SREBP-1在1型糖尿病人鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究

目的探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-l（sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1）的表达以及胰岛素处理的影响。方法以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组。喂养2wk后处死,测定肾皮质组织甘油三酯含量,油红O染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Westernblot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达。结果与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红O检测示脂质沉积定位于。肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色。胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义。免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组。Westernblot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0．673±0．027,成熟片段为0．670±0．028,分别是正常组的1．86倍和1．77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52．8％,成熟片段表达量下降了30．9％。原位杂交结果证实SREBP-1mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）;胰岛素处理后其表达明显下降。结论1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达。     

Foxo1在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的表达研究

目的探究Foxo1在糖尿病大鼠肾脏的表达和脂质代谢的关系。方法构建1型糖尿病大鼠模型,喂养2个月后处死,取肾脏组织,免疫组织化学和Western blot检测Foxo1、Akt和SREBP-1在肾脏的表达;油红O染色及组织脂质定量检测肾组织中脂质含量。结果糖尿病大鼠出现明显的多饮、多食、多尿症状,体重较正常组明显下降,血糖、血甘油三酯及血尿素氮升高。免疫组织化学检测显示,磷酸化Foxo1和Foxo1表达定位于肾小管上皮细胞。Western blot检测可见与正常组大鼠相比,磷酸化Foxo1在糖尿病大鼠表达升高;而总Foxo1在两组间表达未见差异。相似地,磷酸化Akt和SREBP-1在糖尿病组大鼠表达也均明显升高。油红O染色表明脂滴沉积于糖尿病大鼠肾小管上皮细胞,定量甘油三酯测定显示糖尿病组肾脏脂质含量高于正常对照大鼠。结论磷酸化Foxo1在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞表达升高,可能和SREBP-1上调及细胞内脂质沉积相关。     

胰岛素对人肾小管上皮细胞SREBP-1、FAS表达及脂质代谢的时效性研究

目的探讨胰岛素对人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubularepithelial cells line,HKCcells)固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合成酶(fat acid synthase,FAS)表达以及细胞内脂滴形成的时效性影响。方法给予人肾小管上皮细胞100nmol·L-1胰岛素刺激并根据刺激时间分为0、2、4、6、12和24h组。SREBP-1和FAS mRNA采用RT-PCR检测,SREBP-1蛋白的表达用免疫细胞化学和Western blot检测,细胞内脂滴检测采用油红O染色。结果和0h组相比,2h组HKC细胞未见SREBP-1和FAS mRNA表达变化,而4、6、12h组HKC细胞SREBP-1和FAS mRNA表达均升高,其中6h组升高最明显,分别是0h对照组的3.578倍和4.272倍,差异有统计学意义。Western blot检测显示4、6和12h组HKC细胞SREBP-1蛋白的前体和成熟片段表达均较0h和2h组增强,其中也是6h组表达最强,前体和成熟片段分别是0h组的4.106倍和5.167倍。免疫细胞化学技术显示SREBP-1蛋白在人肾小管上皮细胞株中定位于细胞质,在4、6和12h组HKC内其表达明显强于0、2和24h组。油红O染色提示胰岛素刺激6h后HKC细胞内可见明显红染脂滴颗粒,而其他各组HKC细胞未见着色。结论胰岛素呈时间依赖性引起人肾小管上皮细胞SREBP-1和FAS的上调,且作用在6h达到高峰,并最终导致细胞内脂滴沉积,这可能是代谢综合征引起肾脏脂质沉积的重要机制之一。     

贝纳普利对糖尿病大鼠肾脏中ICAM-1 mRNA和尿微量白蛋白的影响

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂贝纳普利对糖尿病肾脏病变的保护作用和对细胞间粘附分子(ICAM-1)mRNA及蛋白表达的影响.方法STZ诱发大鼠糖尿病,实验设正常组,糖尿病对照组,贝纳普利组和胰岛素治疗组,贝纳普利1.1mg·kg-1·d-1治疗2月,观察肾脏肥大、尿蛋白变化以及用免疫组化和RT-PCR方法检测ICAM-1在肾组织的定位、半定量表达.结果与糖尿病组相比,贝纳普利能显著降低肾重/体重,24h尿微量白蛋白(P<0.01).免疫组化和RT-PCR半定量结果显示贝纳普利能显著降低ICAM-1表达(P<0.01).结论贝纳普利能够降低STZ诱发糖尿病大鼠肾脏组织ICAM-1 mRNA和蛋白表达,对糖尿病肾脏病变有保护作用.     

