高肺血流性肺动脉高压大鼠模型改良

目的:为高肺血流性肺动脉高压的机制研究建立更稳定的实验动物模型.方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、常规分流组、改良分流组,每组20只.假手术组予开腹夹闭腹主动脉5min;常规分流组和改良分流组均行腹主动脉—下腔静脉穿刺分流术.对穿刺分流术的穿刺口缝合方式进行改良,常规分流组穿刺口予荷包缝合,改良分流组对穿刺口行四...     

大鼠高肺血流性肺动脉高压形成中肺血管结构的变化

目的探讨大鼠高肺血流性肺动脉高压形成中肺血管结构的动态变化规律.方法80只雄性SD大鼠,随机分为分流组和对照组,每组40只.分流组大鼠经腹主动脉-下腔静脉穿刺术建立高肺血流动物模型,对照组大鼠除不作穿刺术外,其余手术过程同分流组.两组分别在术后1、3 d及1、4、8周经右心插管法测量肺动脉收缩压(SPAP)、肺动脉平均压(MPAP);取心脏组织,称量右心室与左心室 室间隔重量之比[RV/(LV SP)];取肺组织制作光学显微镜及电子显微镜标本,在光镜下观察肺小动脉中肌型动脉(MA)、部分肌型动脉(PMA)及非肌型动脉(NMA)构成比例及MA的相对中膜厚度(RMT)和相对中膜面积(RMA)的变化,电镜下观察肺小动脉超微结构的变化.结果与对照组比较,SPAP和MPAP在分流组术后1、3 d及4周时差异无显著性,分流术后1、8周时,SPAP、MPAP均显著高于对照组(P＜0.01);分流术后8周,RV/(LV SP)显著升高(P＜0.05);与对照组比较,分流术后1、3 d及1周时MA、PMA、NMA占肺小血管总数的百分比在两组之间差异无显著性,分流术后4、8周时大鼠MA、PMA占肺小血管总数的百分比明显增高(均P＜0.01),而NMA百分比明显降低(均P＜0.01);RMT、RMA在分流术后1、3 d及1、4周与对照组比较差异无显著性;分流术后8周时明显增高(P＜0.05).肺小动脉超微结构在分流术后3 d时仅为内皮细胞肿胀、体积增大;分流术后1周时,除内皮细胞结构改变外平滑肌细胞增大、内弹力层厚薄不均;分流术后4周时平滑肌细胞与内弹力层呈垂直生长,由收缩表型向合成表型转化;分流术后8周时细胞间见胶原纤维堆积.结论肺血管结构重建呈现明显的时间依赖性,内皮细胞肿胀出现最早,平滑肌结构改变次之,最后出现细胞外基质异常堆积.     

辛伐他汀对大鼠高肺血流所致肺动脉高压的干预研究

目的:观察高肺血流导致肺动脉高压时肺血管病理改变,并了解辛伐他汀(Simvastatin)对肺动脉高压的干预作用。方法:对大鼠行腹主动脉-下腔静脉分流术,建立高肺血流所致肺动脉高压的动物模型,给予辛伐他汀2mg.kg-1.d-1干预11周后进行肺动脉压力测定,检测肺小动脉百分比,肺中、小型肌性动脉血管壁肌层厚度占外径的百分比(WT%)、血管壁肌层面积占血管总面积的百分比(WA%)以及肺动脉血管阻塞得分(vascular occlusionscore,VOS),并与正常组和对照组比较。结果:辛伐他汀能较好地降低肺动脉压力,降低肺肌性动脉百分比,降低WT%和WA%并能较好地阻止肺动脉血管阻塞。结论:辛伐他汀对高肺血流导致的肺动脉高压有较好的干预作用。     

高肺血流性肺动脉高压大鼠中CTGF表达及法舒地尔的干预作用

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)在高肺血流性肺动脉高压大鼠模型中的表达及法舒地尔对其的调控作用.方法 将75只Wistar大鼠分为对照组、2个分流组和2个分流+法舒地尔干预组,每组15只.对照组于第4周测量右心室平均收缩压(RVSP)、2个分流组和2个分流+法舒地尔干预组分别于第2周和第4周测量RVSP.采用Western blot法和免疫组化检测各组肺动脉中CTGF、转化生长因子β1(TGF-β1)的含量以及Rho激酶的活性.结果 分流组大鼠第2周及第4周肺动脉明显增厚(P<0.01)、重塑,RVSP增加(P<0.01),CTGF及TGF-β1表达增加(P<0.01),且Rho激酶活性增强(P<0.01).应用法舒地尔干预后,肺动脉Rho激酶活性明显降低(P<0.01),且CTGF和TGF-β1在肺动脉中的表达较分流组明显降低(P<0.01)、肺血管重塑较分流组显著减轻(P<0.01).结论 CTGF,TGF-β1参与了高肺血流性肺动脉高压的发病过程,且Rho激酶信号转导通路对肺血管的重塑及CTGF,TGF-β1的表达有着重要的调控作用.     

