不同证候H22荷瘤小鼠胸腺一致上下调高表达的基因

目的:观察常见证候荷瘤小鼠胸腺中一致上调和下调的高表达基因。方法:采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon1.0ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠在早期邪毒壅盛证、气虚证,中期阳虚证,中晚期阴虚证等4个证候胸腺中一致上调或下调者,重点关注表达量高的基因。结果:肿瘤发生后,胸腺中有34个基因表达发生显著改变。其中一致上调者20个,一致下调9个。结论:(1)Tpp2、per2基因在肿瘤发生的早期表达几乎关闭,与肿瘤发生的早期关系密切。(2)20个高表达基因,如Hey2、MMP-19等,可能在中晚期胸腺退化阶段起到特殊的作用。(3)推测这些一致上调和下调的基因与肿瘤发生及其不同阶段的关系更为密切,而非证候。     

Smad信号转导通路在不同证候H22荷瘤小鼠肾上腺的基因表达

目的 研究TGF-β、Bmp/Smad信号通路基因在不同证候H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺的表达特征.方法 采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠接种第8天(早期)邪毒壅盛证和气虚证、接种第21天(中期)阳气虚证、接种第29天(中晚期)气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异.通过系统聚类法分析不同证候肾上腺Smad信号通路基因表达模式的相似性及其差异特征.结果 就证候而言,邪毒壅盛证与气虚证的基因表达模式相似,而阳气虚证和气阴阳虚证的基因表达模式类似.就基因而言,TGF-βr1、2、3等基因具有相似的表达模式;Smad2与Smad4,Bmp1与Bmp4也具有相似的表达模式.Smad信号通路中,TGF-β受体及Bmp受体表达量分别高于TGF-β与Bmp基因.结论 芯片数据提示,H22荷瘤小鼠肿瘤发生后,不同证候的肾上腺Smad通路基因多数被激活,且基因表达模式可能与不同证候有关.     

邪毒壅盛和气虚证H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺基因转录的差异

目的 揭示H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证肾上腺基因表达的特征.方法 采用小鼠标准化四诊及辨证方法 ,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,重点关注早期2个证候表达量大、差异显著的基因.结果 ①筛选邪毒壅盛证上调和下调基因20条和7条,气虚证上调和下调基因4条和7条.②邪毒壅盛证上调的基因涉及到信号转导与免疫应答的Pomc1、Tnfaip6、Ccrl2、Rgs1等,调控转录的Bhlhb2、Ell2、Atf3、Hivep2、Klf4等,参与代谢调节的Usp37、Chka、Dusp10等;邪毒壅盛证下调基因有Hbxip、H2-T22、Ndufs6,Tgfb1、Mgat4b、Cdkl3等.③气虚证独特上调基因有Pde10a、Ol-fr1305、Olfr46、Cyp3a13等;气虚证独特下调基因涉及到激素类Gh、Pomc1、Prl、Cga和原癌基因Junb.结论 荷瘤小鼠邪毒壅盛证和气虚证肾上腺存在大量基因表达的改变,这可能是证候内在的本质之一.     

不同证候H22荷瘤小鼠垂体一致上调或下调的基因

目的：观察常见不同证候荷瘤小鼠垂体基因表达的特征。方法：采用H22荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证等4个证候及正常小鼠垂体基因的表达,筛选出不同证候一致上调或下调的基因。结果：荷瘤小鼠一致上调的基因有Alas2、Ube2l6、Sgk、BC055107、Cdh26、Bhlhb2、Nr1d2、Slc39a14、Serpina3n、Ms4a6c、Lcp1、Dhx8、Il1r1、S100a8、S100a9、Cxcl1、Hp、Csf1r、RIKEN cDNA2610307008gene、Phactr3、Mknk1、Aloxe3、Aqp11等23个;一致下调的基因有2310047A01Rik、Hoxa10、Cryaa、Hspa1a、Dub2a、Mpz、Klk1、Naaladl1、Prph1等9个;其中部分基因在一些证候中的表达有显著的改变。结论：肿瘤发生后,H22荷瘤小鼠垂体存在大量基因表达的差异,其中部分与证候有关。     