海昆肾喜对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及其对肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响

目的 探讨海昆肾喜对糖尿病肾病大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白及mRNA表达的影响.方法 50只大鼠空腹一次性腹腔注射链脲佐茵素造成糖尿病模型,并按血糖高低随机分为2组、试验组灌胃海昆肾喜,给药12周.第4、8、12周末收集大鼠24h尿量及检测尿蛋白量.12周末处死大鼠,取血并分离血清检测肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和甘油三酯(TG)等,取肾后固定包埋切片,采用HE、Mallory染色观察肾组织病理改变,并应用免疫组化检测肾组织TGF-β1及用原位杂交检测肾组织TGF-β1mRNA的表达.结果 海昆肾喜能够降低糖尿病大鼠的蛋白尿,增加体重.降低血清Scr和BUN,改善肾功能,调节TG,改善脂代谢紊乱,并且能够降低糖尿病大鼠肾小管上皮细胞、肾间质细胞浆TGF-β1及mRNA的表达.结论 海昆肾喜可能抑制TGF-β1蛋白及mRNA的过度表达,进而减缓糖尿病肾病的病程进展.     

葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织MMP-2与TIMP-2表达的影响

目的探讨葛根素对糖尿病大鼠肾功能及肾组织基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其组织抑制剂2（TIMP-2）表达的影响。方法单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型。用原位杂交法检测肾小球MMP-2及TIMP-2 mRNA表达，流式细胞术和免疫组织化学检测肾皮质TGFβ1，MMP-2，TIMP-2,IV型胶原及层粘连蛋白表达。结果 糖尿病组较对照组肾小球MMP-2 mRNA及蛋白表达降低而TIMP-2 mRNA及蛋白表达升高，TGFβ1，IV型胶原及层粘连蛋白表达亦增加，肾功能恶化；葛根素用药组较糖尿病组肾小球MMP-2 mRNA及蛋白表达升高，而TGFβ1，TIMP-2，IV型胶原及层粘连蛋白表达减少，肾功能改善。结论葛根素对糖尿病大鼠肾功能具有保护作用，除降低血糖外，调节肾小球MMP-2及TIMP-2表达，从而减轻肾小球细胞外基质沉积也可能是其作用途径之一。     

实验性糖尿病肾病层粘连蛋白B1mRNA的变化及葛根素对其调节研究

目的观察实验性糖尿病肾病鼠层粘连蛋白B1mRNA的变化及葛根素对其影响的研究。方法将实验用SD大鼠采用随机数字法分为正常对照组和造模组，造模组又分为糖尿病组和葛根素治疗组，治疗12周。观察治疗期间及治疗后大鼠的血糖、内生肌酐清除率、24h尿蛋白排泄率，原位杂交检测肾组织层粘连蛋白B．基因表达。结果造模组大鼠均出现肾脏功能损害；糖尿病组及葛根素治疗组尿白蛋白排泄率、内生肌酐清除率、层粘连蛋白B1mRNA、糖基化终未产物均与对照组比较有统计学意义（P〈0．05）；葛根素治疗组较糖尿病组比较有统计学意义（P〈0．05）。结论葛根素通过抑制肾层粘连蛋白B1mRNA的表达对糖尿病大鼠肾脏起到保护作用。     

二甲双胍对脂肪肝作用机制的实验研究

目的观察胰岛素抵抗大鼠肝脏脂肪聚积和胆固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)表达并研究二甲双胍对脂肪肝的作用。方法分3组:设LETO大鼠为对照组,OLETF大鼠随机分为模型组和治疗组(二甲双胍每天100mg·kg-1)。于治疗后9,22周,测定肝组织甘油三酯含量;用WesterBlot方法测定肝脏SREBP-1蛋白表达水平;用定量PCR方法测定SREBP-1及参与其裂解的蛋白。结果与对照组比较,模型组大鼠肝组织甘油三酯含量增高,肝脏SREBP-1mRNA和蛋白表达水平升高,其靶基因脂肪酸合成酶(FAS)的mRNA表达增加。治疗后,与模型组比较,治疗组甘油三酯含量下降;治疗9周后,S1P和S2P mRNA水平下降;治疗22周后,肝脏SREB-1的mRNA表达水平下调。结论OLETF大鼠肝脏SREBP-1高表达,促进脂肪肝形成;二甲双胍可通过下调SREBP-1的表达,改善肝脏脂肪沉积。     

