siRNA非病毒递送载体的研究现状

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年发展起来的一种新技术。RNAi是指通过外源性或内源性的双链RNA在体内诱导靶基因mRNA产生特异性降解,进而引起不同水平的基因沉默。RNAi已经用于肿瘤、病毒感染、乙型肝炎等多种疾病的治疗。小干扰RNA(siRNA)是RNAi的效应分子,可在体内诱导RNAi效应。但是裸siRNA在体内容易被核酶(RNase)降解,且半衰期短,转染效率低。因此,siRNA需要借助递送载体进入细胞发挥治疗作用。病毒载体在基因治疗中有潜在的免疫原性、致突变等副作用。所以,非病毒载体成为当前的研究热点。本文对siRNA非病毒递送载体的研究现状进行了综述。     

小分子干扰RNA非病毒纳米载体的设计进展

小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)进入临床应用最关键的环节是如何有效通过药物递送系统将siRNA递送到特异性靶细胞或靶组织。非病毒纳米载体递送系统具有低的免疫原性、良好的靶向性和生物相容性,是近年来国内外药剂工作者研究的热点。其相应的研究也必将大大增加siRNA有效递送,使其有进一步成为治疗药物的可能性。本文根据国内外的文献报道,将siRNA非病毒纳米载体的设计进展进行了综述。     

小干扰RNA非病毒递送载体的研究进展

虽然RNA干扰应用在哺乳动物细胞中的时间较短,但siRNA强效抑制靶基因表达的功能使它成为目前广泛研究的一种药物。siRNA作为新型的基因药物可有效治疗多种恶性疾病,比如癌症、病毒性感染疾病、遗传及代谢紊乱性疾病等。siRNA在体内不稳定,易被核酸酶降解,有触发免疫反应的倾向,因此选择安全稳定的载体将其递送到靶组织靶细胞是siRNA在体内发挥作用的前提。非病毒载体低毒、低免疫反应且结构可控,目前已被广泛使用来解决基因递送过程中遇到的困难。文章主要综述了近年来研究广泛的siRNA非病毒递送载体:脂质体、阳离子聚合物、树枝状大分子、无机纳米材料等。     

非病毒基因递送载体的研究进展

目前,基因药物的递送成为药学研究的热点,基因递送载体主要包括病毒载体和非病毒载体。非病毒基因载体的毒性低,生物相容性好,转染效率高,具有潜在的临床应用价值。本文就靶向递送基因载体、多功能基因载体、同时载基因与化疗药物的载体、智能基因载体和脂质体等非病毒基因递送载体的研究进展做一综述。     

非病毒载体递送CRISPR/Cas9系统的研究进展

细菌和古细菌中发现的成簇规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白(Cas)系统是通过CRISPR RNA引导核酸内切酶特异性断裂靶基因,借助同源重组和非同源末端连接修复基因组DNA,引入碱基序列的插入、缺失或替换,实现定向基因编辑的一个工具。它的出现为多个学科领域的基础研究带来极大的便利,也为临床治疗基因疾病提供了一种方式。两个主要功能组分只有进入细胞核才能发挥作用,由于细胞内和细胞外的多重障碍,高效递送CRISPR/Cas到靶组织或靶细胞仍是一个巨大的挑战,递送效率低限制了该技术的临床转化。多种递送方式中,非病毒载体与病毒载体、物理递送相比,具有独特的优点,许多学者投入了大量时间和精力设计性质优良的非病毒递送系统,包括阳离子脂质体、类脂纳米粒、阳离子聚合物、囊泡、金纳米粒、多肽和蛋白等。本文对CRISPR/Cas9的作用机制,基于质粒、mRNA和RNP的基因编辑实现方式、这些方式面临的困难和非病毒载体的研究进展进行了总结。     

shRNA病毒递送载体

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种有力的基因沉默工具,在功能基因组学、微生物学、基因表达调控机制研究等领域广泛应用。RNAi可以用于鉴定药物靶标及治疗疾病,尤其是传统治疗手段无效的重大疾病。如何将双链小干扰RNA(siRNA)高效传递至体内靶细胞是RNAi成功用于疾病治疗的关键,也是目前研究的热点。由于病毒载体能高效转导多种细胞成为基因工程和基因治疗的主要载体。目前,越来越多的研究将病毒载体应用于介导RNAi,然而病毒载体存在靶向性差、生物安全性等问题。本文针对这些病毒载体的优劣进行归纳并指出今后改进的方向。     

