缺氧诱导滋养细胞转化生长因子3β表达及机理的实验研究

【目的】探讨低氧对滋养细胞转化生长因子-3β(TGF- 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF -1)对TGF -3β表达的调控作用。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF- 1α反义组和HIF -1α正义组。HIF -1α反义组和HIF -1α正义组先加入HIF -1α寡核甘酸,常氧条件培养6h ,再低氧条件培养4 8h。4 8h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测TGF- 3β和HIF -1αmRNA表达水平,Westernblot方法检测TGF- 3β和HIF 1α蛋白表达水平。【结果】与正常对照组相比,缺氧组的HIF -1αmRNA和蛋白表达增加,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF- 1α正义组比较,HIF- 1α反义组HIF -1αmRNA和蛋白表达降低,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也下降。【结论】缺氧可以诱导滋养细胞TGF- 3β表达,并且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF 1调控。     

缺氧诱导滋养细胞转化生长因子3β表达与调控

目的：探讨低氧对滋养细胞转化生长因子3B(TGF-3β)的表达的诱导作用，以及缺氧诱导因子1(HIF-1)对TGF-3β表达的调控作用．方法：滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养：正常对照组、缺氧组、HIF—1α反义组和HIF-1α正义组．HIF-1α反义组和HIF-α正义组先加入HIF-1α寡核苷酸，常氧条件培养6h，再低氧条件培养48h．48h后，收集细胞，实时定量PCR方法检测TGF-3β和HIF-1α mRNA表达水平，Western blot方法检测TGF-3β和HIF-1α蛋白表达水平．结果：与正常对照组相比，缺氧组的HIF-1α mRNA和蛋白表达增加，TGF-3β mRNA和蛋白表达也升高；与HIF—1α 正义组比较，HIF-1α反义组HIF-1α mRNA和蛋白表达降低，TGF-3β mRNA和蛋白表达也下降．结论：缺氧可以诱导滋养细胞TGF-3β表达，并且缺氧对TGF-3β表达的诱导作用可能通过HIF-1调控．     

低氧促进大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成

目的研究低氧(2%氧)对成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成、总蛋白合成及Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达的影响.方法分离培养成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞,采用液体闪烁计数方法检测心脏成纤维细胞胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率来观察细胞胶原蛋白合成变化,并检测3H-亮氨酸掺入率观察细胞总蛋白合成的变化,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达.结果成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞在低氧第24、48小时胶原酶敏感的3H-脯氨酸掺入率较常氧组显著增加,分别增加132%(P＜0.05)和163%(P＜0.01);低氧12 h起Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA表达显著高于常氧培养的细胞.结论低氧能够直接促进体外培养的成年Wistar大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成和Ⅰ、Ⅲ型胶原前α肽链mRNA的表达,提示低氧对心脏成纤维细胞胶原合成代谢的直接调节可能是低氧性心肌纤维化的重要机制.     

红景天甙对低氧诱导肾小管上皮细胞转分化的作用研究

目的 观察红景天甙(salidroside,Sal)对氯化钴(cobaltous chloride,CoCl_2·6H_2O,Co)诱导的低氧状态下正常大鼠近端肾小管上皮细胞(normal rat kidney tubular epithelia cell,NRK52E)转分化的影响并分析其可能的机制.方法 体外培养NRK52E细胞,分为正常对照组,氯化钴低氧组,10、50、100 μmol/L不同浓度红景天甙组.观察低氧标志蛋白低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible foctor-1α,HIF-1α)的表达.倒置相差显微镜观察细胞形态变化;荧光免疫及细胞免疫法检测NRK52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达情况;RT-PCR检测NRK52E细胞α-SMA、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)mRNA的表达;Western blot蛋白印迹检测HIF-1α和α-SMA蛋白的表达;酶联免疫吸附法检测细胞上清液胶原Ⅰ(collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的含量.结果 100 μmol/L Co诱导NRK52E细胞表达HIF-1α.Co组细胞明显肥大、拉长,呈肌成纤维细胞外观.不同浓度Sal组细胞形态介于正常与Co组之间.CO组α-SMA基因、蛋白和TGF-β_1 mRNA表达量较对照组升高(P＜0.05),不同浓度Sal组α-SMA基因、蛋白和TGF-β1 mRNA表达量较Co组减少(P＜0.05).Co组细胞上清液Col-Ⅰ和FN的含量较对照组增加(P＜0.05),不同浓度Sal组Col-Ⅰ和FN的含量明显下降(P＜0.05),以高剂量组最为明显.结论 Sal可在一定程度上改善Co诱导的低氧状态和细胞转分化,减少细胞外基质的增加.其机制可能是通过抑制TGF-β_1和HIF-1α的表达实现的.     