血清TNF-α升高对糖尿病肾脏脂质积聚的影响研究

目的明确糖尿病小鼠血清TNF-α升高与肾脏脂质代谢的关系。方法 CD1小鼠按体重腹腔注射链脲佐菌素(150 mg·kg-1),72 h后空腹血糖大于16.7 mmol·L-1者确定为1型糖尿病模型,饲养1个月后,采用ELISA方法检测血清中TNF-α水平,免疫组织化学和Western blot方法检测SREBP-1和ADRP的表达。结果与正常对照小鼠相比,糖尿病小鼠血清TNF-α水平明显升高,为正常对照小鼠的7.73倍。SREBP-1和ADRP主要表达于肾小管上皮细胞,糖尿病小鼠肾脏SREBP-1前体片段、成熟片段和ADRP表达明显高于正常对照小鼠,分别是对照组的2.31倍、1.74倍和1.72倍。小鼠血清TNF-α水平和肾脏ADRP表达的相关性分析证实二者间存在正相关,相关系数为0.914。结论糖尿病小鼠血清TNF-α升高可能是导致肾脏脂质积聚的因素之一。     

益肾降压方对RPH大鼠内皮由来因子的调控作用

目的研究中药经验方“YSJY”对RPH大鼠肾组织cNOS与ET1蛋白及基因表达的作用,初步探讨其可能的作用机制。方法通过大鼠肾次全切除法制备RPH动物模型,采用免疫组化及RTPCR法检测肾组织cNOS与ET1蛋白及基因表达变化。结果YSJY治疗8wk后:①免疫组化显示模型组近曲小管cNOS呈弱阳性表达、ET1呈强阳性表达,而YSJY组近曲小管cNOS表达呈强阳性,ET1阳性表达明显减弱,且其近曲小管、肾小球已经接近正常组。②与模型组比较,YSJY组肾组织ET1mRNA表达减弱(P<0.01),cNOSmRNA表达上调(P<0.05)。结论YSJY可通过抑制肾组织ET1mRNA表达、促进cNOSmRNA表达,使肾组织局部ET1含量减少、NO含量增加,从而实现其降压、保护肾功能的作用。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏α-actinin-4表达的影响及意义

目的研究糖尿病大鼠肾脏α-辅肌动蛋白-4(α-acti-nin-4)表达的变化以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)Ⅰ型受体(ATⅠ)拮抗剂氯沙坦(losartan)的调节作用。方法♂SD大鼠随机分为对照组(N组)、糖尿病组(D组)和氯沙坦治疗组(DL组),每组10只,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠模型,氯沙坦治疗组于造模成功后每日给予氯沙坦20mg·kg-1灌胃。8wk末电镜观察足细胞超微结构的变化;免疫组化、Western blot检测各组肾组织α-actinin-4蛋白的表达;半定量RT-PCR检测各组肾组织α-actinin-4mRNA的表达;应用放射免疫法检测肾组织AngⅡ的含量。结果D组大鼠肾重/体重、24h尿蛋白排泄量明显高于N组;肾组织α-actinin-4蛋白及mRNA的表达均明显低于N组。氯沙坦干预后可明显改善24 h尿蛋白与血肌酐水平,α-actinin-4蛋白及mRNA的表达水平明显高于D组。D组大鼠肾组织AngⅡ含量明显高于C组,但氯沙坦给药对其无影响。结论α-actinin-4表达降低参与了糖尿病肾病大鼠蛋白尿的发生,氯沙坦可以上调糖尿病大鼠肾脏α-actinin-4的表达,从而对肾脏起到保护作用。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小球信号转导和转录活化因子1表达的影响

