槲皮素对热休克诱导人肝癌HepG2细胞HSP70和P-gp表达的影响

目的：研究热休克诱导人肝癌HepG22细胞热休克蛋白70（HSP70）和P－糖蛋白（P-gp)随时间的表达规律，并研究应用槲皮素（Qu)对二表达的抑制效应。方法：（1）使用恒温水浴法42℃热休克HepG2细胞90min；（2）采用免疫细胞化学法，流式细胞术检测热休克前，热休克后2，4，8，12，24h时HSP70和P－gp的表达规律，以及热休克前1h应用槲皮素在热后4h二的表达。结果：（1）42℃热休克诱导HepG2细胞，HSP70表达增多，“核内迁移”，阳性细胞数升高，4h达到最高（11．47％），较对照组（6．64％）升高近2倍（P＜0．005），24h后回落到低值，细胞核内表达减少；P－gp阳性细胞数随HSP70升高后升高，12h达到最高值（96．31％），较对照组（33．95）升高近3倍（P＜0．005），24h回落到低值，同时，细胞内低水平的HSP70表达在细胞质中，少部分在细胞核内。（2）热休克前应用槲皮素能有效抑制热2休克诱导HSP70和P-gp的过量表达，槲皮素并能有效抑制二内在表达，以100－200μmol/L Qu作用明显（P＜0．005），呈浓度剂量效应。结论：（1）热休克可能诱导HepG2细胞HSP70和P－gp的过量表达，P－gp与HSP70具有相关关系；（2）槲皮素可能在转录水平上抑制HepG2细胞HSP70和P－gp的合成。     

过敏性紫癜患儿25例血D—二聚体测定及临床意义

目的：了解过敏性紫癜（HSP）患儿血D－二聚体的水平及其临床价值。方法：用单克隆抗体乳胶凝集试验法测定25例HSP患儿血D－二聚体水平。结果：（1）血浆D－二聚体阳性率显著高于正常对照组（P＜0．001）,（2）血D－二聚体阳性组与阴性组比较,出现紫癜性肾炎有明显差异（P＜0．05）。结论：D－二聚体的测定对临床上早期快速准确掌握HSP患儿血液高凝状态提供依据。指导治疗,了解患儿病情进展与恢复情况具有一定的临床价值。     

鼻咽癌及癌旁粘膜组织中c—erbB—2,EGFR mRNA的表达

应用地高辛配基标记探针和ＤＮＡ－ＲＮＡ原位杂交技术，检测了鼻咽部的癌组织，癌旁粘膜和慢性炎症膜组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２，ＥＧＦＲｍＲＮＡ的表达，结果显示：（１）ＣｅｒｂＢ－２和ＥＧＦＲｍＲＮＡ阳性表达率在癌组织分别为８６．７％（２６／３０）和８３．３％（２５／３０），癌旁粘膜分别为８０．０％（１６／２０）和７０．０％（１４／２０）；慢性炎症粘膜均无表达，（２）二基因同时表达者在癌组织中有２５例（８３     

肿瘤标志物DR-70在恶性肿瘤诊断中的应用

目的：评价肿瘤标志物ＤＲ－７０在恶性肿瘤中的诊断应用。方法：应用美国ＡＭＤＬ公司的ＤＲ－７０＾ＴＭ ＥＬＩＳＡ试剂盒,测定对２０例正常人和５９例恶性肿瘤病人血清ＤＲ－７０含量。结果：各种恶性肿瘤ＤＲ－７０的阳性率为６６．７￣１００％,均较正常对照组有非常显著性差异（Ｐ〈０．００１）。结论：血清ＤＲ－７０是诊断恶性肿瘤有价值的标志物。     