基因芯片筛选原发性肝癌患者的差异表达基因

目的利用基因表达谱芯片技术探讨原发性肝癌(PHC)不同阶段(癌组织、癌旁组织、正常组织)差异基因的表达,进一步寻找PHC不同阶段组织中的差异表达基因。方法提取20例肝癌癌组织、癌旁组织和正常组织的总RNA,应用Agilent人类全基因组4×44K基因芯片筛选差异表达基因,采用微阵列类分析(SAS)软件对芯片图像进行分析。结果筛选出癌组织与正常组织差异基因4 175个,其中上调基因1 850个,下调基因2 325个。对筛选出的差异基因进行GO分类,主要分为催化活性、信号转导、酶活性调节、转录活性调节、蛋白运输功能、细胞生长、凋亡等功能过程。结论利用基因芯片技术可高通量地筛选出PHC不同阶段组织的差异表达基因,为进一步阐明PHC的发生机制提供实验依据。     

中晚期气阴阳虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织差异表达基因的分析

目的：揭示H22荷瘤小鼠中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的特征。方法：采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术及芯片分析方法,观察H22荷瘤小鼠中晚期气阴阳虚证与其他3个典型证候早期邪毒壅盛和单纯气虚证,及中期阳气虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果：①筛选到中晚期阴虚证独特性高表达的基因12个,包括与蛋白酶或其抑制因子有关的基因Mmp10、Slpi等4个,与B淋巴细胞有关的基因Cxcll3、P0u2afl等3个,及其他相关的基因Id．V1、Abpg等5个;②筛选到中晚期阴虚证独特性低表达的基因12个,包括与小鼠生殖、发育有关的基因Ldhc、Fabp9、Mael等9个,及其他功能类基因Cxcl9、Atp8b3等3个。结论：中晚期阴虚证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

不同品系H22肝癌小鼠证候特征的比较研究

目的:观察并比较常用不同品系H22肝癌小鼠中医证候的特征与差异。方法:将KM、BALB/c、ICR、C57共4种品系小鼠各30只,分别随机分成正常对照组10只,肝癌组20只。肝癌组小鼠右腋下接种H22细胞造成荷瘤小鼠模型,观察出瘤后各品系肝癌小鼠生存率差异,采用小鼠四诊工作站及其方法,检测小鼠证候的发生与演变。结果:4种品系小鼠腋下接种后均形成实体瘤。在生存率方面,早期各品系肝癌小鼠无明显差异;中晚期差异大,BALB/c肝癌小鼠最低,ICR与KM肝癌小鼠其次,C57肝癌小鼠最高。瘤体积比较,KM肝癌小鼠增长最快,ICR肝癌小鼠增长最慢。去瘤体质量方面,中晚期各荷瘤小鼠呈现下降趋势,ICR小鼠下降最明显,其次是BALB/c与KM小鼠,C57小鼠去瘤体质量变化小。另外,不同品系肝癌小鼠邪毒证与气虚证贯穿疾病始终,且程度逐渐加重,阴虚证与阳虚证在中晚期发生且逐渐加重,其中BALB/c与ICR肝癌小鼠气虚、阴虚、阳虚最严重。结论:KM、BALB/c、ICR、C57等不同品系H22肝癌小鼠均会自发形成证候,KM小鼠最适合于肝癌证候与辨证论治的研究。     

原发性肝癌中医证候特征及与生存质量的关系

目的:探讨原发性肝癌的中医证候特点以及与生存质量的关系。方法:采用回归性分析及中医单一证型分析的方法进行临床研究。结果:血瘀、气虚基本证型出现频率最高,其次为湿热、阴虚、气滞三类基本证型,并且原发性肝癌的中医证候与生存质量有着密切的关系。结论:中晚期肝癌以气虚、血瘀证多见,其余常见湿热、气滞、阴虚证型。同时将中医证候和生存质量引入原发性肝癌的中医疗效评定具有重大意义。     

