多核白细胞弹性蛋白酶对人角膜基质细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

目的观察多核白细胞弹性蛋白酶与白细胞介素-1α对人角膜基质细胞表达的MMP-2、MMP-9的影响,进而探讨角膜溃疡的发生机理。方法体外培养人角膜基质细胞,在培养液中添加或不添加多核白细胞弹性蛋白酶或白细胞介素-1α,培养5天,通过明胶酶谱分析的方法测定培养上清中的MMP-2和MMP-9的表达。结果体外培养的人角膜基质细胞无任何刺激下可释放MMP-2;白细胞介素-1α可加强并激活MMP-2的表达,同时可诱导MMP-9前体的释放;多核白细胞弹性蛋白酶在白细胞介素-1α诱导下可完全激活前体MMP-9转化为活化形式。结论多核白细胞弹性蛋白酶和白细胞介素-1α协同作用参与角膜溃疡的发生。     

单纯疱疹病毒性角膜炎潜伏期HSV-1 LATs功能研究

[目的]研究单纯疱疹病毒I型(Iaerpes simplex virus type 1,HSV-1)感染兔眼球以后潜伏相关转录体(Latency associated transeript,LATs)在兔角膜中的表达,探讨LATs的表达与单纯疱疹性角膜交之间的关系.[方法]将25μL滴度为1×106 U/mL HSV-l stockek病毒株接种于健康新西兰白兔的角膜上建立单纯疱疹性角膜炎动物模型,分别于角膜接种病毒后的d10、d60、d110取角膜片及患侧三叉神经节作PCR检测,分析潜伏期内HSV-1基因表达模式.[结果]未感染HSV-1的兔角膜中不表达LATs,HSv-1感染兔的早期即可诱导LATs在角膜中的表达,并且表达持续存在.[结论]HSV-1上调LATs在兔角膜中的表达,LATs在兔角膜中的表达与角膜炎的发生和发展密切相关.     

单纯疱疹病毒性脑炎模型中Toll样受体的表达及意义

目的:观察Toll样受体(TLRs)在单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型中的表达及意义。方法:小胶质细胞系BV2细胞接种1型单纯疱疹病毒(HSV-1)液,制作HSE细胞模型,实时荧光定量聚合酶链反应检测HSV-1感染组与对照组TLR2、TLR3、TLR9 mRNA转录水平。结果:感染组细胞TLR2、TLR3、TLR9 mRNA转录水平显著高于对照组(P0.01)。结论:小胶质细胞系BV2细胞受HSV-1刺激后可引起TLR2、TLR3、TLR9 mRNA转录水平升高,TLR2、TLR3、TLR9可能参与了BV2细胞对HSV的识别。     

多层羊膜移植术治疗感染性角膜溃疡35例围术期护理

目的:探讨多层羊膜移植术治疗感染性角膜溃疡的围术期护理方法.方法:对35例(35眼)药物治疗效果欠佳、行多层羊膜移植手术治疗的各类感染性角膜溃疡患者进行充分的术前准备和有效的术后护理.结果:随访3～18个月,9眼细菌性角膜溃疡、7眼单纯疱疹病毒性角膜溃疡、14眼真菌性角膜溃疡均有效控制了感染,角膜溃疡表面完全被上皮细胞覆盖,角膜形成局限性云翳、斑翳或白斑,角膜厚度基本正常,视力均有不同程度提高.1眼单纯疱疹病毒性角膜溃疡愈合后形成角膜瘢痕,视力降低.4眼真菌性角膜溃疡多层羊膜移植后,感染未能控制,最终行角膜移植.结论:及时的手术治疗配合科学、全面、合理的术前、术后护理是感染性角膜溃疡患者治疗成功的基本保证.     

HSV-1感染后小胶质细胞炎性因子分泌特点研究

目的：比较单纯疱疹病毒I型（HSV-1）感染小鼠和BV2细胞后,小胶质细胞分泌炎性因子的特征,探讨BV2细胞可否作为小鼠HSV-1性脑炎模型的小胶质细胞功能的模拟研究对象。方法：24只Ba1b／c小鼠分为正常组、HSV-1组、黄芪组及地塞米松组（激素组）各6只;BV2细胞分为同样4组。HSV-1组,黄芪组及激素组小鼠颅内注射HSV-1制造小鼠HSV-1性脑炎（HSE）模型,BV2细胞接种HSV-1制造细胞模型。造模成功后,黄芪组及激素组分别用黄芪及激素作用前后,RT-PCR法检查炎性因子（IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α及iNOS）mRNA浓度及细胞的变化。结果：BV2细胞与模型小鼠在病毒感染及相关药物作用前后,炎性因子具有一致的变化趋势。结论：BV2细胞和Balb／c小鼠脑组织具有相似的免疫反应特性,可作为研究单纯疱疹病毒性脑炎小鼠模型中小胶质细胞功能的模拟对象。     