Adeno-p53转染对高肺血流肺动脉高压大鼠的影响

目的 探讨腺病毒介导野生型p53基因转染对高肺血流肺动脉高压大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞的影响.方法 60只大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、实验组和实验对照组,每组15只.模型对照组、实验组和实验对照组采用套管法连接右侧颈总动脉和颈外静脉建立高肺血流肺动脉高压大鼠模型.空白对照组仅做假手术暴露颈总动脉处理.采用气管吸入法转染携带野生型p53基因的腺病毒(Adeno-p53)至实验组,同法转染重组腺病毒载体(Adeno-lacZ)至实验对照组,病毒保存液转染至空白对照组和模型对照组.采用Western blot法分析p53基因的表达;采用右心导管测压法测定各组大鼠右室平均压(mRVP)、肺动脉平均压(mPAP);肺组织HE染色观察肺小动脉形态学改变,计算管壁厚度与血管外径比值(WT％)、凋亡指数(AI)等,评价野生型p53基因转染对大鼠肺动脉压力及平滑肌细胞凋亡的影响.结果 实验组大鼠成功转染Adeno-p53后,大鼠mRVP、mPAP、RVHI、WT％低于其他三组(P＜0.05),肺动脉平滑肌细胞AI高于其他三组(P＜0.05).结论 Adeno-p53基因转染能在一定程度上缓解高肺血流型大鼠肺动脉高压的发展,其机制可能与野生型p53基因可以诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡的增加有关.     

辛伐他汀对高肺血流并野百合碱注射大鼠肺动脉高压模型的影响

目的 观察辛伐他汀对高肺血流并野百合碱注射大鼠肺动脉高压模型的影响.方法 采用腹主动脉-下腔静脉造瘘联合野百合碱注射制作肺动脉高压动物模型.40只大鼠随机平均分为安慰剂组、辛伐他汀A组[1 mg/(kg·d)]、辛伐他汀B组[2 mg/(kg·d)]和正常对照组.造瘘术后第37d各组分别测量平均肺动脉压力(mPAP)和右心室肥厚程度[RV/(LV S)],观察肺小动脉血管厚度,比较无肌性动脉肌化程度,比较血清总胆固醇(CHOL)浓度.结果 同正常对照组相比,安慰剂组大鼠的mPAP[(24.6±3.2) vs (13.9±1.4) mmHg,1 mmHg=0.133 kPa]、RV/(LV S)[(0.456±0.071) vs (0.245±0.026)]升高(P＜0.05),肺小动脉血管厚度增加[(28.64±5.95)% vs (9.36±2.24)%,P＜0.05],无肌性血管肌化百分比增加[(66.25±9.32)% vs (17.67±3.62)%,P＜0.05)].辛伐他汀治疗减轻了安慰剂组各项指标的增加(P＜0.05).各组间血清CHOL浓度差异无统计学意义.结论 辛伐他汀通过抑制大鼠肺小血管重构,减轻肺动脉高压的形成,提示辛伐他汀可能对左向右分流型先心病具有一定的治疗前景.     

亚硝酸钠对大鼠高肺血流肺动脉高压的治疗作用及可能机制

探讨亚硝酸钠(NaNO₂)对肺动脉高压大鼠的血流动力学改善效果及其作用机制。采用清洁级成年SD雄性大鼠通过腹主动脉-下腔静脉分流手术,建立高肺血流肺动脉高压大鼠模型,对照组(仅采取假手术)。治疗组给予NaNO₂灌胃(3 mg/kg,1次/天,连续3周),模型组和对照组仅给予等量生理盐水灌胃;对比各组的心肺功能及血浆、肺组织中NO水平和肺组织中NF-κB、TGF-β1、VEGF蛋白的表达。结果显示,与模型组和对照组相比,NaNO₂干预3周后,治疗组大鼠的肺血流、肺动脉压具有显著的降低作用,并可减轻肺动脉血管及右心脏重构,其作用机制可能与降低肺组织中NF-κB、TGF-β1、VEGF及增高NO水平有关。     

高肺血流性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌中钙敏感受体表达和血浆中H2S含量的检测及其意义

