晚期糖化终产物及其多克隆抗体的制备

目的制备晚期糖化终产物(advanced glycoslation endproducts,AGEs)及其多克隆抗体并鉴定其特异性用于糖尿病及其并发症的研究.方法牛血清白蛋白(BSA)与葡萄糖(100mg/L)孵育3个月和多点、多次免疫接种新西兰大耳白兔,所得抗血清用亲和层析纯化鉴定.结果AGEs-BSA荧光值为5.26±0.21,而BSA为0.16±0.01.荧光光谱扫描显示AGEs-BSA激发高峰位于365nm,发射高峰位于446nm.抗-BAGEs抗体亲和层析前抗体滴度为1:128,亲和层析后抗体滴度为1:2(P＜0.01).结论所制备的晚期糖化终产物及其抗体效价高,质量稳定.为进一步研究糖尿病及其并发症提供了必要的物质基础.     

阿尔茨海默病中β-淀粉样蛋白损伤血脑屏障的干预新靶点：晚期糖化终产物受体

阿尔茨海默病（Alzheimer＇ s disease, AD）是老年痴呆的最常见类型,脑内β-淀粉样蛋白（β-amyloid protein, Aβ）沉积形成老年斑（senileplaques,SPs）和过度磷酸化tau蛋白形成神经纤维缠结（ neurofibrillary tangles, NFT）是AD的特征性病理变化。     

高级糖化终末产物及其受体的研究进展和临床意义

目的了解高级糖化终末产物(AGEs)及其受体的研究现状与疾病的关系。方法查阅近年来国内外相关文献加以综合分析。结果AGEs及其受体的研究已达到信息分子和基因水平,并与很多的疾病发生有关。结论AGEs在体内过度积累与其受体的过度表达均可引起疾病。     

17β-雌二醇和晚期糖化终末产物对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的：探讨不同浓度的17β－雌二醇（17β－estrodiol)对成骨细胞增殖分化的影响及雌激素（estrogen)与晚期糖化终末产物（advanced glycosylation end-product,AGE)共存对成骨细胞的作用。方法：用不同浓度的17β－雌二醇加入大鼠成骨细胞培养体系,不同作用时间,观察对大鼠成骨细胞增殖分化的影响,以及17β－雌二醇与AGE共存时对成骨细胞增殖的影响。结果：17β－雌二醇＞10^-9mol/L主要表现为对大鼠成骨细胞增殖的抑制作用,10^-10和10^-11mol/L则显著促进大鼠成骨细胞的增殖（P＜0．01,P＜0．05）;10^-12-10^-14mol/L的17β－雌二醇培养48h显著抑制成骨细胞增高（P＜0．01）,10^-6-10^-8mol/L 17β-雌二醇存在下培养24,48,72h,均表现出显著抑制成骨细胞的分化,10^-10mol/L 17β－雌二醇与400－1000mg/L AGE共同存在,培养24h则均表现出促增殖作用（P＜0．01）。结论：雌激素在生理浓度对大鼠成骨细胞增殖产生抑制作用,低于生理浓度具有促增殖活性,浓度进一步降低,再次出现抑制作用,且适量浓度的雌激素与高浓度AGE共存时,促进大鼠成骨细胞增殖。     

晚期糖化终末产物对大鼠海马神经元的损伤作用与机制

目的研究晚期糖化终末产物(AGEs)对海马神经元存活、生长的影响和机制,以探讨AGEs在阿尔茨海默病发生中的作用。方法取培养1 d的新生大鼠海马神经元,分为对照组和AGEs-BSA组。在含终浓度为100 mg.L-1、500 mg.L-1、2000 mg.L-1的牛血清白蛋白(BSA)或AGEs-BSA的培养液中培养24 h,显微镜下观察神经元形态变化,噻唑蓝(MTT)法测定神经元存活率,硫代巴比妥法测定神经元脂质过氧化物(LPO)含量。结果100 mg.L-1BSA或AGEs-BSA条件下,2组海马神经元的形态、存活率及LPO含量均无明显差异(P>0.05)。500 mg.L-1和2 000 mg.L-1条件下,AGEs-BSA组的海马神经元生长状况均较差,细胞存活率均降低(P<0.05,P<0.01),LPO含量均升高(P<0.05,P<0.01),且2 000 mg.L-1组上述变化更显著(P<0.01)。结论AGEs对体外培养的海马神经元有剂量依赖性损伤作用。过氧化应激是AGEs损伤海马神经元的途径之一。     

