血管抑素基因转染联合化疗药物对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的治疗作用

目的研究血管抑素(angiostatin)基因转染联合化疗药物顺铂对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的协同治疗作用及其相关机制。方法使用人卵巢癌细胞株SKOV3建立人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型。将荷瘤裸鼠随机分为4组,分别注射空质粒PcDNA3、angiostatin/PcDNA3、化疗药物顺铂、angiostatin/PcDNA3 顺铂,质粒用脂质体DOTAP介导转染细胞。观察各组动物的腹水量及腹腔荷瘤量,检测各组肿瘤组织中angiostatin的表达和微血管密度,利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果联合治疗组裸鼠的腹水量(P<0.01)及腹腔瘤负荷(P<0.005)均显著低于其他实验组;肿瘤组织中angiostatin蛋白局部高表达,微血管密度显著低于其他实验组(P<0.01),细胞凋亡指数显著高于其他实验组(P<0.05)。结论Angiostatin基因联合化疗治疗人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤可以产生协同抑制作用,多途径联合用药是提高疗效的有效方法之一。     

奥曲肽抑制人卵巢癌细胞增殖的研究

目的：研究奥曲肽（OCT）对人卵巢癌细胞株SKOV3的影响。方法：建立人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤模型,分成空白对照组、OCT组、顺铂组及OCT与顺铂联用组4组,分别予生理盐水、OCT、顺铂及两药联用处理,处死裸鼠后肿瘤标本采用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：各用药组瘤重、瘤体积、VEGF的表达均低于空白对照组（P〈0.05）。结论：OCT能抑制体内人卵巢癌细胞株SKOV3生长。     

内皮抑素基因治疗对癌性腹水抑制效应研究

目的 探讨内皮抑素基因对癌性腹水的治疗作用,并观察与化疗药物顺铂(DDP)联合应用的疗效。方法 利用已构建的腺病毒载体介导的内皮抑素基因,在体外转染sKOV3肿瘤细胞,观察其对人脐静脉内皮细胞的抑制,在小鼠腹腔内注射腺病毒载体介导的内皮抑素基因,观察其在体内的表达情况,在两个不同的小鼠肿瘤腹水模型腹腔中注射腺病毒载体介导的内皮抑索基因,观察其对腹水形成、腹膜渗透性、新生血管形成及肿瘤细胞作用,以及对小鼠生存期的影响等,并比较与化疗药物顺铂联合应用的疗效。结果 ①体外重组内皮抑素蛋白抑制内皮细胞生长,在1：8稀释倍数时内皮细胞抑制率达到50％以上;②腺病毒载体介导的内皮抑素基因在小鼠体内能够表达,在注射第3d血清表达量最高,达1921ng／m1;③使用内皮抑素基因治疗组小鼠的腹水量,腹膜渗透性受到明显抑制,腹水中的红细胞、癌细胞、血管内皮生长因子水平明显减少,腹水中的凋亡细胞明显增多,肿瘤组织内微血管密度明显减少,小鼠的生存期明显延长。内皮抑索基因治疗与化疗联合应用进一步加强这一种治疗效果。结论 内皮抑素基因治疗有望成为治疗癌性腹水的一种新方法,与化疗联合应用可以加强这种治疗效果。     

贝伐珠单抗联合紫杉醇+顺铂对晚期卵巢癌腹腔积液患者腹水中VEGF和CA-125水平的影响

目的 探讨贝伐珠单抗联合紫杉醇+顺铂对晚期卵巢癌腹腔积液患者腹水中血管内皮生长因子(VEGF)、癌抗原-125(CA-125)水平的影响.方法 选取2017年1月至2019年11月于本院接受治疗的82例晚期卵巢癌腹腔积液患者作为研究对象,按照随机数字表法分为两组,各41例.对照组行紫杉醇+顺铂化疗,研究组在对照组基础上联合贝伐珠单抗治疗.比较两组临床疗效、腹水中VEGF和CA-125水平及不良反应发生情况.结果 研究组治疗总有效率高于对照组,腹水中VEGF、CA-125水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应发生率比较差异无统计学意义.结论 晚期卵巢癌腹腔积液患者接受贝伐珠单抗联合紫杉醇+顺铂治疗,可有效提高化疗效果,清除腹腔积液,降低腹水中VEGF、CA-125水平,且不增加不良反应,值得临床推广运用.     

