健脾消癌方对转化生长因子-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响

目的观察健脾消癌方对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的SW620细胞上皮间质转化的影响,探讨其防治结直肠癌的可能机制。方法体外培养结直肠癌细胞SW620。CCK-8法和Transwell小室实验测定细胞增殖、侵袭及迁移能力,qRT-PCR和Western blot检测E-cadherin和Vimentin的基因和蛋白表达。结果健脾消癌方药物血清能抑制SW620细胞体外增殖、迁移和侵袭能力;与空白组比较,TGF-β1诱导组细胞E-cadherin表达水平下降,Vimentin表达水平升高(P0.05);与TGF-β1诱导组比较,健脾消癌方+TGF-β1组细胞E-cadherin表达水平升高,Vimentin表达水平下降(P0.05)。结论健脾消癌方可通过调控TGF-β1诱导的SW620细胞上皮间质转化过程,抑制结肠癌的生长、侵袭和迁移能力,达到防止结直肠癌复发和转移的目的。     

地五养肝胶囊对肝纤维化大鼠肝组织EMT/MET的影响

目的研究地五养肝胶囊(Diwu Yanggan Capsule,DWYG)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠肝脏上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)/间质-上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET)的影响。方法SPF级Wistar大鼠给予50%CCl4/大豆油腹腔注射建立肝纤维化模型。给予DWYG干预后,采用羟脯氨酸(Hyp)检测试剂盒检测该复方对纤维化大鼠肝脏Hyp含量的影响。进一步,应用Western blot检测该复方对纤维化大鼠肝组织上皮细胞标志分子(E-cadherin)和间质细胞标志分子(Vimentin)蛋白表达水平的影响。应用quantitative real-time RT-PCR检测该复方对纤维化大鼠肝组织促EMT分子(TGF-β1)以及促MET分子(BMP-7)基因表达水平的影响。结果与空白对照组大鼠相比,CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠肝组织Hyp含量显著升高,同时纤维化肝组织中E-cadherin的蛋白表达水平和BMP-7的基因表达水平明显下降,而Vimentin的蛋白表达水平和TGF-β1的基因表达水平明显升高。给予DWYG后,干预组大鼠肝组织Hyp含量较模型组大鼠显著降低,同时纤维化肝组织中E-cadherin的蛋白表达水平和BMP-7的基因表达水平均显著上调,而Vimentin的蛋白表达水平和TGF-β1的基因表达水平显著下调,且纤维化肝组织中TGF-β1/BMP-7比值明显下降。结论 EMT/MET失衡参与了CCl4诱导的大鼠肝纤维化的发生与发展,DWYG可通过调控EMT/MET平衡(抑制EMT而促进MET)减轻肝纤维化的病变,其调控机制与降低纤维化肝组织中TGF-β1/BMP-7比值相关。     

芪术抗癌方对肝癌细胞上皮间质化的影响

【目的】探讨芪术抗癌方对肝癌HepG2细胞上皮间质化的影响。【方法】将HepG2细胞分为空白对照组,转化生长因子β1 （TGF-β1） 组,TGF-β1+芪术抗癌方1 mg/mL组,TGF-β1+芪术抗癌方2 mg/mL组等4组,显微镜下观察处理24 h后细胞的形态变化,划痕实验观察24 h细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测细胞上皮间质化相关蛋白E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）、Vimentin、Snail、纤黏蛋白（Fibronectin）的表达情况。【结果】 HepG2细胞加入TGF-β1后出现上皮间质化样多形改变,而芪术抗癌方2个治疗组均能抑制这一细胞形态改变。划痕实验结果显示,TGF-β1组划痕愈合百分比较空白对照组显著增加（P < 0.05）,而芪术抗癌方2个治疗组划痕愈合百分比较TGF-β1组显著减小（P < 0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示：TGF-β1组E-cadherin表达水平较空白对照组降低,N-cadherin、Vimentin、Fibronectin和Snail表达水平较空白对照组均升高,其中2组的Fibronectin表达水平比较,差异有统计学意义（P < 0.05）;与TGF-β1组比较,芪术抗癌方2个治疗组E-cadherin表达水平均升高,N-cadherin、Vimentin、Snail和Fibronectin表达水平均降低,其中,芪术抗癌方1 mg/mL组Vimentin、Snail 表达水平,与 TGF-β1 组比较,差异有统计学意义（均 P < 0.05）,芪术抗癌方 2 mg/mL 组 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail、Fibronectin表达水平,与TGF-β1组比较,差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。【结论】 芪术抗癌方对TGF-β1诱导的HepG2细胞上皮间质化具有抑制作用。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

