漆姑草醇提物对HL-60细胞诱导分化作用

目的探讨漆姑草醇提物(HSJ)对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的诱导分化作用。方法实验设漆姑草250.0、125.0、62.5μg/mL组、阳性对照组(吡柔比星100μg/mL)、对照组;噻唑蓝(MTT)法检测HL-60细胞增殖抑制率;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态;硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验法测定细胞分化能力;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b、CD14阳性细胞的表达;Western blot法检测c-myc蛋白表达。结果与对照组比较,漆姑草组HL-60细胞核浆比例减小,核仁变为肾形或蚕豆形,出现明显的细胞分化形态,细胞增殖受到不同程度抑制;对照组HL-60细胞NBT还原率为(0.83±0.29)%,CD11b和CD14阳性细胞表达率分别为(41.13±0.42)%、(53.30±7.23)%,c-myc蛋白表达量为(0.71±0.02);漆姑草250.0、125.0、62.5μg/mL组HL-60细胞NBT还原率[分别为(16.67±1.76)%、(10.83±1.26)%、(6.00±0.87)%]升高,CD11b和CD14阳性细胞表达率[分别为(66.77±4.27)%、(52.27±0.95)%、(46.27±0.38)%和(96.63±0.23)%、(85.25±3.80)%、(63.84±0.78)%]增加,c-myc蛋白表达量[分别为(0.38±0.01)、(0.45±0.01)、(0.58±0.02)]降低,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论漆姑草醇提物可诱导HL-60细胞向成熟粒细胞、单核细胞方向分化。     

芦丁抑制3T3-L1前脂肪细胞分化并促进米色脂肪细胞形成

目的探讨芦丁对米色脂肪细胞形成的影响。方法用不同浓度芦丁处理3T3-L1前脂肪细胞;细胞计数盒(CCK8)检测不同浓度芦丁对细胞活性影响,油红O染色观察脂滴大小;Western blot检测过氧化物酶增殖物激活受体–γ(PPAR-γ)、aP2及解偶联蛋白1(UCP1)表达;RT-qPCR检测UCP1、PRDM16、Dio2表达;细胞免疫荧光检测线粒体变化。结果芦丁在0～250μmol/L范围内对细胞活性无明显影响,且以药物依赖性方式减少脂滴生成;与对照组[aP2(1.12±0.03)]、[PPAR-γ(0.87±0.02)]比较,50、100、250μmol/L芦丁使a P2[分别为(0.87±0.03)、(0.64±0.01)、(0.64±0.05)]、PPAR-γ[分别为(0.73±0.02)、(0.46±0.02)、(0.43±0.05)]蛋白表达降低,使UCP1蛋白表达[分别为(0.58±0.03)、(0.42±0.02)、(0.34±0.01)]增加;与对照组比较,50μmol/L芦丁可使UCP1、 PRDM16、Dio2表达[分别为(7.02±0.24)、(2.09±0.06)、(10.40±0.93)]升高;细胞免疫荧光显示,3T3-L1前脂肪细胞内线粒体含量增加。结论芦丁可减少3T3-L1前脂肪细胞脂滴生成,并促进米色脂肪细胞形成。     

氟对大鼠骨组织RBPJ及相关基因表达影响

目的观察氟染毒大鼠骨组织中核转录抑制因子(RBPJ)、Jag 1和Hes 5蛋白表达变化,探讨Notch通路与氟骨症关系。方法成年SD大鼠24只,随机分为3组:对照组(饮水含氟1 mg/L),低、高氟组(饮水含氟50、100 mg/L),每组8只;饲养6个月后,收集尿液和骨组织,测定尿氟和骨氟,观察骨组织学变化并测定骨组织系列形态学指标,免疫组化法检测成骨细胞中RBPJ、Jag 1和Hes 5蛋白表达,免疫印迹法和实时荧光定量法分别检测骨组织RBPJ、Jag 1和Hes 5蛋白与mRNA表达量。结果与对照组比较,低、高氟组大鼠尿氟和骨氟[分别为(11.80±1.08)、(18.08±1.13)mg/L和(5 974.76±2 036.13)、(7 996.51±2 669.93)μg/g)]均升高(均P0.05);染氟组大鼠骨组织呈骨质硬化病理改变;与对照组比较,低、高氟组大鼠骨组织RBPJ蛋白表达[分别为(4.985±0.913)、(4.279±1.507)]均升高,高氟组Jag 1、Hes 5蛋白表达[分别为(0.112±0.024)、(0.128±0.039)]均降低(均P0.05);与对照组比较,高氟组大鼠骨组织Jag 1、RBPJ mRNA表达量[分别为(0.005 7±0.005 4)、(0.005 5±0.004 4)]降低(均P0.05)。结论过量氟抑制Notch通路信号,使该通路下游靶基因表达受到抑制,从而促进成骨作用,参与氟骨症发病过程。     

