新疆地区汉族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的分析新疆地区汉族苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变规律和特点。方法用PCR产物直接测序法、基因芯片捕获和二代高通量测序技术对71例汉族PKU患儿及其父母的PAH基因启动子、第1~13外显子及其旁侧内含子等区域进行PAH基因突变分析,并与西北4省及日本、欧洲等进行比较。结果在新疆地区71例汉族PKU患儿142条PAH等位基因中检测出37种突变基因,总检出率为90.1%(128/142),且以错义突变(64.9%)、剪接位点突变(13.5%)、无义突变(13.5%)为主,大部分突变主要分布在第7、6、3、12、2、11外显子和第4内含子中,最常见的错义突变是R243Q(21.8%)、R53H(7.7%);最常见的剪接位点突变为EX6-96AG(6.3%)、IVS4-1GA(4.9%)和V399V(4.2%),最常见的无义突变为R111X(4.9%)、Y356X(4.9%)。新疆地区汉族PKU患儿R53H突变的检出率(7.7%)高于西北其他4省,且发现一PAH基因新突变P225S(c.673CT)。结论新疆地区汉族PKU患儿PAH基因突变构成接近于西北其他4省,而与欧洲、日本等完全不同,具有其独特保守的地域特征。     

中国西北地区汉族苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的 分析中国西北地区汉族苯丙酮尿症(PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(PAH )基因的突变特征.方法 应用PCR产物直接测序法对 2003 年 1 月-2019 年 8月在中国西北五省区新生儿疾病筛查中心或医学遗传中心确诊的223 例汉族PKU患儿及其父母的PAH基因启动子、第 1-13 外显子及其旁侧内含子区域进行基因突...     

新疆地区苯丙氨酸羟化酶基因外显子7的突变研究

目的研究分析新疆地区苯丙酮尿症（PKU）患者中苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因外显子7的突变特征。方法用PCR及单链构象多态性（SSCP）分析技术结合基因序列测定法，对37例PKU患者进行PAH基因外显子7突变筛查和鉴定。结果从37例PKU患者（共74条染色体）中，发现20条染色体等位基因异常，经测序鉴定共检出5种错义突变，即R243Q、L255S、E280G、E280K和P281L，等位基因突变检出率为27％。其中R243Q频率最高（18．9％），L255S次之（4．1％），而E280G、E280K和P281L仅为1．4％。在5种基因突变中，E280G为在国际上第2次发现，1255S、E280K和P281L为在国内第2次检出。维吾尔族群体也检出了2例突变，分别是P281L和R243Q，均为在本地区维吾尔族中首次报道。查阅国内外研究结果结合本结果分析后发现，R243Q是亚洲黄种人常见的突变体，P281L和E280K是欧洲及拉美等国较为普遍存在的突变型，而E280G与L255S则是具有中国特色的基因突变。结论新疆PKU基因突变类型及频率具有明显的地区特点，是我国与欧亚地区之间相互区别、又相互联系的一个较为特殊的PAH突变基因分布带，也是研究基因突变多样性、PAH基因异质性特点以及人类起源、迁徙等的理想资源地。     

内蒙古地区苯丙酮尿症苯丙氨酸羟化酶基因突变的检测

目的　了解内蒙古地区苯丙酮尿症 (PKU)病人苯丙氨酸羟化酶 (PAH)基因突变类型和频率。方法　采用聚合酶链反应 (PCR)扩增 ,单链构象多态性分析 (SSCP)、DNA直接测序的方法 ,对内蒙古地区 2 2个PKU家系PAH基因外显子 3、5、6、7、1 0、1 1、1 2 ,进行检测分析。结果　检出 1 0种苯丙氨酸羟化酶基因的点突变。R2 4 3Q (8/44 )、R2 5 2Q (1 /44 )、R2 6 1Q (1 /44 )、G2 39D (1 /44 )、IVS7nt(2 ) (1 /44 )、Y2 0 4C(5 /44 )、Y35 6X(6 /44 )、R4 1 3P(1 /44 )、R1 1 1X(1 /44 )、Y1 6 1S(1 /44 ) ,经检索国际PAH基因突变数据统计库 ,确认G2 39D(G→A)为首次发现的新突变。结论　R2 4 3Q、Y35 6X、Y2 0 4C是内蒙地区人群中PAH基因的主要突变位点。以Y35 6X的突变率明显高于、R4 1 3P低于北方人群为特征。     

宁夏地区回族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

目的了解宁夏地区回族苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变构成及特点。方法采用PCR产物直接测序的方法,测定18例回族苯丙酮尿症患儿PAH基因全部外显子及其启动子区域序列。结果在36个PAH等位基因中共检出24个突变等位基因,突变检出率为66.67%(24/36),包括14种突变类型,其中错义突变7种、无义突变4种、缺失突变2种、剪切位点突变1种。较为常见的突变类型有R243Q、R241C、S16fsX10、R111X、L430P,其余突变类型均为散在发生。查阅国外文献、专业网站及数据库发现S16fsX10、Y414X、S303fsX38是世界未见报道的新的PAH基因突变类型,L430P和D222G突变是国内未见报道的新突变。结论研究结果显示宁夏地区回族苯丙酮尿症患儿PAH基因突变表现出多样性、复杂性和特殊性,具有显著的民族特色。     