苦豆碱对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨苦豆碱(aloperine, Alo)对三阴性乳腺癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 体外培养人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-468,加入不同浓度(50、100、200μmol/L)Alo干预处理,免疫细胞化学法观察三阴性乳腺癌细胞中上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)的表达;Real-time qPCR法检测三阴性乳腺癌细胞转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)及EMT相关标志物如：E-cadherin、胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1, ZO-1)、波形蛋白(Vimentin)、间质细胞钙黏蛋白(N-cadherin)和Snail的mRNA水平;Western blot法检测三阴性乳腺癌细胞内TGF-β1、ZO-1、Vimentin、 N-cadherin及Snail的表达;Transwell小室法检测三阴性乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力。结果 Alo可上调MDA-MB-231和MDA-MB-4...     

北沙参石油醚部位抑制TGF-β1诱导的A549细胞上皮间质转化

探讨北沙参石油醚部位对TGF-β1诱导的肺癌Ⅱ型上皮细胞A549上皮间质转化的抑制作用及其可能机制。以A549细胞为研究对象,采用5μg·L~(-1)TGF-β1诱导的上皮间质转化模型进行实验。设置空白对照组、模型组、北沙参石油醚组。MTT法检测北沙参石油醚部位对A549细胞存活率的影响;Real-time PCR分析北沙参石油醚部位对诱导后A549细胞ColⅠ,E-cadherin,Vimentin,α-SMA mRNA表达水平的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测北沙参石油醚部位对诱导后细胞羟脯氨酸(HYP)分泌水平影响。细胞划痕检测北沙参石油醚部位对细胞运动能力的影响。从实验结果可以看出,北沙参石油醚部位能抑制A549细胞生长且呈药物浓度依赖关系。与模型组相比,北沙参石油醚部位能有效抑制上皮间质转化的标志性蛋白ColⅠ,Vimentin,α-SMA基因的表达,促进E-cadherin基因的表达。降低细胞内羟脯氨酸含量,同时降低细胞的运动能力。由此表明,北沙参石油醚部位能有效抑制TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞发生上皮间质转化,是特发性肺纤维化的潜在治疗药物。其机制可能通过调控ColⅠ,Vimentin,α-SMA,E-cadherin而实现。     

柚皮素基于TGF-β2介导对白内障晶状体病理性上皮间充质转化的作用研究

目的 探讨白内障的发病机制是否与人晶状体上皮细胞系B3(HLE-B3)的病理性上皮间充质转化(EMT)有关，并评价柚皮素基于转化生长因子-β2(TGF-β2)介导对白内障晶状体病理性EMT的作用及机制。方法 常规培养HLE-B3细胞，筛选TGF-β2和柚皮素的最佳浓度后，TGF-β2处理HLE-B3细胞诱导EMT，建立白内障体外模型。随机将细胞分为对照组(CG)、TGF-β2组(TGF-β2)、柚皮素组(Nar)、柚皮素+TGF-β2组(Nar+TGF-β2)培养48 h，采用跨孔迁移实验检测细胞侵袭能力，伤口愈合实验测定HLE-B3的迁移能力，细胞计数法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡情况，5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法测定细胞增殖能力。Western Blot和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测EMT相关标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)的表达水平。结果 (1)细胞活性与增殖：与CG组比较，Nar组和Nar+TGF-β2组细胞活性较低(t_Nar=16.404,t     

化痰通瘀解毒方水提取物通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胃癌细胞株MKN-45上皮-间质转化及侵袭迁移

