维甲酸对人喉鳞癌裸鼠移植瘤的治疗观察

目的 寻求有效的喉癌辅助治疗方法,研究全反式维甲酸（ＲＡ）在体内的抗肿瘤作用。方法 利用人喉鳞癌瘤系ＰＨＣ３制造裸鼠喉癌模型（裸鼠１６只,实验治疗组和对照组各８只）,观察ＲＡ治疗荷喉癌裸鼠的疗效,并在光镜及透射电镜下观察ＲＡ作用后肿瘤组织显微及超微结构,免疫组化检测肿瘤细胞ｃ－ｍｙｃ蛋白的阳性率。结果 治疗组肿瘤生长明显受到抑制,抑制率达５０％以上（Ｐ〈０．０５）。光镜及透射电镜观察发现,ＲＡ治疗     

喉及喉咽癌雄激素受体的研究

采用免疫组化ＡＢＣ法对喉及喉咽癌６０例，良性喉病变１４例进行雄激索受体（ＡＲ）检测。结果表明：喉及喉咽癌ＡＲ总的阳性率为７１．７％（４３／６０）。良性病变均为阴性。ＡＲ阳性率与性别、癌肿分化程度、癌肿部位、Ｔ分类无关。但与年龄有关，即ＡＲ阳性率随患者年龄升高而降低。认为喉癌是雄激素的依赖肿瘤。ＡＲ阳性率与是否有颈淋巴转移有密切关系。即结果显示Ｎ＋组８８．５％明显高于Ｎｏ组５７．１％（Ｐ＜０．０５）。故认为ＡＲ的检测有利于判断喉癌患者的预后和制定治疗方案的参考。     

c-myc癌基因蛋白在喉癌及癌旁不同距离组织中的表达研究

应用枸橼酸－ＬＳＡＢ－微波免疫组化法，检测ｃ－ｍｙｃ癌基因蛋白在喉癌、边缘区及癌旁０．５、１．０、１．５、２．０ｃｍ处粘膜和４例正常喉粘膜中的表达。结果：ｃ－ｍｙｃ蛋白在喉癌组织中的阳性表达率为９６．７％（２９／３０），与正常组织相比有极显著性差异（Ｐ〈０．０１）；在癌旁２．０ｃｍ处与１．５ｃｍ以内组织的表达存在着显著性差异（Ｐ〈０．０５）。ｃ－ｍｙｃ表达依正常粘膜→癌旁组织→癌呈逐步递增趋势。ｃ     

Myc基因家族在喉癌中的异常扩增及其意义

目的探讨Ｍｙｃ基因家族在喉癌中的异常扩增及其临床意义。方法应用ＰＣＲ非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳激光扫描技术检测了３２例喉癌组织、１２例癌旁组织和６例正常组织。结果正常组织细胞Ｍｙｃ基因无扩增，３２例喉癌中４７％（１５／３２）有Ｃｍｙｃ和Ｌｍｙｃ扩增，４１％（１３／３２）有Ｎｍｙｃ基因扩增。Ｍｙｃ基因扩增率与年龄、性别、喉癌临床分期及分化程度无关（Ｐ＞０．０５），但有淋巴结转移的患者的Ｎｍｙｃ扩增率明显高于无淋巴结转移者（Ｐ＜０．０１）。结论Ｍｙｃ基因３个成员异常扩增是喉癌发生的原因之一，Ｎｍｙｃ扩增在喉癌淋巴结转移过程中可能起正性调控作用。     

喉癌癌变过程中CyclineE的表达及临床病理学意义

目的：研究喉癌癌变过程中ＣｙｃｉｉｎＥ的临床病理学意义。方法：用免疫组化检测２０例正常喉粘膜，４０例喉不典型增生和６０例喉癌组织中ＣｙｃｌｉｎＥ的表达。结果：ＣｙｃｌｉｎＥ阳性表达定位于肿瘤细胞核。在喉癌癌变过程中，喉正常粘膜、不黄型增生病变和喉癌中ＣｙｃｌｉｎＥ阳性表达率分别为：５．０％（１／２０），２０．０％（８／４０）和４５．０％（２７／６０）（Ｐ〈０．００１）。喉癌淋巴结转移组Ｃｙｃｌｉｎ     

上颌窦鳞癌myc,c—erbB—2,EGFR的表达及意义

目的：检测上颌窦鳞癌中癌基因ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ的表达情况，并分析ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ的蛋白表达与上颌窦鳞癌临床分期、病理分化及预后的关系。方法：应用免疫组织化学ＡＢＣ法。结果：上颌窦鳞癌中ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ表达的阳性率分别是６０．０％、４２．５％、４７．５％。ｍｙｃ蛋白高表达者（阳性细胞〉３０％）上颌窦鳞癌３年生存率明显低于ｍｙｃ蛋白低表达（阳性细胞〈     