Go—S试验在大肠癌筛查中的应用

本文应用Ｇｏ－Ｓ试验对肠道症状的１３５名患者进行大肠癌筛查，男性７４例，女性６１例，平均年龄３９．７岁，筛查结果：大肠癌、大肠息肉、溃疡性肠炎Ｇｏ－Ｓ试验阳性率分别为８６．３０％、７６．５０％及７２．７０％。大肠癌与慢性结肠炎其Ｇｏ－Ｓ阳性率统计结果具有显著性差异（Ｐ〈０．０１）；大肠癌与大肠息肉间无显著差异（Ｐ〉０．０５）。直肠癌４例，其Ｇｏ－Ｓ试验皆为阳性，直肠以上癌１８例，Ｇｏ－Ｓ阳性５例。     

苯并（a）芘、预热及其联合作用对人胚肺细胞HSP70合成的影响

用Western blot方法探讨苯并（a) 芘、预热及其联合作用对人胚肺（HEL）二倍休细胞热应激蛋白70（HSP70）合成的影响。结果表明未经S9活化的HEL细胞,在不同剂量的BaP处理后,可轻度诱导HSP70的表达;经S9尖化的BaP作用HEL细胞3hHSP70表达抑制,呈剂量－反应关系,在较高浓度染毒时抑制作用表现明显（P＜0．05）;预热应激的HEL细胞HSP70表达增加,但BaP染毒3h后HSP70表达并不规律,具体表现为低剂量（10－50）μmol/L诱导,而高剂量（50－200）μmol/L呈抑制趋势。结果提示 ,体外未经代谢活化的BaP可以作为应激原诱导热休克反应;HSP70表达降低可能是BP代谢活化产物作用的结果,预热诱导HSP70表达增加很可能掩盖了低浓度时BaP对HSP70合成的抑制作用。     

慢性阻塞性肺疾病患者血清 HSP27和 HSP70与肺功能及生活质量的相关性

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（ chronic obstructive pulmonary disease ,COPD）患者血清HSP27和HSP70水平与肺功能及生活质量的关系。方法选取2015年2月至2016年4月COPD急性加重患者45例（观察组）,健康者50例（对照组）,采集2组患者血清,采用酶联免疫吸附试验（ ELISA ）检测血清HSP27和HSP70水平,采用COPD评估测试量表（ CAT量表）评估COPD患者的生活质量,并对血清HSP27和HSP70水平与COPD患者肺功能及生活质量的相关性分析。结果与对照组比较,观察组患者血清 HSP27和HSP70表达明显升高[（3590．25±503．42） ng／L vs（1974．08±527．38） ng／L]和[（331.82±18．61）ng／L vs（162．73±51．52）ng／L],差异有统计学意义（P＜0．01）。采用Spearman 秩相关分析发现,血清HSP27、HSP70与FEV1呈负相关（r＝－0．674、－0．569,P＜0．05）;观察组CAT量表评分与FEV1呈负相关（ r＝－0．43, P＜0.05）;血清HSP27、HSP70水平和CAT量表评分呈正相关（r＝0．622、0．53,P＜0．05）。结论 CAT量表能有效的评价COPD患者生活质量。 HSP27和HSP70参与了COPD的炎症和氧化应激反应,在COPD急性加重患者中具有一定的诊断价值和临床意义。     

胸液间皮细胞和BCG—PPD检测对结核性和恶性胸液的诊断价值

目的：探讨胸腔积液（胸液）中间皮细胞含量和ＢＣＧ－ＰＰＤ检测对结核性和恶性胸液的诊断价值。方法：间皮细胞检测采用载玻片姬比染色法，ＢＣＧ－ＰＰＤ采用皮内注射 ，同时检测１０６例结核性胸液和６１例恶性胸液患者。结果：结核性胸液组，间皮细胞明显减少（〈０．０２）或消失者占８５．５％，ＢＣＧ－ＰＰＤ强阳性占７６．１４％；癌性胸液的间皮细胞〉０．０５者占８３．７％，ＢＣＧ－ＰＰＤ阴性占７０．８４％。两项同     