目的:观察化痰通瘀解毒方对人胃癌细胞MKN-45侵袭迁移能力和上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响,并探讨其与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。方法:以转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1) 10 ng/m L诱导MKN-45细胞构建EMT模型;采用Transwell小室实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭、迁移能力;采用Western Blot法检测EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:TGF-β1能够明显增强MKN-45细胞侵袭、迁移能力,诱导MKN-45细胞发生EMT:E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达上调;同时,TGF-β1能诱导MKN-45细胞Wnt1和β-catenin蛋白表达上调。化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)均可显著抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞侵袭迁移及EMT:E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达下调;同时,化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)还可下调Wnt1和β-catenin蛋白表达,且上述结果中化痰通瘀解毒方在10、20、40μg/m L剂量组间存在剂量依赖性; Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939与化痰通瘀解毒方40μg/m L均可明显抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞EMT和侵袭迁移,且XAV939可协同化痰通瘀解毒方40μg/m L抑制TGF-β1诱导的EMT和侵袭迁移。结论:化痰通瘀解毒方能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制TGF-β1诱导的EMT,进而降低MKN-45细胞侵袭迁移能力。     

天龙咳喘灵提取物对A549细胞上皮间质转化的影响及机制研究北大核心CSCD

目的探讨天龙咳喘灵提取物能否抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的A549细胞上皮-间质转化(EMT)及其作用机制。方法 1.用TGF-β1刺激体外培养的A549细胞发生EMT,观察天龙咳喘灵提取物干预后细胞形态的改变,Real-time PCR和Western blot检测上皮标志E-cadherin和间质标志Fibronectin的表达情况。2.检测不同时间点TGF-β1和天龙咳喘灵提取物对Notch1、Jagged1和Hey1表达的影响。3.转染Jagged1si RNA并用TGF-β1刺激细胞,检测E-cadherin和Fibronectin的蛋白表达情况。结果 1.与空白对照组比较,TGF-β1组细胞发生间质细胞形态变化,E-cadherin的m RNA和蛋白表达下调,Fibronectin表达上调;与TGF-β1组相比,天龙咳喘灵提取物组细胞恢复上皮细胞形态,E-cadherin的m RNA和蛋白表达上调,Fibronectin表达下调。2.TGF-β1刺激后,Jagged1、Hey1的表达量随着时间上调,而Notch1表达量无明显变化;天龙咳喘灵提取物可使Notch1、Jagged1、Hey1的表达量均随着时间下调。3.转染Jagged1 si RNA成功敲除Jagged1基因后,TGF-β1诱导的E-cadherin表达下调和Fibronectin表达上调受到抑制。结论天龙咳喘灵提取物通过下调Notch信号通路抑制TGF-β1诱导的上皮间质转化。     

罗勒多糖对TGF-β诱导A549细胞上皮间质转化的抑制作用研究

目的研究罗勒多糖抑制转化生长因子-β(TGF-β)诱导的A549细胞上皮间质转化的作用,揭示罗勒多糖可能治疗特发性肺纤维化的机制。方法 A549细胞分为正常对照组、模型组(TGF-β5 ng·m L~(-1))、罗勒多糖组(TGF-β5 ng·m L~(-1)+罗勒多糖200μg·m L~(-1)),观察各组细胞形态学变化;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测各组Ⅰ型胶原蛋白(colⅠ)和上皮间质转化标志物表达;ELISA法检测各组细胞羟脯氨酸(HYP)浓度。结果与正常对照组比较,模型组细胞成纤维样变;与模型组比较,罗勒多糖组细胞维持上皮细胞形态。与正常对照组比较,模型组colⅠ基因表达明显上调(P0.01),E-cadherin基因表达下调(P0.01),Vimentin、α-SMA基因表达上调(P0.05);与模型组相比,罗勒多糖组E-cadherin基因表达上调(P0.05),Vimentin、α-SMA、colⅠ基因表达下调(P0.05)。与正常对照组比较,模型组HYP含量增加(P0.05);与模型组比较,罗勒多糖组HYP含量减少(P0.05)。结论罗勒多糖能抑制TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化,其作用机制与下调colⅠ、Vimentin、α-SMA基因表达,上调E-cadherin基因表达,降低HYP含量有关,罗勒多糖可用于治疗特发性肺纤维化。     