目的探讨糖尿病大鼠肾小球细胞中信号转导和转录活化因子1磷酸化水平及其mRNA水平的改变以及血管紧张素受体1拮抗剂(AT1Ra)氯沙坦的影响。方法♂Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组,腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型,每日灌胃给予氯沙坦40mg·kg-1,共2wk。采用免疫组化和Western印迹检测肾小球细胞磷酸化STAT1(pSTAT1)蛋白的表达,RTPCR检测肾小球细胞STAT1mRNA的表达。结果糖尿病组肾小球p-STAT1表达明显高于对照组(P<001),约是对照组的3倍;氯沙坦治疗组大鼠肾小球pSTAT1的表达明显低于糖尿病组(P<005);RTPCR结果表明糖尿病组肾小球细胞STAT1mRNA表达明显上调,约为对照组的34倍;氯沙坦治疗组STAT1mRNA表达与糖尿病组相比无明显差异。结论STAT1信号途径可能参与了糖尿病早期肾脏的发病过程,氯沙坦的肾脏保护作用可能部分是通过影响STAT1的激活而实现。     

西洛他唑降低链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠肾脏VCAM-1表达

目的　探讨西洛他唑对高糖大鼠肾组织VCAM - 1的影响及对肾脏的可能保护作用。方法　雄性SD大鼠,链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型。观察西洛他唑12周后对血糖、糖化血红蛋白、肾重/体重比值、肾脏VCAM - 1mRNA及蛋白表达的影响。结果　糖尿病对照组及各治疗组肾重/体重比值均明显增加(P <0 . 0 1);VCAM - 1mRNA表达在糖尿病组明显升高,药物治疗后有显著改善( P <0. 0 1);Westernblot各组均有VCAM - 1表达,糖尿病组较正常组表达增强,药物治疗后呈下降趋势。结论　STZ诱发的糖尿病大鼠肾脏VCAM - 1表达增加,西洛他唑降可低糖尿病大鼠肾组织VCAM - 1mRNA和蛋白表达,对糖尿病肾脏具有保护作用。     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾脏保护作用及部分机制

目的探讨白芍总苷(TGP)对糖尿病大鼠肾脏保护作用及部分机制。方法应用链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病模型,同时每日灌胃给予TGP(50,100,200mg·kg-1,连续8wk。结果TGP给药呈剂量依赖性降低糖尿病大鼠AER的增加。TGP给药(50mg·kg-1)大鼠肾小球平均容量(VG)明显低于模型组,肾小管-间质损伤指数(TII)较模型组有所下降,但差异无统计学意义;TGP给药(100,200mg·kg-1VG与TII均明显低于模型组。模型组肾组织MDA含量明显高于对照组,TGP给药(200mg·kg-1)大鼠肾组织MDA含量明显低于模型组。Western blot显示模型组肾组织1α(IV)Ⅳ型胶原蛋白表达较对照组增加2.7倍,TGP给药(50、100、200mg·kg-1)8wk分别可使肾组织1α(IV)Ⅳ型胶原蛋白表达下降47.9%、60.4%与72.9%。模型组肾组织ICAM-1及TGFβ1蛋白表达明显高于对照组,TGP给药(50,100,200mg·kg-1)肾组织ICAM-1与TGFβ1蛋白表达明显低于模型组。结论TGP对糖尿病大鼠肾脏保护作用机制部分与其抑制肾组织中ICAM-1及TGFβ1蛋白表达有关。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织降钙素基因相关肽和内皮素-1表达的影响

目的 探讨氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织降钙素基因相关肽（CGRP）及内皮素-1（ET-1）表达的影响。方法 42只大鼠随机分成正常对照组、糖尿病组和氯沙坦治疗组（每日灌胃给予氯沙坦30mg/kg,共8周）,腹腔注射STZ诱发糖尿病大鼠模型。实验8周取尿、血化验,肾组织采用免疫组化检测CGRP与ET-1蛋白表达,半定量RT-PCR检测CGRP与ET-1mRNA的表达。结果 3组大鼠24h尿蛋白定量、血肌酐、血尿素氮均有统计学意义（P〈0.05）。糖尿病组肾组织CGRP的蛋白及mRNA的表达较正常对照组降低,ET-1的蛋白及mRNA的表达较正常对照组升高;氯沙坦组CGRP的表达较糖尿病组升高,ET-1的表达较糖尿病组降低;3组间均有统计学意义（P〈0.05）。结论 氯沙坦的肾脏保护作用可通过促进CGRP合成,减少ET-1分泌而起作用。     