人喉癌引流淋巴结淋巴细胞局部应用疗效观察

目的　为提高肿瘤引流淋巴结淋巴细胞（ｔｕｍｏｒ ｄｒａｉｎｉｎｇｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ,ＴＤＬＮＬ） 转输后在肿瘤局部的数量,采用肿瘤局部注射的方法对喉癌裸鼠移植瘤模型进行实验性治疗。方法　用２０ 只人喉癌裸鼠移植瘤系ＰＨＣ３ 的裸鼠移植模型作为治疗对象,随机分为２ 组。１０ 只作为治疗组,取新鲜喉癌患者切除的淋巴结,分离得到淋巴细胞,体外培养并用白介素２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ２ ,ＩＬ２）１ ０００ＩＵ／ｍｌ 激活后,每周一次注射于瘤内及周围,每次每只注射１０７ 个细胞（悬于０．１ ｍｌ ＤＨａｎｋｓ 液中）,另１０ 只作为对照组,每周一次注射０．１ ｍｌ ＤＨａｎｋｓ 缓冲液于瘤内及周围。治疗２ 周,观察４ 周。结果　治疗组肿瘤生长较对照组缓慢,差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０５） 。病理组织学检查可见治疗组肿瘤内片状及灶状坏死,肿瘤间质淋巴细胞浸润增多,肿瘤血管周围亦可见较多淋巴细胞聚集,脾小结明显增生,肝、脾及肺脏未见任何转移。对照组肿瘤细胞无明显坏死,间质淋巴细胞浸润很少,脾小结增生不明显,并观察到１ 例肺转移结节。结论　ＴＤＬＮＬ在体外经ＩＬ２ 短期活化后在肿瘤局部注射具有抗肿瘤作用,与以往经静     

喉癌手术安全切缘的免疫组化研究

目的：从基因蛋白水平角度研究喉癌手术安全切缘。方法：应用 Ｌ Ｓ Ａ Ｂ免疫组化法,检测了ｒａｓ、ｃｍ ｙｃ、ｐ５３ 癌基因在３０ 例喉癌,边缘区,癌旁０．５、１．０、１．５、２．０ ｃｍ 粘膜处和 ４ 例正常喉粘膜中的表达情况。结果：三种癌基因产物的单独及联合表达阳性率依正常粘膜→癌旁２．０ ｃｍ →１．５ ｃｍ →１．０ ｃｍ →０．５ ｃｍ →边缘区→癌顺序递增,且癌基因蛋白的表达在距肿瘤０．５ ｃｍ 以内的癌旁组织与癌旁组织１．０ ｃｍ 处有显著性差异（ Ｐ ＜ ０．０５）。结论：距肿瘤０．５ ｃｍ 内的癌旁组织应视为癌前期病变,以切缘距肿瘤０．５ ｃｍ 作为喉癌手术安全切缘的标准较为合适     

喉癌人乳头瘤病毒感染和p53蛋白表达的研究

对４４例喉鳞癌和１６例声带息肉患者采用原位核酸杂交技术探测其人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６Ｂ，１１，１６，１８型ＤＮＡ同源序列及ＬＳＡＢ免疫组化法探测其Ｐ５３蛋白的表达，结果：（１）喉癌与ＨＰＶ１６／１８杂交阳性率为４３．２％（１９／４４），声带息肉为１２．５％（２／１６）（Ｐ〈０．０５）（２）喉癌ｐ５３蛋白阳性率为５６．８％（２５／４４），声带息肉全部为阴性；（３）喉癌ＨＰＶ１６／１８杂交及ｐ５３蛋白     

Myc基因家族在喉癌中的异常扩增及其意义

目的 探讨Ｍｙｃ基因家族在喉癌中的异常扩增及其临床意义。方法 应用ＰＣＲ－非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳－激光扫描技术检测了３２例喉癌组织、１２例癌旁组织和６例正常组织。结果 正常组织细胞Ｍｙｃ基因无扩增，３２例喉癌中４７％（１５／３２）有Ｃ－ｍｙｃ和Ｌ－ｍｙｃ扩增，４１％（１３／３２）有Ｎ－ｍｙｃ基因扩增。Ｍｙｃ基因扩增率与年龄、性别、喉癌临床分期及分化程度无关（Ｐ〉０．０５），但有淋巴结转移的患者的     

