P53对丝氨酸-苏氨酸激酶11-磷酸腺苷激活的蛋白激酶信号传导途径的影响

丝氨酸-苏氨酸激酶11(serine/threonine kinase11,LKB1)的胚系突变可以引起Peutz-Jeghers综合征(PJS)[1].PJS是一种常染色体显性遗传性疾病,其肿瘤的发生率是普通人群的10～18倍[2].研究结果显示,散发性肿瘤中LKB1突变罕见,但在非小细胞肺癌(NSCLC)中,LKB1的突变率可达30%.     

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11研究进展与糖尿病的关系

APN与IR呈负相关,是参与糖尿病发生发展的重要分子,而丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶11(STK11)编码蛋白—肝脏激酶B1(LKB1)是APN信号传导通路中的关键分子。LKB1蛋白通过激活一磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)等抑制炎症因子,在调节能量代谢和细胞增殖方面都具有一定作用。在糖尿病方面,STK11及LKB1蛋白具有延缓糖尿病及并发症发生发展的作用,近期研究发现,LKB1不但能调节β细胞功能,且影响α细胞胰升血糖素的分泌。本文对STK11及LKB1蛋白的结构、信号转导通路、生理作用及在糖尿病中作用的研究进展进行综述。     

磷酸腺苷激活的蛋白激酶与肝脏能量代谢

肝脏作为机体储存能量和调节代谢的重要器官,维持机体合成代谢和分解代谢的平衡。机体能量缺乏时,肝脏糖异生及糖原分解增强,脂肪酸氧化增加,为肝外器官提供充足能量;机体能量过剩时,肝脏增加糖原及脂质合成来储备能量。肝脏作为机体多种物质代谢的中心,代谢和能量平衡常在肝功能异常     

磷脂酰肌醇3激酶／丝氨酸-苏氨酸激酶信号通路与肾脏疾病

磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kimase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(v-akt murine thymoma viral oncogene homolog,Akt)通路是真核细胞关键的信号转导通路,在细胞凋亡、代谢、增殖及分化等生命活动中发挥着重要功能.近年来发现此通路与肾脏疾病关系密切,它在糖尿病肾病(DN)、狼疮性肾炎、多囊肾、肾脏缺血再灌注损伤等疾病的发病机制、诊断及治疗等方面的作用日益受到重视.     

2型猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶对细菌生物学特性的影响

猪链球菌是一种重要的人兽共患病病原菌,有33个血清型[1].2型猪链球菌致病力最强,可引起脑膜炎、关节炎、败血症等[2].信号转导系统对细菌应对外界复杂的环境变化有着重要的作用.本课题组前期在对2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组测序的研究中发现和真核生物同源的丝氨酸/苏氨酸激酶stk,利用同源重组原理成功构建了stk基因敲除突变株[3],本文进一步研究stk缺失后细菌生物学特性的变化.     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3′-激酶 丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3′K／Akt／FKHRL1通路的激活，对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系。方法2004-01-2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率，Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平，同时观察PI3′K／Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响。结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化。wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用，同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K／Akt通路，呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化。从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。wortmannin可以阻断PI3′K／Akt／FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3′-激酶丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3′K/Akt/FKHRL1通路的激活,对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系。方法2004-01~2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率,Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平,同时观察PI3′K/Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响。结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化。wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用,同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K/Akt通路,呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化,从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。wortmannin可以阻断PI3′K/Akt/FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶信号传导通路在慢性阻塞性肺疾病发展“快”“慢”表型中的作用差异研究

背景近年来磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号传导通路在慢性阻塞性肺疾病(COPD)炎性反应机制及抗炎治疗中的作用备受临床关注,但其在COPD"快""慢"表型中的作用差异尚不清楚。目的探讨PI3K/Akt信号传导通路在COPD发展"快""慢"表型中的作用差异。方法选取2017—2018年新疆医科大学附属中医医院呼吸科门诊或住院的COPD患者116例,其中发展"快"表型者26例(A组)、发展"慢"表型者90例(B组);另选取同期新疆医科大学附属中医医院体检中心体检健康者90例作为对照组。比较三组受试者PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)mRNA及蛋白相对表达量,血浆炎性细胞因子〔包括白介素4(IL-4)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)〕水平,肺功能指标〔包括第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%pred)、用力肺活量占预计值百分比(FVC%pred)、第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值(FEV1/FVC),改良英国医学研究学会呼吸困难指数(mMRC)评分,慢性阻塞性肺疾病评估测试量表(CAT)评分〕。结果 (1)A组和B组患者PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt mRNA及蛋白相对表达量高于对照组,B组患者PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt mRNA及蛋白相对表达量低于A组(P0.05)。(2)A组和B组患者血浆IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α水平高于对照组,B组患者血浆IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α水平低于A组(P0.05)。(3)A组和B组患者FEV1%pred、FVC%pred、FEV1/FVC低于对照组,mMRC评分和CAT评分高于对照组(P0.05);B组患者FEV1%pred、FVC%pred、FEV1/FVC高于A组,mMRC评分和CAT评分低于A组(P0.05)。结论 COPD发展"快"表型与PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt基因及蛋白表达上调有关;与COPD发展"慢"表型相比,COPD发展"快"表型患者肺功能更差,可能与PI3K/Akt信号传导通路调控炎性细胞因子有关。     