垂盆草总黄酮通过TGF-β_1/Smad2/3通路干预肝星状细胞上皮间质转化的分子机制

目的:探讨垂盆草总黄酮对肝星状细胞(HSC-T6)增殖及上皮间质转化的影响及其作用机制。方法:将HSC-T6细胞分为空白对照组、水飞蓟素阳性对照组及垂盆草总黄酮低(1 mg/mL)、中(1.5 mg/mL)、高(2 mg/mL)浓度组。MTT法检测各组细胞增殖情况;观察细胞形态学变化;ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;Western blot检测各组细胞TGF-β_1、Smad2/3、E-cadherin、Vimentin蛋白表达;Real-time PCR检测E-cadherin、Vimentin、TGFβ_1、Smad2、Smad3 mRNA表达。结果:垂盆草总黄酮能显著抑制HSC-T6细胞增殖,明显改变细胞形态,降低肝星状细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,上调E-cadherin蛋白及mRNA表达,下调Vimentin蛋白及mRNA表达,并能显著降低HSC-T6细胞中TGF-β_1、Smad2/3蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:垂盆草总黄酮能显著抑制肝星状细胞(HSC-T6)增殖及上皮间质转化,作用机制可能与其抑制TGF-β_1/Smad2/3信号通路的激活有关。     

大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质化的影响

目的:探讨大蒜素对胰腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:常规培养胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别以10μg·L~(-1)转化生长因子-β_1(TGF-β_1),10μg·L~(-1)TGF-β_1+5 mg·L~(-1)大蒜素,5 mg·L~(-1)大蒜素处理PANC-1细胞,另设空白组,镜下观察细胞形态学改变。细胞划痕实验检测大蒜素是否能降低胰腺癌细胞的迁移能力;免疫荧光细胞化学法及免疫印迹法(Western blot)检测各组钙黏附蛋白-E(E-cadherin),波纹蛋白(Vimentin)的表达变化。结果:TGF-β_1能够刺激PANC-1细胞发生典型的EMT形态变化,并伴有E-cadherin表达的上调及Vimentin的下调。划痕实验表明大蒜素能降低胰腺癌PANC-1细胞的迁移能力。免疫荧光细胞化学法及Western blot结果显示,与空白组及TGF-β_1组比较,大蒜素组的E-cadherin表达明显上调(P0.05),Vimentin明显下调(P0.05),这表明大蒜素具有抑制PANC-1细胞产生EMT的效应。结论:大蒜素可抑制胰腺癌细胞发生EMT,进而可能在抑制肿瘤浸润与转移过程中发挥重要作用。     

肾复康对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞HK-2纤维化模型的影响及其机制研究

目的:探讨肾复康含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞株HK-2间质转化的影响及其分子机制。方法:以HK-2细胞作为研究对象,常规培养后将细胞进行如下分组及刺激处理:空白对照组、模型对照组(10 ng/ml TGF-β1刺激)、32 g/kg尿毒清30%含药血清组(30%尿毒清含药血清+TGF-β1刺激)、18.32 g/kg肾复康10%、30%含药血清组(10%或30%肾复康含药血清+TGF-β1刺激)。MTT法检测肾复康含药血清对HK-2细胞活力的影响;显微镜下观察各组细胞间形态学的差异;ELISA法检测各组细胞上清液中I型胶原(collagen I)和纤维连接蛋白(fibronectin)的水平;q-PCR法检测各组细胞内E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和整联蛋白连接激酶(ILK)基因的表达水平;蛋白免疫印迹法检测Smad2/3总蛋白、核蛋白表达及其磷酸化水平;蛋白免疫印迹法检测下游的ILK蛋白表达水平。结果:肾复康含药血清对HK-2细胞的存活率无抑制作用;与空白对照组比较,模型对照组细胞形态由上皮样的铺路石状变成间质样的长梭形,E-cadherin的mRNA水平显著下调(P0.01),Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平显著上调(P0.01),Smad2/3的蛋白磷酸化及核内水平显著上调(P0.01);与模型对照组比较,肾复康各含药血清组E-cadherin的mRNA水平显著上调(P0.01),Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平显著下调(P0.05或P0.01),Smad2/3的蛋白磷酸化及核内水平明显下调(P0.05或P0.01)。结论:肾复康能逆转TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞HK-2纤维化模型的上皮间质转化,其作用机制可能与其抑制胞内Smad2/3-ILK信号通路的活化有关。     