非小细胞肺癌Notch1和Jagged1表达及意义

目的探讨Notch1和Jagged1在非小细胞肺癌中的表达和临床病理学意义。方法应用免疫组化S-P方法,检测80例非小细胞肺癌组织Notch1和Jagged1的表达,分析其与非小细胞肺癌各临床病理学参数之间的关系。结果非小细胞肺癌Notch1和Jagged1表达显著高于癌旁正常肺组织(P0.01)。Notch1和Jagged1在非小细胞肺癌的表达有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P0.05),非小细胞肺癌Notch1和Jagged1表达Ⅲ和Ⅳ期高于Ⅰ和Ⅱ期(分别P0.01;P0.05)。肺腺癌Jagged1表达显著高于肺鳞癌(P0.05)。非小细胞肺癌Notch1和Jagged1的表达呈正相关(P0.01)。结论 Notch1和Jagged1表达与非小细胞肺癌发生发展密切相关。     

Notch信号通路在妊娠期DN小鼠中的表达意义

目的探究Notch信号通路在妊娠期糖尿病肾病(DN)小鼠肾组织中的表达意义。方法采用链脲佐菌素(STZ)建立DN小鼠模型,DN小鼠(腹腔注射STZ溶液)和对照组小鼠(腹腔注射等量枸椽酸盐缓冲液),每组各6只,2、4、8周时分别收集小鼠血液检测生化指标,8周末处死小鼠取其肾脏组织,HE染色观察两组小鼠肾组织形态,免疫组织化学染色观察两组小鼠肾组织Notch1表达情况,Western blot检测Notch信号通路中Notch1、Jagged1、Hes1、Hey1蛋白表达水平,Real-time PCR检测Notch信号通路中的Notch1、Jagged1、Hes1和Hey1 mRNA相对表达量。结果2周、4周、8周时,DN组小鼠血糖(Glu)、糖化血红蛋白(HbA1c)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及尿酸(UA)水平均显著高于对照组小鼠,且HbA1c、Scr、BUN及UA水平随着DN病程延长而升高(DN组2周vs.对照组:t值分别为11.804、7.481、2.362、5.621、2.557;DN组4周vs.对照组:t值分别为14.431、9.936、4.449、7.329、3.977;DN组8周vs.对照组:t值分别为12.415、13.593、7.619、9.654、6.981,P<0.05)。DN组小鼠Notch1、Jagged1、Hes1和Hey1蛋白表达水平均显著高于对照组小鼠(t值分别为3.781、9.738、12.231、6.684,P<0.05)。DN组小鼠Notch1、Jagged1、Hes1和Hey1 mRNA相对表达量均显著高于对照组小鼠(t值分别为6.411、9.510、15.490、9.498,P<0.05)。结论DN小鼠肾组织中Notch信号通路蛋白表达明显增加,Notch信号通路可能在DN肾脏损害的发生和发展中发挥着重要作用。     

百草枯对胚胎神经干细胞分化过程中Notch信号通路分子表达的影响

目的 观察百草枯(paraquat,PQ)对人胚胎神经干细胞(hNSCs)分化过程中Notch信号通路中参与中枢神经系统发育的关键受体Notch1、配体Jaggedl和下游分子DTX1的mRNA表达的变化.方法 以0.10、1.00、10.00 mol/L PQ对hNSCs进行染毒,分别在分化染毒的第2、4、8、12天用噻唑蓝(MTT)法观察细胞活力,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time PCR)技术检测Notch信号通路关键受体Notch1、配体Jagged1和下游分子DTX1 mRNA的表达情况.结果 与对照组比较,在细胞分化的第4、8及12天10.00 mol/L PQ染毒组的细胞活力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 0.10 mol/LPQ染毒组Notch1 、Jagged1 mRNA的表达水平在第2、4、8天明显低于对照组,第12天明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).0.10 mol/L染毒组DTX1 mRNA的表达水平在第2、8天明显低于对照组,第4天明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).10.00 mol/L PQ染毒组对Notchl 、Jagged1和DTX1mRNA的表达水平在第2、8、12天均明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).PQ在分化初期(2 d)可以下调Notch1、Jagged1和DTX1的表达,分化中期(4d)会上调Notch1的表达,但在分化晚期(8 d)至结束阶段(12d),PQ对Notch1 、Jagged1和DTX1的表达呈抑制状态.结论 PQ影响了神经干细胞分化过程中的Notch信号通路分子的表达.     