低氧微环境下siRNA靶向沉默HIF 2α基因对前列腺癌PC 3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察体外低氧条件下缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在人前列腺癌细胞PC-3中的表达情况,并研究siRNA沉默HIF-2α基因对前列腺癌PC-3细胞生长及凋亡的影响.方法 在体外培养的PC-3细胞中加入化学诱导剂CoCl2建立低氧模型,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法检测CoCl2诱导HIF-2αmRNA和蛋白表达的时-效和量-效关系.合成HIF-2αsiRNA片段并转染前列腺癌PC-3细胞,采用RT-PCR及Western印迹法检测HIF-2αsiRNA对HIF-2α基因表达的影响,采用MTT法检测转染HIF-2αsiRNA后对PC-3细胞生长的抑制情况,采用流式细胞仪检测RNA干扰对PC-3细胞凋亡的影响.结果 (1)低氧可诱导PC-3细胞的HIF-2αmRNA表达,与常氧组比较,低氧12,24及48 h组的HIF-2αmRNA和蛋白表达量逐渐升高(P<0.05).100μmol/L的CoCl2作用48 h可作为最佳前列腺癌细胞PC-3低氧模型.(2)低氧+HIF-2αsiRNA干扰组的HIF-2αmRNA和蛋白表达水平明显低于低氧+阴性对照组和低氧组(P<0.05),而低氧+阴性对照组与低氧组的HIF-2αmRNA和蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05).低氧+HIF-2αsiRNA干扰组细胞增殖受抑制、细胞凋亡增加(P<0.05),而常氧组、低氧组、低氧+阴性对照组细胞增殖活力和凋亡差别均无统计学意义(P>0.05).     

低氧对大鼠肺组织结构的影响及其机制的探讨

目的观察间歇性常压低氧对SPF级SD大鼠肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、通道蛋白Smad4、Ⅰ型胶原、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及肺组织结构的影响。方法将SD大鼠置于常氧或间歇性常压低氧(101kPa,10%O2,每天低氧8h)条件下,分别于3、7、14、21d每组处死5只大鼠,HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测肺组织TGF-β1、Ⅰ型胶原表达,RT-PCR检测TGF-β1、Ⅰ型胶原的mRNA表达量,Westernblot法检测Smad4通道蛋白的表达,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α的表达。结果 HE染色提示低氧第3d低氧组大鼠肺组织即出现轻度水肿及炎症细胞浸润,且随低氧时间延长,炎症反应加重,肺泡间隔逐渐增厚;低氧组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad4、Ⅰ型胶原蛋白表达量及TGF-β1mRNA、Ⅰ型胶原mRNA均较对照组高(P<0.01),随低氧时间延长,各因子表达量逐渐增高,且Smad4蛋白表达水平与TGF-β1表达水平呈正相关(r=0.944,P<0.01);肺泡灌洗液中TNF-α表达量较对照组高(P<0.01)。结论低氧可能通过诱发肺组织水肿及炎症反应,上调TNF-α水平、激活TGF-β1/Smads通路从而增加Ⅰ型胶原合成,引发细胞外基质沉积,肺泡间隔增厚。     

