XIAP在涎腺黏液表皮样癌中的表达及意义

目的检测X染色体连锁凋亡抑制蛋白(x-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)在涎腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达,探讨XIAP的表达在涎腺黏液表皮样癌发生发展中的作用。方法采用免疫组织化学法检测25例涎腺黏液表皮样癌中XIAP的表达,分析其与临床病例的关系。结果 XIAP在MEC中呈高表达,在正常涎腺组织中不表达或低表达;MEC和正常涎腺组织XIAP阳性检出率分别为84%(21/25)和0.00%(0/10)(P<0.01);XIAP表达与MEC组织病理分化程度呈正相关关系(P<0.05),而与肿瘤部位、临床分期、远处转移无相关性(P>0.05)。结论 XIAP在MEC中高表达,可能在MEC发生过程中具有重要的作用。     

β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1在涎腺多形性腺瘤及其恶变中表达的研究

目的：检测正常涎腺组织、多形性腺瘤（Pleomorphic adenoma,PA）和癌在多形性腺瘤中（Carcinoma in pleomorphic adenoma,CPA）β-连环蛋白（β—catenin）和细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的表达情况及其表达间的相关性,探讨β—catenin、Cyclin D1在涎腺多形性腺瘤发生、复发及恶变中可能的作用。方法：用免疫组化S-P法结合计算机图像分析技术检测15例正常涎腺组织、45例涎腺多形性腺瘤（腮腺、颌下腺、腭腺各15例）、16例癌在多形性腺瘤中β-catenin及Cyclin D1的表达情况;并对β-catenin、Cyclin D1在涎腺PA、CPA中的表达情况进行相关性分析。结果：β-catenin在15例正常涎腺组织中均呈正常表达（细胞膜着色）,而Cyclin D1表达均呈阴性;β—catenin在PA和CPA中呈异质性表达（细胞膜着色减弱或缺失,细胞浆或核出现染色颗粒）,表达率分别为35．6％、81．2％,Cyclin D1在PA和CPA中的表达率为51．1％、87．5％,β-catenin、Cyclin D1在PA、CPA的表达均有显著性差异（P〈0．01,P〈0．05）。β—catenin异常表达和Cyclin D1的过表达在涎腺PA、CPA中均有显著的正相关（r=-0．587,P〈0．05）。结论：涎腺PA、CPA中均存在β-catenin异常表达和Cyclin D1的过表达,且两者的表达呈正相关,提示Wnt（Wingless＆Int）信号通路异常激活,导致β—catenin胞浆累积,而β—catenin的异常表达激活Cyclin D1引起细胞增殖和分化失控,在涎腺PA及CPA发生中可能具有一定作用。     

VEGF、MMP．9和Ki-67在涎腺肿瘤中的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ki-67在涎腺肿瘤中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学SP法对26例涎腺良性肿瘤和22例涎腺恶性肿瘤的VEGF、MMP-9和Ki-67表达进行检测.结果:VEGF和MMP-9在涎腺恶性肿瘤中阳性表达率分别为72.73%和68.18%,与二者在涎腺良性肿瘤中阳性表达率34.62%和26.92%相比,其表达水平显著增高(P＜0.01);涎腺良、恶性肿瘤的Ki-67增殖指数分别为(8.13±2.09)%和(14.86±4.71)%,二者之间的差异有统计学意义(P＜0.01);涎腺恶性肿瘤中VEGF、MMP-9和Ki-67三者之间的表达均存在显著性相关关系.结论:VEGF、MMP-9和Ki-67在涎腺肿瘤的发牛、发展中起重要作用.     

65例恶性成分为非特异性腺癌的涎腺恶性多形性腺瘤临床病理特点

目的 研究分析恶性成分为非特异性腺癌的涎腺恶性多形性腺瘤(malignant pleomorphic adenoma,MPA)的临床病理特点,以期为临床诊断和治疗提供参考.方法 回顾性分析115例原发MPA的临床病理资料,应用统计学软件分析恶性成分为非特异性腺癌和其他组织学类型病例在临床病理特点方面的差异,分析恶性成分为非特异性腺癌病例的临床病理指标与颈淋巴结转移的相关性.结果 恶性成分为非特异性腺癌的65例原发MPA中,男性58例,女性7例;发病年龄23～83岁,平均57岁,50～59岁最好发;发生于大涎腺61例,小涎腺4例;组织学分级为低、中、高度恶性者分别为12、14、39例;非侵袭性、微侵袭性、侵袭性MPA分别为15、13、37例;13例发生颈部淋巴结转移.恶性成分为非特异性腺癌的原发MPA组织学分级与侵袭性呈显著正相关(P＜0.05);侵袭性与TNM分期呈显著正相关(P＜0.05);侵袭性和组织学分级与颈部淋巴结转移之间有显著相关性(P＜0.05).结论 MPA恶性成分组织学类型最常见为非特异性腺癌,组织学分级越高,肿瘤的侵袭性越强;侵袭性癌、组织学分级高度恶性者易发生淋巴结转移.