镉暴露对HepG2细胞NRF2信号通路影响

目的探讨镉暴露对HepG2细胞转录因子NF-E2相关因子2(NRF2)信号通路的影响。方法采用甲臢比色法测定CdCl_2(0、1、2.5、5、10、25、50、100、200μmol/L)处理24 h后,HepG2细胞活力变化;应用蛋白免疫印迹法检测CdCl_2(1、2、5、10、20μmol/L)处理细胞6 h后,NRF2蛋白水平;采用RT-q PCR方法检测10μmol/L CdCl_2处理细胞2、4、6、12、24 h后,GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 m RNA水平变化,检测CdCl_2(1、2、5、10、20μmol/L)处理细胞6 h后,GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 m RNA水平变化。结果 HepG2细胞活力随镉处理剂量升高而降低(P0.05);与对照组(0.60±0.01)比较,1、2、5、10、20μmol/L镉处理组HepG2细胞NRF2蛋白表达水平[分别为(0.65±0.01)、(1.37±0.04)、(1.94±0.05)、(2.24±0.07)、(2.22±0.05)]均明显升高(P0.05);与对照组比较,镉处理6 h时,HepG2细胞内GCLC、GCLM、HO1和AKR1C1 m RNA水平[分别为(45.76±7.04)、(114.21±5.23)、(59.52±1.50)、(674.13±27.12)]明显升高(P0.05);与对照组比较,5μmol/L镉处理组HepG2细胞内GCLC和GCLM m RNA水平[分别为(24.77±2.16)、(29.93±0.67)]升高,2μmol/L镉处理组HepG2细胞内HO1和AKR1C1 m RNA水平[分别(28.55±2.02)、(186.32±12.63)]升高(P0.05)。结论镉暴露能激活HepG2细胞系中NRF2信号通路。     

硒对氟诱导NRK-52E细胞凋亡干预作用机制

目的探讨硒对氟诱导NRK-52E细胞凋亡的拮抗作用。方法实验设对照组、染氟组、染硒组、硒干预组,培养NRK-52E细胞,染毒72 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测AMPK及线粒体通路相关蛋白表达水平。结果与对照组[(5.97±0.09)%]比较,5、20 mg/L Na F组细胞凋亡率[分别为(7.92±0.24)%、(11.06±0.17)%]明显升高(P0.05);与20 mg/L Na F组比较,17.1、34.2μg/L硒干预组细胞凋亡率[分别为(8.46±0.09)%、(9.88±0.08)%]明显降低(P0.05);与对照组比较,20 mg/L Na F组细胞AMPK磷酸化蛋白、bax、Cyt-C蛋白表达[分别为(0.73±0.16)、(0.99±0.16)、(0.73±0.08)]、活性caspase-9和caspase-3蛋白表达[分别为(1.17±0.17)、(1.51±0.42)]均升高(P0.05);与20 mg/L Na F组比较,17.1、34.2 g/L硒干预组AM PK磷酸化蛋白表达量[分别为(0.46±0.12)、(0.48±0.15)]、bax、Cyt-C蛋白表达量[分别为(0.55±0.09)、(0.61±0.16)与(0.30±0.06)、(0.34±0.05)]及活性caspase-9、caspase-3蛋白表达量[分别为(0.76±0.11)、(0.40±0.12)与(0.35±0.12)、(0.27±0.04)]均降低(P0.05)。结论 AMPK介导的线粒体通路参与了硒拮抗氟诱导NRK-52E细胞凋亡过程。     