异病同证大鼠肾上腺类固醇及儿茶酚胺合成酶相关基因的表达特征

目的：观察Wistar大鼠、自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rat,SHR）、2型糖尿病Goto-Kakizaki（GK）大鼠肾上腺类固醇及儿茶酚胺合成酶相关基因的表达特征。方法：以16周龄Wistar大鼠、SHR和GK大鼠为研究对象,采用大鼠四诊计量化诊法及GeneChip RatExon 1.0 ST Array等技术,检测正常与气虚Wistar大鼠、气虚和气盛SHR、气虚和气盛GK大鼠的肾上腺基因表达谱,分析类固醇及儿茶酚胺合成酶相关基因在不同证候大鼠肾上腺中的表达情况,以1.5倍筛选差异表达基因。结果：筛选获得31个基因在证候中存在差异表达。Hsd3b6在糖尿病气虚和气盛大鼠肾上腺组织的表达显著下调6.0倍,Cyp11b2在糖尿病气虚证大鼠肾上腺组织中的表达显著上调1.5倍以上。类固醇激素调节因子Por、Hsd11b2和Nr2f6基因在不同证候的表达均上调,Cyp2c23、Cyp4a3、Cyp4a8和Cyp2e1基因在不同证候的表达均下调,Srd5a1和Nr4a1基因仅在糖尿病大鼠肾上腺的表达上调,Lss仅在高血压病大鼠肾上腺的表达下调。儿茶酚胺合成酶Th在高血压气虚证、糖尿病气虚证与气盛证大鼠上调1.5倍以上,Ddc在糖尿病气盛证上调1.5倍以上,Dbh在糖尿病气虚证与气盛证上调达3.0倍。儿茶酚胺代谢酶Comt基因在糖尿病气盛证、气虚证下调1.5倍以上,Mao基因却在高血压气盛证、气虚证上调1.5倍以上。结论：SHR和GK大鼠类固醇激素以及儿茶酚胺合成途径中部分基因存在显著的差异表达特征,且可能与证候的发生有关。     

原发性肝癌常见中医基本证候定性诊断规范的研究

目的:初步建立原发性肝癌常见中医基本证候定性诊断规范.方法:应用文献整理、临床调查、专家研讨等方法,初步建立原发性肝癌常见中医基本证候定性诊断规范,将诊断规范的辨证结果与专家经验辨证进行对照验证,根据临床验证结果对诊断规范进行反复修订,逐步完善.结果:初步建立的原发性肝癌常见中医基本证候定性诊断规范包括实证与虚证两部分,实证包括气滞证、血瘀证、热证、湿证,虚证包括气虚证、血虚证、阴虚证、阳虚证,并设立了每个基本证候的诊断条件.临床验证结果显示:诊断规范辨证与专家辨证结果对照,基本证候的总体符合率为73.92%.结论:原发性肝癌中医基本证候定性诊断规范基本符合中医临床实际,值得在临床上进一步验证和修订,并在此基础上进一步开展肝癌复合证候的研究.     

垂体特异性转录因子Pou1f1靶基因在不同证候H22荷瘤小鼠的表达特征

目的分析垂体重要功能基因及其垂体特异性转录因子(Pou1f1)靶基因在不同证候荷瘤小鼠的表达差异。方法将H22肝癌腹水细胞接种于190只昆明种小鼠腋下,并设置对照组,采用小鼠标准化四诊信息采集与辨证技术筛选典型的邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证小鼠,并抽提小鼠垂体、下丘脑、肾上腺等组织RNA,采用基因芯片技术检测不同组织基因表达谱,本文重点分析不同证候垂体基因芯片数据。结果与对照组比较,垂体重要功能基因阿片促黑素皮质素原(Pomc)、生长激素(Gh)和催乳素(Prl)在早期的邪毒壅盛证和气虚证中表达下调约10%,而Pomc、Gh、Prl和促甲状腺激素β亚基(Tshb)在中晚期的阳气虚证和气阴阳虚证中表达上调30%以上。Pou1f1在垂体组织中表达最高,呈现组织特异性表达特征;垂体特异性转录因子Pou1f1和Neurod1仅在邪毒壅盛证上调,Tbx19和Egr1在不同证候中均呈现上调特征,Nr4a1、Nr4a2、Pitx1、Gata2、Nr4a3、Foxl2等基因在不同证候中均呈现下调特征。Pou1f1相关靶基因Crem、Tcf4、Rnf41、Lrpprc,Mrps18b、Eif3a、Lars,Arf4、Cep57、Vcpip1,Ptpn6、Myd88、F3,Lrrfip2、Dixdc1与Pou1f1基因表达模式类似,即在邪毒壅盛证上调。结论肿瘤状态下的不同证候小鼠,其垂体重要功能基因表达失常,垂体特异性转录因子Pou1f1及其靶基因在邪毒壅盛证具有类似的表达模式。     