尿路上皮癌相关基因1对3T3-L1脂肪细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶信号通路的影响

目的：观察长链非编码RNA（lncRNA）尿路上皮癌相关基因1（UCA?1）对3T3?L1脂肪细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号通路及糖代谢的影响。方法通过转染UCA?1过表达质粒或UCA?1特异性siRNA干预3T3?L1脂肪细胞中UCA?1的水平,western blotting检测Akt信号通路相关蛋白磷酸化水平的变化,通过2?脱氧?3H?D?葡萄糖掺入法检测细胞的葡萄糖摄取能力。两组之间比较用t检验,多组之间比较采用单因素方差分析。结果随着3T3?L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,UCA?1的mRNA水平逐渐升高,第6天时为诱导前的（3.48±0.09）倍（t=12.093,P<0.01）;过表达UCA?1可增加3T3?L1脂肪细胞中Akt及FOXO1的磷酸化水平[分别为p?AKT（S473）：2338±59比1103±42;p?AKT（T308）：3565±45比1524±34,p?FOXO1：2190±31比912±21,t=16.390、13.025、10.544,均P<0.01];而利用特异性siRNA沉默UCA?1,可降低细胞中Akt及FOXO1的磷酸化水平[分别为p?AKT（S473）：540±34比1090±22;p?AKT（T308）：805±18比1409±26;p?FOXO1：459±31比2444±29,t=11.045、9.527、16.899,均P<0.01];未给予胰岛素刺激时,过表达UCA?1可增加细胞的葡萄糖摄取能力（2.21±0.09）倍（t=5.922,P<0.05）,沉默UCA?1可使细胞的葡萄糖摄取能力降低66%以上（t=5.557,P<0.05）;而给予胰岛素刺激时,过表达UCA?1可增加细胞的葡萄糖摄取能力（3.25±0.12）倍（t=5.709,P<0.05）,沉默UCA?1可使细胞的葡萄糖摄取能力降低77%以上（t=6.567,P<0.05）。结论 UCA?1可激活3T3?L1脂肪细胞Akt信号通路,并促进其葡萄糖摄取能力。     

阿霉素诱导磷脂酰肌醇3''''-激酶丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶FKHRL1通路对胃癌细胞化疗耐药性的影响

目的探讨阿霉素在胃癌细胞中诱导PI3'K/Akt/FKHRL1通路的激活,对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及两者的关系.方法 2004-01～2005-09武汉大学人民医院消化内科采用MTT比色法检测胃癌细胞的生存率,Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平,同时观察PI3'K/Akt抑制剂wortmannin对阿霉素诱导的上述变化的影响.结果阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,呈时间依赖性的诱导FKHRL1磷酸化.wortmannin可明显增强阿霉素的细胞生长抑制作用,同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达.结论阿霉素可能是通过激活SGC-7901细胞的PI3′K/Akt通路,呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化,从而影响胃癌细胞的化疗耐药性.wortmannin可以阻断PI3'K/Akt/FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性.     

磷酯酰肌醇-3-激酶、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶在2型糖尿病大鼠骨组织中的表达及意义

目的探讨磷酯酰肌醇-3-激酶（P13K）、丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt）在糖尿病大鼠骨组织中的表达及意义。方法将50只体重180—200g的6月龄雌性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组（n=24）和2型糖尿病组（n=26）。2型糖尿病组大鼠予高糖高脂饮食喂养8周后,腹腔注射链脲佐菌素30mg／kg,对照组大鼠正常饮食。糖尿病成模后12周两组大鼠分别行腰椎骨密度测定;应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测骨组织P13K、Aktl和Akt2mRNA的相对表达。组间比较采用t检验。结果对照组大鼠骨密度高于糖尿病组,差异有统计学意义[（0．079±0．034）比（0．060±0．017）g／cm2,t=2．499,P〈0．05];同时,对照组大鼠骨组织P13K、Aktl、Akt2mRNA均高于糖尿病组（分别为：0．65±0．05比0．51±0．04、0．756±O．031比0．694±0．017、0．77±0．04比0．66±0．04）,差异均有统计学意义（t=4．969、3．924、4．515,均P〈0．01）。结论2型糖尿病大鼠骨组织P13K、Aktl及Akt2表达低于正常,这可能是2型糖尿病骨质疏松发生的分子生物学机制之一。     