白藜芦醇、雷公藤甲素、肝细胞生长因子对TGF-β1诱导的足细胞损害的不同影响

目的:通过白藜芦醇、雷公藤甲素、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor hepatocyte,HGF)对转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)刺激的小鼠足细胞表型、细胞骨架以及细胞凋亡的影响,分析白藜芦醇、雷公藤甲素、HGF对足细胞损害的不同干预作用及机制。方法:体外分化条件下培养小鼠足细胞10d,TGF-β1诱导作为研究模型,分别用白藜芦醇、雷公藤甲素和HGF干预。流式细胞术检测足细胞线粒体膜电位以及Vimentin、Nestin、E-cadherin等蛋白表达,采用western-blotting技术检测p-cadherin蛋白表达。结果:TGF-β1可诱导足细胞线粒体膜电位显著降低,E-cadherin、p-cadherin、Vimentin等表达水平显著下调,而Nestin表达显著增高。白藜芦醇干预可增高足细胞线粒体膜电位,并显著上调E-cadherin、Vimentin等蛋白表达,但对Nestin则无显著影响;雷公藤甲素可显著抑制TGF-β1对E-cadherin、P-cadherin表达的下调作用,但对线粒体膜电位、骨架蛋白分子Vimentin、Nestin的表达无显著影响。HGF可显著降低Nestin表达,但对线粒体膜电位、Vimentin、E-cadherin、P-cadherin等表达无显著影响。结论:白藜芦醇、雷公藤甲素、HGF均可显著改善TGF-β1诱导的足细胞损害,但作用位点不尽相同,并具有互补性。     

臭牡丹总黄酮通过调控Wnt/β-catenin通路影响A549细胞上皮间质转化研究

目的探讨臭牡丹总黄酮对人肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用及其机制。方法将pcDNA3.1+空载体与S45位点突变的β-链蛋白(S45A-β-catenin)真核过表达载体转染A549细胞,给予臭牡丹总黄酮干预。MTT法检测细胞的相对存活率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞β-catenin、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、转录因子Snail 2(Slug)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β的表达水平。结果转染S45A-β-catenin质粒后,A549细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显增强,β-catenin、vimentin蛋白表达水平显著上调,E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白的表达水平显著下调。臭牡丹总黄酮可抑制A549细胞的增殖、迁移与侵袭能力,对转染S45A-β-catenin质粒组的细胞作用尤为明显。对转染空载质粒的A549细胞,可上调E-cadherin、GSK-3β、P-GSK-3β表达,下调β-catenin、vimentin表达;对转染S45A-β-catenin质粒的A549细胞,可下调β-catenin、vimentin表达。结论抑制细胞中β-catenin的高表达并调控下游的一系列因子,从而影响Wnt/β-catenin通路诱导的上皮间质转化(EMT)现象可能是臭牡丹总黄酮抑制肺癌侵袭、转移的重要作用机制之一。     