大鼠CRH基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的：构建针对大鼠促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体并进行鉴定。方法针对CRH基因设计4个RNAi靶点并分别构建入慢病毒骨架载体,测序鉴定。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T工具细胞后,用Western blot进行外源筛靶以确定有效靶序列。有效RNAi病毒质粒与辅助质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞,培养48 h后,收集细胞培养上清液,将其浓缩后用孔稀释法测定病毒滴度。结果 Western blot外源筛靶显示3个靶点能有效敲减目的基因的表达。测定浓缩病毒悬液的滴度为1．5×109 T U／ml。结论成功构建了CRH基因的RNAi慢病毒载体,可用于CRH在应激反应中作用的研究。     

siRNA体内递送研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi),是一种在动植物中存在的通过双链RNA诱导同源特异性序列转录后基因沉默的过程。虽然小干扰RNA (siRNA) 较单链反义寡核苷酸显示出更好的稳定性与基因沉默效果,但是作为新型的基因治疗药物,靶向递送siRNA是药物进入临床应用最主要的环节,siRNA体内有效作用发挥的关键在于它在体内能否高效递送至靶细胞并与靶基因结合。目前研究主要集中在siRNA的修饰方式与递送载体研究,以提高其体内的稳定性与靶向性。文中主要综述了siRNA的体内靶向递送障碍以及近几年siRNA非病毒递送载体脂质体、阳离子多聚物、纳米粒、胶束等方面的研究进展。     

siRNA新型非病毒载体递送策略新进展

小干扰RNA(siRNA)是一个靶向治疗和精确医学的代表性治疗工具，可通过序列特异性的RNA干扰(RNAi)沉默任何疾病相关基因的表达。然而，它的治疗前景历来受到体内半衰期短、递送困难和安全问题的限制。非病毒载体介导的药物递送已经成为克服这些局限性的一个成功策略，可实现siRNA在体内的有效递送，高效沉默靶基因。目前，已有多种药物处于临床试验中，4种基于siRNA的新型疗法已获得美国FDA的批准，标志着靶向疗法新时代的开始。该文概述了近年来基于siRNA的非病毒载体递送策略的新进展及其应用，并展望了siRNA药物研究的未来发展趋势。     

多肽介导的核酸药物递送系统研究进展

核酸药物作为新型基因治疗药物备受关注,但生物学稳定性差、易被体内核酸酶降解、生物利用度低、靶组织内聚集浓度低等是制约其发展的主要因素。新的药物递送技术的快速发展在一定程度上解决了核酸药物的稳定性及靶向递送问题,极大地推动了核酸药物的研发进展。尤其是多肽蛋白类递送载体,已成为核酸药物递送系统研究领域的热点之一。介绍核酸药物递送载体多肽修饰的两种主要方式——共价缀合和非共价络合,重点综述近年来多肽缀合物和复合物以及多肽修饰的载体在核酸药物递送系统中的应用研究,探讨多肽介导的核酸药物递送系统在应用中存在的问题,为新型核酸药物递送系统研发提供参考。     

纳米载体治疗

长久以来,优化治疗(即疗效最大化的同时减少副反应)始终是困扰人类的医学难题之一,可注射的、纳米尺度的药物递送系统,或称为“纳米载体”为解决这项难题提供了理想的候选方法。纳米技术可以实现将药物装载于大小合适的载体中,通过多重靶向识别机制选择性浓集于靶区,从而将药物     

胍基化非病毒载体研究进展

非病毒载体具有质量可控、携带能力高和免疫原性低等优点,近些年来备受关注。理想的非病毒载体在递送基因的过程中需要克服多重生物学屏障,包括血液屏障、细胞屏障和胞内转运屏障。胍基来自于精氨酸,可以与磷酸基团形成双齿氢键,在DNA压缩、细胞膜跨越和入核等过程中发挥着重要作用。对非病毒载体进行胍基化基团的修饰,有利于克服非病毒载体在递送基因的过程中面临的生理屏障,提高基因的转染效率。本文综述了非病毒载体的胍基化修饰对于提高基因递送效率方面的研究进展,为构建新的高效非病毒载体提供了思路。     

微载体药物递送系统在姜黄素中的应用研究进展

目的综述微载体药物递送系统在姜黄素中的应用研究进展,进一步了解姜黄素的研究概况。方法分别介绍姜黄素的纳米粒、微球、微乳、微囊、胶束、脂质体、磷脂复合物、环糊精包合物等递送系统的研究进展。结果微载体药物递送系统被广泛的应用于提高姜黄素的溶解度和稳定性,进而提高药物在体内的生物利用度。结论微载体药物递送系统在姜黄素中的应用研究为姜黄素进一步应用于临床提供研究基础。     