单纯疱疹病毒性角膜炎42例临床分析

目的探讨单纯疱疹病毒性角膜炎的诊治及复发的预防。方法利用我院2年期间就诊的42例单纯疱疹病毒性角膜炎患者的分型上皮型和基质型，原发性和复发性的治疗情况进行回顾性分析总结结果对单纯病毒性角膜炎积极控制诱发因素及口服阿昔洛韦400mg，2次／d，持续1年，可减少复发率。结论单纯疱疹病毒性角膜炎是最常见的角膜溃疡，有反复发作的特点，又无有效控制复发的药物。     

基质金属蛋白酶2,9在高氧所致急性肺损伤实验中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶2,9(MMP-2,MMP-9)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用.方法将54只小鼠置于密闭的氧气室暴露于＞95%的高氧,另取18只小鼠置于呼吸室内(空气)作为对照组.分别于24,48和72 h取出小鼠评价肺损伤程度,以基质金属蛋白酶谱分析调查支气管肺泡灌洗液中MMP-2及MMP-9的释放及活性.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法测定肺组织MMP-2及MMP-9的表达及组织分布.结果高氧能引起急性肺损伤伴支气管肺泡灌洗液MMP-2及MMP-9释放及活性增加,RT-PCR结果显示高氧组动物肺组织MMP-2及MMP-9的mRNA表达增高,免疫组织化学研究显示MMP-2和MMP-9蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和炎性细胞的胞浆中,它们在气道上皮细胞的表达在高氧环境下明显升高.结论基质金属蛋白酶2,9在高氧所致的急性肺损伤过程中发挥重要作用.     

多种基质金属蛋白酶在高氧所致急性肺损伤中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶（MMPs）和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）在高氧所致急性肺损伤（ALl）发病中的作用。方法 72只小鼠按随机数字表法分为正常对照组和高氧24、48、72h组，每组18只。高氧组小鼠置于密闭的氧气室，暴露于体积分数〉98％的高氧；正常对照组小鼠呼吸室内空气作为对照组。分别于24、48和72h活杀高氧组小鼠，取肺评价肺损伤程度；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组化法测定肺组织MMP-2、MMP-9及EMMPRIN的mRNA和蛋白表达及组织分布。结果 高氧能引起ALI。RT—PCR结果显示，高氧组动物肺组织MMP-2、MMP-9及EMMPRIN的mRNA表达均增高；免疫组化研究显示，MMP-2和MMP-9蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和炎性细胞的胞浆中，EMMPRIN蛋白则主要表达于上述细胞胞浆和细胞膜上；它们在气道上皮细胞中的表达在高氧环境下明显升高。结论 高氧能引起ALI，伴MMP-2、MMP-9和EMMPRIN的表达增高，MMPs通过降解细胞外基质从而在高氧所致ALI过程中发挥重要作用。     

黄芪注射液治疗鼠单纯疱疹病毒性脑炎的实验研究

目的 探讨黄芪注射液对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)感染致病毒性脑炎的疗效及机制.方法 将60只小鼠随机分为对照组、模型组和黄芪治疗组,每组20只.建立HSV-Ⅰ感染致病毒性脑炎模型.观察各组小鼠的死亡率,检测小鼠血中自细胞介素-1β(IL-1β)、γ-干扰素(IFN-γ)、一氧化氮(NO)水平,电镜下观察小鼠神经细胞形态结构的变化.结果 电镜下HSV-Ⅰ感染后小鼠脑细胞胞质水肿明显,核仁固缩,核内结构破坏,多数线粒体呈空泡样改变,脊突破坏,髓鞘严重松解,核仁内可见病毒颗粒;IL-1β、IFN-γ、NO水平及小鼠的死亡率均较对照组明显上升(P均<0.01).黄芪注射液治疗后小鼠脑组织病理学改变减轻,死亡率及IL-1β、NO水平较模型组明显下降,而IFN-γ继续上升(P均<0.01).结论 早期应用黄芪注射液对单纯疱疹病毒性脑炎有一定的治疗效果,其作用机制可能是通过调节免疫应答,影响IL-1β、IFN-γ和NO等细胞因子的水平,从而减轻炎症反应.     