糖尿病大鼠肾脏水通道蛋白-2mRNA的表达及黄芪的调节作用

目的观察黄芪注射液(astragalus membranaceus,AM)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肾脏髓质水通道蛋白-2(aquaporin-2,AQP-2)基因表达的影响,以探讨黄芪治疗糖尿病的分子生物学机制。方法实验大鼠分为4组:正常组、糖尿病模型组、AM小剂量组和AM大剂量组,后两组应用AM5、10g·kg-1·d-1腹腔注射6周,测定各组大鼠血糖、血清胰岛素及C肽水平,用代谢笼法测定各组大鼠24h尿量,RT-PCR方法测定各组大鼠肾AQP-2 mRNA的表达。结果糖尿病大鼠血糖水平明显增高,血清胰岛素及C肽水平明显下降,单用黄芪注射液治疗对血糖、血清胰岛素和C肽水平无明显影响,但黄芪治疗可使糖尿病大鼠尿量明显增加。RT-PCR检测发现糖尿病大鼠肾髓质AQP-2 mRNA的表达明显上调,黄芪治疗可使其表达下降。结论黄芪治疗糖尿病利水消肿、改善水平衡代谢紊乱的作用可能与其降低肾髓质AQP-2 mRNA的表达有关。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质TGFβ_1及其受体表达的影响

目的探讨苯那普利对糖尿病大鼠肾皮质ＴＧＦβ１及其受体表达的影响。方法大鼠随机分单侧肾切除组（Ｃ组）;糖尿病组（Ｄ组）及糖尿病苯那普利治疗组（１０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１,灌胃,ＤＢ组）,观察４ｗｋ后各组血糖、血胰岛素、血肌酐水平及体重、肾重和肾组织蛋白含量的变化,采用荧光分光光度法测定血浆及肾皮质、髓质ＡＣＥ活性。应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测各组肾皮质ＴＧＦβ１,１α（ＩＶ）前胶原及ＦＮｍＲＮＡ表达;Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交检测各组肾皮质ＴＧＦβ１及细胞膜ＴβＲⅠ蛋白表达。结果苯那普利治疗４ｗｋ后能够明显缓解糖尿病大鼠高血糖、低胰岛素血症、血肌酐水平上升及体重下降、肾脏肥大。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交表明糖尿病大鼠肾皮质ＴＧＦβ１、１α（ＩＶ）前胶原及ＦＮｍＲＮＡ表达分别３．９４、４．２５及１．５０倍,Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交表明肾皮质ＴＧＦβ１及细胞膜ＴβＲⅠ蛋白表达分别上调３．１０、１．００倍,苯那普利治疗４ｗｋ后对它们均有明显抑制作用。另外,尽管糖尿病大鼠血浆ＡＣＥ活性明显下降,肾皮质ＡＣＥ活性却明显增加,苯那普利治疗后对血浆及肾皮质ＡＣＥ活性抑制分别达９２．００％和８８．７０％。结论苯那普利可抑制高血糖状态下肾皮质ＴＧ?     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ2型受体及诱生型一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 研究氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织血管紧张素系统与一氧化氮系统的影响及其二者之间的关系。方法 SD大鼠随机分成3组：对照组、糖尿病组和氯沙坦（30 mg·kg^-1·d^-1×8周, ig）治疗组。应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ2型受体(AT₂)、Ⅳ型胶原及诱生型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA表达。并同时检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、NO含量及一氧化氮合酶（NOS）活性。结果 糖尿病组大鼠尿蛋白排泄率、肾皮质AngII含量、Ⅳ型胶原mRNA及iNOS mRNA表达较对照组明显升高；糖尿病大鼠肾皮质NOS活性也较对照组明显增强；然而糖尿病大鼠肾皮质NO含量及AT₂ mRNA水平却较对照组大鼠明显降低；氯沙坦治疗能显著降低糖尿病大鼠尿蛋白排泄率及肾皮质Ⅳ型胶原mRNA表达；并能明显增加肾皮质AT₂及iNOS mRNA表达及总NOS活性及NO含量。结论 AT₂的激活与氯沙坦的肾脏保护作用有关，并可能参与了对肾脏iNOS mRNA表达的上调。