大肠癌组织与癌旁正常组织基因差异表达图谱及信号通路研究

目的筛查人大肠癌肿瘤组织与相应癌旁正常组织差异表达基因。方法应用NimbleGen基因芯片检测4例大肠癌肿瘤组织及相应癌旁正常组织基因表达谱,并以RT-PCR技术对部分基因芯片检测结果进行验证,利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果大肠癌肿瘤组织和癌旁正常组织差异表达基因共5042条,其中表达水平上调3399条,下调1643条,这些基因涉及多个信号通路。结论本研究结果可为寻找大肠癌分子标记物和探索大肠癌发生的分子机制提供实验依据。     

肿瘤对小鼠肾上腺皮质细胞胆固醇稳态分子表达的影响

目的：探讨肝癌状态下肿瘤大小对肾上腺皮质细胞内胆固醇稳态分子表达的影响。方法：在220只KM小鼠右腋下接种H22肝癌腹水细胞,复制肝癌荷瘤小鼠模型,在接种第11天依据肿瘤体积排序,筛选瘤体大组和瘤体小组各18至、并设立18只正常小鼠为对照组。采用生化方法检测血脂含量;应用实时荧光定量PCR检测各组小鼠肾上腺组织Srb1、Ldlr、Npc1、Npc2、Stard3、Hmgcr、Lipe、Acat1、Abca1、Abcg1、Srebp-1c、Lxrα、Lxrβ、Rxrα、Apoa1、Apoe基因mRNA表达,并以Gapdh和β-actin两个基因作内参照;应用Western blot方法检测SRB1和ApoA1蛋白表达。结果：瘤体大组小鼠肿瘤质量明显大于瘤体小组（P＜0.05）;与正常组比较,两组肝癌小鼠血浆HDL-C显著下降（P＜0.05）;瘤体大组肝癌小鼠,肾上腺皮质细胞胆固醇摄取相关分子Srb1、Ldlr 、Apoa1基因表达显著升高（P＜0.05）,且SRB1蛋白表达显著升高（P＜0.05）、而ApoA1蛋白表达在肿瘤大组明显高于肿瘤小组（P＜0.05）;胆固醇酯化及其分解酶Acat1与Lipe基因表达在瘤体大组显著低于肿瘤小组（P＜0.05）;胆固醇逆向流出胞外的Abca1和Abcg1基因表达在瘤体大组也显著下降（P＜0.05）;而调控细胞胆固醇稳态的核受体Srebp-1c、Lxrα与Rxrα基因表达无明显变化,但肿瘤小组Srebp-1c、Lxrβ与Rxrα基因表达显著升高（P＜0.05）。内质网合成胆固醇的酶Hmgcr与载脂蛋白Apoe在各组间均无显著差异。结论：在肝癌状态下,小鼠为适应肿瘤慢性反复的应激,肾上腺皮质细胞能有效利用胆固醇合成皮质激素。     

非功能性肾上腺肿瘤的诊断与外科治疗(附26例报告)

报告外科治疗非功能性肾上腺肿瘤26例,其中仅7例有症状,19例无症状与体征,是在体检中被B超偶然发现。文中指出,非功能性肾上腺肿瘤的定位诊断需依靠B超、CT、MRI及肾上腺血管造影,并强调术前都要作系统的内分泌功能检查,以鉴别其有无功能,尤其是要与嗜铬细胞瘤相鉴别。肿瘤直径大于3.5cm应外科手术治疗;直径小于3.5cm的肿瘤虽可在B超、CT的严密监视下进行随访观察,但对青壮年患者,因其肿瘤会继续生长增大,亦应手术治疗。     

肾上腺囊肿合并出血的诊断和治疗 (附3例报告)

目的 探讨肾上腺囊肿合并出血的诊断及治疗.方法 对1996年8月-2007年3月3例肾上腺囊肿合并出血患者进行回顾性总结.结果 3例病例均经手术探查确诊,行肾上腺及囊肿切除术.结论 肾上腺囊肿合并出血的术前多不能定位,需急诊手术探查及病理加以明确,本病预后良好.     

