热疗联合化疗对K562/AO2细胞体外作用的实验研究

本研究观察热疗联合阿霉素对耐药慢性髓系白血病细胞系K562/AO2体外增殖的抑制作用、诱导凋亡及对Bcl-2及P-gp表达的影响。以MTT法确定阿霉素的工作浓度进行化疗,以40、41和42℃体外加热K562/AO2。加热前及加热后48小时采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率,MTT检测肿瘤细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、Bcl-2及P-gp表达,观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。作用48小时的IC50值作为实验的工作浓度。结果表明：与单纯培养相比,40、41和42℃热疗60分钟对K562/AO2细胞有明显地抑制作用（p〈0.01）,并随温度增高而增强;热疗＋化疗组在40、41和42℃时,K562/AO2增殖抑制明显（p〈0.01）,随着温度的增高而增强。热疗组、化疗组及热疗＋化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间均有显著性差异（p〈0.01）;Bcl-2蛋白及P-gp的表达均下降,各组之间也有显著性差异（p〈0.01）。结论：热疗联合阿霉素能增强对K562/AO2细胞的体外抑制作用,提高肿瘤细胞的凋亡率,下调Bcl-2及P-gp的表达。     

热疗联合化疗对Raji细胞的体外抑制及Bcl-2表达的作用

目的：观察热疗联合阿霉素对人B细胞淋巴瘤细胞系Raji的体外增殖的抑制作用、凋亡及Bcl-2表达的影响。方法：MTT法确定阿霉素的工作浓度，以该浓度进行化疗或与热疗的联合，选择温度40℃、41℃及42℃，体外作用于Raji细胞。作用前及48h采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率；MTr法检测肿瘤细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡及Bcl-2表达。观察热疗联合阿霉素的抗肿瘤效果。结果：作用48h IC50的药物浓度作为实验的工作浓度。单纯40℃、41℃及42℃热疗60min对Raji细胞系有抑制作用（P〈0．01），热化疗组对Raji细胞有明显的抑制作用（P〈0．01），均随着温度的增高而增强。流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2的表达，热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高，各组之间差异均有非常显著性意义（P〈0．01）；Bcl-2蛋白的表达则下降，各组之间差异也有非常显著性意义（P〈0．01）。结论：热疗联合阿霉素能增强对Raji细胞的体外抑制作用：提高肿瘤细胞的凋亡率，下调Bcl-2蛋白的表达。     

重组变构人TNF相关促凋亡配体联合三氧化二砷诱导白血病耐药细胞株凋亡

本研究探讨重组变构人TNF相关促凋亡配体（recombinant mutant human TNF—related apoptosis—inducing ligand，rmhTRAIL）联合三氧化二砷（As2O3）对阿霉素诱导的人慢性髓系白血病红白血病变耐药细胞株K562／AO2（mdr-1^＋）的促凋亡作用，以亲本阿霉素敏感细胞株K562（mdr-1^-）为对照，观察rmhTRAIL作用后细胞形态变化，采用MTT法测定rmhTRAIL、As2O3单药及联合作用后细胞增殖抑制率；碘化丙锭染色的流式细胞术（FACSCalibur）定量检测rmhTRAILL、As2O3单药及联合作用后sub—G1峰占检测细胞的百分比（sub—G1％）。结果表明：rmhTRAIL联合As2O3对K562／AO2和K562增殖的抑制作用优于单药，采用国内金（正均）氏公式判断rmhTRAIL和As2O3联合作用具有协同作用；流式细胞术定量检测sub—G1％显示，rmhTRAIL 2000ng／ml与As2O3 2μmoL／L单独作用下K562／AO2组与K562组凋亡率分别为（34．93±0．10）％、（10．53±0．16）％（P〈0．01）；（5．95±0．07）％、（3．50±0．01）％（P〈0．05），联合作用下细胞凋亡率分别为（50．95±0，91）％、（20．75±0．95）％（P〈0．05），K562／AO2组凋亡效应强于K562组．结论：rmhTRAIL可诱导K562、K562／AO2细胞凋亡；rmhTRAIL联合凋亡诱导剂As2O3对白血病耐药细胞株K562／AO2和K562细胞株的凋亡具有协同作用；rmhTRAIL、As2O3对K562／AO2的促凋亡作用优于其亲本K562细胞．     