多耐药基因在乳腺癌组织中的表达及价值

目的：观察多药耐药基因（MDR1）及其编码的糖蛋白（P－gp）在乳腺癌组织中的表达及临床价值。方法：选取病历资料完整的乳腺癌根治术乳腺组织标本84份,使用S－P 法免疫组化法染色检测P－gp、谷光甘肽S转移酶（ GST－π）及热休克蛋白（ HSP70）、p53的表达情况,采用Kendall＇s taub相关性分析P－gp、p53、GST－π、及HSP70、p53之间协同表达关系。结果：P－gp 表达阳性率为50％（42／84）,HSP70表达阳性率为61．9％（52／84）,p53表达阳性率为52．4％（44／84）,GST－π表达阳性率为40．5％（34／84）;相关性分析显示,GST－π与P－gp无协同表达（r＝0．146,P＞0．05）,HSP70与p53有协同表达（r＝0．626,P＜0．05）,p53与P－gp有协同表达（r＝0．763,P＜0．05）;P－gp表达对对乳腺癌10年生存率有明显影响。 COX模型乳腺癌预后多因素分析表明,年龄因素、GST－π表达均不具有独立的预后意义;临床分期、组织学分级、P－gp 表达、p53表达、HSP70表达均具有独立的预后意义。结论：同时检测MDR1、HSP 7、p53和GST－π的表达,可为乳腺癌临床耐药性的判断提供更为全面的信息。     

喉鳞癌中C—myc基因表达与预后

研究喉鳞癌中Ｃ－ｍｙｃ基因表达与预后的关系。方法应用免疫组织化学ＡＢＣ法检测６４例喉鳞癌、１０例喉乳头状瘤、６例喉正常粘膜组织中Ｃ－ｍｙｃ基因的表达。结果１．Ｃ－ｍｙｃ在上述３种组织中表达率分别为７０％、３０％、０％,差别有显著性（Ｐ＜０．０１）;２．Ｃ－ｍｙｃ表达与喉鳞癌ＴＮＭ分期、颈淋巴转移及５年生存期相关（Ｐ＜０．０５）。结论Ｃ－ｍｙｃ在喉上皮中的分布与其恶性程度相关,Ｃ－ｍｙｃ表达可作为喉鳞癌病情进展和预后不良的客观指标。     

肿瘤的热休克蛋白90-肽复合物诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞的体外研究

目的探讨肿瘤组织来源的热休克蛋白90-肽复合物(HSP90-PC)诱导产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的作用。方法高压液相色谱法分离纯化肾腺癌患者肿瘤组织HSP90-PC,同时从该患者外周血扩增树突状细胞及T细胞,以提取的HSP90-PC冲击树突状细胞,将致敏的树突状细胞与T细胞混合,流式细胞仪检测特异性CD8^* CTL的增殖情况。结果肿瘤组织来源的HSP90-PC致敏的树突状细胞可显著诱导T细胞增殖生成CD8^* CTL。结论从肿瘤组织中提取的HsP90-PC具有良好的免疫原性,用其致敏的树突状细胞可有效诱导CTL增殖,从而为肿瘤的免疫治疗提供了新的方法和依据。     

