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1.
目的 探讨过氧亚硝酸根(peroxynitrite,ONOO-)和重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinanthumanbasicfibroblastgrowthfactor,bFGF)共同作用对人晶状体上皮细胞细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的影响。初步探讨ONOO-导致白内障发生的可能机制。方法 将培养的HLEC细胞分为4组,对照组(未经ONOO-和bFGF处理)、bFGF单独处理组、bFGF+ONOO-处理组[bFGF预处理1h后加入不同浓度ONOO-(50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1)处理1h]和ONOO- +bFGF处理组[不同浓度ONOO-(50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1)预处理1h后加入bFGF处理1h]。检测各组细胞内ERK磷酸化水平的变化。结果 bFGF单独处理组和bFGF +ONOO-(50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1)处理组中磷酸化ERK相对表达值分别为5.17±0.35、4.42±0.12、3.91±0.15和0.49±0.08,与对照组(1.00±0.05)相比差异有统计学意义(F=402.83,P<0.001),结果显示ONOO-可以抑制由bFGF诱导的ERK磷酸化水平的增加(F=310.34,P<0.05)。ONOO-(50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1)+bFGF处理组中磷酸化ERK相对表达值分别为3.36±0.04、3.32±0.06和2.92±0.08,与对照组(1.00±0.02)相比,所有处理组的ERK磷酸化水平均显著增加(F=518.94,P<0.001);50μmol·L-1和100μmol·L-1ONOO-处理细胞后经bFGF处理,ERK磷酸化水平较bFGF单独处理组(3.04±0.05)显著增加(F=35.53,P<0.05),而200μmol·L-1ONOO-处理组与bFGF单独处理组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ONOO-诱导的白内障的发生可能与ERK磷酸化的紊乱有关。 相似文献
2.
表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响 总被引:9,自引:4,他引:5
目的探索表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)对培养的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞促进DNA合成的最佳刺激浓度,并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人RPE细胞第6代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine,3H-TdR)掺入试验及放射自显影检测EGF、bFGF对RPE细胞的促DNA合成作用。结果EGF、bFGF均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含2%血清的培养液中,EGF、bFGF作用最佳浓度为1ng/ml,明显低于无血清培养液中EGF、bFGF作用的最佳浓度(10ng/ml)。联合应用10ng/mlEGF、10ng/mlbFGF约提高RPE细胞合成DNA能力2.96倍。结论EGF、bFGF对培养的人RPE细胞具有促进DNA合成作用,且两者可产生协同效应。 相似文献
3.
目的寻找抑制视网膜、玻璃体内细胞增生的有效药物;明确抗增生药物秋水仙碱、道诺霉素和5-氟尿嘧啶(5-Fu)对体外培养的人视网膜胶质(retinal glia,RG)细胞的作用。方法用 MTT法测定秋水仙碱(0.5~16.0μg/ml)、道诺霉素(0.1~3.2μg/ml)和5-Fu(0.5~16.0μg/ml)对体外培养人RG细胞的作用。结果秋水仙碱(1.0~16.0μg/ml)、道诺霉素(0.2~3.20μg/ml)和 5-Fu(1.0~16.0μg/ml)3组药物对培养细胞均有抑制作用,与对照组均差别显著(P<0.01),ID_(50)分别为3.11μg/ml,0.79μg/ml和5.23μg/ml。结论秋水仙碱、道诺霉素和5-Fu对RG细胞有明显抑制作用。 相似文献
4.
目的 寻找抑制视网膜、玻璃体内细胞增生的有效药物;明确抗增生药物秋水仙碱、道诺霉素和5-氟尿嘧啶(5-Fu)对体外培养的人视网胶质(retinal glia,RG)细胞的作用。方法 用MTT法测定秋水仙碱(0.5~16.0ug/ml)、道诺霉素(0.1~3.2ug/ml)和5-Fu(0.5~16.0ug/ml)对体外2人RG细胞的作用。结果 秋水仙碱(1.0~16.0ug/ml)、道诺霉素(0.2 相似文献
5.