卵清蛋白多克隆抗体的制备及其双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立卵清蛋白(ovalbumin,OVA)双抗体夹心ELISA检测方法并进行验证,用于定量检测鸡胚流感疫苗中的OVA含量。方法 建立双抗体夹心酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA),对该方法的反应条件进行优化,确定定量范围及检测下限,并对重复性、特异性和准确度进行验证。结果 建立的方法最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为2.5μg/ml和0.5μg/ml,最适封闭液配方为1%BSA+1%蔗糖。该方法的cut-off值为0.134,线性范围为0.313-20.000ng/ml,定量下限为0.078ng/ml。重复性好,板内变异系数为3.428%~25.953%,板间变异系数为5.375%~ 27.614%。特异性好,准确度高,检测结果与试剂盒检测结果符合率为91.43%~102.96%。稳定性好,预包被的酶标板冻存于-20℃,半年内检测样本变异系数为1.976%~14.409%。结论 建立了快速、简便、低成本的OVA定量检测方法,可用于鸡胚流感疫苗中OVA定量检测。     

骨质疏松大鼠晚期糖化终末产物含量及氨基胍的防治效果

目的以去势大鼠建立的绝经后骨质疏松模型,检测骨组织中晚期糖化终末产物(AGEs)含量,探讨其特异性抑制剂氨基胍的防治效果。方法54只SD大鼠随机分为3组:去势后给药(氨基胍)实验组(groups1,G1),单纯去势组(G2)和假去势组(G3),并将术后第4,10和16周定为实验周。检测骨胶原组织中AGEs和骨形成指标:骨钙素(BGP),骨特异性碱性磷酸酶(骨AKP),骨吸收指标:尿吡啶醚(PYD)和脱氧吡啶醚(DPD),同步用IBAS计算机全自动图像分析系统对不脱钙骨组织动态观测骨形态计量学参数。结果单纯去势后4～16周骨胶原AGEs含量(58.96RU/mg胶原)明显高于假去势组(52.83RU/mg胶原);给予氨基胍组(51.33RU/mg胶原)明显低于去势组(P<0.01),而BGP和骨AKP氨基胍组明显高于去势组(分别为P<0.01和P<0.05)。骨吸收指标:尿PYD和DPD2组之间无显著差异(P>0.05)。骨形成表面(FS)和骨小梁体积(TBV),骨小梁平均厚度(MTT)较去势组明显升高,尤其TBV和FS(分别为P<0.001和P<0.01),这种差异在第10周最为显著。随着给药时间的延长(第16周)MAR逐渐增加(P<0.001)。骨吸收表面(RS)与单纯去势组比较在所有实验周均无差异。结论去势后雌激素降低可致骨中AGEs增多,引发骨质疏松,而氨基胍可通过降低AGEs刺激成骨细胞活跃增生,促进骨形成,改善骨组织形态。     

晚期糖化终末产物受体基因多态性与糖尿病动脉硬化关系的研究进展

糖尿病微血管和大血管并发症是糖尿病患者致死、致残的主要原因,动脉硬化是糖尿病血管病变的主要病理改变。晚期糖化终末产物（AGEs）和晚期糖化终末产物受体（RAGE）相互作用,激活细胞内一系列信号转导途径,是产生和加剧糖尿病动脉硬化的重要机制。RAGE基因定位于染色体6p21．3,包含11个外显子和10个内含子。迄今为止,已经有30多个RAGE基因多态性位点被证实,其中多个RAGE基因多态性位点,特别是-374T／A、-429T／C、G82S-9糖尿病动脉硬化相关。但RAGE基因多态性影响糖尿病动脉的机制尚不清楚。     

香烟烟雾暴露的大鼠晶状体白内障样改变中高度糖化终末产物及其相关荧光的研究

目的：通过检测在体暴露于香烟烟雾大鼠的晶状体中的高度糖化终末产物及其相关荧光，探讨香烟烟雾凝聚物在吸烟致大鼠晶状体白内障样改变中的可能作用机制。方法：雄性Wistar大鼠随机分2组，实验组每天暴露于香烟烟雾1h，连续90d，对照组大鼠只暴露于普通室内空气，其他条件相同。每只大鼠两只眼球在处死后摘除，一只做组织病理学检查，另一只用于研究体内糖化情况。荧光质谱仪检测激发吸收光370／440nm处高度糖化终末产物相关荧光，并通过HPLC检测N-羧甲基赖氨酸及pentosidine。结果：实验组晶状体上皮细胞发生显著组织形态学改变。如增生、肥大，上皮多层化，并有晶体上皮细胞移行于晶状体后囊，对照组未见上述改变。吸烟组晶体水溶性和非水溶性组分中高度糖化终末产物荧光和N-羧甲基赖氨酸及pentosidine显著升高。结论：香烟烟雾吸入致大鼠晶状体白内障样改变，伴随高度糖化终末产物形成，糖化是吸烟致白内障形成的一个可能机制。     