非致死剂量高强度聚焦超声逆转K562／AO2细胞多药耐药的实验研究

目的探讨非致死剂量高强度聚焦超声（HIFU）逆转K562／AO2细胞多药耐药（MDR）的效能及其作用机制。方法（1）固定辐照时间或超声声强，应用不同声强或辐照时间的HIFU辐照K562、K562／AO2细胞株，观察HIFU的剂量-效应关系；（2）将K562／AO2细胞株分组为：阿霉素组（ADM组）、ADM加HIFU辐照组（HIFU组）、ADM加维拉帕米组（VRP组），分别观察各组细胞内的ADM浓度、细胞的抑制率和细胞凋亡情况；（3）检测HIFU干预前后K562／A02细胞的P—gP、PDCD5表达情况。结果（1）当辐照时间一定时（5s）声强越高肿瘤细胞存活率越低，当HIFU声强一定时（400w／cm^2）细胞存活率随HIFU辐照时间延长而下降；（2）在K562／AO2细胞株中HIFU、VRP干预均能提高细胞内ADM浓度，HIFU组、VRP组与ADM组比较P均〈0．01，HIFU组与VRP组比较P〉0．05；HIFU组、VRP组、ADM组均能抑制K562／AO2细胞的增殖和促使K562／AO2细胞发生凋亡。HIFU组、VRP组与ADM组比较P均〈0．01，HIFU组与VRP组比较P〉0．05；（3）HIFU辐照K562／AO2细胞后P—gP表达明显降低，PDCD5表达升高。结论非致死剂量HIFU辐照K562／AO2细胞能够提高耐药肿瘤细胞内的化疗药物浓度，增加耐药肿瘤细胞的抑制率和凋亡率。非致死剂量HIFU逆转MDR的可能机理是下调耐药细胞的P—gP表达和上调PDCD5表达。     

阿霉素化疗与热化疗对人肺腺癌细胞株A549细胞抑制作用的比较研究

目的 探讨阿霉素（adriamycin，ADR）化疗与热化疗（热疗联合化疗）对人肺腺癌细胞株A549细胞的抑制作用与细胞内阿霉素浓度的关系。方法 不同浓度的阿霉素作用于体外培养的A549细胞，42．5℃作用30、60min后，37℃继续培养，然后用MTT法检测细胞的毒性作用，用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度。结果 化疗、热化疗对A549细胞均有抑制作用，与对照组比较差异有非常显著性（P〈0．01），且均存在浓度、时间的依赖性；热化疗对细胞的抑制作用明显强于单纯化疗（P〈0．01）；热化疗组细胞内阿霉素的浓度明显高于单纯化疗组（P〈0．01）；各组细胞内药物浓度与细胞的抑制率呈直线相关（P〈0．05）。结论 阿霉素热化疗可以显著增强对A549细胞的抑制，其抑制作用与细胞内浓度有关。     

mdr1基因shRNA表达载体逆转白血病耐药细胞系K562/ADM多药耐药的实验研究

目的 探讨mdr1短发夹RNA（mdr1 shRNA）对人红白血病耐阿霉素细胞系K562／ADM的耐药逆转作用。方法 编码设计合成靶位mdr1基因mRNA具有19个碱基发夹结构互补的寡核苷酸模板，构建2个shRNA表达载体pSilencer^Tm3．1-H1 neo mdr1—A和mdr1—B，将其稳定转染K562／ADM细胞。用RT—PCR法检测转染后K562／ADM细胞mdr1 mRNA表达，Western blot检测P-糖蛋白（P—gP）表达，流式细胞术和MTT法分别检测K562／ADM细胞凋亡和对阿霉素的敏感性，用激光共聚焦荧光显微镜观察并测定细胞内柔红霉素的积累。结果 在pSilencer^TM3．1-H1 neomdr1—A和mdr1—B shRNA表达载体稳定转染的K562／ADM细胞，mdr1mRNA表达分别减少到转染前的35．9％（P〈0．05）和27．5％（P〈0．01）；同时Western blot结果显示P—gP表达被明显而特异地抑制，对阿霉素的耐药性由79倍分别减低到38倍和30倍；并且，细胞内荧光强度与对照组相比显著增加（P〈0．05），与阿霉素联合应用凋亡细胞百分率分别增加至18．1％（P〈0．05）和54．4％（P〈0．01）。结论 靶向mdr1基因shRNA表达载体可有效逆转耐药，使耐药的肿瘤细胞恢复对化疗药物的敏感性。     