目的：检测钙敏感受体（CaSR）在高肺血流性肺动脉高压（PH）大鼠肺动脉平滑肌中的表达水平及血浆中H₂S含量,阐明两者在PH形成机制中的作用。方法：18只雄性SD大鼠随机分为对照组和PH组,对照组大鼠行单纯开胸,PH组大鼠行左肺切除手术。饲养35 d后,应用右心导管法分别测定各组大鼠肺动脉平均压（PAMP）,检测右心室/ 体质量(RV/ BW) 和右心室/左心室+室间隔［RV/（LV+S)］ 比值,光学显微镜观察肺血管结构的变化,分光光度法检测血浆H₂S含量,应用实时荧光定量PCR方法检测大鼠肺动脉平滑肌细胞CaSR mRNA的表达水平。结果：PH组大鼠PAMP、RV/ BW及RV/ (LV + S) 比值均明显高于对照组（P<0.05）,光镜下肺小血管肌化程度明显增强,肺中、小肌型动脉相对中膜厚度明显增加（P<0.05）。PH组大鼠肺动脉平滑肌细胞CaSR mRNA的表达水平较对照组明显增高（P<0.05）;PH组大鼠血浆中H₂S含量较对照组明显降低（P<0.05）。大鼠肺动平滑肌细胞CaSR mRNA的表达水平与血浆H2S含量呈负相关(r=－0.931,P<0.05)。结论：高肺血流时肺动脉平滑肌细胞CaSR mRNA表达的改变可能通过改变内源性H2S的产生参与PH的形成。     

高葡萄糖促进人内皮细胞NOX4表达

目的 观察高葡萄糖刺激HUVECs时NOX4表达水平的变化.方法 倒置显微镜下观察人脐静脉内皮细胞形态;用免疫组织化学法检测人脐静脉内皮细胞Ⅷ因子相关抗原的表达;实验设对照组(给予含生理浓度葡萄糖的基础培养液培养)、高葡萄糖组(30 mmol/L葡萄糖处理16 h)和 DPI干预组(30 mmol/L葡萄糖加10 μmol/L的NADPH氧化酶抑制剂DPI处理16 h),用RT-PCR检测NOX4 mRNA水平.结果 HUvECs中Ⅷ因子相关抗原表达为阳性;高葡萄糖组的HUVECs中NOX4 mRNA表达上调与对照组相比差异有显著性;而DPI干预组的HUVECs中NOX4 mRNA表达与对照组相比差异无显著性.结论 高葡萄糖能促进HUVECs中NOX4 mRNA表达,DPI能抑制HUVECs中NOX4 mRNA表达.     

吡非尼酮下调NOX4减轻由博来霉素诱导的小鼠肺纤维化

目的 观察NOX4在博来霉素诱导的小鼠纤维化肺中的表达及其意义,探讨PFD对NOX4表达的影响。方法 72只C57健康雌性小鼠采用数字表法随机分为PFD干预组(A组)、模型组(B组)、正常对照组(C组)3组,每组各18只。采用气管内注入博来霉素(3.5mg/kg)的方法构建小鼠肺纤维化模型。小鼠肺组织行病理切片HE和Masson染色,检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组织化学方法检测NOX4在肺组织中的表达。结果 Masson染色显示:造模后B组于第7天、第14天、第28天3个时间点肺纤维化评分较C组均增加(P<0.05);A组肺纤维化评分较B组降低(P<0.05)。造模第7、14、28天3个时间点B组肺组织Hyp含量较C组均增高(P<0.05);A组肺组织Hyp含量较B组减低(P<0.05)。免疫组化显示造模第7、14、28天3个时间点B组小鼠肺组织均可见在气道平滑肌细胞、上皮细胞、肺泡上皮细胞,以及血管平滑肌细胞、内皮细胞,肺成纤维细胞中NOX4广泛的强表达;C组NOX4表达较B组弱(P<0.05);A组NOX4表达较B组减弱(P<0.05)。结论 NOX4在肺组织广泛表达,其表达上调可能与博来霉素诱导的肺纤维化形成相关。PFD可下调NOX4表达,提示NOX4有望成为治疗肺纤维化的新靶点。     