Abstract：

Objective To analyze the clinicopathologic features of salivary malignant pleomorphic adenoma(MPA)(the subtype of the malignant component was classified as non-specific adenocarcinoma). Methods The clinical and pathological characteristics of 115 salivary gland tumors histologically diagnosed as MPA were analyzed. Results In all the 65 MPA cases, there were 58 male and 7 female patients, and the mean age was 57 years(from 23 to 83). Sixty-one tumors were located in major salivary glands, and 4 in minor. Histologically the malignant components of 39 tumors were high-grade, 14 intermediate-grade, and 12 low-grade. Thirty-seven tumors were invasive carcinoma, 13 minimally invasive, and 15 non-invasive. The high-grade tumors had positive correlation with the invasive carcinomas(P＜0.05). The invasive carcinomas had positive correlation with TNM clinical stage(P＜0.05). The invasive carcinoma and the high-grade tumor had correlation with cervical lymph node metastasis (P＜0.05).Conclusions Non-specific adenocarcinoma are the most common malignant subtype in MPA. The invasive and the high-grade types are more likely to metastasize to cervical lymph node.     

HIF-1α和Glut-1在涎腺黏液表皮样癌中的表达和临床意义

目的:研究涎腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,Glut-1)的表达,探讨其在MEC预后中的意义。方法:采用免疫组化半定量方法检测60例MEC患者肿瘤组织中HIF-1α与Glut-1的表达,同时分析其表达水平与临床病理及预后之间的关系。结果:HIF-1α与Glut-1在MEC中的表达高于正常组织。其表达水平与患者性别、年龄及淋巴结转移之间无相关性(P>0.05);与肿瘤的分化程度、大小及临床分期之间有相关性(P<0.05)。HIF-1α与Glut-1在MEC中的表达呈正相关(rs=0.463,P<0.05)。结论:HIF-1α与Glut-1高表达与MEC的分化程度、大小及临床分期密切相关,可作为MEC患者预后的预测指标。     

粘液表皮样癌中热休克蛋白70和细胞周期调节蛋白p27表达与预后的研究

目的研究热休克蛋白70(heat shock proteins 70,HSP70)和细胞周期调节蛋白p27在粘液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma, MEC)中的表达及其与临床病理特征的关系和对预后的影响.方法应用免疫组化LSAB法检测44例MEC中HSP70和p27表达,选用10例多形性腺瘤(plemorphic adenomas, PAs)作对照.结果 HSP70在MEC中表达明显高于在PAs中(P＜0.05).p27在MEC中表达显著低于在PAs中(P＜0.01).在MEC和PAs中,HSP70和p27表达呈负相关(P＜0.05).在MEC中,HSP70表达与肿瘤组织学分级、临床分期、肿瘤大小呈正相关(P＜0.05),p27表达与组织分级、临床分期、肿瘤大小和淋巴结转移呈负相关(P＜0.05).多因素生存分析显示HSP70表达与不良预后显著相关.结论 HSP70可能是MEC独立的预后预测指标,p27对MEC预后预测有一定意义.     