内源性可溶性糖化终末产物受体和内源性分泌型糖化终末产物受体水平对糖尿病性骨质疏松症的诊断价值

目的探讨内源性可溶性糖化终末产物受体(sRAGE)和内源性分泌型糖化终末产物受体(esRAGE)对糖尿病性骨质疏松症的诊断价值。方法 59例≥50岁髋部骨折住院患者分为非糖尿病组(Ⅰ组,20例)、糖尿病非骨质疏松症组(Ⅱ组,21例)及糖尿病合并骨质疏松症组(Ⅲ组,18例),用双能X线骨密度仪检测骨密度(BMD),酶联免疫吸附测定法检测血浆sRAGE、esRAGE水平,并检测空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、肌酐(Cr)、碱性磷酸酶(AKP)、钙(Ca)等生物化学指标及体质量指数(BMI)。结果 3组患者的BMI、Cr、TG、TC、AKP水平差异均无统计学意义(P>0.05),Ⅰ组和Ⅱ组患者血浆Ca水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但与Ⅲ组Ca水平比较差异均有统计学意义(P<0.01);3组间血浆FBG、HbA1c、BMD、sRAGE、esRAGE水平比较差异均有统计学意义(P<0.01);sRAGE、esRAGE水平与FBG、HbA1c呈负相关(P<0.01),与BMD呈正相关(P<0.01)。结论血浆sRAGE、esRAGE可能成为糖尿病性骨质疏松症的诊断指标。     

糖基化终产物—牛血清白蛋白的制备和纯化

目的　制备高纯度的糖基化终产物(AGEs) 用作免疫原或检测标准品。方法　牛血清白蛋白(BSA) 与葡萄糖在体外共同孵育制备AGEs - BSA,经凝胶层析纯化后,应用荧光光谱和SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。结果　纯化后AGEs - BSA 与标准的AGEs - BSA 电泳图谱基本一致;激发和发射光谱均为单峰,分别位于360 nm 和446 nm 。结论　应用凝胶层析纯化AGEs - BSA 效果满意     

RAGE、sRAGE与冠心病的关系

晚期糖基化终产物受体(RAGE)属于细胞表面分子免疫球蛋白超家族中的一个成员,可与多种配体结合后影响细胞内信号转导、刺激细胞因子释放等从而发挥其生物学效应,与炎症和冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)密切相关。仅有胞外区的RAGE称可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE),可阻断配体与RAGE结合,抑制RAGE的作用。     

RAGE基因型在2型糖尿病伴慢性牙周炎患者颊黏膜中的检测

目的 对2型糖尿病伴慢性牙周炎患者颊黏膜中糖基化终产物受体(RAGE)进行检测,探讨其可能致病位点基因型.方法 分别选取2型糖尿病伴慢性牙周炎患者(DMCP组)、单纯慢性牙周炎患者(CP组)和健康对照组(H组)各50例.采集颊拭子,进行牙周检查,对比牙周状况.从样本中提取DNA,RAGE PCR产物检测,PCR质量控制,限制性内切酶酶切产物,确定可能的基因型.结果 RAGE基因中-429T/C位点和2184A/G位点在DMCP组、CP组和H组中无统计学差异(P＞0.05),而1704G/T位点GG基因型在DMCP组和CP组的表达要高于H组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 RAGE基因中内含子区域1704G/T位点GG基因型在DMCP组和CP组中出现频率高.2型糖尿病伴慢性牙周炎和单纯慢性牙周炎可能与1704G/T位点GG基因型表达有关.     

