哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路与胶质瘤

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）是一个重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,mTOR信号通路通过调节细胞周期、蛋白质合成等途径发挥重要的作用,处于生长调节的中心环节,其异常活跃与胶质瘤等恶性肿瘤的发生、发展有关。GOLPH3是新近发现的癌基因,可同时激活mTORC1和mTORC2,导致细胞内S6K1、Akt同时增高,加速蛋白合成、     

神经生长因子及其受体在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达及其生物学意义

目的：观察神经生长因子在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达．分布及其生物学作用。 方法：实验于2005—07／12在江苏大学医学院基础与临床研究中心完成。①U251培养3d后，于培养基中加入终浓度为2mmol／L羟基脲继续培养24h（≥1个细胞周期），使细胞同步化于DNA合成期。②用免疫荧光法对细胞内神经生长因子及其高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶受体A进行染色定位：③免疫印迹法检测U251培养上清液中的神经营养因子表达。④促胚胎脊髓神经细胞生长试验鉴定U251细胞培养上清液的神经营养因子活性。取怀孕16d的SD大鼠1只，断头处死，浸泡体积分数为0．75的乙醇20min后剖腹取胎鼠，分离脊髓组织，细胞培养2d后，分别加入无血清DMEM（对照组）及培养过U25124h的无血清DMEM（实验组）。 结果：①神经生长因子及酪氨酸蛋白激酶受体A在U251中高表达，神经生长因子主要呈颗粒状分布于胞浆及胞核内，酪氨酸蛋白激酶受体A分布于胞膜及核仁部位。②U251无血清培养上清液能够促进胚胎脊髓神经细胞集落的形成，实验组集落数明显多于对照组（345．38&;#177;14．15），（145．5&;#177;12．71）／孔，P〈0．01）；且在浓缩的U251无血清培养上清液中检测出相对分子质量为36000的神经生长因子肽链。 结论：人脑胶质瘤细胞株U251呈神经生长因子及酪氨酸蛋白激酶受体A强阳性表达，且能合成并分泌具有生物学活性的神经营养因子，相对分子质量为36000的神经生长因子是其中主要成分之一。     

锌指蛋白A20 RNAi腺病毒的制备及其对人脑胶质瘤细胞系U87细胞功能的影响

目的:进一步探讨A20与促进脑胶质瘤恶性增殖和抗细胞凋亡之间的关系,尝试今后在动物体内进行脑胶质瘤基因治疗的研究,通过构建针对A20基因的重组腺病毒干涉载体感染U87细胞系,观察其对细胞生存状态的影响。方法:在前期预实验的基础上构建对A20干涉效果最好的腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1,通过HEK-293细胞的包装后收获腺病毒并进行纯化,最后用此腺病毒再次感染人脑胶质母细胞瘤细胞U87,经RT-PCR、Western blot确认干涉效果;通过流式细胞术(FCM)观察A20表达抑制对U87细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:完成了重组腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1在HEK-293细胞内的包装;对病毒进行纯化后获得了高滴度(1.1×1011pfu/mL)的感染病毒,将其感染U87细胞系后,RT-PCR和Westernblot结果证实U87细胞中A20mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制;FCM结果也证实U87-A20R1细胞内凋亡细胞明显增多。结论:重组A20腺病毒干涉载体可很好地抑制U87细胞内A20的表达且能导致细胞凋亡,该研究结果为临床上用新思路治疗脑胶质瘤提供了实验依据。     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白与肾脏疾病的关系

雷帕霉素(rapamycin)是一类最早在1975年从土壤细菌中提取出来的物质,起初将其用作抗真菌治疗,随后又发现其有免疫抑制作用而广泛应用于器官移植后的抗排斥反应当中[1]。正是由于雷帕霉素的发现,在1994年研究人员又克隆出了哺乳动物的雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamy-     