三磷酸腺苷对房室旁路和房室结传导的影响

目的评价三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对房室结及房室旁路传导特性的影响及剂量相关性,寻求最佳给药剂量。方法１０２例患者在窦性心律或心室起搏下股静脉快速推注ＡＴＰ０．１ｍｇ／ｋｇ（Ａ组）、０．２ｍｇ／ｋｇ（Ｂ组）、０．３ｍｇ／ｋｇ（Ｃ组）或生理盐水（Ｄ组）,观察其电生理效应和副反应。结果对房室旁路前向和逆向传导的影响在各组间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。对房室结前向和逆向传导的阻断作用,Ａ、Ｂ、Ｃ组与Ｄ组相比差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。Ａ、Ｂ、Ｃ各组间相比,仅Ａ、Ｃ组差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。副反应发生率与剂量呈正相关。推导ＡＴＰ剂量与药效、副作用关系的一元三次多项式回归方程,确定阻断房室结逆传ＡＴＰ最佳剂量为０．２５ｍｇ／ｋｇ。结论ＡＴＰ应用宜个体化、标准化,推荐从０．１ｍｇ／ｋｇ起逐渐加量,射频消融术后如０．２５ｍｇ／ｋｇ仍不能阻断室房逆传,应考虑房室旁路未断或另有其它房室旁路存在。     

巨噬细胞特异性敲除一磷酸腺苷激活依赖性蛋白激酶基因的小鼠模型构建

目的:构建巨噬细胞特异性敲除一磷酸腺苷激活依赖性蛋白激酶(AMPK)基因的小鼠模型,并观察对血压的影响。方法:利用胚胎显微注射法构建AMPKα1基因第3外显子两端携带loxP位点的小鼠模型,和集落刺激因子1受体启动子诱导表达Cre酶的小鼠模型,交配繁育出巨噬细胞特异性敲除AMPK的小鼠模型。鼠尾DNA做PCR鉴定基因型,腹腔注射他莫昔芬诱导敲除AMPK,Real-time PCR检测小鼠骨髓细胞AMPK RNA水平。检测Cre阴性小鼠注射与不注射他莫昔芬的血压差异,以及Cre阴性和阳性小鼠注射他莫昔芬5d后的血压差异。结果:鼠尾DNA PCR鉴定出AMPKα1 loxP为纯合阳性、且Cre为阴性或阳性的小鼠。与Cre阴性小鼠相比,他莫昔芬显著降低了Cre阳性小鼠骨髓细胞AMPK mRNA[(0.9263±0.1293)vs.(0.47±0.04657),P<0.017]。他莫昔芬对Cre阴性小鼠血压的影响不显著[收缩压(122.9±3.183)vs.(124±6.878) mmHg,1 mmHg=0.133 kPa,P=0.427],而AMPK敲除鼠血压显著低于对照组[收缩压(123.5±3.577)vs.(107.5±4.814)mmHg,P=0.037]。结论:成功构建巨噬细胞特异性敲除AMPK的小鼠模型,证实敲除鼠血压降低。     

缺血预处理对糖尿病在体大鼠心肌环磷酸腺苷及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶表达的影响

目的 探讨糖尿病大鼠心肌缺血预处理（IPC）后环磷酸腺苷（cAMP）及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶（PKA）表达的变化.方法 选取糖尿病与非糖尿病SD大鼠各30只,分为3组（n=10）：假手术（Sham）组,缺血再灌注（I/R）组及IPC组.比较各组血清肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、心肌梗死面积（MI）及心肌cAMP、PKA含量的变化.电镜标本观察心肌线粒体.结果 非糖尿病大鼠中,IPC组与I/R组比较,CK减少[（2428.32±170.19）vs（6324.06±356.26） U/L,P＜0.05],LDH减少[（1698.98±129.65）vs（4660.15±115.84） U/L,P＜0.05],CK-MB减少[（1450.43±23.56）vs（3280.90±71.33）U/L,P＜0.05],MI减少[（5.63±9.32）％vs（17.75±7.36）％,P＜0.05].糖尿病大鼠中,IPC组与I/R组比较,CK、LDH、CK-MB、MI未见明显缩小[（5962.63±145.22）vs（6012.13±124.08） U/L,（5998.44±123.40）vs（6023.54±89.01）U/L,（4011.13±81.09）vs（4380.71±76.21）U/L,（18.54±2.39）％vs（15.25±4.33）％,P＞0.05].非糖尿病大鼠中,IPC组与I/R组比较,cAMP增加[（0.61±0.07）vs（0.32±0.06） pmol/g,P＜0.05],PKA含量增加[（17.05±1.75）vs（12.68±1.13） pmol/（mg·min）,P＜0.05],糖尿病大鼠IPC组cAMP、PKA含量无明显增加[（0.35±0.04）vs （0.37±0.08） pmol/g,（12.14±2.15）vs（11.79±1.16） pmol/（mg·min）,P＞0.05].非糖尿病大鼠IPC组线粒体的损伤减轻,而糖尿病大鼠IPC组线粒体损伤未见减轻.结论 非糖尿病大鼠IPC可保护心肌.糖尿病抑制IPC的心肌保护作用,其机制可能与糖尿病大鼠心肌cAMP信号系统表达受抑制有关.     