灯盏细辛对低氧环境下肺成纤维细胞Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1表达的干预作用

目的研究灯盏细辛对低氧环境下肺成纤维细胞Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶1(MMP1)和金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)表达的影响。方法以人胚肺成纤维细胞系MRC-5为研究对象,Western blot法检测常氧、低氧、丝/苏氨酸激酶抑制剂星型孢菌素(straurosporine,SP)、灯盏细辛作用下MRC-5缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1alpha,HIF-1α)、Ⅰ型胶原前α1链(pro-col1α1)、p-smad2蛋白的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1蛋白的含量。结果体外培养的MRC-5,常氧环境下细胞内表达一定的pro-col1α1、p-smad2蛋白,几乎不表达HIF-1α,细胞外基质有较低水平的Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1蛋白表达;低氧环境下细胞内pro-col1α1、p-smad2蛋白、HIF-1α和细胞外基质Ⅰ型胶原、MMP1和TIMP1均较常氧组表达增加(P<0.05);SP(5nmol/L)预处理细胞30min与单纯低氧组比较,其胞内的p-smad2蛋白、pro-col1α1和基质中的Ⅰ型胶原、TIMP1降低(P<0.05),而基质中的MMP1表达增加(P<0.05);灯盏细辛组(12.5μg/mL、50μg/mL)与单纯低氧组比较其胞外的Ⅰ型胶原、MMP1、TIMP1蛋白和胞内的HIF-1α、pro-col1α1和p-smad2蛋白表达均有降低(P<0.05)。结论灯盏细辛可降低低氧环境下HIF-1α蛋白的表达,并部分通过p-smad2信号通路抑制Ⅰ型胶原、TIMP1蛋白生成。     

钙蛋白酶介导低氧诱导的肺动脉高压肺血管重构

目的：研究钙蛋白酶(calpain)在低氧诱导肺动脉高压肺血管重构中的作用及机制。方法：SD大鼠随机分为低氧模型组和常氧对照组。插管法测定大鼠右心室收缩压及平均肺动脉压,右心室/(左心室+室间隔)比值评价右心肥厚指数,HE染色检测血管重构情况,分别采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测肺动脉calpain-1,-2和-4 mRNA和蛋白的表达。原代培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞分为4组：常氧对照组、常氧对照+ MDL28170(calpain抑制剂)组、低氧模型组、低氧模型+MDL28170组。MTS及流式细胞术观察细胞增殖情况,实时荧光定量PCR检测Ki-67及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA) mRNA表达情况。结果：与常氧对照组大鼠比较,低氧模型组大鼠右心室收缩压、平均肺动脉压及右心肥厚指数显著增加,肺动脉血管显著重构;同时,低氧模型组大鼠肺动脉中calpain-1,-2,-4 mRNA和蛋白表达也显著上调。与常氧对照组细胞比较,低氧模型组细胞显著增殖,MDL28170可显著抑制低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖,同时逆转低氧诱导的Ki-67和PCNA mRNA表达上调。结论：calpain介导低氧诱导的肺动脉高压肺血管重构,其机制可能与介导低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖有关。     