Ezrin基因在人涎腺腺样囊性癌中的表达及对转移细胞增殖侵袭性的影响

目的 检测Ezrin基因在人涎腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达,探讨Ezrin基因对SACC肺高转移细胞(adenoid cystic carcinoma,ACC)-M增殖、凋亡及侵袭活性的影响和作为SACC基因治疗靶点的可行性.方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-perosidase,SP)检测石蜡包埋的43例SACC、40例涎腺多形性腺瘤(pleomorphic adenoma,PA)及15例正常涎腺组织中Ezrin的表达.设计并合成Ezrin特异性经化学修饰的双链siRNA和双链SiRNA阴性对照组,经脂质体介导转染人ACC-M,将细胞分为实验组、阴性对照组、空白对照组.反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学分析各组细胞中Ezrin基因的mRNA及蛋白表达变化;甲基噻唑基四唑(MTT)法绘制细胞生长曲线,检测各组细胞体外增殖能力;流式细胞术测定细胞周期及凋亡情况;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力差异.结果 15例正常涎腺组织Ezrin表达阳性4例,40例PA中23例、43例SACC中37例,Ezrin表达阳性依次升高,差异有统计学意义(P<0.05).Ezrin特异性siRNA转染ACC-M后,Ezrin基因mRNA及蛋白表达水平均降低,细胞增殖活性受抑制,细胞凋亡增加,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 Ezrin的高表达可能在SACC的发生、发展及转移中发挥一定作用,Ezfin特异性siRNA能有效沉默ACC-M细胞Ezrin基因,使体外培养的ACC-M细胞在一定程度上增殖受抑制并诱导细胞凋亡及降低侵袭能力.     

涎腺多形性腺瘤中赖氨酰氧化酶表达的研究

目的 检测涎腺多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma,SPA)组织中赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)的表达,探讨LOX与SPA发生发展的关系.方法 取20例SPA组织标本,并配对20例SPA瘤旁涎腺组织,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量PCR方法检测LOX mRNA在组织中的的表达水平,并分析其表达变化,用蛋白质印迹法检测LOX的蛋白表达水平.结果 SPA组织中LOX mRNA表达水平明显高于瘤旁涎腺组织(12.81 ±0.92),SPA组织中LOX蛋白表达水平明显高于瘤旁涎腺组织.结论 LOX mRNA和蛋白在SPA瘤组织中均呈高表达,提示LOX的异常表达可能参与了SPA的发生、发展.     

口腔白斑癌变过程中整合素β1的表达及其与细胞增殖的关系

目的 探讨整合素β1在口腔白斑癌变发生、发展中的可能作用及其与细胞增殖的关系.方法 免疫组化SP法研究整合素β1及Ki-67在12例正常口腔黏膜、10例单纯增生白斑、24例异常增生白斑、14例早期浸润癌组织中的表达情况及关系.结果 在正常黏膜及单纯增生白斑中整合素β1表达于基底及副基底层细胞的胞膜;Ki-67在基底及副基底层的胞核中表达.在异常增生白斑及早期浸润癌中可见整合素β1表达于基底层、增生的棘层细胞及癌细胞胞膜;Ki-67表达于基底层、增生的棘层细胞及癌细胞的胞核.整合素β1在异常增生及早期浸润癌中的强阳性表达率分别为29%(7/24)、57%(8/14);Ki-67在异常增生及早期浸润癌中的强阳性表达率分别为42%(10/24)、57%(8/14).整合素β1、Ki-67在4组病变之间的阳性分级差异有统计学意义(χ2=10.651,P=0.014;χ2=14.831,P=0.002);整合素β1在正常黏膜、单纯增生组与早期浸润癌组之间的差异有统计学意义(P=0.008,P=0.013).Ki-67在正常黏膜组与异常增生组、早期浸润癌组之间差异有统计学意义(P=0.026,P=0.001),单纯增生组与早期浸润癌组之间差异有统计学意义(P=0.005).整合素β1与Ki-67的表达显著相关(R=0.442,P＜0.01).结论 整合素β1在口腔白斑异常增生及早期浸润癌中表达增强,可能与促进细胞增殖有关.     

涎腺多形性腺瘤中Gli-2蛋白的表达及意义

目的 探讨转录因子Gli-2蛋白在涎腺多形性腺瘤(salivary pleomorphic adenoma,SPA)组织中的表达及其生物学意义.方法 采用免疫组织化学方法检测60例SPA组织中Gli-2蛋白的表达情况并进行分析.结果 Gli-2蛋白在60例SPA组织中高表达,主要表达在细胞核内,呈棕黄色颗粒.21例(3...     

DDR1在唾液腺黏液表皮样癌中的表达及意义

目的:探讨盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)在唾液腺黏液表皮样癌(mucoepidermoid carcinoma,MEC)中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学和Western免疫印迹技术检测MEC细胞株M3SP2和MC3中DDR1的表达情况.应用免疫组织化学方法检测58例唾液腺MEC组织及20例正常唾液腺组织中DDR1的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:DDR1在黏液表皮样癌组织中的阳性表达率为79.3％,显著高于正常唾液腺组织(10％,P＜0.01).DDR1的高表达与MEC的临床病理参数无显著相关性(P＞0.05).在黏液表皮癌细胞株M3SP2和MC3中,DDR1表达阳性.结论:DDR1在唾液腺MEC的发生、发展中可能发挥重要作用.     

