分别分离培养脂肪组织来源和骨髓组织来源的基质干细胞,取第5代细胞进行实验,2种细胞分别与正常或受损PC12细胞培养上清液共培养,或仅单独培养。结果与结论:脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞均表达较高水平的CD44和CD29,而后者表达的CD45、CD56在前者几乎未检测到。单独培养的2种细胞均表达较高水平的Nanog、Oct4、Sox2,不表达神经元特异性烯醇酶。其中经受损PC12细胞干预的2种细胞Nanog、Oct4、Sox2表达水平显著降低,而脂肪基质干细胞中神经元特异性烯醇酶阳性细胞数更多,提示受损PC12细胞对于脂肪基质干细胞可能具有更强的诱导分化作用。     

颅骨来源骨髓基质干细胞的分离培养方法

背景：从小鼠颅骨提取的一类骨髓基质干细胞称为PA6细胞,研究者发现当PA6细胞与其他干细胞共培养时可向神经细胞分化,此特性可被应用于神经损伤部位的修复。所以,PA6细胞越来越受到研究者的关注,但目前国内对类似骨髓基质干细胞PA6的提取方法鲜见报道。目的：分离培养SD大鼠颅骨来源的骨髓基质干细胞,体外观察细胞形态并免疫荧光鉴定。方法：无菌条件下,取新生的SD大鼠颅骨将其剪碎,用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液冲洗颅骨碎片,反复吹打制成单细胞悬液,将其置于培养瓶中培养,多次换液培养纯化细胞。取第2代生长均一的细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,并用免疫荧光染色法进行细胞表面标记鉴定。结果与结论：原代细胞培养24 h后,骨髓基质干细胞开始贴壁;3 d后细胞数量增多,形态呈不规则形、多角形、三角形和扁平形;细胞传代后,形态基本均一,细胞排列呈放射状和束状,贴壁能力较强,部分细胞呈聚集生长,增殖速度比原代有明显的加快。免疫荧光染色检测CD105、CD73、CD44、CD90表达呈阳性, CD45、CD34、CD14和HLA-DR表达呈阴性,证实了提取的细胞为骨髓基质干细胞。     

脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞的体外分化能力

背景：脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞具有很多相似的生物学特性。目的：比较脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞与受损PC12细胞分别共培养后定向分化能力的差异。方法：分别分离培养脂肪组织来源和骨髓组织来源的基质干细胞,取第5代细胞进行实验,2种细胞分别与正常或受损PC12细胞培养上清液共培养,或仅单独培养。结果与结论：脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞均表达较高水平的CD44和CD29,而后者表达的CD45、CD56在前者几乎未检测到。单独培养的2种细胞均表达较高水平的Nanog、Oct4、Sox2,不表达神经元特异性烯醇酶。其中经受损PC12细胞干预的2种细胞Nanog、Oct4、Sox2表达水平显著降低,而脂肪基质干细胞中神经元特异性烯醇酶阳性细胞数更多,提示受损PC12细胞对于脂肪基质干细胞可能具有更强的诱导分化作用。