低氧诱导因子-1α介导成骨细胞凋亡的实验研究

目的:观察低氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在化学诱导的低氧状态下培养的原代鼠胚成骨细胞中的表达变化,并初步探讨其与细胞调亡之间的关系。方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测低氧和常氧培养不同时间的成骨细胞HIF-1α以及参与细胞调亡的关键基因Caspase-3与Bcl一2的表达变化。应用免疫印迹(Western-blotting)方法分别检测了低氧和常氧培养下成骨细胞Caspase-3和bcl一2蛋白的表达情况。结果:反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各基因的表达变化:经氯化钴处理后,HIF-1α和Caspase-3mRNA的表达随时间的延长逐渐增加(P<0.01),除第0天外,均高于常氧组(P<0.01),而常氧组各时间段则无明显变化(P>0.05);Bcl-2 mRNA表达与前两者相反,随时间的延长呈逐渐降低(P<0.01),除第0天外,均低于常氧组(P<0.01),常氧组各时间段则无明显变化(P>0.05)。免疫印迹(Western-blotting)检测各蛋白的表达变化:通过ECL(enhanced chemi luminescence)显色观察结果并经Lab-work软件分析可见,经氯化钴处理后,Caspase-3蛋白的表达逐渐增加(P<0.01),除第0天外,均高于常氧组(P<0.01),而常氧组各时间段则无明显变化(P>0.05);Bcl-2蛋白表达与前者相反,呈逐渐降低(P<0.01),除第0天外,均低于常氧组(P<0.01),常氧组各时间段则无明显变化(P>0.05)。结论:氯化钴可以化学模拟低氧状态,使成骨细胞表达大量的HIF-1α。HIF-1α可能通过调节Caspase-3和Bcl一2的表达而促进成骨细胞凋亡,且这种促进作用与缺氧的时间有关。     

CRAMP对小鼠心脏成纤维细胞激活、增殖和胶原分泌功能的影响

目的:探讨CRAMP对小鼠心脏成纤维细胞激活、增殖和胶原分泌功能的影响。方法:分离培养小鼠心脏成纤维细胞。第一部分实验将细胞分为3组：对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)组(10 mg/L 48 h)、CRAMP组(TGF-β1处理后给予CRAMP 0.5 mg/L 24 h),采用MTT法检测细胞增殖活性,采用免疫荧光染色检测α-SMA、Ⅲ型胶原和PCNA蛋白表达水平,采用RT-PCR检测Ⅲ型胶原和α-SMA mRNA表达水平,采用Western blot检测Smad信号通路蛋白表达水平。第二部分实验将细胞分为3组：TGF-β1组(10 mg/L 48 h)、SIS3组(TGF-β1处理后给予SIS3 10μmol/L 24 h)、CRAMP+SIS3组(TGF-β1处理后给予CRAMP 0.5 mg/L和SIS3 10μmol/L 24 h),采用免疫荧光染色和RT-PCR检测Ⅲ型胶原和α-SMA蛋白及mRNA表达水平。结果:TGF-β1组成纤维细胞增殖活性,PCNA、Ⅲ型胶原、α-SMA蛋白表达水平,Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达水平,p-Smad2、p-Smad3和Sm...     

低氧依赖低氧诱导因子-1α增强卵巢癌细胞SKOV3中乙酰肝素酶的表达及其侵袭力

目的研究低氧条件下卵巢癌细胞株SKOV3中乙酰肝素酶(HPA)的表达及其侵袭力的变化,探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)与SKOV3细胞侵袭力变化的关系。方法将SKOV3细胞分为常氧组、低氧组和低氧加雷帕霉素组。低氧组细胞在5%CO2 1%O2的条件下培养;在低氧培养前30min,向低氧加雷帕霉素组细胞培养基中加入终浓度为10ng/ml的雷帕霉素。分别于低氧培养12、24、36h收集细胞,采用Western bloting和RT-PCR方法检测HIF-1α和HPA的表达,基质凝胶侵袭实验检测细胞侵袭力。结果低氧条件下,HIF-1α的蛋白表达显著高于常氧组(P<0.05),而HIF-1αmRNA的表达不随氧浓度的降低而改变。低氧组HPAmRNA和蛋白质的表达量均显著高于常氧组(P<0.05)。雷帕霉素能抑制低氧导致的HPA mRNA和蛋白质表达的升高,HPA mRNA和蛋白质的表达均显著低于低氧组(P<0.05)。低氧组细胞的侵袭力显著高于常氧组(P<0.05)。SKOV3细胞HPA的表达与细胞侵袭力呈正相关(r=0.9863,P<0.01)。结论低氧可能依赖HIF-1α途径显著增强SKOV3细胞HPA的表达及其细胞的侵袭力。     

羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响

目的 研究羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响,探讨其抗肺纤维化作用及机制。方法 将实验分成对照组、TGF-β1组、TGF-β1+不同剂量羊栖菜多糖组（25、50、100μg/ml）,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Smad 3、Smad 7、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western blot法检测α-SMA的表达。结果 TGF-β1能诱导肺成纤维细胞增殖及表达Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原、α-SMA（P < 0.05）。羊栖菜多糖可以不同程度抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖以及Smad3mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,且呈剂量依赖性（P < 0.05）,能促进TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达Smad7 mRNA, 呈剂量依赖性（P < 0.05）。结论 在离体细胞,羊栖菜多糖能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、分化与表达,其机制可能与其下调Smad3,促进Smad 7表达从而抑制TGF-β/Smads信号通路有关。     

缺氧应激对HepG-2增殖活性和HIF-1α、MMP-2表达的影响

目的研究缺氧应激对人肝癌细胞HepG-2增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白-2(MMP-2)表达的影响。方法将缺氧(5%O2、5%CO2、90%N2)和常氧环境中培养的HepG-2细胞,在相差显微镜下观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定常氧组和缺氧4、12、24h组HepG-2细胞HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA的表达量;用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定常氧和缺氧12、24h组细胞培养上清MMP-2蛋白含量。结果同时相缺氧组HepG-2细胞增殖活性与常氧组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。常氧下HepG-2细胞不表达HIF-1αmRNA,缺氧4h时HIF-1αmRNA表达量最高,随后下降(P<0.01),但仍高于常氧组;缺氧4h时MMP-2mRNA表达量最高,随后下降,但仍高于常氧组(P<0.01);缺氧组HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA呈高度正相关关系。缺氧24h组HepG-2细胞培养上清液中的MMP-2蛋白含量与常氧24h组含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧应激(5%O2)促进人肝癌细胞HepG-2的增殖作用并上调HIF-1α和MMP-2的表达量。     

苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子和低氧诱导因子1α表达的影响

目的研究不同浓度苦参碱对常氧及低氧下人肺成纤维细胞株MRC-5的增殖及结缔组织生长因子(CTGF)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法采用MRC-5常规体外培养传代,细胞培养至80%融合时,将细胞分组,分别在常氧(21%O2,74%N2,5%CO2)及低氧(1%O2,94%N2,5%CO2)下采用不同浓度苦参碱(终浓度0～3.2mmol/L)干预24h。按培养条件不同分为8组:常氧组(N0组)、常氧+苦参碱0.2mmol/L组(N0.2组)、常氧+苦参碱0.4mmol/L组(N0.4组)、常氧+苦参碱0.8mmol/L组(N0.8组)、低氧组(H0组)、低氧+苦参碱0.2mmol/L组(H0.2组)、低氧+苦参碱0.4mmol/L组(H0.4组)和低氧+苦参碱0.8mmol/L组(H0.8组)。采用四氮甲基唑蓝比色法(MTT法)检测细胞活性,采用Westernblot法检测细胞CTGF、HIF-1α蛋白表达情况。结果低氧对各组细胞增殖有促进作用(P0.05);苦参碱对常氧及低氧下细胞增殖有抑制作用(P0.05),具有浓度依赖性。CTGF、HIF-1α在常氧下有低水平表达,低氧下表达明显增强(P0.01);苦参碱对常氧及低氧下CTGF、HIF-1α的表达均有抑制作用(P0.05)。结论苦参碱对常氧及低氧下培养的MRC-5细胞增殖有抑制作用,对细胞CTGF和HIF-1α表达有抑制作用,且具有一定浓度依赖性。     