增殖细胞核抗原和Ki-67抗原在涎腺癌中的表达

目的:探讨细胞增殖核抗原和Ki-67抗原在不同类型涎腺癌中的表达及意义。方法:采用SABC和LSAB免疫组化法分别检测PCNA和Ki-67在17例粘液表皮样癌、12例腺样囊性癌、9例恶性多形性腺瘤中的表达和分布。结果:1)PCNA及Ki-67的增殖指数即PI值在粘液表皮样癌和腺样囊性癌的不同分级中表达不同,且有统计学意义(P<0.005)。2)恶性多形性腺瘤PCNA及Ki-67的PI值较高,与腺样囊性癌及粘液表皮样癌相比差异有统计学意义(P<0.001)。3)PCNA及Ki-67的表达水平与涎腺癌的生物学行为(复发和转移)明显相关。结论:涎腺癌中PCNA和Ki-67的表达水平与细胞分化有关,其PI值可作为粘液表皮样癌和腺样囊性癌的组织学分级的重要参数,也是诊断恶性多形性腺瘤的重要指标。PCNA和Ki-67的高表达预示着涎腺癌预后的不良。     

国际文摘

1上颌窦腺样囊性癌和黏液表皮样癌25例报告Adenoid cystic carcinoma and mucoepidermoid carcinoma of the maxillary sinus:report of a 44-year experience of 25 cases from a single institution. da Cruz Perez DE,Pires FR,Lopes MA,etal.J Oral Maxillofac Surg.2006;64(11):1592-1597.该文旨在分析原发于上颌窦的腺样囊性癌(ACC)和黏液表皮样癌(MEC)的临床病理特点。方法:对1953-1997年间原发于上颌窦的18例ACC和7例MEC进行分析,所有患者均行病理复片。结果:平均发病年龄为45.9岁(13～77岁);88.9%的ACC患者TNM分期处于晚期,而57.1%的MEC患者处于临床早期;手术结合放疗是常用方法,随访显示,     

机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达变化初探

目的 探讨在一定机械压应力条件下人牙周膜成纤维细胞常见炎症相关细胞因子的表达谱变化,初步明确机械压应力对牙周膜成纤维细胞炎症相关细胞因子表达的影响.方法 取健康恒前磨牙牙根中1/3牙周膜组织,采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,分为加压组(200 Pa持续加压)与未加压组培养24 h后,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量PCR法检测白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、TNF-β、干扰素(interferon,IFN)-γ的mRNA表达量并与管家基因磷酸甘油醛脱氢酶进行对比.加压组与未加压组培养48 h后通过微球流式多因子方法检测上述细胞因子蛋白水平的表达量.结果 加压组人牙周膜成纤维细胞培养24 h后细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ mRNA相对表达量(分别为0.3633±0.0874、0.4200±0.0285、0.1697±0.0284、0.0983±0.0131、0.2840±0.0676及3.1067±0.2857)显著高于未加压组(分别为0.1173±0.0176、0.1691±0.0174、0.0117±0.0021、0.0243±0.0050、0.0000±0.0000及0.1433±0.0125),P＜0.05;加压组人牙周膜成纤维细胞培养48 h后细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β及IFN-γ的蛋白表达量[分别为(18.21±1.01)、(1634.11±472.41)、(1461.47±50.53)、(20.71±2.52)、(884.11±118.86)以及(1461.47±333.37)ng/L也显著高于未加压组[分别为(5.32±4.97)、(373.56±155.92)、(679.11±141.42)、(4.32±0.73)、(3.56±0.92)及(204.11±35.36)ng/L],P＜0.05;IL-2、IL-4、IL-5、IL-10及IL-12的mRNA相对表达量及蛋白表达在两组中差异无统计学意义(P＞0.05).结论 人牙周膜成纤维细胞在持续机械压应力作用下可显著上调IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β、IFN-γ等炎症相关细胞因子mRNA及蛋白水平的表达,从而进一步影响局部牙周组织微环境.