Ion Torrent PGM~(TM)测序仪检测苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变

目的评价Ion Torrent PGMTM测序仪检测苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶基因(PAH)突变的可行性。方法提取15例确诊为经典型PKU的患儿及其父母外周血DNA,对PAH全部外显子及外显子-内含子交界区进行PCR反应,用Ion Torrent PGMTM测序仪测序,再对检出突变的样本进行Sanger法验证。结果 Ion Torrent PGMTM平均覆盖深度为1 465倍,平均覆盖率为99.3%;共检出29个突变位点,分属17种突变,其中p.P292L为新发突变,所有检测结果均与Sanger法相一致。结论用Ion Torrent PGMTM测序仪可快速简便检测PKU患儿PAH基因突变。     

苯丙氨酸羟化酶基因突变研究进展

苯丙氨酸羟化酶(PAH)是由苯丙氨酸羟化酶基因编码,通过将苯丙氨酸转化为酪氨酸,参与苯丙氨酸的代谢,该酶主要存在于肝脏中。PAH基因突变导致PAH活性几乎缺如时,该酶不能将苯丙氨酸转化为酪氨酸,血液中苯丙氨酸含量     

连云港地区苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因突变谱的构建及其应用

目的分析连云港地区苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变特点,构建PAH基因突变谱,探讨PKU患儿基因型与表型的关系。方法用二代测序技术分析29例PKU患儿及其父母PAH基因第1~13外显子及两侧内含子序列,用AV值评分法进行基因型-生化表型的预测。结果 29例PKU患儿的58个等位基因中共检测出50个突变,检出率为86.2%,常见突变依次为R243Q(11/50,22.0%),R241C(4/50,8.0%)和V399V(4/50,8.0%);R169S和P292L为新发突变;通过基因型预测的生化表型与患儿实际生化表型的一致率为80.0%,其中经典型PKU的预测一致率为83.3%,患儿治疗前血苯丙氨酸水平与AV值评分呈显著负相关(r=-0.71,P0.05)。结论连云港地区PKU患儿PAH基因突变谱与其他地区有差别,基因型与表型之间具有相关性,对临床治疗具有重要指导意义。     

山东省30例苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因的突变分析

目的 研究山东省30例苯丙酮尿症患儿苯丙氨酸羟化酶基因的突变特点。方法 使用二代测序技术结合生物信息学分析手段检测PAH缺乏型苯丙酮尿症患者PAH基因的变异位点。结果 30例患者的60个PAH等位基因中共检测出53个PAH基因位点突变,检出率为88.3%。检测出的27种PAH基因的突变类型包括17种错义突变、4种无义突变、4种剪接突变、1种同义突变和1种移码突变。突变分布在第1-3、5-7、10-12号外显子和第4号、5号、7号、12号内含子上。其中热点突变为c.728G>A(24.53%)、c.721C>T(7.55%)和c.1238G>C(5.66%),新突变位点为：c.155T>G和c.621T>A。结论 山东省30例PKU患儿的PAH基因突变以错义突变为主,主要发生在第7号外显子上。研究检测出PAH基因的27个突变位点,包括2个新的突变位点,为苯丙酮尿症的产前诊断和机制研究提供依据。     

新疆少数民族苯丙酮尿症患者的突变基因分析

目的 探讨新疆少数民族苯丙酮尿症(PKU)患者的基因突变特征,为有针对性的防治策略提供科学依据.方法 采用单链构象多态性分析技术和PCR产物直接测序方法 ,检测12例少数民族PKU患者的苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因突变.结果 从12例维吾尔族、回族和哈萨克族PKU患者(24个PAH等位基因)中,检出13种基因突变,包括错义突变8种、无义突变1种、剪切位点突变3种,其中突变频率最高的是EX6-96A＞G和P281L,EX6-96A＞G常见于国内和亚洲地区,P281L多见于欧洲各地.突变频率较高的R243Q、R111X、R176X和F161S 4种突变中,其中R243Q是我国北方地区居首位的突变,R111X处于第3位.而R176X和F161S在世界范围内都极为少见,尤其F161S是具有中国特色的基因突变,是第2次在中国人中发现.结论 新疆少数民族中的PAH突变基因不仅与亚洲黄种人和欧洲及拉美人种表现出密切的联系,而且也存在着明显的差异,形成了自身独立的遗传规律和特点,是我国一个十分特殊的PAH突变基因分布区域.     