Wnt信号通路在ALDH1A1影响胃癌细胞生物学行为中作用

目的探讨乙醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)基因表达对胃癌细胞的生物学行为影响及机制。方法通过脂质体将shRNA-ALDH1A1载体转染到胃癌MKN-45细胞,48 h后,采用RT-PCR及蛋白印迹(WB)法检测转染后MKN-45细胞中ALDH1A1蛋白及mRNA表达;四唑盐(MTT)法检测细胞活力;Transwell法检测胃癌细胞迁移及侵袭能力;WB检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9及Wnt/β-catenin信号通路表达情况。结果shRNA-ALDH1A1转染组M KN-45细胞中ALDH1A1蛋白及mRNA表达量[分别为(0.09±0.01)、(0.08±0.01)]明显低于对照组[分别为(0.89±0.09)、(0.48±0.05)];shRNA-ALDH1A1组M KN-45细胞活力(0.40±0.04)低于对照组(0.73±0.07),细胞迁移、侵袭数目[分别为(39.78±3.24)、(42.53±4.25)个/视野]少于对照组[分别为(98.86±9.03)、(90.52±9.14)个/视野];shRNA-ALDH1A1组MKN-45细胞中MMP2、MMP9、Wnt1、Wnt5a及β-catenin表达水平[分别为(0.10±0.01)、(0.10±0.01)、(0.28±0.03)、(0.12±0.01)、(0.19±0.02)]明显低于对照组[分别为(0.49±0.04)、(0.95±0.09)、(1.29±0.12)、(0.52±0.04)、(0.56±0.05)],差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 ALDH1A1基因沉默可明显降低胃癌细胞MKN-45活力、抑制细胞迁移、侵袭能力,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

苦参碱诱导NB4细胞凋亡作用及机制

目的探讨苦参碱(Mat)诱导急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞凋亡作用及机制。方法不同剂量M at(0.25、0.50、1.00 mg/m L)作用于NB4细胞(24、48、72 h),噻唑蓝法(M TT)检测细胞增殖抑制率;Hoechst33258染色观测细胞形态学变化;流式细胞术(FCM)检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;分光光度法检测NB4细胞内caspase-3和caspase-8活性。结果与对照组比较,Mat可明显抑制NB4细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈时间和剂量效应(P0.05);细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡特征;与对照组比较,0.50、1.00 mg/m L M at组G0/G1期细胞比例(分别为57.91%、83.00%)明显增加,S期比例(分别为40.95%、16.10%)减少;与对照组比较,0.50、1.00 mg/m L Mat组NB4细胞内caspase-3酶活性[分别为(77.41±4.01)、(111.78±4.05)]、1.00 mg/m L M at组NB4细胞内caspase-8酶活性(44.98±7.63)明显增强(P0.05)。结论 M at可抑制NB4细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与G_0/G_1期细胞阻滞、抑制DNA合成并激活细胞内caspase-3、caspase-8凋亡途径有关。     

蓬子菜总黄酮诱导NB4细胞凋亡作用及机制

目的观察蓬子菜总黄酮(FGVL)诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)细胞凋亡作用,并探讨其作用机制。方法 FGVL(50、100、200μg/mL)作用于体外培养的NB4细胞,Hoechst染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡状况;RT-PCR检测NB4凋亡相关基因Mel-18、Sall4、Bmi-1 m RNA表达。结果细胞形态学观察显示,NB4细胞经FGVL处理48 h后,与对照组比较,FGVL各剂量组NB4细胞凋亡比例均明显升高(P0.05),呈现细胞核固缩、核碎裂及凋亡小体等典型的细胞凋亡特征;与对照组(2.3%)比较,50、100、200μg/mL FGVL组NB4细胞凋亡率(分别为9.3%、13%、20.4%)明显升高(P0.05);细胞周期检测结果显示,与对照组比较,50、100、200μg/mL FGVL组NB4细胞G0/G1期细胞比例(分别为43.92%、37.26%、29.15%)减少,S期细胞比例(54.16%、62.23%、70.46%)增多;与对照组比较,100、200μg/mL FGVL组NB4细胞M el-18 m RNA表达水平升高,Sall4、Bmi-1 m RNA表达水平明显降低。结论 FGVL可阻滞NB4细胞于S期,抑制细胞增殖,通过调节M el-18、Sall4、Bmi-1等凋亡相关基因表达诱导细胞凋亡。     