小片段RNA干扰提高人卵巢癌耐药细胞对化疗药物的敏感性研究

目的采用针对多药耐药基因MDR1的小片段RNA(siRNA)转染人卵巢癌耐药细胞株,了解转染后能否提高细胞对化疗药物的敏感性。方法用脂质体将合成针对MDR1的siRNA转染具有MDR1高表达的人卵巢癌泰素耐药细胞株OVCAR8/TR,并用ATP生物发光法检测转染前、后细胞对顺铂、5-氟脲嘧啶、阿霉素和泰素4种化疗药物敏感性的变化。结果OVCAR8/TR细胞对顺铂、阿霉素和泰素均耐药,转染后细胞能够明显提高通过P-gp转运药物泰素和阿霉素的敏感性,泰素对细胞的抑制率由转染前的26%提高到78%,阿霉素对细胞的抑制率则由转染前的37%提高到58%,对顺铂的耐药性则没有改变。单用脂质体转染组的药敏结果与未转染组差异无统计学意义。结论siRNA干扰能够逆转人卵巢癌化疗药物的多药耐药,提高对化疗药物的敏感性。     

多西紫杉醇、草酸铂静脉联合顺铂腹腔化疗晚期卵巢癌合并腹水30例临床观察

目的探讨多西紫杉醇、草酸铂全身化疗联合顺铂腹腔化疗晚期卵巢癌合并腹水的疗效和毒性。方法30例晚期卵巢癌合并腹水患者采用多西紫杉醇、草酸铂全身化疗联合顺铂腹腔化疗两个周期后，按照WHO规定并参照国内评定方法评价疗效。结果30例晚期卵巢癌合并腹水患者总有效率25例（83.3％），主要毒性反应为骨髓抑制、消化道反应、脱发等。结论多西紫杉醇、草酸铂全身化疗联合顺铂腹腔化疗近期效果显著，毒副反应较小，可作为晚期卵巢癌合并腹水患者的一种有效治疗方法。     

姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索

目的研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理。方法用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物〔顺铂(DDP),紫杉醇〕及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率。RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA)mRNA的表达。结果不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48h后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疗药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P<0.05)。顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3 KCA mRNA的表达降低(P<0.05)。结论姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3 KCA基因的表达。     

顺铂联合γ射线对裸鼠卵巢癌腹腔播散的抑制作用

目的；观察顺铂联合γ射线对卵巢癌腹腔播散的抑制作用。方法；采用裸鼠卵巢癌腹腔播散模型，用顺铂和γ射线照射进行治疗。结果：低剂量顺铂单独和联合γ射线可部分抑制，而高剂量顺铂联合γ射线可完全抑制卵巢癌的腹腔播散。结论：顺铂联合γ射线有协同抗卵巢癌的作用。     

妇科肿瘤

缺氧诱导因子-1α及血管生长因子与晚期卵巢浆液性癌腹膜播散和预后相关性分析；PTEN蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿及卵巢子宫内膜样癌组织中的表达及临床意义；1，25（OH）2D3联合顺铂对卵巢癌细胞株HO8910增殖及Skp2／P27蛋白表达的影响；紫杉醇与奥沙利铂联合化疗治疗晚期卵巢上皮性癌的临床观察；卵巢透明细胞癌70例临床分析     

虫草素及虫草多糖对结直肠癌转移的预防作用和调控血管内皮生长因子表达的研究

目的观察虫草素、虫草多糖单独用药或联合铂类化疗药物对结肠癌转移的预防作用以及对血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响。方法 25只BALB/c裸鼠经腹腔注射接种结肠癌细胞株SW1116(5×106个细胞)24 h后,分为虫草素组、虫草多糖组、顺铂化疗组、联合用药组(虫草素+顺铂)和空白对照组5组,分别予喂饲和(或)腹腔注射给药。持续3周后,采用颈椎脱臼法处死裸鼠。观察各组裸鼠的致瘤总数、腹腔内肿瘤结节直径以及各脏器转移情况。取腹腔肿瘤结节作病理切片,苏木精-伊红(H-E)染色后置于光学显微镜下观察。应用透射电子显微镜观察细胞超微结构,并检测细胞凋亡状况。采用免疫组织化学法观察肿瘤细胞VEGF的表达情况。结果顺铂化疗组、联合用药组的腹腔内肿瘤结节数均显著低于空白对照组(P值分别为0.007、0.001),联合用药组与顺铂化疗组间的差异无统计学意义(P>0.05),虫草组与虫草多糖组间的差异亦无统计学意义(P>0.05)。联合用药组肿瘤结节的直径显著小于其余4组(P值均<0.05),顺铂化疗组肿瘤结节的直径显著小于虫草素组及空白对照组(P值均<0.05),虫草多糖组肿瘤结节的直径显著小于空白对照组(P=0.0...     