CGRP通过抑制p38MAPK/ NOX4通路保护

目的 观察降钙素基因相关肽（CGRP）对氧化应激损伤血管内皮细胞的保护作用及其对p38 MAPK/NOX4信号通路的抑制作用。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）,外源性给予过氧化氢（H₂O₂）或血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）作为氧化刺激因素,CGRP作为保护剂处理细胞。噻唑蓝比色法（MTT）观察HUVECs活力;流式细胞仪（FCM）观察分析HUVECs增殖指数的改变; Western Blot和Real-time PCR分别检测p38 MAPK、NADPH氧化酶4 （NOX4）蛋白和mRNA的表达。 结果 500 μmol/L H₂O₂或100 nmol/L AngⅡ能浓度依赖性地降低HUVECs活力和增殖指数（PI）;CGRP可以显著增加HUVECs活力和及其PI。同时,H₂O₂、AngⅡ均能诱导p38 MAPK磷酸化,并能上调NOX4蛋白和mRNA表达,p38 MAPK阻断剂能部分增强CGRP抑制AngⅡ或H₂O₂诱导的NOX4的表达。 结论 CGRP对内外源性的氧化应激损伤HUVECs的保护机制可能与抑制p38 MAPK/NOX4信号通路有关。     

肺动脉内皮细胞在急性肺栓塞致肺动脉高压中作用的研究进展

急性肺栓塞(acute pulmonary thromboembolism,APTE)是呼吸系统中常见病、多发病及高病死率的疾病。急性肺栓塞发生时由于栓子阻塞肺动脉或神经体液导致血管痉挛,致使肺血管床面积骤减,引发肺血管阻力增加及肺动脉高压(pulmonary artery hypertension,PAH),严重者导致右心功能不全,最终发展成慢性肺源性心脏病(chronic cor pulmonale,CCP)。肺动脉高压是APTE发展成慢性肺源性心脏病的关键环节,其中血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)在其发病机制和治疗方面,起着十分重要作用。     

Hydrogen sulfide induces apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cell in rats with pulmonary hypertension induced by high pulmonary blood flow

Background Abnormal apoptosis of pulmonary artery smooth muscle cells （PASMCs） is an important pathophysiological process in the pulmonary artery structural remodeling and pulmonary hypertension. We investigated possible effect of endogenous hydrogen sulfide （H2S） on apoptosis of PASMCs during the development of pulmonary hypertension induced by high pulmonary blood flow. Methods Thirty-nine male Sprague-Dawley rats were randomly assigned to 4-week control, 4-week shunt, 4-week shunt＋propargylglycine （PPG）, 11-week control, 11-week shunt and 11-week shunt＋sodium hydrosulfide （NariS） groups. Rats in 4-week shunt, 4-week shunt＋PPG, 11-week shunt and 11-week shunt＋NariS groups underwent an abdominal aorta-inferior vena cava shunt. Rats in 4-week shunt＋PPG group were intraperitoneally injected with PPG, an inhibitor of endogenous H2S production, for 4 weeks. Rats in 11-week shunt＋NariS group were intraperitoneally injected with NariS, a H2S donor, for 11 weeks. Lung tissue H2S was evaluated by sulfide-sensitive electrode. Apoptosis of PASMCs were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labelling （TUNEL）. Expressions of Fas, bcl-2 and caspase-3 in the PASMCs were analyzed with immunochemical staining. Results Four weeks after the shunting operation, the apoptosis of PASMCs and expression of Fas and caspase-3 were significantly decreased （P 〈0.01）, but expression of bcl-2 increased significantly （P 〈0.01）. PPG administration further inhibited the apoptosis of PASMCs, downregulated the expression of Fas and caspase-3 （P 〈0.01）, but increased the expression of bcl-2 （P 〈0.01）. After 11 weeks of shunting operation, the apoptosis of PASMCs and expression of Fas and caspase-3 were significantly decreased （P 〈0.01）, but expression of bcl-2 increased obviously （P 〈0.01）. NariS administration significantly increased the apoptosis of PASMCs, upregulated the expression of Fas and caspase-3, but inhibited the expression of bcl-2. Conclusions H2S induces the apoptosis of PASMCs in the development of high pulmonary blood flow-induced pulmonary hypertension by activating the Fas pathway and inhibiting the bcl-2 pathway.     

慢性阻塞性肺疾病患者氧化应激与血清基质金属蛋白酶9的关系及其在并发肺动脉高压中的作用

目的 研究慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者氧化应激与血清基质金属蛋白酶9（MMP-9）的关系及其在并发肺动脉高压（PAH）中的作用.方法 对62例COPD患者采用多普勒超声心动仪测定肺动脉收缩压（PASP）,按PASP将患者分为单纯COPD组（PASP正常）、轻度PAH组、中度PAH组、重度PAH组;同期另择体检健康者19例作为对照组.采用ELISA法检测并比较各组研究对象尿8-异前列腺素F2α（8-iso-PGF2α）和血清MMP-9水平,分析COPD并发PAH者尿8-iso-PGF2α水平与血清MMP-9水平的相关性.结果 中度PAH组及重度PAH组尿8-iso-PGF2α及血清MMP-9水平均明显高于对照组、单纯COPD组及轻度PAH组（均P＜0.05）,轻度PAH组MMP-9水平明显高于对照组（P＜0.05）,各组间其他两两比较均无明显差异（均P＞0.05）.相关性分析结果显示,COPD并发PAH者,尿8-iso-PGF2α水平与血清MMP-9水平呈显著正相关[r=0.372,P=0.009）.结论 COPD患者尿8-iso-PGF2α和血清MMP-9水平升高与并发中-重度PAH密切相关,通过影响肺血管重建起作用;COPD患者氧化应激增加可促使MMP-9合成和分泌.     