高分辨熔解曲线检测苯丙氨酸羟化酶基因突变的临床价值

目的 研究用HRM分析技术检测经典型PKU患者PAH基因突变的临床应用价值。方法采用HRM分析技术对17例经典型PKU患者PAH基因的13个外显子及外显子-内含子交界区域进行检测,并采用DNA测序验证HRM检测结果。同时评价HRM诊断PKU的敏感度和特异度。另外,对其中2个家系的风险胎儿进行产前诊断。结果采用HRM分析技术从17例经典型PKU患者中检出有2个致病突变的患者16例,检出有3个致病突变患者l例。同时检出194V(c.280A＞G)、IVS4nt-1G＞A(c.442-1G＞A)、R158Q(c.473G＞ A)、Q160X(c.478C＞ T)、W187X(c.561G＞ A)、E6nt-96A＞ G(c.611A＞ G)、G239D(c.716G＞ A)、R241C(c.721C＞ T)、R243Q(c.728G＞ A)、G247R (c.739C-＞ C)、G247V(c.740G＞ T)、R261X(c.781C ＞T)、R261Q(c.782G＞ A)、H264R(c.791A ＞G)、F302 fsX39(c.904delT)、E305K(c.913G＞ A)、G312V(c.935G＞ T)、Y356X(c.1068C＞A)、V399V (c.1197A ＞T)、R408Q(c.1223G＞ A)、T418P(c.1252A ＞C)、A434D(c.1301C＞ A) 22种致病突变;Q232Q(c.696G＞A)、V245V(c.735G＞ A)、L385L(c.1155C＞G)3种沉默突变;1种单核苷酸多态点rs2280615(c.402A＞ C)。其中194V(c.280A＞ G)、Q160X(c.478C＞ T)、H264R(c.791A ＞G)、G312V (c.935G＞T)和E305K(c.913G＞ A)为PAH基因新发现的突变。2例风险胎儿经产前诊断,1例未发现致病突变,1例诊断为携带者。HRM突变筛查经典型PKU的敏感度和特异度均为100％,其检测结果与DNA测序结果完全一致。结论HRM分析技术是一种简单、准确、快速、高通量、低成本的遗传学分析方法,可用于经典型PKU的PAH基因突变筛查,并可用于已知父母突变的经典型PKU家系快速产前诊断。     

Mutational spectrum of the phenylalanine hydroxylase gene in patients with phenylketonuria in the central region of China

Phenylketonuria (PKU, OMIM 261600) caused by phenylalanine hydroxylase (PAH) deficiency is an autosomal recessive disease that is characterized by abnormalities of phenylalanine metabolism. In this study, a total of 77 patients, originating from the central region of China and who were diagnosed with PAH deficiency at the third affiliated hospital of Zhengzhou University, were enrolled in this study. The 13 exons and 12 flanking introns of the PAH gene were analyzed by Sanger sequencing and next generation sequencing. The sequencing data were aligned to the hg19, PAHvdb and HGMD databases to characterize the genotypes of PKU patients, and genotype–phenotype correlations and BH4 responsiveness predictions were performed using BIOPKUdb. In total, 149 alleles were characterized among the 154 PKU alleles. These mutations were located in exons 2–13, and intron 12 of the PAH gene, with a relative frequency of ≥5%, for EX6-96A>G, p.R241C, p.R243Q, p.V399V and p.R53H. Additionally, a novel variant, p.D84G, was identified. The genotype correlated with clinical symptoms in 33.3–100% of the cases, depending on the disease severity, and BH4 responsiveness predictions show that only five patients with MHP-PKU and one patient with Mild-PKU were predicted to be BH4 responsive. In conclusion, we have characterized the mutational spectrum of PAH in the central region of China and have identified a novel mutation. The hotspot mutation information might be useful for screening, diagnosis and treatment of PKU.     

血清苯丙氨酸、酷氨酸的高效毛细管电泳分析

目的 建立和完善用高效毛细管电泳（HPCE）快速测定血清中苯丙氨酸（Phe）和酪氨酸（Tyr）的方法。方法 用HPCE检测7例正常儿童和10例苯丙酮尿症息儿血清中苯丙氨酸和酪氨酸,用苯丙氨酸和酪氨酸标准液测定后绘制校正曲线,并使用高效液相色谱法（HPLC）对部分标本同步测定进行比较。结果 对HPCE实验条件和电泳条件进行优化和选择,最终采用：水浴温度50℃,水浴时间40min,硼酸钠缓冲溶液pH为9．8,分离电压28kV,分离温度15℃。苯丙氨酸迁移时间为6．8min,酪氨酸迁移时间为5．9min;用HPCE检测苯丙酮尿症患儿血清中Phe和Tyr的水平,与HPLC的检测结果差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 该方法快速、简便、准确、灵敏度高,为临床检测苯丙酮尿症提供了一种有效的方法。