免疫重建荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立

目的：建立免疫重建的荷人卵巢小鼠腹腔移植模型。方法：用人外周血淋巴细胞（PBL悬液腹腔注射建立有免疫功能的严重联合免疫缺陷（SCID）鼠模型3只;用人PBL和人卵巢癌细胞株SKOV3细胞腹腔注射建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 SCID鼠模型3只,观察其生物学、免疫学特性。结果：每组免疫重建小鼠成瘤比例为3／3。免疫重建均检测到人IgG 存在,与未重建组比较差异有显著意义（P＜0．05）;免疫重建荷瘤鼠主要成瘤在腹腔,分布于肝下素、腹膜、横膈、肠系膜等部位,与未重建组比较,成瘤减少;原代移植瘤细胞形态、CA125表达与SKOV3细胞相似,但透射电镜观察到早期细胞凋亡表现;组织学观察到成片淋巴细胞浸润。结论：免疫重建荷人卵巢癌SCID鼠腹腔移植模型已初步建立,本模型较好地模拟了在免疫功能情况下人卵巢癌腹腔播散的生物学行为,为卵巢癌治疗的临床前研究提供了较理想动物模型。     

人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的建立

目的　探讨建立人卵巢癌顺铂耐药细胞裸鼠腹腔转移模型的方法。方法　人卵巢癌细胞株 3AO和顺铂耐药细胞株 3AO/cDDP细胞体外培养。 4× 10 6个 3AO、3AO/cDDP分别接种于裸鼠腹腔 96h后 ,各随机分为 2组 ,分别腹腔内注射生理盐水和顺铂 (cDDP) ,观察各组裸鼠的致瘤率、生存期和生存延长率。采用流式细胞技术观察转移瘤LRP、MRP基因的表达情况。转移瘤瘤体行病理学检查。结果　 3AO、3AO/cDDP细胞的裸鼠致瘤率差异无显著性 ,P >0 .0 5 ;cDDP能提高 3AO荷瘤鼠的生存期及生存延长率 ,与 3AO/cDDP荷鼠相比 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ;3AO/cDDP转移瘤的LRP、MRP基因的表达水平显著高于 3AO转移瘤 ,P <0 .0 5 ;病理学检查提示裸鼠腹腔转移瘤细胞具人恶性特征。结论　该方法建立裸鼠卵巢癌腹腔转移模型具有成瘤率高的特点 ,并能保持顺铂耐药特征。     

荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立

目的 :建立荷人卵巢癌细胞株 SKOV3严重联合免疫缺陷小鼠 (SCID)动物模型。方法 :SCID鼠腹腔注射人 SKOV3卵巢癌细胞 1× 10 7个 /只 ,饲养在无特定病原体环境中 ,观察其生物学特性。结果 :实验组 3只 SCID小鼠腹腔内均见肿瘤生长 ,并形成以横膈、肠系膜、肝周、腹膜为主的转移灶 ,其中 1只肺部有镜下转移灶。移植后肿瘤细胞在形态、生长、分泌 CA12 5功能方面均与原细胞株保持一致。结论 :建立的荷人 SKOV3卵巢癌 SCID鼠腹腔移植模型能较好地模拟人卵巢癌腹腔播散的生物学特征。     

癌性腹水的抗血管生成基因治疗研究

目的：探讨内皮抑素基因治疗在癌性腹水中的治疗作用。方法：在两个不同的小鼠肿瘤腹水模型腹腔内注射腺病毒载体介导的内皮抑素基因，观察其对腹水形成、腹膜的渗透性、肿瘤细胞的作用，以及对小鼠生存期的影响等。结果：用内皮抑素治疗组小鼠的腹水、腹膜的渗透性受到明显抑制，腹水中肿瘤细胞数明显减少，小鼠的生存期明显延长。结论：内皮抑素基因治疗有可能成为一种新的癌性腹水的治疗方法。     

重组人血管内皮抑素联合放疗对CNE1鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤生长及其VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达的影响

目的探讨重组人血管内皮抑素（恩度）联合放疗对人鼻咽癌细胞株1（CNE1）鼻咽癌裸鼠移植瘤的生长及血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA表达的影响。方法建立人鼻咽癌细胞裸鼠模型,成瘤后随机分为4组,对照组、恩度组、放疗组和恩度＋放疗联合组,分别进行恩度与放疗干预,观察各组移植瘤的生长速度和瘤体大小的变化。4周后处死裸鼠摘取瘤体,应用RT-PCR检测各组瘤体组织中的VECF、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达变化。结果联合组对鼻咽癌移植瘤的生长有显著抑制作用,且明显强于其他三组（均P〈0.05）;联合组中VECF、MMP-2和MMP-9的表达与另外三组相比均显著下调（均P〈0.05）;VEGF与MMP-2及MMP-9的表达呈正相关（均P〈0.01）。结论恩度联合放疗能明显抑制CNE1鼻咽癌移植瘤的生长,恩度对鼻咽癌裸鼠抑制瘤具有放疗增敏作用,这种作用可能与VEGF、MMP-2和MMP-9表达下调有关。     