联合应用缓激肽与罂粟碱开放血肿瘤屏障作用

目的探讨缓激肽与罂粟碱(papaverine,PA)联合应用对血肿瘤屏障通透性和紧密连接(tight junctions,TJ)相关蛋白之闭锁小带蛋白1(ZO-1)表达的影响。方法应用大鼠胶质瘤模型,伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透性实验检测血肿瘤屏障通透性,免疫组织化学法测定ZO-1蛋白表达,RT-PCR法测定ZO-1 m RNA表达。结果与对照组大鼠脑肿瘤组织中EB含量[(0.182±0.026)μg/g]比较,缓激肽、罂粟碱、缓激肽+罂粟碱组(联合组)大鼠脑肿瘤组织中EB含量[分别为(0.487±0.031)、(0.503±0.029)和(0.875±0.040)μg/g]均明显升高(P0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中EB含量进一步增加(P0.01)。与对照组(0.379±0.011)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1蛋白表达[分别为(0.259±0.008)、(0.252±0.010)和(0.135±0.015)]均明显下降(P0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1蛋白表达进一步降低(P0.01)。与对照组(0.876±0.062)比较,缓激肽、罂粟碱、联合组大鼠肿瘤组织中ZO-1 m RNA表达[分别为(0.735±0.036)、(0.695±0.050)和(0.420±0.047)]均明显降低(P0.01);与缓激肽、罂粟碱组比较,联合组大鼠脑肿瘤组织中ZO-1 m RNA表达进一步降低(P0.01)。结论缓激肽与罂粟碱联合应用对血肿瘤屏障的开放作用具有协同效应,此作用与紧密连接相关蛋白ZO-1表达水平下调有关。     

PM_(2.5)暴露对肺组织和H1299细胞Twist1、Zeb1表达影响

目的探讨细颗粒物(PM_(2.5))暴露对大鼠肺组织及H1299细胞中Zeb1、Twist1的表达和细胞增殖影响。方法体内实验:40只大鼠分别给予PM_(2.5)混悬液和生理盐水,于暴露后2和4周收集肺组织;体外实验:分别用0、50、100、200μg/mL PM_(2.5)混悬液培养H1299细胞48 h,收集细胞;采用免疫印迹法法检测小鼠肺组织和H1299细胞中Zeb1、Twist1蛋白表达,采用噻唑蓝(MTT)法检测H1299细胞增殖率。结果体内实验:与对照组[(0.68±0.19)、(0.99±0.11)]比较,PM_(2.5)暴露大鼠4周后肺组织中Zeb1、Twist1蛋白表达量[分别为(0.27±0.18)(0.44±0.15)]明显下调(P 0.05)。体外实验:与对照组[(1.34±0.38)、(1.05±0.11)]比较,200μg/mL PM_(2.5)染毒组H1299细胞中Zeb1、Twist1蛋白表达量[分别为(0.17±0.08)、(0.20±0.05)]明显下调(P 0.05);200μg/mL PM_(2.5)处理H1299细胞72 h,H1299细胞生存率为(25.26±1.84)%,明显低于对照组(P 0.05)。结论 PM_(2.5)暴露后,小鼠肺组织及人肺腺癌细胞H1299中Zeb1、Twist1表达明显降低,并且肺癌细胞(H1299)呈现增殖抑制现象。     

基于Notch通路探讨高糖诱导下乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的研究

目的探讨高糖对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其机制,为寻找有效生物靶标、实现乳腺癌的精准治疗提供一定理论基础。方法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,分为正常对照(Ctrl)组、高糖(HG)组、Notch通路抑制剂FLI06+HG组和FLI06组,采用CKK-8法、平板细胞克隆形成实验检测细胞增殖情况,PI法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测Notch通路相关基因Notch1、Jagged1、Hes1mRNA表达情况,蛋白免疫印迹(WB)技术检测细胞中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,高糖组MCF-7细胞增殖速度显著增高,平板克隆形成率显著增加,G0/G1期细胞比例显著减少,早期、晚期凋亡率均显著减少,Notch、Jagged1、Hes1mRNA及蛋白表达水平均显著上调,差异均有统计学意义(P0. 05);与高糖组比较,高糖+FLI06组MCF-7细胞增殖速度显著降低,平板克隆形成率显著减少,G0/G1期细胞比例显著增加,早期、晚期凋亡率均显著增高,Notch、Jagged1、Hes1mRNA及蛋白表达水平均显著下调,差异均有统计学意义(P0. 05)。结论高糖可提高人乳腺癌细胞的生长能力,降低其凋亡,可能通过激活Notch信号通路实现。     