表皮生长因子对牛眼小梁细胞c—fos基因表达的诱导 总被引:4,自引:0,他引:4
目的研究表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)对小梁细胞的作用。方法应用分子杂交技术研究EGF对体外培养的牛眼小梁细胞c-fos基因表达的诱导和3H胸腺核苷酸(3H-thymidineincorparation,3H-TdR)掺入法观察细胞DNA的合成。结果小梁细胞的3H-TdR掺入率随着EGF浓度不同而变化,浓度为20~150ng/ml时,细胞掺入率随浓度增加升高(P<0.01)。与对照组相比,EGF刺激停止生长的小梁细胞0.5小时后,c-fos基因开始表达,1小时后达高峰,至2小时后消失。不同浓度EGF刺激小梁细胞1小时后,c-fos基因表达呈浓度依赖性。结论实验结果表明EGF刺激小梁细胞增殖或进入生长状态,可能与c-fos基因产物的信号传递作用有关。 相似文献
6.
目的 探究转化生长因子-β2(transforminggrowthfactor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法 使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Westernblot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nervecalciumadhesionpro-tein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L-1)刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L-1、1μg·L-1、5μg·L-1)以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L-1时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0h、3h、6h、12h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3h、6h、12h、24h、48h组与0h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。 相似文献
7.
生长因子对培养人眼视网膜色素上皮细胞增殖的调控作用 总被引:7,自引:0,他引:7
目的探讨生长因子对人眼视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞增殖的调控作用。方法建立人眼RPE细胞培养体系,利用3H-TdR掺入法和细胞计数观察表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic-fibroblastgrowthfactor,b-FGF)、胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF-I)对培养RPE细胞的作用。结果(1)EGF,b-FGF,IGF-Ⅰ与对照组比较,可明显增强人眼RPE细胞DNA合成6.6~12.2倍,增强能力为EGF>b-FGF>IGF-Ⅰ。(2)当生长因子联合作用时,可数倍明显增强3H-TdR掺入,能较单一因子更有效地刺激人眼RPE增殖。结论结果提示,生长因子的协同作用可能是增殖性视网膜病变发生的重要机理之一。 相似文献
8.
表皮生长因子对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨不同浓度的表皮生长因子(EGF)对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用。方法利用培养的兔晶状体和角膜上皮细胞,通过MTT方法,检测细胞增殖密度。培养晶状体上皮细胞的EGF浓度(1~250ng/ml)分为8组;而培养角膜上皮细胞的EGF浓度(4~1000ng/ml)分为10组。结果EGF浓度在32ng/ml时,促晶状体上皮细胞的增生作用最强,与无血清组比较差异非常显著(P<0.01)。促角膜上皮细胞增生的最佳浓度为16ng/ml,与无血清组比较差异显著(P<0.05)。结论上述结果为今后在细胞和分子水平上研究白内障和角膜伤口愈合的发生规律及其机制提供实验资料。 相似文献
9.
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 在体外对牛晶状体上皮细胞(BLEC) 增殖的影响及确定BLEC 是否表达bFGF 蛋白。 方法 BLEC 原代培养。用不同浓度的bFGF 及3H胸腺嘧啶(3HTDR) 处理BLEC36 h 后,液闪测定bFGF 对BLEC3HTDR 掺入率的影响。Western 印迹( Western blot) 法确定BLEC 是否表达bFGF 蛋白。 结果 bFGF 在体外有促进BLEC 增殖作用,Western blot 法表明BLEC 可表达低分子量(18 000)bFGF 蛋白。 结论 bFGF 可能通过晶状体上皮细胞的自分泌,促进白内障术后残留晶状体上皮细胞的增殖,导致后发性白内障 相似文献
10.
目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、胰岛素样生长因子I(insulinlike growth factorI,IGFⅠ) 及二者的共同作用对体外牛晶体上皮细胞(bovine lensepithelialcell,BLEC)增殖的影响。方法 BLEC原代培养,取第4 代细胞种入24 孔板,加入不同浓度的bFGF、IGFⅠ、bFGF+ 20 μg/LIGFⅠ,20 h 后加入3HTDR,16 h 后作液闪计数。结果 一定浓度的bFGF(1~100 μg/L) 、IGFⅠ(20~100 μg/L) 在体外有促进BLEC 增殖的作用( P< 0-01 ) ,20 μg/L的IGFⅠ可增加bFGF的促BLEC增殖作用。结论 生长因子及它们之间的协同作用在促进晶体上皮细胞异常增殖的过程中起重要作用。 相似文献