氧化应激促进大肠癌发展

目的：探讨氧化应激对结肠癌细胞的影响及其在肿瘤发展中的作用。方法：将裸鼠分为4组,经腹腔内接种结肠癌细胞SW1116后,使用不同的药物处理：第1组：0.9%NaCl;第2组：0.9%NaCl＋rhuMAb-VEGF;第3组：0.9%NaCl＋H2O2;第4组：0.9%NaCl＋H2O2＋rhuMAb-VEGF;均于第1天,第3天/周腹腔注射,共6周。6周后处死动物,观察腹腔内肿瘤生长及腹水情况,对肿瘤组织中H2O2、VEGF及微血管密度检测。结果：与第1组相比,加入H2O2的第3组裸鼠,大部分动物（9/10）的腹腔内,包括大网膜、肠系膜上,布满明显增多大小不一的白色肿瘤结节,伴有大量腹水形成及肝、脾、胰腺转移;肿瘤组织中H2O2、VEGF明显增高,微血管密度增大;经rhuMAb-VEGF处理后,第2组与第1组相比肿瘤生长情况及腹水形成情况差异无统计学意义,第4组与第3组相比肿瘤生长及腹水形成情况明显减少,腹水及肿瘤、瘤周组织中H2O2、VEGF明显降低,微血管密度变小。结论：H2O2模拟的氧化应激可促进结肠癌细胞的生长和浸润,在大肠肿瘤的发展中具有促进作用,H2O2促进VEGF表达增加是其作用的机制之一。抗VEGF有望成为大肠癌的辅助治疗方法。     

整体可视化卵巢癌原位及转移动物模型的建立

目的建立整体可视化卵巢癌原位及转移动物模型,实时观察卵巢癌发展、转移的规律。方法将pEGFP-N1表达质粒转染入人卵巢癌细胞株HO-8910中,建立稳定表达绿色荧光蛋白(EGFP)的卵巢癌细胞株pEGFP-N1/HO-8910,裸鼠皮下接种pEGFP-N1/HO-8910细胞,利用肿瘤细胞表达EGFP的特点,借助整体荧光成像系统,并利用IPP5.0软件采集、分析卵巢癌细胞发出的荧光信号,实时观察卵巢癌细胞在裸鼠皮下的生长情况,利用卵巢癌外科原位手术移植方法建立卵巢癌原位及转移动物模型,应用病理学方法对卵巢癌原位及转移动物模型进行评价和鉴定。结果卵巢癌细胞pEGFP-N1/HO-8910稳定、高效表达EGFP。皮下接种pEGFP-N1/HO-8910细胞后,可以在动物活体外实时观察肿瘤的皮下生长情况,并进行定量分析,利用外科原位移植的方法建立的卵巢癌原位动物模型,成功率达到100%。手术后2周,裸鼠卵巢原位成瘤未发现有转移情况,6周后处死的裸鼠中,有2只(33.3%)发生腹腔转移(癌灶转移到了肠管),在这2只裸鼠中有1只同时出现肝转移。通过病理学方法验证了可视化模型的可靠性。结论整体可视化卵巢癌动物原位及转移模型是研究卵巢癌发展及转移的可靠有效的观察模型。     

重组腺病毒载体介导血管抑素基因治疗裸鼠卵巢癌的实验研究

目的 构建携带血管抑素(AG)基因K(1-3)重组复制缺陷型腺病毒表达载体,研究腺病毒介导的人血管抑素基因对卵巢癌的治疗作用.方法 (1)将人血管抑素K(1-3)cDNA插入穿梭载体pShuttle产生重组质粒pShttle-AG(K1-3),经双酶切与骨架载体pAdeno-X重组产生pAdeno-X-AG(K1-3),转染293细胞制备重组腺病毒.(2)建立人卵巢癌裸鼠动物模型,检测腺病毒介导的人血管抑素基因对肿瘤生长的抑制作用.结果 3个实验组中,Ad-AG(K1-3)组肿瘤的体积和重量显著小于PBS和Ad-LacZ组(P<0.01),而PBS和Ad-LacZ组之间肿瘤体积和重量差异无统计学意义(P>0.05).PBS组和Ad-LacZ组肿瘤组织中CD34及VEGF表达差异无统计学意义(P>0.05),与对照组相比Ad-AG(K1-3)组中CD34及VEGF表达明显降低(P<0.01).结论 成功包装出重组腺病毒介导的人血管抑素基因在体内、体外均高效表达,并明显抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的肿瘤血管生成和肿瘤生长,为其治疗卵巢癌的临床应用奠定了基础.