miR-34a通过靶向调控Notch1表达影响乳腺癌细胞的增殖

目的探讨miR-34a通过靶向调控Notch1表达影响乳腺癌细胞的增殖。方法乳腺癌细胞MCF-7转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT,克隆形成实验,Hoechst染色及流式细胞术分别检测miR-34a mimics对乳腺癌MCF-7细胞活力、克隆能力、凋亡情况及细胞周期的影响;通过双荧光素酶报告基因实验,western blot及RT-PCR检测Notch1是否是miR-34a的下游靶基因。结果与miR-34a NC比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞克隆数目减少(P0.01),细胞周期阻滞在G1期(P0.01),Notch1蛋白及mRNA表达量都显著降低(P0.01),同时荧光素酶报告基因实验也证实miR-34a mimics能与报告基因结合。结论 miR-34a mimics能通过负性调控Notch1表达,从而显著的抑制MCF-7乳腺癌细胞增值,并诱导细胞凋亡。     

miR-34a在膀胱癌细胞中的表达及对细胞的增殖、迁移的影响

目的:探究在膀胱癌细胞中miR-34a的表达及对细胞的增殖、迁移的影响。方法:在ATCC细胞库购买膀胱癌细胞株,随机分为3组,miR-34a组通过转染方法将miR-34a mimics转染到膀胱癌细胞中;膀胱癌组(BC组)单纯膀胱癌细胞株不做其他处理,正常培养;抑制组(IN组)将miR-34a inhibitor转染到膀胱癌细胞株中。通过TUNEL法、CCK-8法、克隆实验、Transwell分析3组膀胱癌细胞凋亡、增殖、迁移、侵袭情况的差异性来探究在膀胱癌细胞中miR-34a的表达及对细胞的增殖的影响。结果:结果显示,IN组癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最低,miR-34a组癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最高,IN组和BC组、miR-34a组相比较miR-34a mRNA含量下降,说明转染成功(P<0.05)。IN组癌细胞凋亡数量最少,miR-34a组癌细胞大量凋亡,IN组和BC组、miR-34a组相比较癌细胞分布明显稀疏,数量明显减少(P<0.05)。组间两两比较发现IN组和miR-34a组之间OD值具有明显差异,IN组癌细胞的增殖数量最多,miR-34a组癌细胞的增殖数量最少,IN组显著高于BC组,BC组癌细胞的生长情况显著高于miR-34a组(P<0.05)。对3组癌细胞进行克隆迁移实验。由结果明显可知,IN组癌细胞迁移能力强,显微镜下细胞数量多(P<0.05),IN组和BC组、miR-34a组相比较整体迁移能力明显增强,癌细胞数量明显增多(P<0.05)。由结果明显可知,IN组膀胱癌细胞侵袭能力强,miR-34a组膀胱癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱(P<0.05),IN组和CO组、miR-34a组相比较,数量显著上升,整体侵袭能力增强(P<0.05)。结论:在膀胱癌细胞中,过表达的miR-34a能够抑制癌细胞生长,降低miR-34a的水平含量可以促进膀胱癌细胞的增殖。     

下调miR-214对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响

目的:研究miR-214对鼻咽癌细胞CNE2凋亡的影响及机制。方法:RT-PCR检测鼻咽癌细胞CNE2和正常鼻咽上皮细胞NP69细胞中miR-214的表达;通过miR-214inhibitor转染鼻咽癌细胞CNE2,流式细胞仪(FCM)检测鼻咽癌细胞凋亡变化;并用Western印迹法检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达变化。结果:正常鼻咽上皮细胞明低表达miR-214,而鼻咽癌CNE2细胞中明显高表达miR-214(P<0.05),miR-214inhibitor可浓度依赖性的抑制miR-214的表达(P<0.05)。40μmol/L和5μmol/L的miR-214inhibitor组细胞凋亡率分别为:(45.3±9.1)%和(12.3±3.8)%,而NC inhibitor组细胞的凋亡率为(5.1±0.4)%。miR-214inhibitor可下调Bcl-2的表达(P<0.05),对Bax的表达无明显影响。结论:miR-214可能通过下调Bcl-2的表达从而诱导CNE2细胞凋亡,这可能为鼻咽癌的治疗提供新靶点。     