异种黑色素细胞疫苗诱导小鼠抗恶性黑色素瘤免疫反应的机理研究

目的　研究异种黑色素细胞疫苗诱导小鼠抗恶性黑色素瘤免疫反应的机理。方法　制备异种黑色素细胞疫苗 ,免疫小鼠。采用间接 EL ISA法检测小鼠抗肿瘤抗体滴度及抗体亚型 ,纯化免疫球蛋白及进行体外抗肿瘤增殖 ,采用 Western blot法分析交叉抗原蛋白质。接种恶性黑色素瘤 ,观察肿瘤生长 ,采用免疫细胞去除法分析NK细胞及 T细胞亚群对疫苗抑瘤效应的影响。结果　异种疫苗免疫后 2周小鼠体内出现抗自身肿瘤抗体 ,产生的抗体以 Ig G为主 ,抗体认别的猪眼黑色素细胞及恶性黑色素瘤细胞交叉抗原为相对分子质量达 180× 10 3的蛋白质 ,纯化的免疫球蛋白在体外能抑制恶性黑色素瘤细胞增殖。异种疫苗诱导特异性保护性免疫反应使 90 %小鼠恶性黑色素瘤生长受到抑制 ,去除 NK细胞不影响疫苗抑瘤效应 ,去除 CD4 + T细胞使疫苗抑瘤效应消失 ,去除CD8+ T细胞 70 %小鼠恶性黑色素瘤生长仍受到抑制。结论　异种黑色素细胞疫苗诱导特异性体液免疫及细胞免疫反应 ,抑制恶性黑色素瘤的生长 ,CD4 + T细胞在这一过程中发挥了关键性作用。     

肿瘤热休克蛋白70—多肽复合物诱导特异性细胞毒T淋巴细胞产生 …

OBJECTIVE: To investigate the killing effect of cytotoxic T lymphocytes (CTLs) induced with heat shock protein-peptide complexes (HSP-PC70) derived from tumor cells. METHODS: Cell culture, flow cytometric analysis, affinity chromatography for protein extraction and purification, SDS-PAGE, Western blotting, CTL induction and expansion, and LDH release were used. RESULTS: 63.5% of the HcaF cells expressed HSP-PC70 on their membrane by FCM analysis under physiological condition, and the expression was 75.5% of the stressed cells (P < 0.01). HcaF cells had high HSP70 expression and inducibility. The cytotoxic activity of the CTLs induced with HSP70 obtained by affinity chromatography from HcaF cells was 84.2%, 47.9% and 14.8% respectively at E/T ratio of 50 : 1, 25 : 1 and 12.5 : 1. The CTLs were CD8 positive T cells. All mice which received CTL injection got long period survival (over 90 days, P < 0.01), compared with control group (10.6 days). CONCLUSION: HSP-PC70 derived from tumor cells has strong immunogeneicity, and can activate CTLs with high peculiarity and killing activity. HSP-PC70 induced CTL adoptive immunotherapy can be a promising treatment for human to fight cancers.     

重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵及其免疫学活性

目的:实现重组人黑色素瘤抗原MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌的高密度发酵,并测定MAGE3/HSP70融合蛋白在体内的抗肿瘤免疫效应. 方法:利用自控发酵罐发酵,采用溶氧反馈,分批补料的方法对MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌进行了高密度发酵,从菌体中纯化MAGE3/HSP70融合蛋白,并用所纯化的MAGE3/HSP70融合蛋白免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了融合蛋白激活机体细胞免疫反应的状况. 结果:高密度发酵取得成功,发酵菌中MAGE3/HSP70融合蛋白的表达量与摇瓶中的相当,摸索出发酵水平纯化MAGE3/HSP70融合蛋白工艺,ELISPOT和LDH显示MAGE3/HSP70可以激活机体免疫反应,并产生针对MAGE3的CTL,特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞. 结论:MAGE3/HSP70融合蛋白工程菌成功实现高密度发酵,MAGE3/HSP70融合蛋白可以有效激活机体免疫反应,产生针对特异性抗原MAGE3的CTL,免疫学活性良好,为新型抗肿瘤疫苗临床前研究奠定了良好基础.     