Abstract：

Objective To investigate the changes of inflammation-related cytokine expression profiles in human periodontal ligament fibroblasts (hPDLF) under mechanical stress. Methods The periodontal ligament attached to the mid-third part of the fresh root of young premolars extracted for orthodontic treatment was scalped and removed hPDLFs were cultured by the method of digesting by Ⅰ -type collagenase combined with tissue adhering, and then isolated and purified by cells passages. hPDLFs were then divided into two groups, group with mechanical force and group without mechanical force and then cultured for 24 h. Employing cytokine-microarray analysis to assess, in a comprehensive manner compared to the hPDLFs culture system without a static force. The quantity of different cytokine-related genes in hPDLFs was analyzed by means of quantitative with the special primers of up-and down-regulated genes. The mRNA of inflammation-related cytokines was examined by real-time PCR, and the expression of the cytokines in hPDLFs detected by cytokine flowcytomix assay. Results The relative expression of interleukin (IL)-1β,IL-6, IL-8, tumor necrosis factor(TNF)-α, TNF-β and interferon(IFN)-γ mRNA in the hPDLFs with 24 h persistent-pressure (0. 3633 ± 0. 0874, 0. 4200 ± 0. 0285, 0. 1697 ± 0. 0284, 0. 0983 ± 0. 0131, 0. 2840 ±0. 0676 and 3. 1067 ±0. 2857) was significantly higher than the group without mechanical force(0. 1173 ±0.0176, 0. 1691 ± 0.0174, 0.0117 :± 0.0021, 0.0243 ± 0.0050, 0.0000 ± 0.0000 and 0.1433 ±0. 0125) ,P ＜0. 05. The cell culture supernatant cytokines expression of IL-1 β, IL-6, IL-8, TNF-α, TNF-βand IFN-γ after 48 h cultured [(18.21 ± 1.01), (1634. 11 ± 472. 41), (1461.47 ± 50. 53), (20. 71 ±2. 52), (884. 11 ± 118. 86) and (1461.47 ± 333.37) ng/L]was significantly higher than the group without mechanical force [(5. 32 ± 4. 97), (373.56 ± 155.92), (679. 11 ± 141.42), (4. 32 ± 0. 73), (3.56 ±0.92)and(204. 11 ±35.36) ng/L],P ＜0.05. The relative mRNA and protein expression of IL-2, IL-4,IL-5, IL-10 and IL-12 showed no significant difference between the both groups. Conclusions Persistent static mechanical force could regulate the expression of some inflammation-related cytokines. These upregulated cytokines may be invloved in remodeling of hPDLFs, bone resorption and periodontal microenvironment.     

转化生长因子β1在人涎腺黏液表皮样癌高低转移细胞系中的表达

目的探讨转化生长因子(TGF)βl在人涎腺黏液表皮样癌高、低转移细胞株的差异表达。方法应用基因芯片技术、反转录(RT)-PCR、免疫组化、免疫印迹杂交等方法从基因水平和蛋白水平检测TGF-βl的表达。结果基因芯片技术、RT-PCR、免疫组化、Western blot结果都证实TGF-β1在人涎腺黏液表皮样癌脊髓转移株高表达,在低转移株不表达。结论TGF-β1的表达上调可能与人涎腺黏液表皮样癌转移有关。     

RAGE与RECK在涎腺多形性腺瘤复发及恶变中的表达及意义

目的:检测RAGE、RECK在涎腺多形性腺瘤 (pleomorphic adenoma,PA)初发、复发和恶变中的表达情况及临床意义。方法:免疫组化法分别检测正常13例,PA初发36例、复发8例,恶变10例涎腺组织RAGE及RECK的表达情况,分析其表达的差异性,并探讨其相关性。结果:RAGE在正常、初发、复发及恶变标本中阳性表达率分别为:15.40％、41.70％、62.50％、90.00％,呈逐渐升高的趋势,并且在阳性率和表达强度比较发现,正常、初发组均明显低于复发及恶变组,差异具有统计学意义(P<0.05)。RECK在正常、初发、复发及恶变标本中阳性表达率分别为:76.90％、55.60％、37.50％、20.00％,呈逐渐降低的趋势,并且在阳性率和表达强度比较发现,正常、初发组均明显高于复发及恶变组,差异具有统计学意义(P<0.05)。RAGE和RECK在各组中的表达呈负相关性(r=-0.512,P＜0.05)。结论:本研究结果可能进一步阐述多形性腺瘤复发及恶变的发病机制,为辅助预测患者预后及为患者的综合治疗提供参考。     