基质金属蛋白酶-9和肿瘤坏死因子α在大鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）在大鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义。方法：SPF级SD大鼠（180~220g）50只,随机分为空气对照组和光气暴露组。建立大鼠光气吸入性肺损伤动物模型,并分别于光气染毒后2、46、、8h采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定MMP-9mRNA在肺组织中的表达含量,酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中的TNF-α含量,同时对肺湿/干质量比,支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、中性粒细胞数以及肺组织病理学改变进行动态监测和对比分析。结果：与空气对照组相比,光气暴露组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润,随时间延长进一步加重。光气暴露组肺湿/干质量比值,BALF中蛋白含量、TNF-α含量、中性粒细胞计数均明显高于空气组（P〈0.05）;光气暴露各组MMP-9mRNA表达水平和BALF中MMP-9的表达明显高于空气对照组,随时间延长肺水肿加重（P〈0.01）。结论：基质金属蛋白酶的过度激活和表达及其与炎症因子相互影响在光气肺损伤过程中发挥重要的作用。     

单疱病毒性角膜炎的分型与治疗

[目的]评价Holland等提出的单疱病毒性角膜炎(HSK)新分类法在诊治HSK时的指导意义及皮质类固醇类药物在治疗HSK时的作用.[方法]对本院临床诊治的73例(92眼)HSK患者应用Holland等提出的新分类法进行分类,再根据不同类型的HSK在抗病毒治疗的基础上灵活应用皮质类固醇类药物进行治疗,观察其临床疗效.[...     

Role of matrix metalloproteinase-9 in angiogenesis caused by ocular infection with herpes simplex virus

In this report, we demonstrate that herpes simplex virus (HSV) infection of the cornea results in the upregulation of the matrix-degrading metalloproteinase enzyme MMP-9. This enzyme was shown to contribute to the neovascularization process that occurs in the corneal stroma in response to HSV infection. The likely source of MMP-9, at least initially after infection, was neutrophils that were signaled to invade the cornea soon after infection. Corneal infiltrating neutrophils were shown to express MMP-9, and preventing the neutrophil response with specific mAb diminished MMP-9 expression as well as the extent of angiogenesis. Further supporting a role for MMP-9 in HSV-induced corneal angiogenesis was the observation that inhibition of MMP-9 with the specific inhibitor TIMP-1 resulted in reduced angiogenesis. In addition, angiogenesis was diminished in ocularly infected MMP-9 knockout mice. Our results demonstrate that MMP-9 is involved in angiogenesis caused by HSV. Since angiogenesis appears to represent a vital step in the pathogenesis of herpetic stromal keratitis, these results indicate that targeting MMP-9 for inhibition should prove useful for the therapy of herpetic stromal keratitis.     

Diagnosing superinfection keratitis with multiplex polymerase chain reaction

Purpose

To report the potential usefulness of multiplex polymerase chain reaction (mPCR) for diagnosing superinfection keratitis caused by herpes simplex virus-1 (HSV-1), bacteria and fungus.

Interleukin 4 and T helper type 2 cells are required for development of experimental onchocercal keratitis (river blindness)

Inflammation of the corneal stroma (stromal keratitis) is a serious complication of infection with the nematode parasite Onchocerca volvulus. Because stromal keratitis is believed to be immunologically mediated in humans, we used a murine model to examine the role of T cells and T helper cell cytokines in the immunopathogenesis of these eye lesions. BALB/c mice immunized subcutaneously and injected intrastromally with soluble O. volvulus antigens (OvAg) developed pronounced corneal opacification and neovascularization. The corneal stroma was edematous and contained numerous eosinophils and mononuclear cells. Stromal keratitis in immunized mice was determined to be T cell dependent based on the following observations: (a) T cell-deficient nude mice immunized and injected intrastromally with OvAg fail to develop corneal pathology; and (b) adoptive transfer of spleen cells from OvAg-immunized BALB/c mice to naive nude mice before intrastromal injection of OvAg results in development of keratitis. OvAg-stimulated lymph node and spleen cell cytokine production was dependent on CD4 cells and included interleukin (IL)-4 and IL-5, but not interferon gamma, indicating a predominant T helper type 2 cell-like response. Inflamed corneas from immunized BALB/c mice and from reconstituted nude mice had greatly elevated CD4 and IL-4 gene expression compared with interferon gamma. Mice in which the IL-4 gene was disrupted failed to develop corneal disease, demonstrating that IL-4 is essential in the immunopathogenesis of O. volvulus-mediated stromal keratitis.     