伊立替康联合热疗抑制人大肠癌细胞LOVO体外增殖作用的研究

目的：探讨伊立替康联合热疗体外抑制人大肠癌细胞增殖的效果，以确定联合方案是否具有协同效应。方法：使用四甲基偶氮唑蓝（Mar）法测定单独或联合应用伊立替康与热疗对人大肠癌LOVO细胞体外增殖的抑制作用，使用流式细胞仪检测不同方案对LOVO细胞凋亡率的影响。根据Veleriote法判断热化疗联合的作用效果；透射电镜观察细胞形态。结果：与伊立替康化疗或单纯热疗作用相比．伊立替康与43℃热疗联合后对LOVO细胞增殖有显著的抑制作用（P〈0．01），24h时流式细胞仪检测LOVO细胞的凋亡情况发现，热疗组、化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论：伊立替康与热疗联合对LOVO细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。     

人骨髓间充质干细胞对K562细胞增殖和化疗敏感性的影响

本研究比较K562细胞与正常人骨髓间充质干细胞（MSC）黏附培养前后细胞增殖、化疗敏感性及MDR1变化，以寻找白血病耐药与造血微环境的关系。对悬浮培养和与MSC黏附培养的K562细胞绘制细胞生长曲线；用流式细胞术测定细胞周期并观察化学药物对细胞存活率和凋亡的影响；用RT-PCR技术检测MDR1基因表达。结果表明：与悬浮培养比较，黏附培养K562细胞增殖受抑，G0／G1期细胞比例增加（P〈0．05），S期细胞比例下降（P〈0．05），G2／M期细胞比例增加（P〈0．01）。在柔红霉素（DNR）诱导的凋亡中，黏附培养组K562细胞凋亡受阻（P〈0．05）。黏附培养未诱导K562细胞MDR1基因表达，也未使K562／ADM细胞的MDR1基因表达发生改变。结论：K562细胞与MSC黏附接触共培养，可导致K562细胞生长抑制，并产生化疗耐药，其机制可能与MDR1无关。     

姜黄素、红霉素逆转K562/A02细胞多药耐药机制的研究

目的研究姜黄素（curcumin，Cur）及红霉素（erythromycin，EM）对多药耐药（MDR）细胞株K562／A02的影响及作用机制。方法MTF法测定Cur、EM作用后K562／A02细胞对阿霉素（ADM）敏感性的变化。流式细胞仪测定细胞内柔红霉素的平均荧光强度（DNR MFI）。免疫组化法检测细胞膜上P—gP的表达。RT—PCR法检测细胞mdr1 mRNA水平：结果Cur、EM均可减低ADM对K562／A02细胞的IC50值，两药合用时逆转倍数可达11．3倍。K562／A02细胞内DNR MFI明显低于K562细胞（P〈0．01），Cur、EM均可明显增加K562／A02细胞内DNR MFI（P〈0．05），以两药合用时作用最为明显，Cur2．5μg／ml处理组细胞内DNR MFI略高于EM120μg／ml处理组，但差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化检测结果显示K562／A02细胞P—gP表达明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物分别处理后，K562／A02细胞膜P—gP表达减低（P〈0．01），但仍高于K562细胞（P〈0．01）；各药物组处理5d细胞膜P—gP表达均低于3d组（P〈0．01），Cur与EM合用时细胞膜P—gP表达降低最为明湿，低于其它处理组（P〈0．01）。RT—PCR结果显示K562／A02细胞mdr1 mRNA水平明显高于K562细胞（P〈0．01），各组药物处理后，K562／A02细胞mdr1 mRNA水平均减低（P〈0．01），5d组低于3d组，但仍高于K562细胞（P〈0．01）；Cur与EM合用时K562／A02细胞mdr1 mRNA水平降低最为显著，Cur 2．5μg／ml处理5dK562／A02细胞mdr1 mRNA水平低于EM120μg／ml处理5d组（P〈0．01）。结论Cur、EM均可部分逆转K562／A02细胞的MDR，降低其P—gP的表达和功能，逆转作用有时间依赖性；两药联合应用时逆转作用明湿增强，Cur2．5μg／ml逆转作用略强于EM120μg／ml。     