千斤藤碱对头颈部恶性肿瘤细胞诱导分化的研究

为观察千斤藤碱（Ｓｔｅｐｈｏｌｉｄｉｎｅ，ＳＴ）对头颈部恶性肿瘤细胞株诱导分化作用，采用ＡＢＣ免疫组化结合图象分析仪及流式细胞仪，以维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）作对照，通过细胞形态学、细胞增殖动力学的研究，定量检测了癌基因Ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２及抑癌基因ｐ５３蛋白。结果表明：经无毒剂量的千斤藤碱及维甲酸处理后，头颈部恶性肿瘤细胞株的细胞形态趋向良性分化，细胞接触抑制部分恢复，集落形成率和细胞增殖指数明显降低，癌基因Ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２蛋白明显降低，ｐ５３蛋白明显增高。结论：千斤藤碱及维甲酸对头颈部恶性肿瘤有诱导分化作用，其机理可能是通过抑制癌基因的表达，增加抑癌基因的表达，改变细胞的形态结构和生物学特性，促进癌细胞的分化。     

CXCR4小干扰RNA对人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨CXC族趋化因子受体4(CXCchemokine receptor 4,CXCR4)小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)对人喉癌细胞株Hep-2细胞裸鼠体形成的移植瘤淋巴结微转移的影响.方法 将与CXCR4mRNA互补的siRNA通过阳离子脂质体转染Hep-2细胞,用RT-...     

串珠素反义cDNA对人喉癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究串珠素（perlecan）反义cDNA质粒（pAP）对喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的影响。方法：应用pAP转染喉癌Hep-2细胞,建立人喉癌裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠移植瘤的生长速度。分为3组：未转染的Hep-2细胞组（WT组）、空载体phβApr-neol转染组（neo组）及pAP转染组（pAP组）。用RT-PCR和免疫组织化学方法检测各组裸鼠移植瘤的perlecan mRNA和蛋白质的表达情况。结果：肿瘤生长4周后,WT组和neo组裸鼠移植瘤的平均体积较大,pAP组裸鼠移植瘤的平均体积较小,差异有统计学意义（P〈0.01）。perlecan mRNA在WT组和neo组高表达,在pAP组低表达,均差异有统计学意义（均P〈0.05）。perlecan蛋白在WT组和neo组高表达,定位于癌细胞的细胞核和细胞质,在pAP组低表达,均差异有统计学意义（均P〈0.01）。结论：pAP对喉癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤的发生、发展有重要影响。     

榄香烯对真核细胞翻译起始因子家族表达和血管生成的抑制作用

目的探讨榄香烯对人喉鳞癌细胞株Hep-2细胞荷瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用，以及荷瘤中真核细胞翻译起始因子（eukaryotic initiation factor，eIF）家族成员（eIF4E、eIF4G）与肿瘤新生血管有关的碱性纤维母细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达情况。方法利用人喉鳞癌细胞株Hep-2细胞制造裸鼠喉癌模型（共7组42只）腹腔注射用药并观察肿瘤体积，生长曲线以及抑瘤率；使用免疫组织化学法检测榄香烯治疗后荷瘤中eIF4E、eIF4G、bFGF、VEGF的表达和微血管密度的变化。结果榄香烯可引起荷瘤体积和重量的减少，剂量越高作用越明显；榄香烯低、中、高剂量组抑瘤率分别为5．2％、41．7％和50．5％；榄香烯乳作用组eIF4E、eIF4G、bFGF、VEGF的表达较空白对照组低（P〈0．05）；榄香烯乳作用组的微血管密度低于其他各组（P〈0．05）。榄香烯100mg／kg抑瘤效率与顺铂3mg／kg相似，榄香烯100mg／kg和顺铂3mg／kg联合用药抑瘤率为51．2％。结论榄香烯可抑制人喉鳞癌细胞荷瘤的生长，其作用机制不仅与直接抑制蛋白合成有关，而且还与eIF家族成员引起相关蛋白bFGF和VEGF表达下降，抑制肿瘤血管生成有关。榄香烯和顺铂联合用药具有药物协同作用。     

人喉癌引流淋巴结淋巴细胞局部应用疗效观察

目的 为提高肿瘤引流淋巴结淋巴细胞（ＴＤＬＮＬ）转输后在肿瘤局部的数量,采用肿瘤局部注射的方法对喉癌裸鼠移植瘤模型进行实验性治疗。方法 用２０只人喉癌裸鼠移植瘤系ＰＨＣ３的裸鼠移植模型作为治疗对象,随机分为２组。１０只作为治疗组,取新鲜喉癌患者切除的淋巴结,分离得到淋巴细胞,体外培养并用白介素２（ＩＬ－２）１０００ＩＵ／ｍｌ激活后,每周一次注射于瘤内及周围,每次每只注射１０＾７个细胞（悬于０．１ｍ     