热休克蛋白70在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义

目的:观察热休克蛋白70(HSP70)在人骨肉瘤组织中的表达。方法:采用免疫组化SP法检测55例骨肉瘤组织,其中骨母细胞型24例,软骨母细胞型20例,纤维母细胞型11例,以及30例正常骨组织中HSP70的表达情况。结果:HSP70在正常骨组织与骨肉瘤组织中的表达率分别为20%(6/30)及96.4%(53/55),平均阳性细胞率分别为0.53%和95.57%,两者差异具有统计学意义(P<0.01),在骨母细胞型、软骨母细胞型与纤维母细胞型中阳性表达率分别为98.65%,92.37%,90.36%,三者之间差异无统计学意义。HSP70在骨肉瘤中的表达与病理分级有明显相关性(P<0.05),与临床分期无关(P>0.05)。结论:HSP70在人骨肉瘤组织中高表达,可作为判断恶性程度的重要指标以及肿瘤免疫的重要靶位。     

sCD40L联合TB.HSP70-H22肽刺激树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的研究

目的 探讨受sCD40L与结核杆菌HSP70(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,TB.HSP70)-H22肽联合刺激的树突状细胞(dendritic cell,DC)在体内外的特异性抗肿瘤免疫.方法 取小鼠骨髓于培养第7天分为未刺激组、sCD40L组、TB.HSP70-H22肽组、sCD40L+TB.HSP70-H22肽组,共4组,分别给予相应干预,24 h后取上清,ELISA法检测IL-12、IL-10,流式细胞术检测CD40、CD80,混合淋巴细胞反应(MRL)检测淋巴细胞增殖,MTT法检测对肿瘤细胞的杀伤率;建立小鼠肝癌模型,完全随机分为5组(分别给予生理盐水和以上4种干预获得的DC干预),Ⅰ组:生理盐水对照组,Ⅱ组:未刺激DC治疗组,Ⅲ组:sCD40L DC治疗组,Ⅳ组:TB.HSP70-H22肽DC治疗组,V组:sCD40L+TB.HSP70-H22肽DC治疗组,于第21天测瘤质量,ELISA法测血清IL-10、IFN-γ.结果 sCD40L+TB.HSP70-H22肽组的各项指标与其他各组相比,IL-10显著降低,其他指标均显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).V组与其他各组相比,IL-10和瘤质量均显著降低,IFN-γ显著上升,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 受sCD40L与TB.HSP70-H22肽复合物联合刺激后的DC被充分激活,能诱导强有力的特异性抗肿瘤细胞免疫,对H22瘤细胞产生强大的杀伤作用,显著抑制肿瘤的生长.     

Prophylactic Antitumor Effect of Mixed Heat Shock Proteins/Peptides in Mouse Sarcoma

Background:

To develop a vaccine-based immunotherapy for sarcoma, we evaluated a mixture of heat shock proteins (mHSPs) as a vaccine for sarcoma treatment in a mouse model. Heat shock protein/peptides (HSP/Ps) are autoimmune factors that can induce both adaptive and innate immune responses; HSP/Ps isolated from tumors can induce antitumor immune activity when used as vaccines.

Methods:

In this study, we evaluated the effects of mHSP/Ps on prophylactic antitumor immunity. We extracted mHSP/Ps, including HSP60, HSP70, GP96, and HSP110, from the mouse sarcoma cell lines S180 and MCA207 using chromatography. The immunity induced by mHSP/Ps was assessed using flow cytometry, ELISPOT, lactate dehydrogenase release, and enzyme-linked immunosorbent assay.

Results:

Of S180 sarcoma-bearing mice immunized with mHSP/Ps isolated from S180 cells, 41.2% showed tumor regression and long-term survival, with a tumor growth inhibition rate of 82.3% at 30 days. Of MCA207 sarcoma-bearing mice immunized with mHSP/Ps isolated from MCA207 cells, 50% showed tumor regression and long-term survival with a tumor growth inhibition rate of 79.3%. All control mice died within 40 days. The proportions of natural killer cells, CD8⁺, and interferon-γ-secreting cells and tumor-specific cytotoxic T-lymphocyte activity were increased in the immunized group.

Conclusions:

Vaccination with a polyvalent mHSP/P cancer vaccine can induce an immunological response and a marked antitumor response to autologous tumors. This mHSP/P vaccine exerted greater antitumor effects than did HSP70, HSP60, or tumor lysates alone.     