顺铂与热疗联合对胃癌细胞系体外增殖抑制作用的研究

目的 研究顺铂与热疗联合对2株胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823细胞体外增殖的影响。方法 使用MTT法测定细胞增殖，确定顺铂的工作浓度。并以该浓度进行化疗或与热疗联合，计算24h和48h时的细胞生存率，根据Veleriote法判断热化疗联合24h或48h的作用效果；24h时流式细胞仪检测BGC-823细胞的调亡情况。结果以24h时ICA0-IC50的药物浓度作为试验的工作浓度，确定CDDP对SGC-7901和BCK3-823细胞的工作浓度分别为5μg／mL和1μg／mL。单纯的43℃热疗60min在24h时对2个细胞系均有抑制作用（P〈0．05），在48h时没有显著抑制作用。CDDP5μg／mL化疗或与热疗联合在24h和48h时对SGC-7901细胞均有显著的抑制作用（P〈0．01），C73DP5μg／mL与热疗联合作用24h时呈叫显的协同作用，在48h时呈次加作用。CDDP1μg／mL化疗或与热疗联合在24h和48h时均对BGC-823细胞都有显著的抑制作用（P〈0．01），CDDPμg／mL与热疗联合作用24h和48h均呈明显的协同作用；24h时流式细胞仪检测BGC＋823细胞的凋亡情况发现，CDDP化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论 CDDP5μg／InL与43℃热疗60min联合在24h时对SCiC-7901细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，在48h时里次加作用；CDDPμg／mL与43℃热疗60min联合BGC-823细胞的增殖抑制在24h和48h时均呈明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。     

Educating patients with type 2 diabetes

The patient is the self-manager of type 2 diabetes. The role of the health care professional is to provide the knowledge, skills, and behavior change support to empower the patient to do so. Recent governmental, financial, and clinical factors influence how health care professionals perform this role. Such factors coupled with a growing body of research evidence are shaping the way diabetes self-management education is provided.     

经皮氧监测在ARDS病人氧复苏治疗中的作用

目的　观察急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)病人的氧动力学变化特点 ,探讨无创氧动力学监测在ARDS病人氧复苏治疗中的作用。方法　应用美国Novametric公司的经皮氧监测仪对ARDS病人进行连续动态皮肤氧 (PtcO2 )、CO2 张力(PtcCO2 )检测 ,并在 0、8、16、2 4、4 8、72h同时抽取动脉血观测PtcO2 、PtcO2 /FiO2 、PtcCO2 、SaO2 、PaO2 、PaO2 /FiO2 的变化趋势。结果　 93例病人中 ,存活 6 6例 ,死亡 2 7例 ,死亡率为 2 9 0 3%。存活组与死亡组的PtcO2 /FiO2 ,PaO2 /FiO2 的变化为 2 98 7± 70 76和97 6± 19 97;2 87 15± 6 3 7和 10 2 3± 4 0 85 (P <0 0 5 )。结论　无创氧动力学监测在ARDS病人氧复苏治疗中安全有效 ,临床动态监测对ARDS病人的氧复苏治疗有明显的指导作用 ,并且为迅速改善氧代谢提供科学依据。早期应用和合理指导能明显降低ARDS病人的死亡率     