高糖对肾小管上皮细胞PTEN蛋白表达影响

目的 观察高糖条件下肾小管上皮细胞第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达变化,探讨其在肾小管纤维化病变中的作用及可能机制.方法 体外培养大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E),随机分为对照组和高糖组,每组分别设2、12、24、48 h4个时间点进行动态观察;采用免疫荧光细胞化学染色检测E-钙黏素(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化,Western blotting检测各组PTEN、磷酸化蛋白激酶B[p-Akt1 (Ser473)]、E-caderin和c-SMA蛋白表达变化.结果 与对照组比较,高糖组培养24、48 h时,PTEN、E-caherin蛋白表达量[分别为(1.15±0.13)、(1.10 ±0.13)和(1.23±0.11)、(1.22±0.11)]均减少(均P＜0.05),而p-Akt1(ser473)、α-SMA蛋白表达量[分别为(1.53±0.13)、(1.60±0.13)和(1.86±0.10)、(1.91±0.10)]均增多(均P ＜0.05);PTEN与E-cadherin蛋白表达量呈正相关(r=0.58,P＜0.05),与α-SMA蛋白表达量呈负相关(r=-0.61,P＜0.05).结论 高糖培养的肾小管上皮细胞中PTEN蛋白表达明显减少,可能通过PI3K/Akt信号通路参与了肾小管纤维化病变的发生发展过程.     

姜黄素对人肝癌HepG2细胞Notch1和NF-κB表达的影响

目的研究姜黄素作用于人肝癌HepG2细胞后Notch1、NF-κB的表达,探讨姜黄素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法将肝癌细胞株HepG2培养至对数生长期,分组加入不同浓度(20、40、80μmol/L)的姜黄素干预后继续培养24 h,并设立空白对照组。用MTT法观察姜黄素对体外培养的肝癌细胞生长的抑制作用;q RT-PCR法检测各组Notch1m RNA表达量,Western blot法检测各组Notch1、NF-κB蛋白的表达水平。结果 MTT比色法测定显示,姜黄素对肝癌细胞HepG2的抑制作用呈剂量依赖性,对照组及不同浓度姜黄素作用组的抑制率分别为0%,25.36%±2.54%,44.64%±2.98%,74.94%±3.62%。q RT-PCR及Western blot法提示,与对照组相比,姜黄素作用组的Notch1及NF-κB的表达量均下降且呈剂量依赖性。结论姜黄素抑制肝癌细胞HepG2的增殖,其机制可能与其下调Notch1、NF-κB的表达有关。     

越桔原花青素抑制胶质瘤细胞生长作用

目的探讨越桔原花青素对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法培养胶质瘤SHG-44细胞,随机分为对照组和越桔原花青素低、中、高剂量组(10、20、40μg/L),采用噻唑蓝法(MTT)检测越桔原花青素对细胞生长的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞周期变化,western blot检测细胞周期蛋白cyclin D1表达。结果 M TT结果显示,各剂量越桔原花青素均可抑制胶质瘤细胞生长,与对照组比较,10、20、40mg/L越桔原花青素作用48、72 h时,胶质瘤细胞生长[A值分别为(0.56±0.03)、(0.42±0.07)、(0.29±0.02)和(0.71±0.09)、(0.56±0.02)、(0.30±0.01)]均明显受抑制,差异有统计学意义(P0.05);倒置显微镜观察发现,越桔原花青素组细胞密度随剂量升高而减少,细胞明显皱缩;流式细胞分析结果显示,随着剂量增加,Sub G1期细胞明显增多而G2/M期细胞明显减少;Western blot结果显示,20、40μg/L越桔原花青素组胶质瘤细胞cyclin D1蛋白表达[分别为(2.40±0.18)和(1.82±0.20)]高于对照组(3.06±0.11),差异有统计学意义(P0.05)。结论越桔原花青素可抑制胶质瘤细胞的体外生长,其机制可能与降低胶质瘤细胞内cyclin D1蛋白表达、阻滞细胞周期有关。     