����Warthin����ƤVEGF-C��Ｐ�������΢�ܰ͹��ܶ�������о�

目的 研究Warthin瘤中微淋巴管密度(MLVD)与肿瘤上皮细胞中血管内皮生长因子C(VEGF-C)的相关性.方法 收集1999-2008年内蒙古医学院附属医院和内蒙古自治区医院病理科存档的Warthin瘤病例109例,同时选取多形性腺瘤(PA)、正常涎腺、正常涎腺淋巴结各20例,采用免疫组化法检测各组织标本中VEGF-C和淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)的表达情况,并通过LYVE-1的表达来计数MLVD.结果 (1)Warthin瘤中MLVD明显高于PA、正常涎腺及其淋巴结（均P＜0.01）;(2)VEGF-C在Warthin瘤组织中呈强阳性表达,而在PA、正常涎腺组织及其淋巴结中呈弱阳性或阴性表达;(3)Warthin瘤中VEGF-C表达强度与MLVD呈正相关关系.结论 VEGF-C可介导Warthin瘤淋巴管生成.     

反义微小RNA-21寡核苷酸抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的体外研究

目的 探讨反义微小RNA-21寡核苷酸(antisense oligonucleotide micro RNA-21,AS-miRNA-21)抑制Tb3.1人舌鳞状细胞癌增殖的效果和机制.方法 实验分3组,①空白对照组;②无义寡核苷酸转染组;③AS-miRNA-21转染组.寡核苷酸介导转染反义寡核苷酸敲低Tb3.1细胞miRNA-21表达.使用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)鉴定转染后Tb 3.1细胞miRNA-21表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)法检测转染后Tb 3.1细胞生存率;流式细胞术检测转染后Tb3.1早期凋亡;Matrigel基质生长实验检测转染后Tb 3.1细胞生长形成球形集落能力;Transwell体外迁移实验检测转染后Tb 3.1细胞迁移能力;蛋白质印迹法检测转染后Tb3.1细胞增殖核抗原(antigen KI-.67,Ki67)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma 2,Bcl-2)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(phosphatase and tensin homolog,PTEN)、基质金属蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase 2/9,MMP-2、MMP-9)和组织基质蛋白酶抑制因子蛋白1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1)蛋白表达.结果 荧光实时定量PCR显示转染后miRNA-21表达水平下调;转染第4天,AS-miRNA-21转染组肿瘤细胞生长速度[(53.43±11.83)%]低于其他两组[(91.32±8.02)%和100%](F=27.02,P=0.00);细胞凋亡率显著升高[(12.23±2.92)%,F=26.641,P=0.001];AS-miRNA-21转染组细胞生长不能形成球形克隆且通过Transwell小室聚碳酸酯膜的细胞数小于空白对照组(F=268.231,P=0.000);Ki67、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白表达下调,PTEN和TIMP-1蛋白表达上调.结论 敲低miRNA-21后Tb3.1人舌癌细胞增殖与侵袭能力被抑制,并为探索miRNA-21调控人舌癌发生机制提供实验依据.

Abstract：

Objective To investigate the effect of micro RNA-21 (miRNA-21) knocking on the Tb3.1 human tongue squamous cell carcinoma growth. Methods Anti-sense miRNA-21 oligonucleotide was delivered with oligofectamine to suppress Tb 3. 1 tongue cancer cell growth in vitro. Real-time polymerase chain reaction (PCR) was conducted to detect the miRNA-21 expression after transfection. Methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to determine Tb 3. 1 cell survival rate. Apoptosis were examined by flowcytometry. Matrigel matrix and transwell assay were used to determine Tb 3.1 cell colony formation and migration ability. Antigen KI-67 (Ki67), B cell lymphoma (Bcl-2), phosphatase and tensin homolog (PTEN), matrirx metalloproteinase 2(MMP-2, MMP-9) and tissue inhibitor of metalloproteinase 1 (TIMP-1) protein expression in Tb 3. 1 cell were measured by Western blotting. Results miRNA-21 expression was decreased in miRNA-21 antisense oligonucleotide (ASODN) group. The survival rate of Tb 3. 1 cells with AS-miRNA-21 transfection was significantly suppressed (F=27.02, P = 0.00) and early phase apoptosis(F =26. 641 ,P = 0. 001) induced in Tb 3.1 cell. Ki67, Bcl-2, MMP-2 and MMP-9 protein weredown regulated while PTEN and TIMP-1 protein expression was increased. Conclusions Blocking miRNA-21 expression in Tb3.1 cell could suppress cancer cell growth in vitro and miRNA-21 can serve as a novel target candidate for human tongue cancer gene therapy.