乏氧和低糖条件下SPCA1肺癌细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA的表达变化

【目的】观察乏氧和低糖对SPCA1细胞凋亡的影响及乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)的表达变化。【方法】乏氧低糖处理后用流式细胞术检测SPCA1细胞凋亡率,Western Blotting检测HIF-1α蛋白表达,Northern Blotting检测Glut-1 mRNA表达水平。【结果】乏氧和/或低糖处理后48 h,乏氧高糖组SPCA1细胞凋亡指数(10.2±1.6)%,显著高于常氧高糖组(3.4±1.1)%(P<0.01),乏氧低糖组(32.6±4.7)%显著高于常氧低糖组(4.6±1.4)%(P<0.01)。常氧条件下SPCA1细胞不表达HIF-1α蛋白,Glut-1 mRNA仅轻微表达,但在乏氧和低糖条件下HIF-1α蛋白和Glut1 mRNA表达明显增加。【结论】乏氧低糖条件下SPCA1细胞HIF-1α蛋白和Glut-1 mRNA表达增加,提示SPCA1肺癌细胞通过增加糖代谢以适应乏氧和低糖。     

阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导肾成纤维细胞表型活化的影响

目的 观察阿魏酸哌嗪对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾成纤维细胞表型活化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的可能机制.方法 体外培养正常大鼠肾脏成纤维细胞(NRK-49F),利用MTT观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞活力的影响;免疫细胞化学法观察阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达的影响;实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞α-SMA及CTGF mRNA表达的作用,双抗体夹心ABC-ELISA法检测阿魏酸哌嗪对TGF-β1诱导细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)表达的影响.结果 TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏成纤维细胞活力,上调细胞α-SMA、CTGF蛋白和mRNA的表达以及Col Ⅰ、FN的表达.与TGF-β1刺激组相比,阿魏酸哌嗪能部分抑制TGF-β1诱导的细胞活力增加、α-SMA、CTGF的表达和细胞外基质(ECM)的合成.结论 阿魏酸哌嗪可以在一定程度上拮抗TGF-β1诱导的肾纤维化效应.     

HIF-1α在低氧刺激的气道平滑肌细胞中的表达及意义

目的:观察低氧状态下大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)增殖情况及低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)表达变化,探讨ASMC低氧反应机制?方法:体外传代(5代)培养大鼠ASMC分3组:常氧状态下培养为正常对照组(A组),低氧状态下培养为单纯低氧组(B组),低氧 + HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol,2ME)为低氧2ME干预组(C组)?甲基甲苯基硫(MTS)法检测细胞增殖,荧光实时定量RT-PCR检测HIF-1α mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白表达?结果:①大鼠ASMC增殖B组比A组更加明显(1.123 ± 0.006 vs 0.809 ± 0.003,P < 0.05),C组较B组明显受抑制(1.012 ± 0.005 vs 1.123 ± 0.006,P < 0.05);②HIF-1α mRNA和蛋白表达B组比A组表达明显增加(5.265 ± 0.040 vs 0.449 ± 0.017,P < 0.05和0.905 ± 0.013 vs 0.105 ± 0.008,P < 0.05),C组较B组表达明显减少(1.903 ± 0.044 vs 5.265 ± 0.040,P < 0.05和0.278 ± 0.012 vs 0.905 ± 0.013,P < 0.05)?ASMC增殖与HIF-1α mRNA表达呈正相关(r = 0.850),与HIF-1α蛋白表达呈正相关(r = 0.883)?结论:低氧刺激促进大鼠ASMC增殖,可能是由HIF-1α所介导?     