miR-182抑制HES激活Notch信号协调TGF-β信号途径促进急性川崎病

目的探讨miR-182抑制HES1激活Notch信号与TGF-β信号途径,促进急性川崎病的发生及与急性川崎病(KD)临床特征的关系。方法通过血液常规检测KD各组的临床研究数据并检测血清miR-182表达水平与KD患儿临床特征的相关性;采用流式细胞法检测各组外周血中Treg细胞比例;qRT-PCR检测各组外周血中Foxp3、TGF-β、TGF-βRI、TGF-βRII及Smad3、Smad4 mRNA的表达水平;qRT-PCR检测各组中Notch信号途径配体Notchl、Notch3 mRNA及Notch信号途径受体Jagged1、Jagged2 mRNA的表达水平;RT-PCR检测Notch信号途径靶基因HES1 mRNA的表达水平;利用靶基因数据库、荧光素酶报告基因法、qRT-PCR及Western blot检测HES1为miR-182的靶基因及相关靶向调控关系;Western blot检测在HES1处理组中Notch及TGF-β途径受体Notch1、Notch3、TGF-βRI、TGF-βRII、Smad3、Smad4的磷酸化蛋白表达。结果 KD急性组血清中miR-182表达量相对较低;miR-182表达与KD急性期患儿的血小板计数有关(P0.05);KD急性组Foxp3、TGF-β、TGF-βRI、TGF-βRII、Smad3、Smad4、Notch1、Notch3、Jagged1、HES1 mRNA的表达水平明显低于KD治愈组和正常对照组;miR-182能够抑制HES1的mRNA翻译及其蛋白表达;HES1激活了Notch及TGF-β信号通路,诱导了途径受体表达升高。结论 miR-182可以通过下调HES1的表达影响Notch及TGF-β信号途径Treg细胞减少,导致促进急性川崎病的病理进程,miR-182与HES1的靶向调控可能会成为急性川崎病检测与治疗医学的新靶点。     

姜黄素类似物H8对db/db小鼠内脏脂肪代谢影响

目的探讨姜黄素类似物H8对db/db小鼠(糖尿病模型)内脏脂肪代谢的影响及机制。方法将db/db小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮5 mg/kg),H8低、高剂量组(5、10 mg/kg);连续干预8周,称量小鼠体重和内脏脂肪重量,检测血液生化指标,取肾周脂肪组织石蜡包埋,HE染色观察内脏脂肪细胞,免疫荧光法检测内脏脂肪细胞F4/80表达水平;Real-time PCR法检测脂代谢合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、固醇调节元件绑定蛋白(SREBP)mRNA表达水平,蛋白印记法检测FAS、ACC1、SREBP的蛋白表达。结果与模型组比较,低、高剂量H8组小鼠内脏脂肪系数[分别为(3.20±0.23)%、(2.93±0.75)%]明显降低、内脏脂肪细胞体积[分别为(304.7±24.8)、(331.3±18.0)明显缩小(均P0.01),内脏脂肪细胞F4/80表达水平[分别为(0.39±0.06)、(0.43±0.04)]显著降低,脂肪合成相关基因FAS[(217.0±46.5)、(249.1±31.4)]、ACC1 [(54.9±5.4)、(50.4±5.3)]、 SREBP[(14.2±1.7)、(13.4±1.5)]mRNA表达水平均明显下降(均P0.01),脂肪合成相关蛋白FAS[(0.69±0.03)、(0.41±0.06)]、ACC1[(0.11±0.02)、(0.07±0.01)]、SREBP[(0.36±0.05)、(0.41±0.06)]表达也显著降低(均P0.01)。结论姜黄素类似物H8能够改善db/db小鼠内脏脂肪代谢。     

Orai1在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨Orai1蛋白及其mRNA在正常宫颈组织、宫颈息肉组织、宫颈鳞状细胞癌组织中的表达。方法 应用免疫组织化学染色法、免疫印迹法、酶联免疫吸附实验法及实时定量反转录聚合酶链反应法检测Orai1蛋白及其mRNA在正常宫颈组织、宫颈息肉组织、不同分级的宫颈鳞状细胞癌组织中的表达,所得数据用统计软件进行分析。结果 Orai1蛋白及其mRNA在宫颈息肉(蛋白表达量为0.43μg/ml; mRNA相对表达量为2.64)、正常宫颈组织(蛋白表达量为0.23μg/ml; mRNA相对表达量为1.90)和宫颈鳞状细胞癌组织中的表达依次减少,并且其表达量随着该肿瘤的分级升高而下降(高、中及低分化宫颈鳞状细胞癌组织中蛋白表达量分别为0.14μg/ml、0.08μg/ml及0.02μg/ml;高、中及低分化宫颈鳞状细胞癌组织中mRNA相对表达量分别为1.32、0.58及0.18)。结论 Orai1的表达变化与宫颈鳞状细胞癌的发生、发展及侵袭性相关,该分子有望成为这种恶性肿瘤早期诊断和治疗的新靶点。