Therapeutic efficacy of tumor-derived heat shock protein 70 immunotherapy combining interleukin-2 on tumor-bearing mice

Ｔｕｍｏｒ ｄｅｒｉｖｅｄＨＳＰ70ｃａｎａｃｔｉｖａｔｅＣＤ8+ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ (ＣＴＬ)ａｎｄｍｏｕｎｔｓｐｅｃｉｆｉｃｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅａｇａｉｎｓｔｔｕｍｏｒ Ａｓａｓｐｅｃｉｆｉｃｔｕｍｏｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＨＳＰ70ｈａｓｓｈｏｗｎｐｒｏｍｉｓｅａｇａｉｎｓｔｔｕｍｏｒｓｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｏｆｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ＩＬ 2ｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｃｅｌｌｆａｃｔｏｒｔｏｒｅｇｕｌａｔｅｉｍｍｕｎｉｔｙｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａ…     

结核杆菌热休克蛋白70刺激表位在融合基因疫苗中的佐剂作用

目的：探讨结核杆菌热休克蛋白70（mtHSP70）的刺激表位在肝细胞癌相关抗原661（HCA661）融合基因疫苗pCI-HCA661-mtHSP70中的佐剂作用,为提高基因疫苗的免疫效果提供依据。方法：18只BALB/c小鼠随机分为pCI-neo组、pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组,每组6只,分别肌肉注射100μg空质粒pCI-neo、重组质粒pCI-HCA661-mtHSP70C和pCI-HCA661-mtHSP70E,流式细胞术分析小鼠脾T细胞亚群变化;ELISA法检测体外培养脾细胞上清中干扰素γ(IFNγ)的含量及免疫小鼠血清中HCA661特异性抗体的滴度;体外特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤试验观察融合基因疫苗对肿瘤细胞的抑制作用。 结果：pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+T淋巴细胞的百分比和CD4+/CD8+比值与pCI-neo组比较差异有统计学意义（P<0.05）;pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组的CD3+、CD4+百分比和CD4+/CD8+比值均高于pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组,差异有统计学意义（P<0.05）;在抗原肽刺激下,pCI-HCA661-HSP70E免疫组小鼠脾细胞培养上清中IFNγ含量较pCI-mtHCA661-HSP70C免疫组明显提高（P<0.05）;pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组和pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组IFNγ含量均高于pCI-neo组(P<0.05)。pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组诱导的HCA661特异性抗体水平较pCI-HCA661-mtHSP70C免疫组显著增高（P<0.05）;pCI-HCA661-mtHSP70E免疫组可以产生更强的CTL抗肿瘤效应。结论：mtHSP70刺激表位可以诱导机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答,发挥更强的佐剂作用。     

高表达热休克蛋白70鼠脑胶质瘤细胞瘤苗的体内抗瘤作用

目的观察高表达热休克蛋白70（HSP70）鼠脑胶质瘤细胞（C6细胞）瘤苗在体内的抗瘤效应.方法以SD大鼠为动物模型,采用热休克、β榄香烯、丝裂霉素单独或联合诱导制备不同高表达HSP70表达率的细胞瘤苗.各实验组注射不同HSP70蛋白表达率的瘤苗进行免疫,对照组注射1640培养液;C6细胞皮下注射,观察皮下胶质瘤成瘤率及成瘤大鼠的生存期,分析HSP70蛋白表达率与抗瘤效应间的关系.结果经C6细胞瘤苗免疫大鼠较对照组皮下胶质瘤成瘤率下降,成瘤大鼠平均生存期明显延长,平均生存期与瘤苗的HSP70表达率呈正相关,应用单克隆抗体封闭瘤苗的HSP70表达则此作用消失.结论应用高表达HSP70的C6细胞瘤苗明显延长载瘤大鼠生存期.瘤苗免疫大鼠的抗瘤作用是由HSP70介导的.