沉默survivin抑制喉癌细胞Hep-2生长的实验研究

目的 探讨沉默survivin对喉癌细胞Hep-2生长的影响.方法 将重组质粒(psi-survivin)和阴性对照质粒(psi-scramble)用脂质体包裹转染人喉癌细胞株Hep-2,分别用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)从mRNA和蛋白水平检测survivin的表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)观察喉癌细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡.建立裸鼠喉癌移植瘤模型,将psi-survivin和psi-scramble注射于肿瘤周围,观察其抗肿瘤的效果.免疫组化法和Western blot法检测重组质粒对肿瘤Survivin蛋白表达的影响.末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记技术(Tunel)观察肿瘤细胞的凋亡.结果 psi-survivin不仅在mRNA水平(抑制率为54.4%),而且蛋白水平也抑制Survivin表达,抑制率为37.0%.MTT证实psi-survivin明显抑制喉癌细胞的增殖,抑制率达71.7%.流式细胞仪结果显示psi-survivin组细胞凋亡明显增加,凋亡率达(13.05±0.56)%((-x)±s,下同).体内实验表明,质粒注射后第32天,盐水组瘤体积为(1443.9±230.5)mm3,psi-scramble组为(1348.5±198.4)Rim3,而psi-survivin组为(624.6±188.4)mm3,与对照组相比,差异有统计学意义(t=-5.917,P＜0.01).psi-survivin能明显抑制肿瘤survivin的表达,抑制率为41.8%,与对照组相比,差异有统计学意义(t=-80.343,P＜0.01).Tunel染色结果显示psi-survivin组肿瘤组织中出现较多凋亡细胞,而对照组未见凋亡细胞.结论 沉默survivin能明显抑制喉癌细胞Hep-2的生长.     

p16基因治疗喉鳞状细胞癌的实验研究

OBJECTIVE: To assess the anti-tumor effects of p16INK4A gene transfer in laryngeal squamous cell carcinoma. METHODS: A Complete p16INK4A gene was inserted into a replication-defective recombinant adenovirus (Ad-p16) and the tumor cells were infected with Ad-p16. Confirmation of p16INK4A protein expression after Ad-p16 infection was performed by Western Blotting. The therapeutic effects were evaluated both in in vitro and in vivo study. RESULTS: The replication-defective recombinant adenovirus can direct a high level of p16INK4A protein expression in laryngeal squamous cell carcinoma. Studies both in in vitro and in vivo experiments demonstrated that Ad-p16 treatment significantly inhibits the cell growth and the established tumors in nude mice. The mean value of tumor volumes among the Ad-p16, Ad-Lacz and phosphatic buffered saline(PBS) groups was (91.00 +/- 6.32) mm3, (137.00 +/- 9.62) mm3 and (144.00 +/- 13.87) mm3 respectively. Statistic analysis showed that there was a significant difference between the Ad-p16 group and the control groups (P < 0.05). No significant difference was found between Ad-lacZ and PBS groups, which indicated that the antitumor effects was not influenced by the adenovirus. CONCLUSION: These results demonstrate a significant antitumor effect of Ad-p16 against human laryngeal squamous cell carcinoma. This data also further support the potential application of Ad-p16 to treat the human head and neck cancer.     

小干扰RNA对喉鳞状细胞癌裸鼠移植瘤增殖细胞核抗原及p53蛋白表达的影响

目的：应用小干扰RNA（siRNA）技术抑制裸鼠喉癌皮下移植瘤人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达,探讨移植瘤中增殖细胞核抗原（PCNA）及p53蛋白表达的变化。方法：根据hTERT cDNA序列构建表达短发夹RNA（shRNA）的、靶向hTERT mRNA的真核表达质粒pshRNA,其载体质粒含荧光素报告基因。建立人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株裸鼠皮下接种模型,将pshRNA转染入荷瘤裸鼠瘤体内,观察肿瘤生长情况。以激光共聚焦显微镜观察质粒在瘤体内的表达;以免疫组织化学SP法检测PCNA及p53蛋白在肿瘤内的表达。结果：所有裸鼠均接种成功,5d后可见皮下肿瘤形成,14d左右肿瘤直径达5～7mm。pshRNA及空质粒载体转染入瘤体后,共聚焦显微镜下见癌组织中有绿色荧光表达。病理学检查发现：pshRNA组肿瘤生长受到抑制,细胞分裂少见,可见大量癌细胞坏死。与注射生理盐水的对照组比较,转染质粒完毕后7d抑瘤率为76．50％,P〈0．01。pshRNA治疗后瘤体内PCNA蛋白表达显著下调（P〈0．05）,p53蛋白表达显著上调（P〈0．05）。结论：靶向hTERT mRNA的shRNA可显著抑制人喉癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是诱导PCNA下调,促进p53蛋白表达所致。