过氧化物还原酶蛋白家族与疾病

过氧化物还原酶（ Peroxiredoxins , Prxs）属于抗氧化蛋白超家族,广泛存在于原核生物和真核生物中。作为抗氧化剂, Prxs蛋白含有能够氧化H2 O2的活性半胱氨酸位点,能够清除正常组织和细胞内的活性氧,保护细胞抵抗氧化应激。Prxs蛋白与氧化应激相关疾病都有着密切联系。文中就Prxs蛋白家族及其与肿瘤等相关疾病的研究进展作一综述,以期为临床相关疾病的诊断及治疗提供新的思路。     

氧化应激在低压缺氧性肺动脉高压形成中的作用

目的观察低氧对血清中活性氧（ROS）水平的影响,探讨氧化应激在低压缺氧性肺动脉高压形成中的作用。方法将24只Wistar大鼠随机分为平原对照组（C组）,缺氧组（H组）,N-乙酰半胱氨酸组（N组）,缺氧＋N-乙酰半胱氨酸组（H＋N组）。建立低压缺氧模型21 d后,测定其右心室收缩压（RVSP）和平均肺动脉压（mPAP）;HE染色观察各组大鼠的肺动脉壁厚度;比色法测定血清中ROS的含量。结果与C组相比,H组RVSP、mPAP明显升高（均P〈0.05）,HE染色示H组肺动脉壁增厚,且血清中ROS水平明显升高（P〈0.05）;给予ROS清除剂NAC后,RVSP及mPAP降低,肺血管重塑减弱。结论低氧时氧化应激参与了低压缺氧性肺动脉高压的形成。     

硫化氢供体对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺血管结构及血管活性多肽的影响

目的探讨硫化氢供体对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺血管结构重建及血管活性多肽的影响。方法将32只雄性SD大鼠随机分为分流组、分流 硫氢化钠(NaHS)组、假手术组和假手术 NaHS组,每组8只。对分流组和分流 NaHS组大鼠行腹主动脉-下腔静脉穿刺建立高肺血流动物模型;假手术组及假手术 NaHS组大鼠仅开腹后暴露腹主动脉和下腔静脉,不作动静脉之间的穿刺。手术完毕,分流 NaHS组和假手术 NaHS组大鼠腹腔内注射NaHS〔56μmol/(kg·d)〕,分流组及假手术组每天腹腔内注射等量生理盐水。分流11周后,测定肺动脉收缩压(SPAP)、计算右心室/左心室 室间隔重量之比〔RV/(LV SP)〕;光镜下计算肺小血管中肌型动脉(MA)百分比及肌型动脉的相对中膜厚度(RMT);电镜下观察其超微结构变化;采用敏感硫电极法测量大鼠血浆中硫化氢(H2S)含量;应用非平衡法放免试剂盒检测大鼠血浆中内皮素(ET-1)、心钠素(ANP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、肾上腺髓质素原N端肽(PAMP)的含量。结果分流11周后,大鼠血浆H2S水平比假手术组明显降低(P<0·01),SPAP升高48·63%(P<0·01),RV/(LV SP)升高21·95%(P<0·01)。MA及RMT比假手术组明显升高(P<0·01),分流组大鼠肺小动脉内皮细胞肿胀、脱落,内弹力层不规则,平滑肌细胞呈合成表型。血浆ET-1、ANP、CGRP、PAMP比假手术组明显升高(均P<0·01)。H2S供体NaHS干预后,分流大鼠血浆H2S含量明显升高(P<0·01),SPAP降低19·82%(P<0·01),RV/(LV SP)降低7·3l%(P<0·01),MA及RMT比分流组明显降低(P<0·01),肺血管超微结构明显改善,血浆ET-1、ANP、CGRP含量明显降低(均P<0·01),血浆PAMP含量明显升高(P<0·01)。结论硫化氢生成下降是高肺血流性肺动脉高压和肺血管结构重建形成的机制之一,H2S对高肺血流性肺动脉高压大鼠血管活性多肽ET-1、ANP、CGRP及PAMP具有重要的调节作用。