基于高内涵细胞成像系统研究黄芩苷对人肺癌A549 细胞上皮间质转化模型的影响

目的基于高内涵细胞成像系统（HCS）探讨黄芩苷（Baicalin）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肺癌 A549 细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法体外培养人肺癌A549 细胞,用TGF-β1 诱导A549 细胞发生上 皮间质转化,设立空白对照组（TGF-β1 0 ng·mL-1）、TGF-β1 模型组（TGF-β1 5 ng·mL-1）和黄芩苷干预组 （TGF-β1 5 ng·mL-1 +黄芩苷5、10、20 μmol·L-1）。采用MTT 法检测黄芩苷对A549 细胞活性的影响;以 TGF-β1 诱导人肺癌A549 细胞发生上皮间质转化,并加入不同浓度黄芩苷干预,采用HCS 分析细胞肌动蛋白 应激纤维（F-actin）纹理强度、细胞面积、细胞圆度和细胞长度等形态学变化,以及细胞黏附能力和运动迁移能 力变化;RT-qPCR 法检测上皮间质转化相关标志基因Collagen I、FN1、Vimentin 和E-cadherin 的相对表达 量。结果黄芩苷干预A549 细胞48 h 后半数抑制浓度（IC50）为22.59 μmol·L-1。HCS 分析结果显示,与空白对 照组比较,TGF-β1 模型组细胞形态呈间质细胞样（纺锤形）变化,F-actin 纹理强度增强（P＜0.01）,细胞长度 和细胞面积增大（P＜0.01）,细胞圆度减小（P＜0.01）,黏附率降低（P＜0.01）,迁移率和迁移速度升高（P＜ 0.01）;与TGF-β1 模型组比较,黄芩苷干预组细胞形态呈上皮细胞样（不规则多边形）变化,F-actin 纹理强度 减弱（P＜0.05,P＜0.01）,细胞长度和细胞面积减小（P＜0.01）,细胞圆度增大（P＜0.01）,黏附率升高（P＜ 0.01）,迁移率和迁移速度降低（P＜0.05,P＜0.01）。RT-qPCR 结果表明,与空白对照组比较,TGF-β1 模型组 Collagen Ⅰ、FN1 和Vimentin 的mRNA 相对表达量升高（P＜0.01）,E-cadherin 的mRNA 相对表达量降低（P＜ 0.01）;与TGF-β1 模型组比较,黄芩苷干预组Collagen I、FN1 和Vimentin 的mRNA 相对表达量降低（P＜ 0.05,P＜0.01）,E-cadherin 的mRNA 相对表达量升高（P＜0.05,P＜0.01）。结论黄芩苷能够有效阻止 TGF-β1 诱导的人肺癌A549 细胞上皮间质转化进程,提示HCS 是一种多参数系统分析细胞上皮间质转化的有 效工具。     

丹皮酚对TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化的抑制作用及其机制研究

目的:探讨丹皮酚(Paeonolum,Pae)对TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化的抑制作用及机制。方法:将细胞分为5组:无血清对照组、TGF-β_1组、TGF-β_1+10 mg/L Pae组、TGF-β_1+50 mg/L Pae组、TGF-β_1+100 mg/L Pae组。TGF-β_1作用24 h,后加入相应药物继续培养48 h,用倒置显微镜观察各组细胞形态学变化,Western blot法检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达的变化,RT-PCR法检测Twist mRNA表达变化。结果:①倒置显微镜下观察:10μg/L TGF-β_1刺激72 h后,HK-2细胞形态发生明显改变,变成长梭形,且细胞间的缝隙变大,Pae各个剂量组作用后,细胞的形态趋向于铺路石状,高剂量组变化最显著。②Western blot结果显示:丹皮酚组能剂量依赖地提高E-cadherin蛋白表达,降低Vimentin蛋白表达。③RT-PCR结果显示丹皮酚能剂量依赖地降低HK-2细胞的Twist mRNA表达。结论:丹皮酚能显著抑制TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化萁作用机制可能与抑制Twist mRNA表达有关。     

人参皂苷Rg1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2中炎症反应和纤维化的影响及可能的机制。方法 细胞计数法(CCK-8)检测不同浓度人参皂苷Rg1对细胞活性的影响。HK-2细胞随机分为正常对照组、高糖组、低、高人参皂苷Rg1组。ELISA检测TNF-α和IL-1β,Western blot分析α-SMA、E-cadherin、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达情况。结果人参皂苷Rg1对HK-2细胞无明显毒性作用。与正常对照组相比,高糖组TNF-α和IL-1β含量升高(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平上调(P 0.05),E-cadherin的表达水平下调(P 0.05);与高糖组相比,低、高人参皂苷Rg1组TNF-α和IL-1β含量降低(P 0.05),α-SMA、Fn、TGF-β1、Smad 2和Smad 3的表达水平下调(P 0.05),E-cadherin的表达水平上调(P 0.05)。结论人参皂苷Rg1通过抑制HG诱导的肾小管上皮细胞炎症反应和EMT来阻碍肾纤维化进展,其机制可能与阻断TGF-β/Smad信号通路有关。     