miRNA-34a通过调控SOX4/RAS/MAPK信号通路对中枢神经系统淋巴瘤进展的影响

目的:探讨微小RNA-34a(miR-34a)在原发性中枢神经系统淋巴瘤(PCNSL)中的作用及其潜在的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测PCNSL组织中miR-34a的表达。体外培养Raji细胞，将miR-34a模拟物(miR-34a mimic)、模拟物对照(NC mimic)、miR-34a抑制剂(miR-34a inhibitor)、抑制剂对照(NC inhibitor)、miR-34a mimic+空白质粒(Vector)、miR-34a mimic+SOX4过表达质粒(pcDNA-SOX4)分别转染至细胞中。RT-qPCR实验检测细胞中miR-34a的表达；CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测细胞中SOX4蛋白和RAS/MAPK通路蛋白Ras、p-Raf-1、p-MEK的表达；生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-34a与SOX4的靶向关系。结果:PCNSL组织中miR-34a的表达显著降低(P<0.05)。与NC mimic组比较，miR-34a mi...     

miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34cmimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81．16％。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P〈0．05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

microRNA-34a体外调控鼻咽癌鳞状肿瘤干细胞表型

目的探讨microRNA-34a(mi R-34a)对鼻咽癌鳞状肿瘤干细胞表型的体外调控作用。方法利用原代培养的人类鼻咽癌细胞,采用流式分选法定量并收集ALDH(aldehyde dehydrogenase)+肿瘤干细胞。通过RT-qPCR分析mi R-34与肿瘤干细胞相关因子(Sox2、Nanog、Oct3/4)在ALDH~+和ALDH~-细胞中的表达情况。进一步用miR-34a拟态转染评估其对鼻咽癌肿瘤干细胞标记物以及相关因子的表达调控能力。结果原代鼻咽癌细胞中表达ALDH的细胞约占15.43%左右。与ALDH~-细胞相比,miR-34a表达水平在大多数ALDH~+细胞中显著下调(-13.2 vs-4.1倍),3种肿瘤干细胞相关因子表达显著增加(最高36.8倍)。ALDH~+细胞转染miR-34a拟态24 h、48 h、72 h后miR-34a mRNA水平显著增加,48 h时达峰值水平(4.49倍,P0.01),而3种肿瘤干细胞相关因子表达水平显著降低。结论恢复miR-34a表达显著抑制人类原代鼻咽癌干细胞表型的形成。调控鼻咽癌和肿瘤干细胞中miR-34a的表达可能降低肿瘤治疗后的转移和复发率。     

miR-34c对II型子宫内膜癌HEC-1-B细胞生长和凋亡的影响

目的 ：研究miR-34c对Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-B细胞的生长及凋亡的影响。方法：用hsa-miR-34c mimics转染HEC-1-B细胞。流式细胞技术测定细胞转染率,实时荧光定量PCR验证转染后miR-34c的表达。CCK-8检测细胞增殖能力的改变。细胞克隆形成实验观察miR-34c对细胞生长的长期抑制。流式细胞技术测细胞凋亡。结果：细胞转染率为81.16%。相对于对照组,转染后实验组miR-34c表达明显增加,细胞增殖、克隆形成能力减弱,凋亡增加（P＜0.05）。结论：miR-34c能明显抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是Ⅱ型子宫内膜癌的潜在抑癌基因。     

miR-34a抑制人鼻咽癌细胞生长与侵袭

目的探讨miR-34a在人鼻咽癌CNE2细胞中的生物学功能。方法采用MTT、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验分别检测过表达miR-34a对人鼻咽癌CNE2细胞的生长与侵袭作用。结果 MTT检测发现,过表达miR-34a可抑制人鼻咽癌CNE2细胞的生长增殖;细胞划痕和Transwell侵袭实验显示,在鼻咽癌CNE2细胞中过表达miR-34a 48 h后划痕愈合率为40.3%±9.0%,与对照组（76.3%±6.8%）比较,能明显减缓CNE2细胞划痕的愈合,转染miR-34a mimics 48 h后穿过基底膜的细胞数为71±10,与对照组（147±5）比较,能明显减缓CNE2细胞侵袭能力（P〈0.01）。结论 miR-34a可抑制鼻咽癌CNE2细胞生长与侵袭。     