糖基化终末产物对大鼠基底前脑胆碱能神经元的损伤作用

目的 研究糖基化终末产物(AGE BSA)对原代培养的基底前脑胆碱能神经元形态、生存率、凋亡率、胆碱乙酰转移酶(ChAT)与乙酰胆碱酯酶(AchE)活性的影响。在体外水平研究AGEs在阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)神经元缺失发生中的作用及其可能机制。方法 原代培养大鼠基底前脑胆碱能神经元,观察细胞生长变化,进行免疫荧光细胞化学鉴定;用300μg/mLAGE BSA以及糖基化终末产物受体(RAGE)中和抗体阻断处理原代培养的基底前脑胆碱能神经元,作用不同时间后置于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用MTT法检测神经元的存活率;采用流式细胞术检测神经元的凋亡率;经比色法检测ChAT和AchE的活性变化。结果 AGE-BSA干预胆碱能神经元72h后,细胞形态发生明显损伤性变化,细胞存活率明显降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高;RAGE中和抗体阻断组72h较之AGE-BSA组,细胞形态损伤变化较轻,生存率偏高,凋亡率较低,ChAT活性较高,AchE活性偏低,但比空白对照组生存率降低,凋亡率增高,ChAT活性明显下降,AchE活性明显升高。结论 糖基化终末产物作用72h可以引起胆碱能神经元的损伤,并造成ChAT活性下降和AchE活性明显升高,部分阻断其与特异性受体RAGE的结合可以减弱其损伤作用,提示糖基化终末产物通过其受体参与了对胆碱能神经元的损伤作用。     

可溶性糖基化终产物受体与无糖尿病冠心病的相关性研究

目的研究可溶性糖基化终产物受体（soluble advanced glycatioil end products receptor,sRAGE）与不同类型无糖尿病冠心病以及冠状动脉病变程度的关系。方法实验组患者58例,按临床表现和冠脉造影结果分亚组为稳定性心绞痛组、不稳定性心绞痛组、急性心肌梗死组、陈旧性心肌梗死组、单支病变组、双支病变组、多支病变组。22例健康查体的随机个体作为对照组。分别检测血清sRAGE,做心脏Doppler。结果实验组sRAGE浓度明显低于对照组（P〈0．01）;有高血压病的实验组血浆sRAGE浓度比无高血压病患者明显减低（P〈O．05）．血浆sRAGE浓度与EF值的相关系数为0．274（P〈0．05）,有显著相关性。结论sRAGE在冠心病的发生发展过程中发挥着重要的保护性作用。     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾病大鼠肾脏晚期糖基化终产物及其受体表达的影响

目的观察厄贝沙坦对糖尿病肾病（DN）大鼠晚期糖基化终产物（AGEs）及其受体（RAGEs）表达的影响,探讨其对DN的肾保护作用机制。方法应用链脲佐菌素建立大鼠DN模型,将DN模型大鼠随机分为2组：DN模型对照组、厄贝沙坦组;另设正常对照组。各组分别干预8周后,观察24h尿蛋白定量、血清和肾组织AGEs含量变化,免疫组化法检测肾组织RAGEs的表达,RT-PCR法检测肾组织RAGEs mRNA的表达,光镜观察肾脏病理改变。结果应用厄贝沙坦干预后,DN大鼠24h尿蛋白定量、血清及肾组织AGEs含量明显减少,肾组织RAGEs含量及其mRNA表达水平明显降低,肾脏病理改变显著减轻。结论厄贝沙坦对DN的肾保护作用机制与降低血清、肾组织AGEs水平以及肾组织RAGEs含量,抑制肾组织RAGEs mRNA表达有关。     

阿托伐他汀对不稳定性心绞痛患者血清sRAGE和esRAGE水平的影响

目的探讨阿托伐他汀对不稳定性心绞痛患者血清可溶性晚期糖基化终产物受体(SRAGE)和内源性分泌型晚期糖基化终产物受体(esRAGE)水平的影响。方法不稳定性心绞痛患者40例(UA组),给予阿托伐他汀20 mg口服,每日1次,于治疗前和治疗后3个月分别采集静脉血,测量血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、血糖、糖化血红蛋白(HbA1C)、sRAGE及esRAGE水平。另选择20名年龄、性别相匹配的健康体检者作为正常对照组。结果治疗前,UA组的TC和LDL-C水平显著高于正常对照组(P<0.05),sRAGE和esRAGE水平显著低于正常对照组(P<0.05,P<0.01),两组其他指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。经阿托伐他汀治疗3个月后,UA组患者的血糖和HbA1C水平无明显变化(P>0.05),但TC和LDL-C水平明显低于治疗前(P<0.05),sRAGE和esRAGE水平明显高于治疗前(P<0.05);直线相关分析显示,esRAGE水平与LDL-C浓度呈负相关(r=-0.36,P=0.01)。结论他汀类药物具有多效性,阿...