金贝口服液对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的作用研究

目的:探讨金贝口服液对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的治疗效果,并初步探讨其作用机制,为金贝口服液治疗肺纤维化提供实验依据。方法:40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金贝口服液1. 8ml/只、3. 6ml/只、7. 2ml/只剂量组,模型组和金贝口服液低、中、高剂量组大鼠气管内一次性注入博莱霉素5mg/kg构建大鼠肺纤维化模型,对照组注入等量生理盐水。造模7天后对照组和模型组灌胃生理盐水,金贝口服液各组灌胃相应剂量药物,造模28天后处死所有动物。取肺组织病理切片进行HE和Masson染色,观察肺泡炎和肺纤维化程度,ELISA法测定肺组织匀浆羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血小板衍生长因子(PDGF)的表达情况,并用Western blot法检测上皮细胞黏蛋白-E(E-cadherin)、胶原蛋白I(Collagen I)、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平。结果:与模型组相比,金贝口服液各组肺组织炎症与纤维化程度均减轻;模型组与对照组相比,HYP、TGF-β、TNF-α与PDGF的含量明显升高,Collagen I、α-SMA和Vimentin蛋白表达水平显著升高,E-cadherin蛋白表达水平明显降低;与模型组相比,金贝口服液各组大鼠肺组织HYP、TGF-β、TNF-α与PDGF的含量明显降低,Collagen I、α-SMA和Vimentin蛋白表达水平显著降低,E-cadherin蛋白表达水平显著升高。结论:金贝口服液对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化具有明显治疗作用,能显著降低肺组织中HYP、TGF-β、TNF-α与PDGF含量,有效调节E-cadherin、Collagen I、α-SMA与Vimentin蛋白水平表达,并呈现一定的量效关系。     

培元固肾方含药血清对已转染HBV质粒的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、E-cadherin蛋白的影响

[目的] 通过培元固肾方含药血清对已转染乙型肝炎病毒（HBV）质粒的人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）的干预,观察其对转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、E-cadherin蛋白表达的影响,探讨培元固肾方抗肾间质纤维化的作用机制。[方法] 体外培养HK-2细胞,应用脂质体转染法,将扩增、鉴定后的质粒转染至HK-2细胞。将细胞分为7组,分别为：Mock组（常规培养的HK-2细胞组）;Control组（转染空载质粒pHY106的HK-2细胞组）;HBV组（转染空质粒与HBV复合物（PHY106-HBV）的HK-2细胞组）;HBV+ACEI组（贝那普利组）;HBV+PYGS Low组（培元固肾方低剂量组）;HBV+PYGS Middle组（培元固肾方中剂量组）;HBV+PYGS High组（培元固肾方高剂量组）,实验分3个独立样本（n=3）。经HBV转染6 h后,予各组相应的药物进行干预。药物干预48 h后,应用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测各组细胞裂解液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）及TGF-β1的表达量;应用免疫细胞化学法检测α-SMA、E-cadherin的表达。[结果] 培元固肾方各干预组对TGF-β1表达均有下调（P<0.001）,对α-SMA蛋白表达明显下调,差异有统计学意义（P<0.001）,对E-Cadherin蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。[结论] 培元固肾方可能通过抑制促纤维化因子TGF-β1的表达抑制乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBV-GN）肾小管上皮细胞的表型转化,对上皮细胞标志性蛋白E-cadherin的表达具有上调作用,对肌成纤维细胞标记蛋白α-SMA的表达具有下调作用,从而防治HBV-GN肾小管间质纤维化。