封闭内源性miR-23a对人胃腺癌细胞系MGC803增殖及侵袭的影响

目的设计并合成miR-23a ASO (ASO-23a),封闭内源性miR-23a的功能后,检测人胃腺癌细胞系MGC803增殖及侵袭能
力的改变。方法首先设计并合成ASO-23a,经脂质体方法转染MGC803 细胞,实时定量PCR 检测转染细胞MGC803 中
miR-23a的表达水平;经MTT实验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验、TUNEL实验及transwell实验,观察细胞内源性
miR-23a功能被封闭后对MGC803细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果实时定量PCR结果表明ASO-23a能够有效封闭细
胞中内源性miR-23a;MTT、平板克隆形成及软琼脂克隆形成实验结果显示,封闭内源性miR-23a后可抑制MGC803细胞活性;
TUNEL实验结果显示,ASO-23a可以促进MGC803细胞凋亡的发生;Transwell实验结果显示,ASO-23a可以抑制MGC803细
胞的侵袭能力。结论设计并合成的ASO-23a在人胃腺癌细胞系MGC803中有效封闭内源性miR-23a,能够抑制细胞活性及侵
袭能力,并能促进细胞凋亡的发生。
     

Micro RNA-132对结肠癌细胞生物学功能的作用

目的  探讨microRNA-132（miR-132）对结肠癌细胞系LOVO生物学功能的作用。方法  通过体外转染miR-132 mimic的方式进行获得性功能实验。以细胞计数检测（CCK-8）、平板克隆形成、流式细胞凋亡检测以及划痕实验分析miR-132过表达对LOVO细胞增殖与侵袭的影响。结果  LOVO细胞中，外源性过表达miR-132能够抑制其生长，且抑制率呈时间、浓度依赖性，50 nmol/L miR-132 mimic处理72 h后，抑制率达30%。流式细胞凋亡检测发现miR-132过表达诱导细胞凋亡。miR-132过表达可以抑制LOVO细胞体内的外克隆形成能力。体外平板克隆形成实验显示，miR-132过表达使LOVO细胞克隆形成率从21%降至7%。划痕修复实验结果显示，高表达miR-132各组细胞的迁移能力降低。结论  miR-132过表达能显著抑制结肠癌细胞LOVO发生细胞凋亡及增殖，还能削弱结肠癌细胞LOVO的克隆形成能力。

     

过表达miR-29b可抑制胆管癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡

目的研究miR-29b在胆管癌中的表达情况,及其对胆管癌细胞QBC939增殖和凋亡的影响。方法Real-time PCR检测 miR-29b在胆管癌细胞QBC939与良性胆管细胞株H-69中的表达;及胆管癌组织与正常胆管组织中的表达。将对数生长期的 QBC939细胞分为3组,空白对照组,阴性对照组,miR-29b过表达组。MTT和细胞克隆形成实验分别检测过表达miR-29b对细 胞增殖和克隆形成率的影响;流式细胞术检测过表达miR-29b对细胞周期和凋亡的影响。结果miR-29b在胆管癌细胞及胆管 癌组织中表达较正常胆管细胞和组织中均显著降低（P<0.01）。miR-29b过表达组QBC939细胞的miR-29b较阴性对照组表达 明显升高（P<0.01）。在QBC939细胞中,过表达miR-29b可以显著抑制细胞的增殖和克隆形成（P<0.01和P<0.05）;过表达miR- 29b可阻滞细胞在S期（P<0.05）,并且导致细胞凋亡明显增加（P<0.01）。结论miR-29b作为一种抑癌microRNA,在胆管癌中 低表达,过表达miR-29b可以抑制胆管癌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