低氧和IL-1β联合刺激对类风湿 关节炎成纤维样滑膜细胞基质 金属蛋白酶表达的影响及机制 研究

探讨低氧和IL-1β联合刺激对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-3、MMP-9水平的影响,并分析缺氧诱导因子1α（HIF-1α）通路和NF-κB通路在其中的调控作用。方法应用组织块法从临床RA患者滑膜组织分离原代FLS,一阶段实验中,细胞分为常氧组、低氧组、IL-1β组、IL-1β+低氧组;二阶段实验中,细胞分为IL-1β+低氧组、YC组、BAY组、YC+BAY组。采用ELISA法和Real-timePCR法分别检测MMP-1、MMP-3、MMP-9水平及MMP-1、MMP-3、MMP-9mRNA表达水平,采用Westernblot法检测HIF-1α和磷酸化NF-κBp65(p-p65)的表达,采用免疫荧光法检测p-p65的表达及核移位。结果与常氧组比较,IL-1β组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平均升高（均P＜0.05）;而与IL-1β组比较,IL-1β+低氧组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平均升高（均P＜0.05）。与常氧组比较,低氧组、IL-1β组MMP-1、MMP-3、MMP-9mRNA表达水平均升高（均P＜0.05）;而与IL-1β组、低氧组比较,IL-1β和IL-1β+低氧组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平均升高（均P＜0.05）。与常氧组比较,低氧组、IL-1β组HIF-1α和p-p65核移位明显增加,而IL-1β+低氧组HIF-1α和p-p65蛋白表达水平及核移位进一步增加。YC或BAY预处理细胞后,IL-1β+低氧组MMP-1、MMP-3、MMP-9水平和mRNA表达水平均下降（均P＜0.05）。结论低氧和IL-1β能协同促进RA关节滑膜组织中FLS生成MMP,而HIF-1α和NF-κB通路在RA炎症缺氧微环境病变机制中起重要作用。     

大鼠肺动脉内皮细胞缺氧环境下培养时TSP-1、TGF-β1及EGFR的表达

目的观察肺动脉内皮细胞在低氧情况下TSP-1、TGF-β1及EGFR的表达。方法原代培养SD乳鼠肺动脉内皮细胞,传代后的细胞分为常氧对照组和低氧(3%氧浓度)实验组。两组细胞经24h培养后,运用免疫组化染色法(SP法)观察TSP-1、TGF-β1及EGFR在肺动脉内皮细胞中的表达情况。结果低氧刺激24h后的内皮细胞TSP-1主要表达部位在胞浆内,阳性表达率为80.00%,与常氧对照组的20.00%阳性率相比差异有统计学意义(P<0.01)。TGF-β1阳性部位在胞核和胞浆中,低氧实验组和常氧对照组阳性表达率分别为92.50%和25.00%,组间差异有统计学意义(P<0.01)。EGFR主要表达部位在胞膜,低氧实验组和常氧对照组阳性表达率分别为89.74%和15.00%,组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论低氧刺激后肺动脉内皮细胞高表达TSP-1、TGF-β1、EGFR,上述因子表达增加可能与低氧性肺动脉高压有关。     

低氧对人肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-1α和低氧诱导因子-2α的差异性调控作用

目的探讨低氧对肺腺癌细胞SPCA-1低氧诱导因子-lα(HIF-lα)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的差异性调控作用及其原因。方法体外培养肺腺癌细胞系SPCA-1细胞在常氧、低氧条件下培养不同时间,采用RT-PCR和Western blot检测低氧对HIF-2α和HIF-lα基因的激活作用。通过加入线粒体活性氧族阻断剂观察低氧对HIF-2α和HIF-lα蛋白表达的影响,探讨其表达调控的机制。结果正常氧条件下,SPCA-1整细胞提取物和细胞核提取物中,HIF-1α几乎不表达,HIF-2α在整细胞提取物中有少量表达,但在细胞核提取物中无明显表达。经低氧(0.5%O2)处理4 h后,HIF-2α和HIF-1α蛋白均明显增多;HIF-2α和HIF-1α蛋白与细胞浓度、氧浓度有关;HIF-1α蛋白在低氧4 h后增加,6 h后显著降低,而HIF-2α蛋白低氧4 h增加后并保持于此水平。HIF-1αmRNA水平在低氧6～12 h时降低,而HIF-2αmRNA表达持续升高;经线粒体活性氧族阻断剂鱼藤酮、二亚苯基碘鎓和粘噻唑菌醇处理4 h后,HIF-2α和HIF-lα蛋白水平明显降低。结论低氧可在肺腺癌细胞诱导HIF-1...