神经生长因子及其受体在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达及其生物学意义

目的:观察神经生长因子在人脑胶质瘤细胞株U251中的表达、分布及其生物学作用。方法:实验于2005-07/12在江苏大学医学院基础与临床研究中心完成。①U251培养3d后,于培养基中加入终浓度为2mmol/L羟基脲继续培养24h(≥1个细胞周期),使细胞同步化于DNA合成期。②用免疫荧光法对细胞内神经生长因子及其高亲和力受体酪氨酸蛋白激酶受体A进行染色定位。③免疫印迹法检测U251培养上清液中的神经营养因子表达。④促胚胎脊髓神经细胞生长试验鉴定U251细胞培养上清液的神经营养因子活性。取怀孕16d的SD大鼠1只,断头处死,浸泡体积分数为0.75的乙醇20min后剖腹取胎鼠,分离脊髓组织,细胞培养2d后,分别加入无血清DMEM(对照组)及培养过U25124h的无血清DMEM(实验组)。结果:①神经生长因子及酪氨酸蛋白激酶受体A在U251中高表达,神经生长因子主要呈颗粒状分布于胞浆及胞核内,酪氨酸蛋白激酶受体A分布于胞膜及核仁部位。②U251无血清培养上清液能够促进胚胎脊髓神经细胞集落的形成,实验组集落数明显多于对照组(345.38±14.15),(145.5±12.71)/孔,P<0.01);且在浓缩的U251无血清培养上清液中检测出相对分子质量为36000的神经生长因子肽链。结论:人脑胶质瘤细胞株U251呈神经生长因子及酪氨酸蛋白激酶受体A强阳性表达,且能合成并分泌具有生物学活性的神经营养因子,相对分子质量为36000的神经生长因子是其中主要成分之一。     

磁敏感成像在隐匿性出血性脑血管疾病方面的研究进展

隐匿性出血性脑血管病是指症状轻微或不典型的脑出血及引起脑出血的一组疾病的总称。包括颅内小动脉瘤、脑血管畸形、少量脑出血及蛛网膜下腔出血、脑微出血、脑梗死并发少量出血或出血性脑梗死等。这组病变都与出血相关联,临床症状可以很轻微且无特异性,早期往往被临床忽视或者没有引起足够重视,造成误诊或漏诊,延误患者的抢救治疗     

Dishevelled蛋白在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨Dishevelled蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况,并分析其表达水平与临床病理级别的关系。方法采用免疫组化法及免疫印迹法检测Dishevelled蛋白在67例不同病理级别人脑胶质瘤标本和3例正常人脑组织中的表达水平。结果在正常人脑组织中均未见Dishevelled蛋白表达,而在人脑胶质瘤组织中Dishevelled蛋白高表达,67例胶质瘤中,Dishevelled阳性率为65.67%(44/67);且Dishevelled蛋白表达水平均随着脑胶质瘤病理级别的增高而显著升高(P<0.05)。结论 Dishevelled蛋白高表达可能对人脑胶质瘤细胞的发生、发展具有促进作用。本研究结果不仅为Wnt/β-catenin信号通路的研究开辟了新的领域,也为诊断及基因治疗脑胶质瘤提供了新的靶点。     

Girdin和BCL-2蛋白在脑胶质瘤组织中表达及其意义

【目的】探讨肌动蛋白丝束小梁(Girdin)和B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)蛋白在脑股质瘤组织中表达及其意义。【方法】选取2010年3月至2013年1月在本院诊治并经病理学确诊的脑胶质瘤患者53例,采用免疫组织化学染色法检测53例患者脑肢质瘤组织及瘤旁正常组织中Girdin和BCL-2蛋白的表达水平,分析其表达水平与患者各临床病理特征、术后总生存期的关系。【结果】脑胶质瘤中G ird in蛋白、BCL-2蛋白阳性表达率为60.38%(32/53)、41.51%(22/53),均显著高于正常组织的5.66%(3/53)、1.89%(1/53),其差异均具有统计学意义(P<0.05)。脑胶质瘤组织中Girdm蛋白表达水平与患者病理学分级、瘤周水肿及肿瘤肉眼直径有关(P<0.05);脑胶质瘤组织中BCL-2蛋白表达水平与患者性别有关(P<0.05)。Girdin蛋白高表达患者生存率明显低于低表达患者,其差异具有统计学意义(P<0.05);BCL-2蛋白高表达和低表达的患者生存率比较差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】Girdin和BCL-2蛋白在脑胶质瘤组织中呈高表达;Girdin蛋白参与脑股质瘤的发展,并对其预后有负面影响。     