羟基磷灰石表面修饰人工角膜钛支架的生物相容性

背景：纯钛作为安全的生物种植体材料已被用于制作俄罗斯钛人工角膜,但其临床使用中仍存在人工角膜移位、漏水、角膜组织融解或人工角膜排出等并发症。目的：观察经羟基磷灰石表面修饰人工角膜钛支架在碱烧伤兔角膜内的生物相容性。方法：将30只右眼角膜碱烧伤新西兰白兔随机分为3组,实验组于角膜基质层内植入经羟基磷灰石表面修饰的人工角膜钛支架,对照组于角膜基质层内植入人工角膜钛支架,空白对照组仅作角膜板层切口。结果与结论：所有支架在观察期内稳定存留,无角膜坏死融解及支架脱出发生。术后2,8周,实验组与对照组炎症细胞浸润数量明显高于空白对照组（P〈0.05）,16周后各组间炎症细胞浸润数量差异无显著性意义。术后2,8,16周,实验组角膜成纤维细胞数高于对照组和空白对照组（P〈0.05）。实验组支架表面有密集的角膜细胞及细胞外基质紧密抓附,支架与角膜组织愈合良好;对照组支架表面仅见少量角膜组织简单包裹,支架与角膜组织未真正愈合。表明羟基磷灰石表面修饰的人工角膜钛支架可在碱烧伤兔角膜组织中稳定存留,生物相容性较单纯钛支架提高。     

ICAM-1和MMP-9在足月及早产分娩中的作用研究

目的：研究细胞间粘附分子-1（ICAM1）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在足月及早产分娩发动前后孕妇子宫下段肌层中的表达,探讨ICAM1和MMP-9在足月及早产分娩中的作用。方法：用免疫组织化学SP法检测ICAM-1和MMP-9在足月及早产分娩发动前后各组孕妇子宫下段肌层中的表达。结果：足月及早产分娩发动组中ICAM-1在子宫下段肌层血管内皮细胞上的表达均显著强于分娩未发动组。MMP-9在分娩发动子宫下段间质中的表达也均显著强于分娩发动前。分娩发动后白细胞浸润间质较分娩发动前明显增加。结论：ICAM-1和MMP-9在足月及早产分娩发动中显著增加,它们在分娩发动中具有重要作用。早产发生机制与足月分娩发动相似,类似于急性炎症反应。     

液相蛋白芯片法测蜕膜细胞与滋养层细胞共培养体系中基质金属蛋白酶的表达

目的：探讨蜕膜基质细胞与绒毛外滋养层细胞共培养体系中细胞滋养层细胞侵入过程中基质金属蛋白酶表达水平的变化及在母胎界面间基质金属蛋白酶对细胞滋养层细胞侵袭行为的调控。 方法：实验于2005—09／12在南方医科大学南方医院生殖中心及病生实验室完成。①分别进行蜕膜基质细胞与绒毛外滋养层细胞的体外分离培养与纯化。②在Transwell—Col Insert细胞培养板内进行蜕膜细胞与滋养细胞体外共培养及直接混合培养。③利用Luminex xMAP对培养上清液中多种基质金属蛋白酶蛋白表达的含量变化进行分析。 结果：①与绒毛外滋养层细胞相比，基质金属蛋白酶1，3在共培养体系与混合培养体系中的表达依次升高，差异有显著性（P〈0．05），基质金属蛋白酶2，7，9在共培养体系与混合培养体系中的表达依次降低，差异有显著性（P〈0．05），且在共培养体系中以基质金属蛋白酶2，9表达尤为显著，基质金属蛋白酶8，12，13在各培养体系中均为低表达。②两种共培养体系中，除基质金属蛋白酶-13变化不显著外，其余基质金属蛋白酶均在Tranwell共培养体系下显著升高（P〈0．05）。④基质金属蛋白酶1，3，7，8两两之间正相关，基质金属蛋白酶2，7，9两两间正相关，相关关系均显著（P〈0．05），且关系较密切（r〉0.5548）。 结论：共培养条件下滋养层细胞侵入过程中基质金属蛋白酶量的变化及之间的相互关系与胚胎着床关系密切。     

超声乳化白内障吸除术后单纯疱疹病毒性角膜炎的诊疗观察

目的回顾分析超声乳化白内障吸除+人工晶体植入术后患单纯疱疹性角膜炎(HSK)患者的病例资料,对其诊疗进行总结归纳并分析探讨。方法 2009年4月至2010年4月眼科门诊随访超声乳化白内障吸除+人工晶体植入术的患者,术后发生HSK 4眼。诊断明确给予抗病毒药物及角膜修复药物治疗。结果 4只眼均为单眼发病,其中2眼合并2型糖尿病。1眼表现为角膜上皮点状缺损,3眼表现为树枝状角膜浸润,荧光素染色均为(+)。经抗病毒治疗7~21 d角膜修复,荧光染色(-)。随访3~6个月未见复发。结论尽管白内障术后HSK发生少见,但对合并糖尿病等全身抵抗力下降的患者,医师仍须警惕术后诱发HSK的可能。发现病毒感染后及时给予抗病毒治疗至关重要。