替米沙坦通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶途径改善内皮祖细胞的功能活性

目的 研究替米沙坦对内皮祖细胞增殖、迁移、黏附等生物学活性的影响并探讨其可能机制.方法 利用密度梯度离心法分离、培养人外周血单个核细胞,经FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色鉴定为正在分化的内皮祖细胞.将分离、培养的内皮祖细胞分为对照组、替米沙坦组(0.1 μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)、过氧化体增殖物激活型受体γ抑制剂(GW9662)干预组和磷脂酰肌醇-3-羟基激酶抑制剂(Ly294002)干预组.采用MTT比色法、Transwell小室、细胞计数法观察各组内皮祖细胞增殖、迁移、黏附能力的变化情况.同时采用免疫蛋白印迹法观察替米沙坦处理内皮祖细胞后丝苏氨酸蛋白激酶及磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶的表达情况.结果 与对照组相比,替米沙坦组内皮祖细胞增殖、迁移、黏附能力显著提高,且在不同浓度组间呈剂量依赖性增强,而在过氧化体增殖物激活型受体γ抑制剂干预组和磷脂酰肌醇-3-羟基激酶抑制剂干预组,内皮祖细胞功能活性的改善受到明显的抑制.免疫蛋白印迹检测显示,相比于对照组,替米沙坦组磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶的表达水平明显增高,而在过氧化体增殖物激活型受体γ抑制剂干预组磷酸化丝苏氨酸蛋白激酶的表达相比于对照组未见明显增高.结论 替米沙坦具有促进内皮祖细胞增殖、迁移、黏附等功能的作用,其主要机制可能与过氧化体增殖物激活型受体γ介导的磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶信号通路激活有关.     

三磷酸腺苷给药途径对犬心律的影响

目的三磷酸腺苷(ATP)可抑制心脏搏动使心房造影清楚显示各个肺静脉,但是用药途径不同时对心脏会产生不同抑制效应.本研究主要探讨股静脉及左心房给药时对心搏的不同影响.     

三磷酸腺苷及腺苷对心电的影响

三磷酸腺苷（ATP）及腺苷有明显的心电生理作用。腺苷进入体内后与窦房结、房室结及心房、心室细胞膜上的腺苷A1受体结合,使动作电位时间缩短,阈值升高,进而达到抗心律失常的目的。由于腺苷半衰期短、代谢快、副作用小、使用方便,负性肌力作用虽弱但负性传导及负性变时作用较强,已成为终止阵发性室上性心动过速的一线用药。同时,     

重组人胰岛素样生长因子1对脑出血大鼠磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶及凋亡细胞的作用

目的探讨重组人胰岛素样生长因子1（rhIGF-1）对大鼠脑出血血肿周围区磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（p-Akt）及凋亡细胞的影响。方法健康雄性Wistar大鼠78只,随机将其分为假手术组（6只）、脑出血对照组（简称对照组,36只）、rhIGF-1干预组（简称干预组,36只）。对照组和干预组大鼠按照给予干预措施后的6个时间点再随机分为6个亚组：6、12 h组和1、2、4、7 d组,每个亚组为6只大鼠。采用Ⅳ型胶原酶立体定位法制备大鼠急性脑出血模型。干预组经尾静脉注射rhIGF-1（50μg/kg）,1次/d,直至实验结束。假手术组和对照组每天经尾静脉注射等量等渗盐水。各组在规定的时间取材,采用免疫组化方法观察血肿周围区p-Akt的表达;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）法检测凋亡细胞。结果①对照组大鼠和干预组大鼠的神经功能缺损评分在术后1 d或2 d达到最高,此后逐渐降低,干预组大鼠的评分仅在术后第7天时低于对照组,差异均有统计学意义,P〈0.05。②假手术组大鼠仅少量表达p-Akt阳性细胞。在6 h以外的其余各时间点,干预组大鼠的p-Akt阳性细胞数量均高于对照组,差异有统计学意义,P〈0.05。③假手术组大鼠仅少量表达TUNEL阳性细胞。在除6 h外的其余各时间点,干预组大鼠的TUNEL阳性细胞数量均低于对照组,差异均有统计学意义,P〈0.05。结论 rhIGF-1能减少脑出血后的细胞凋亡,改善神经功能缺损评分,其作用可能与p-Akt的激活有关。