细胞红蛋白在脑胶质瘤的表达和临床意义

目的：探讨细胞红蛋白（Cygb）在不同级别脑胶质瘤的表达及其在预后判断等方面的意义。方法采用免疫组织化学方法检测88例脑胶质瘤组织标本（WHOⅠ级10例,Ⅱ级37例,Ⅲ级26例,Ⅳ级15例）Cygb的表达情况,并分析其与临床病理、肿瘤复发和预后的关系。结果在低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）中Cygb呈高表达,在高级别胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）中Cygb呈低表达。Kruskal-Wallis test分析Cygb的表达程度与胶质瘤的病理级别呈高度负相关（P＜0.01）;Mann-Whitney U test分析Cygb与胶质瘤术后是否复发也呈高度负相关（P＜0.01）。Cygb低表达组患者的生存率低于Cygb高表达组。Cox回归分析Cygb低表达为脑胶质瘤高风险因素之一。结论 Cygb的表达水平能作为判断脑胶质瘤恶性程度的另一个指标, Cygb的表达水平还可以作为判断脑胶质瘤患者的预后和是否复发指标之一。     

骨形态发生蛋白-2和骨形态发生蛋白-7表达与脑胶质瘤复发的相关性研究

目的探讨骨形态发生蛋白质类(BMP)中BMP-2和BMP-7在原发和复发性人脑胶质瘤组织中的表达及意义。方法收集34例脑胶质瘤患者首次就诊及其复发后再治疗的完整临床资料和组织标本,采用免疫组织化学MaxVisionTM2法检测所有患者原发、复发的脑胶质瘤组织石蜡标本中BMP-2和BMP-7阳性细胞表达水平,并分析其与脑胶质瘤复发的关系及其影响因素。结果 BMP-2和BMP-7在原发脑胶质瘤中阳性细胞计数分别为21.33±15.87、19.82±12.89,而在复发脑胶质瘤中表达分别为33.48±17.76、34.05±15.91,复发脑胶质瘤中两者表达均显著多于原发(P<0.01)。ROC曲线显示:BMP-2和BMP-7的表达水平对胶质瘤复发的诊断的准确性为中等(曲线下面积分别为0.711和0.790,均P<0.01)。结论脑胶质瘤的复发与BMP-2和BMP-7的分泌生成增加有关,且两者表达的增高对胶质瘤复发的诊断具有重要的指导意义,这为其作为脑胶质瘤复发诊断的指标应用于临床的可行性提供了依据。     

Survivin在脑胶质瘤表达的临床意义

目的探讨Survivin在脑胶质瘤组织中的表达及其与肿瘤生物学行为之间的联系。方法应用免疫组织化学方法检测63例不同病理分级的脑胶质瘤组织Survivin蛋白的表达。结果Survivin的表达程度随肿瘤分化程度的恶化而升高,而在正常脑组织中Survivin的表达为阴性。结论胶质细胞瘤恶性程度与Survivin表达相关;Survivin在胶质瘤的发生发展过程中可能起着重要作用。     

Survivin在宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的 探讨宫颈鳞癌组织中survivin基因表达的特征及临床意义。方法 采用免疫组织化学方法（PV法）检测54例宫颈鳞癌，16例正常官颈组织中Survivin基因的表达，并分析其临床病理特征。结果 Survivin在正常宫颈组织中不表达，在官颈鳞癌组织中阳性表达率与年龄、临床分期及淋巴结转移有关。结论 Survivin基因在官颈鳞癌组织中的稳定表达。预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后，可能成为有效的预测官颈鳞癌侵袭性的监测指标及判断预后的指标，对指导临床治疗具有重要意义。     

Survivin和b-FGF在食管癌中的表达及临床意义

目的探讨Survivin与b-FGF在食管癌中的表达度临床意义。方法采用免疫组织化学法检测60例食管癌和30倒食管炎组织中Survivin和b—FGF的表达。结果食管癌中Survivin和b-FGF的阳性表达率分别为78．33％和65．00%。明显高于对照组（食管炎组织）（P〈0．05）；Survivin、b—FGF在中晚期食管癌中的阳性表达比早期显著升高（P〈0．05），而与食管癌的组织学类型、病理分级无关（P〉0．05）；Survivin与b-FGF在食管癌中的表达呈正相关（P〈0．05，f=0．364）。结论Survivin和b-FGF可能在食管癌的发生发展中起关键作用，二者与食管癌的临床病理分期密切相关，二者联合检测对食管癌的诊断有一定价值。     

宫颈癌组织中survivin基因的表达及其临床意义

目的 :探讨宫颈癌组织中survivin基因表达的特征及其临床意义。方法 :应用免疫组织化学方法 (SP法 )检测survivin基因在 41例宫颈癌组织、17例CIN宫颈组织及 10例正常宫颈组织中的表达 ,分析其与临床病理特征的相关性及其与预后的关系。结果 :宫颈癌组织中survivin的阳性表达率较正常组织及CIN均明显升高 (P <0 0 5 ) ;宫颈癌患者中survivin阳性表达的中位生存期明显小于阴性表达者 (P <0 0 5 )。Survivin的表达与宫颈癌的临床分期、病理分级及组织类型无关。结论 :survivin的阳性表达增高与宫颈癌的发生密切相关 ,预示预后不良。     