抑郁症患者睡眠障碍与血清白细胞介素2及可溶性白细胞介素2受体水平的关系

背景动物实验发现细胞因子对睡眠有一定的调节作用.临床研究证实抑郁症患者存在细胞因子水平异常,抑郁症患者的多种病理症状与细胞因子有关.睡眠节律紊乱是抑郁症的常见症状,但关于细胞因子与睡眠的关系国内外研究较少.目的探讨抑郁症患者细胞因子水平异常与睡眠障碍临床特征的关系,以期为抑郁症患者睡眠障碍的早期干预和功能监测提供理论基础.设计以抑郁症患者为研究对象,正常人群为对照组的病例-对照研究.单位一所大学医院的两个精神科病区.对象本研究在新乡医学院第二附属医院精神科完成,研究对象分为抑郁组和对照组.抑郁组为2001-09/2001-12新乡医学院第二附属医院精神科的住院患者.纳入标准①符合国际疾病分类第10版(ICD-10)和中国精神障碍分类与诊断标准第三版(CCMD-3)中的抑郁症诊断标准者;②汉密顿抑郁量表(,21项版本)≥18分者;③血常规、肝功能、心电图和肾功能等实验室检查结果正常者.排除标准①近1年内用过免疫调节剂、抗抑郁剂、抗精神病药和锂盐等,有酒精和药物滥用史,接受电抽搐治疗者;②近2周内有感冒、发烧等感染性疾病史者;③有内分泌疾病、心、肝、肾疾病及其他严重躯体疾病者.符合以上纳入标准者35例,其中男14例,女21例;年龄18～60岁,平均(36±12)岁.对照组30例,其中男13例,女17例;年龄19～60岁,平均(34±10)岁.方法采用酶联免疫吸附法检测血浆白细胞介素2及可溶性白细胞介素2受体水平.主要观察指标①血浆白细胞介素2,可溶性白细胞介素2受体水平;②血浆白细胞介素2水平与抑郁症患者睡眠障碍严重程度的相关性.结果抑郁组血浆白细胞介素2水平(77.92±36.85)pg/L低于正常对照组(98.98±30.72)pg/L(t=2.446,P＜0.05),且白细胞介素2水平与睡眠表浅程度呈正相关(r=0.364,P＜0.05);可溶性白细胞介素2受体水平与对照组相比,差异无显著性意义(P＞0.05).结论抑郁症患者睡眠障碍症状的产生可能与细胞因子水平有关,白细胞介素2水平降低可能是抑郁症患者睡眠表浅的神经生物学基础.     

PbO2 modified with TiO2-NTs composite materials with enhanced OER electrocatalytic activity for Zn electrowinning

The high oxygen evolution overpotential of the Pb–Ag anode is one of the main reasons for the high energy consumption in Zn electrowinning. PbO₂, owing to its high conductivity, good corrosion resistance and low cost, is widely used as an excellent coating material. In present research, a novel composite Ti/TiO₂-NTs/PbO₂ material was synthesized through a facile anodization, annealing, electrochemical reduction and galvanostatic deposition. The surface morphology, internal structure and the mechanisms of TiO₂-NTs enhancing electrochemical performance were discussed. The results show that the self-organized high aspect ratio TiO₂-NTs with diameter of ∼120 nm and length of ∼8 μm were obtained on Ti substrate. The Ti/TiO₂-NTs/PbO₂ composite material exhibits excellent oxygen evolution performance and good stability in Zn electrowinning simulation solution (50 g L⁻¹ Zn²⁺, 150 g L⁻¹ H₂SO₄) at 35 °C. Its oxygen evolution overpotential is only 630 mV under current density 50 mA cm⁻², which is 332 m lower than that of Pb-0.76 wt% Ag (η = 962 mV) and only increases 22 mV after 5000 cycles of CV scanning. Its outstanding electrochemical performance is mainly ascribed to the introduction of TiO₂-NTs in Pb(CH₃COO)₂ media since it refines the crystal grains, increases the electrochemical surface area, greatly reduces the charge transfer resistance (25.4 Ω cm² to 2.337 Ω cm²) and enhances corrosion resistance. Therefore, the Ti/TiO₂-NTs/PbO₂ material prepared in Pb(CH₃COO)₂ medium may be an ideal anode for Zn electrowinning.

The high oxygen evolution overpotential of the Pb–Ag anode is one of the main reasons for the high energy consumption in Zn electrowinning.