粉防己碱对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡作用的研究

目的：探讨粉防己碱（Tet）对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡的影响。方法：将人鼻咽癌细胞株CNE分为不同浓度Tet处理组,并设立对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE体外生长的抑制作用;采用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术Annenxin V/PI EGFP观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链反应技术（RT-PCR）观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡相关基因mRNA表达的影响。结果：Tet呈浓度依赖性抑制癌细胞体外生长（P〈0.05）。Tet处理细胞72 h后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成;随着Tet浓度的提高,各Tet处理组DNA凝胶电泳梯形条带和细胞凋亡率渐趋明显。与对照组相比较,Bcl-2 mRNA的表达渐减弱,Bax基因mRNA表达渐增强（P〈0.05）。结论：Tet可抑制癌细胞生长,促进癌细胞凋亡,其抗癌作用机制可能与下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达有密切联系。     

干扰长链编码RNA FOXCUT能抑制鼻咽癌细胞上皮间质转化及诱导线粒体损伤

目的 探讨干扰长链编码RNA FOXCUT对鼻咽癌细胞上皮间质转化及线粒体功能的影响。方法 RT-PCR检测50例鼻咽癌患者癌组织及癌旁组织和NP69、CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞株中FOXCUT表达水平;将shRNA FOXCUT转染至CNE1细胞,随机分组为Control组、shRNA-NC组和FOXCUT-shRNA3组。采用CCK8法和克隆形成实验检测细胞增殖;显微镜观察细胞形态;免疫荧光检测Vimentin+含量;试剂盒检测氧化应激标记物SOD、MDA、LDH的水平;流式检测线粒体膜电位的变化;Western blot法检测E-cad、N-cad、Vimentin、Bax、Bcl-2、caspase-3和c-Myc蛋白表达水平。结果 与癌旁组织相比,鼻咽癌组织中FOXCUT表达水平均升高（P<0.001）。与NP69细胞相比,CNE1、CNE2、SUNE2、HER2和5-8F细胞FOXCUT表达水平均升高（P<0.001）。与Control组相比较,FOXCUT-shRNA3组细胞增殖倍数及克隆形成率降低（P<0.001）,细胞形态呈短梭形、扁平型或圆形,细胞间的连接较为紧密,具有铺路石样特征;N-cad、Vimentin的表达水平降低,E-cad的表达水平升高（P<0.05）,Vimentin+含量降低（P<0.001）,MDA、LDH的含量明显升高（P<0.05）,SOD的活性明显降低（P<0.05）,红色荧光细胞向绿色荧光细胞转变较明显,绿色荧光细胞百分比增加,Bax/Bcl2、Cleaved cas3/cas3表达显著上升,c-Myc表达显著降低（P<0.001）。结论 干扰长链非编码RNA FOXCUT能够抑制鼻咽癌细胞增殖,减少上皮间质转化,增强氧化应激、降低膜电位,诱导CNE1细胞线粒体功能损伤,促进凋亡;干扰长链非编码RNA FOXCUT对CNE1细胞抑制效果显著,具有靶向治疗鼻咽癌的潜力。     

miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖及凋亡的调控

目的:探讨miR-19a在去势抵抗性前列腺腺癌中的表达及其对去势抵抗性前列腺癌细胞株PC3及DU145的增殖及凋亡的影响。方法:用定量PCR方法检测10例去势抵抗性前列腺癌细胞组织及相关癌旁的miR-19a表达,通过MTT、克隆形成、Western blotting、流式细胞仪检测增殖及凋亡及体内成瘤的方法来研究miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响。结果:miR-19a在去势抵抗性前列腺癌组织中的表达相对于癌旁组织显著提高。抑制miR-19a在激素非依赖前列腺癌中的表达,可抑制细胞的增殖及集落形成并增加其凋亡。结论:在激素非依赖性前列腺癌中,miR-19a起着癌基因作用,与前列腺癌的增殖及凋亡相关。     

circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的探讨circ_0001178靶向miR-1179调控胃癌AGS细胞增殖和凋亡的机制。方法选取33例胃癌组织及癌旁组织标本,实时荧光定量PCR检测circ_0001178和miR-1179的表达水平;将胃癌细胞株AGS随机分为si-NC组、si-circ_0001178组、miR-NC组、miR-1179组、si-circ_0001178+anti-miR-NC组、si-circ_0001178+anti-miR-1179组;采用克隆形成实验检测克隆形成数,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测蛋白表达;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0001178和miR-1179的靶向关系。结果胃癌组织中circ_0001178表达水平明显高于癌旁组织,而miR-1179表达水平明显低于癌旁组织（P < 0.01）。抑制circ_0001178表达或过表达miR-1179,AGS细胞克隆形成数减少,细胞活性降低,AGS细胞凋亡率升高,cleaved-caspase3和cleaved-caspase9表达水平均升高（P < 0.05）。结论抑制circ_0001178表达可能通过靶向上调miR-1179抑制胃癌AGS细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

miR-19a在鼻咽癌细胞上皮间质转化中的作用

目的 研究微小RNA-19a(miR-19a)在鼻咽癌细胞中的表达以及对体外鼻咽癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用.方法 利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测miR-19a在鼻咽癌细胞株CNE2、SUNE-1、HNE1、58F及人正常鼻咽上皮细胞株NP69中的转录水平;使用miR-19a模拟物(miR-19a...     

建立慢病毒介导的miR-145稳定过表达的鼻咽癌细胞株

目的 构建过表达miR-145的慢病毒载体,建立稳定过表达miR-145的鼻咽癌细胞株.方法 构建慢病毒表达质粒pLVTHM/miR-145;293FT细胞进行慢病毒包装,生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株;最后应用荧光定量PCR检测病毒感染后鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中miR-145的表达水平.结果 荧光定量PCR结果和测序验证pLVTHM/miR-145重组质粒构建成功;包装生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2后,与阴性对照组比较,其表达水平分别升高4000倍和4500倍.结论 成功构建了pLVTHM/miR-145慢病毒重组质粒,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,为研究miR-145在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型.     

miR-29a在宫颈癌组织中的表达及其上调后对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响

目的检测微小RNA（miR）-29a 在宫颈癌组织和不同种类宫颈癌细胞系中的表达情况及其上调后对宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移等恶性生物学行为的影响。方法①组织标本检测：收集2014 年7 月-2016 年7 月西南医科大学附属医院活检或手术切除的宫颈组织标本160 例,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-29a 的表达情况,并分析宫颈癌组织中miR-29a 的表达与临床病理特征的关系。②细胞学实验：采用qRT-PCR检测miR-29a在不同种类的人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski及C33a）和人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7中的表达水平,选取miR-29a表达最低的宫颈癌细胞系SiHa进行后续研究,使用miR-29a mimics转染SiHa细胞,qRT-PCR检测转染后细胞miR-29a 的表达变化,CCK-8 法检测转染后细胞增殖活力的变化,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率的变化,Transwell实验检测转染后细胞迁移和侵袭能力的变化。结果宫颈鳞癌组织中miR-29a 表达低于HSIL、LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）;HSIL组织中miR-29a表达低于LSIL及正常宫颈组织（p <0.05）,LSIL与正常宫颈组织间miR-29a的表达差异无统计学意义（p >0.05）。宫颈鳞癌组织中miR-29a的表达与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（p <0.05）。miR-29a在人宫颈癌细胞系（SiHa、HeLa、Caski和C33a）中的表达低于人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7（p <0.05）。SiHa细胞转染miR-29a mimics后,miR-29a表达水平增高（p <0.05）,细胞增殖活力降低（p <0.05）,细胞凋亡率增高（p <0.05）,细胞迁移和侵袭能力下降（p <0.05）。结论miR-29a在宫颈癌组织和细胞中均呈低表达,上调miR-29a的表达能够抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖及侵袭迁移能力,促进细胞的凋亡。