人Survivin蛋白的纯化、单克隆抗体的制备及在肿瘤细胞的表达

目的表达人Survivin重组蛋白、制备单克隆抗体及检测Survivin在多种肿瘤细胞中的表达。方法诱导含有pMS-Survivin重组质粒的E.coli.表达人MS2-Survivin重组蛋白,并作为抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经ELISA双筛,获得稳定分泌抗人Survivin mAb的杂交瘤细胞株。ELISA检测Survivin mAb的特异性。免疫细胞化学检测多种肿瘤细胞中天然Survivin的表达情况。结果诱导菌在相对分子质量为30KD左右表达出一新的蛋白条带。筛选出2株稳定分泌特异性抗人Survivin mAb的杂交瘤细胞株,亚类鉴定均为IgG1类。两株单克隆抗体的效价均达到6.4×105。ELISA结果显示出抗人Survivin mAb的特异性。在胃癌细胞、肺癌细胞、宫颈癌细胞中均强表达,且主要在细胞浆中。结论成功制备出特异性抗人Survivin mAb,为以后应用于临床检测奠定了基础,也为其进一步开发成诊断性试剂盒奠定了基础。     

Survivin和Caspas3在侧向发育型大肠肿瘤中的表达

目的研究凋亡相关基因Survivin和Caspase3蛋白在侧向发育型大肠肿瘤（LST）中的表达。方法应用免疫组织化学方法检测良性LST、大肠腺瘤、大肠腺癌及其正常黏膜组织中Survivin和Caspase3的蛋白表达。结果 Sur-vivin在大肠腺癌（61.9%）高表达,良性LST（21.7%）和大肠腺瘤（20.6%）表达降低,而在正常黏膜组织不表达。Cas-pase3在正常黏膜高表达（90.9%）,在良性LST（60.9%）和大肠腺瘤（64.7%）表达降低,在大肠腺癌（42.9%）低表达。结论良性LST中Survivin和Caspase3的表达与大肠腺瘤没有统计学差别,都是癌前病变,应引起临床重视。     

RUNX3和Survivin在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义

目的探讨RUNX3蛋白和Survivin蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测5例正常卵巢组织、10例良性卵巢上皮性肿瘤及50例卵巢上皮性癌组织中RUNX3蛋白和Survivin蛋白的表达情况。结果①在正常卵巢组织、卵巢良性囊性上皮性肿瘤及上皮性癌中RUNX3蛋白的表达率分别为80%、70%、28%,Survivin蛋白的表达率分别为0、10%、72%。在正常卵巢和良性卵巢肿瘤中RUNX3蛋白和Survivin蛋白的表达差异无显著性意义(P>0.05);而良性卵巢肿瘤和卵巢癌中RUNX3蛋白和Survivin蛋白的表达差异有显著性意义(P<0.05);②在卵巢癌中RUNX3蛋白和Survivin蛋白的表达与病理组织学分化程度及临床分期密切相关(P<0.05);③RUNX3蛋白和Survivin蛋白在卵巢癌组织中表达呈负相关。结论 RUNX3蛋白和Survivin蛋白可能共同参与了卵巢癌的发生、发展过程,二者的联合检测有可能成为判断卵巢癌临床侵袭及预后的分子标志。     

膀胱移行细胞癌尿液脱落细胞中survivin的表达及意义

目的:研究膀胱移行细胞癌(TCC)尿液脱落细胞中survivin的表达及意义。方法:留取49例TCC患者、10例泌尿系统其他疾病患者和8例正常健康成人的新鲜尿液,离心收集脱落细胞,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TCC尿液脱落细胞中survivin的表达,并行尿脱落细胞学检查。结果:49例膀胱移行细胞癌患者尿脱落细胞中有41例检测出survivin表达,而10例泌尿系统其他疾病患者和8例正常健康成人的尿脱落细胞中均未检测出survivin的表达。以RT-PCR检测膀胱癌患者尿液脱落细胞中survivin的方法敏感性为83.7%,特异性为100%。结论:初步的试验结果显示,RT-PCR法检测膀胱癌患者尿液脱落细胞中survivin的方法可以作为诊断膀胱癌的无创性方法。