聚乙烯亚胺纳米基因递送系统的研究进展

基因治疗在恶性肿瘤、感染性疾病、自身免疫性疾病、罕见病等重大难治性疾病的治疗中表现出巨大潜力。基因递送载体是基因治疗能否成功实施的关键所在,聚乙烯亚胺（PEI）是一种被广泛研究的阳离子基因递送载体,在不同细胞系和转染条件下均展现出稳定高效的基因转染效果,其中PEI25k更被视作基因转染的“黄金标准”。为解决PEI在基因递送中存在的体内转染效率低、细胞毒性大、靶向性低和负载基因溶酶体降解等问题,该文对基于PEI设计构建新型纳米递送系统用于基因治疗的研究进展进行综述,主要包括高相对分子质量线性PEI、多糖、亲水性的聚合物和右旋糖酐修饰的PEI,交联的低相对分子质量PEI,基于PEI的无机纳米递送载体以及基于PEI的药物与基因共递送载体系统,以期为进一步构建高效低毒的基因递送系统提供理论指导。     

慢病毒介导的siRNA沉默结肠癌HCT116细胞中Slug基因表达的影响

目的探讨慢病毒载体介导RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体在结肠癌HCT116细胞中的沉默效应。方法构建Slug基因特异性siRNA慢病毒载体,感染结肠癌HCT116细胞,设立空白对照组、阴性对照组及Slug siRNA三组,应用qRT-PRC和Western blot方法分别从基因和蛋白水平检测各组干扰质粒对Slug基因的干扰效果。结果转染Slug siRNA后,结肠癌HCT116细胞中Slug基因mRNA和蛋白表达明显受到抑制(P<0.05)。结论 Slug siRNA能明显沉默靶基因Slug的表达,并且可能成为潜在治疗肿瘤的新靶点。     

病毒载体基因治疗药品的临床设计与评价思考

基因治疗是将外源性遗传物质通过多种方法转移到靶细胞中,用来治疗特定疾病。基因治疗已逐渐成为药品开发和风险投资领域的热点,或将成为未来治疗人类疾病的重要手段。然而,以病毒为载体的基因治疗相比传统药物开发存在诸多差异性。因此,本文将从病毒载体基因治疗产品的基本概念出发,结合美国食品药品监督管理局(FDA)的系列指南,通过对美国FDA批准上市的腺相关病毒载体的治疗药物Zolgensma,慢病毒载体的治疗药物Kymriah,逆转录病毒载体的治疗药物Yescarta,以及溶瘤病毒药物Imlygic的临床审评案例分析,从受试者选择,对照组与盲法,剂量与疗程,治疗方案,医学监查与随访多个维度对临床研究的设计和评价进行研究。研究结果提示以病毒载体为代表的基因治疗产品的临床试验设计需要着重考虑适合基因治疗的受试者群体、个体化的剂量选择模式、风险最小化的给药方案、以及根据不同载体特点确定的医学监察策略和长期随访时间等,以满足充分评价的需要。     

基因转移载体的研究进展

目的:介绍基因转移载体的研究进展,为其深入研究提供参考.方法:对近年来有代表性的文献进行分析、归纳.结果:介绍了病毒载体和非病毒载体的主要优缺点、研究方向及存在的障碍.结论:病毒载体虽转染率较高、表达时间长,但其安全性令人担比.非病毒载体的转染率还不够高,有效表达时间短,其毒副反应近来也受到关注;为了进一步提高其转染率和表达持续时间,还须深入研究外源DNA进入靶细胞核的细胞和分子机制.     

借助于病毒的基因释放系统

在过去十年中，基因治疗方法已经成为新治疗技术的前沿。随着人们对载体生物学及疾病分子水平机制更深刻的了解，载体技术的巨大发展，已经显著地提高了人类基因治疗领域的水平。本文将讨论基因转移载体中借助于病毒的部分，着重阐述了目前最新建立的病毒载体，包括借助于小病毒、腺病毒、逆后病毒、斑病毒和疱疹病毒的载体及其新进展。过去的研究已表明，除了优化转基因表达的载体，减少与载体相关的免疫反应及载体产物外，还需要建立适宜的靶细胞载体转导的载体释放方法。这篇综述也将阐述一些目前先进的适宜载体给药的体内释放系统。     

p100蛋白慢病毒干扰载体及p100沉默的HepG2稳定细胞系的构建

目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系。方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA并构建pLKO.3G-p100I慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定。将构建好的p100shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒。运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,利用Westernblot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果。结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株。慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90%以上细胞发出绿色荧光,Westernblot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低。结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系。     

基于水凝胶的核酸药物负载策略的研究进展

基因治疗在癌症以及遗传疾病的治疗中具有广阔的应用前景,基因治疗的关键在于如何实现将核酸药物精准递送至靶部位。近年来,研究人员致力于将核酸药物负载于水凝胶中,以实现全身或局部的基因递送。水凝胶系统由于其良好的生物相容性、高效的核酸药物负载能力和局部定位控制释放等优势,为核酸药物的递送提供了有效的工具,在实体瘤和再生医学领域具有巨大的潜力。本文综述了近年来水凝胶系统作为核酸药物载体的研究,并重点探讨基于水凝胶的核酸药物负载策略,以期为基于水凝胶的核酸药物递送系统的研究提供参考。