阳气虚和气阴阳虚证荷瘤小鼠肾上腺基因表达的差异性

目的：揭示H22荷瘤小鼠阳气虚证和气阴阳虚证肾上腺基因表达的特征。方法：采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠中期阳气虚证及中晚期气阴阳虚证肾上腺基因表达的差异。结果：①筛选阳气虚证独特上调基因52条、独特下调基因11条：气阴阳虚证独特上调和下调基因分别为23条和4条。②阳气虚证肾上腺独特上调的基因涉及到蛋白水解类,如Klkl家族、Ctrc、Ctrbl、Renl、Ela3、Cpal、Prss2、Cpbl;脂类代谢基因,如Clps、Pnlip、Pnliprpl、Cel：精子发生类基因,如Tnp2、Tnpl、Crispl、Prml、Prm2、Smcp等：激素相关蛋白,如Pip、Abpg等。阳气虚证独特下调的基因涉及脂代谢类,如scdl、Fasn,Acaca、Acss2、Pnpla3。③气阴阳虚证独特上调基因,包括参与炎症应答类基因,如S100a8、S100a9、Alox5ap、Orml、Kngl、Mpo：参与血凝聚与正调控细胞增殖基因,如Fga、Fgb、Fgg、Prtn3、Fgll等;参与离子运输,如Lcn2、Hpxn、Ltf等。气阴阳虚证独特下调基因仅4条。结论：H22荷瘤小鼠阳气虚证和气阴阳虚证肾上腺存在大量的基因表达改变,构成了这两个证候内在的特征。     

Differentially expressed microRNAs at different stages of atherosclerosis in ApoE-deficient mice

Background  Atherosclerosis is the primary cause of cardiovascular disease, carotid artery disease, and peripheral vascular disease. However, it is hard to obtain human arterial tissue at different stages of atherosclerosis for a systematic study. The ApoE-deficient (ApoE^-/-) mice predictably develop spontaneous atherosclerotic plaques with numerous features similar to the human lesions and contain nearly the entire spectrum of lesions observed during atherogenesis in humans. MicroRNA expression profiles at different stages of atherosclerosis in ApoE-deficient mice were screened to find out the differentially expressed microRNAs.

Methods  ApoE-deficient mice were euthanized at 4, 8, and 20 weeks of age and divided into three groups according to the three time points, including groups A4 (fed a Western-type diet for 0 week), A8 (fed a Western-type diet for 4 weeks), and A20 (fed a Western-type diet for 16 weeks). Atherosclerotic lesions were analyzed. Fifteen aortas were collected and combined into three pools (five aortas in one pool) in each group. MicroRNA microarray analysis was replicated thrice in each group. The threshold of fold change ³2.0 was used to screen up or down-regulated microRNAs. Differentially expressed microRNAs were subsequently verified with quantitative real-time polymerase chain reaction. Those increasingly up or down-regulated microRNAs during the progression of atherosclerosis were selected.

Results  Atherosclerotic lesions first appeared in the aortic arch in group A8. Severe atherosclerotic lesions were observed in group A20. In group A8, seven MicroRNAs were up-regulated while two were down-regulated. In group A20, 15 microRNAs were up-regulated while two were down-regulated. miR-34a-5p and miR-497-5p were increasingly up-regulated, while miR-434-3p was progressively down-regulated when atherosclerosis progressed.

Conclusions  In this study, we described that microRNAs are differentially expressed at different stages of atherosclerosis in ApoE-deficient mice. Those increasingly up or down-regulated microRNAs during the progression of atherosclerosis may play an important role in the pathogenesis of atherosclerosis and provide us opportunities for investigating atherosclerosis from early to advanced stages.