Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤中的动态变化

目的观察Klotho蛋白在缺血再灌注急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的动态变化。方法将120只Wistar雄性大鼠随机分为正常+生理盐水组(Norm+NS)、假手术+生理盐水组(Sham+NS)、假手术+Klotho组(Sham+Klotho)、缺血再灌注手术+生理盐水组(I/R+NS)、手术+Klotho组(I/R+Klotho),建立缺血-再灌注AKI模型,同时各组于造模成功1h、5h、12h、24h分别处死大鼠6只,分别测定血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血肌酐(serum creatinine,Scr),检测血清Klotho蛋白水平,Klotho mRNA表达情况;应用Pearson直线相关法分析AKI时大鼠肾组织以及血清的Klotho蛋白与Scr水平之间的关系。结果缺血再灌注24h后,与Norm+NS组、Sham+NS组相比,I/R+NS组Scr、BUN以及肾小管损伤评分上升(tScr=3.767,4.145,tBUN=14.533,15.047,t肾小管评分=153.093,7.261;P值分别为0.013,0.009,0.001,0.001,0.001,0.008),肾小管上皮细胞明显变性、坏死,而外源性给与Klotho蛋白的I/R+Klotho组Scr、BUN和肾小管损伤评分较I/R+NS组降低(t值分别为10.220,9.571,11.076;P值均0.001),空泡变性减少;I/R+NS组血清、肾组织Klotho蛋白以及Klotho mRNA的表达低于Norm+NS组、Sham+NS组。结论缺血再灌注急性肾损伤后小鼠血清及肾组织局部Klotho蛋白表达均下调,Klotho蛋白水平的下降可能与急性肾损害密切相关,Klotho蛋白可能是AKI的保护性因素。     

白藜芦醇对高脂饮食诱导肾损伤小鼠肾组织单核细胞趋化蛋白1及转化生长因子β1表达的影响

目的观察白藜芦醇(resveratrol,Res)对高脂饮食诱导肾损伤小鼠肾组织单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响,并探讨其肾脏保护机制。方法 24只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,每组7只:正常对照(normal control,NC)组、高脂饮食(high-fat diet,HFD)组和高脂饮食+白藜芦醇干预(high-fat diet with resveratrol intervention,HFD+Res)组。HFD+Res组小鼠每日予以白藜芦醇[35 mg/(kg·d)]灌胃,NC和HFD组予以同等剂量的羧甲基纤维素钠灌胃。12周时,常规生化检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)及尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,采用HE染色法观察肾组织病理学改变,免疫组织化学法、蛋白印迹法检测肾组织中MCP-1和TGF-β1的表达水平。结果正常对照组、高脂饮食组和高脂饮食+白藜芦醇干预组3组间在TC(F=48.688,P0.001),TG(F=15.361,P=0.001),LDL(F=50.401,P0.001),Scr(F=27.143,P0.001)及BUN(F=23.369,P0.001)的差异具有统计学意义。与NC组及HFD+Res组相比,HFD组小鼠的TC、TG、LDL、Scr、BUN水平显著增高(与NC组比较:P0.001;P=0.002;P0.001;P0.001;P0.001;与HFD+Res组比较:P=0.022;P=0.027;P0.001;P=0.001;P=0.001)。HE染色显示,HFD组肾小球系膜细胞和基质稍增多,肾小管上皮细胞胞质增多,HFD+Res组病理损伤减轻。免疫组化结果显示,HFD组MCP-1及TGF-β1表达高于NC组(P=0.004;P0.001)及HFD+Res组(P=0.023;P=0.007),蛋白印迹结果同样显示:HFD组MCP-1及TGF-β1表达高于NC组(P=0.013;P=0.002)及HFD+Res组(P=0.044;P=0.039)。结论 MCP-1和TGF-β1可能参与了高脂肾损伤发病及进展,白藜芦醇可能通过下调其表达起到肾脏保护作用。     

分泌型Klotho蛋白抑制肾间质纤维化的机制研究

目的 研究分泌型Klotho蛋白抑制肾间质纤维化的机制,为治疗慢性肾脏病提供理论基础和新思路。方法 通过单侧输尿管梗阻（UUO）诱导C57BL/6小鼠肾纤维化,并分5组处理：假手术[Sham+磷酸盐缓冲液（PBS）]组、模型（UUO+PBS）组、UUO+Klotho组、UUO+Klotho+胰岛素组、UUO+Klotho+胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组。检测小鼠左肾组织活性氧水平,并用HE及Masson染色评估肾脏病理改变及纤维化程度。实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法以及免疫荧光化学检测肾组织中超氧化物歧化酶2 （SOD2）、纤连蛋白和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平,此外用蛋白免疫印迹法检测磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、AKT、磷酸化磷脂酰肌醇（-3）激酶（p-PI3K）、PI3K、胰岛素受体底物-1（IRS-1）蛋白表达水平。结果 成功建立了UUO小鼠模型。与UUO+PBS组比较,UUO+Klotho组小鼠肾组织的纤维化缓解（P <0.001）,且肾纤维化标志物纤连蛋白和α-SMA mRNA及蛋白的表达降低（P均 < 0.001）,保护因子SOD2 mRNA及蛋白表达升高（P均 < 0.001）。胰岛素及IGF-1可激活肾组织IRS-1/PI3K/AKT通路并破坏Klotho对肾脏的保护作用（P均 < 0.001）。结论 Klotho通过抑制胰岛素下游IRS-1/PI3K/AKT信号通路从而缓解肾脏的纤维化。     

草酸钙肾结石大鼠模型肾组织中Klotho的表达及其意义

目的:初步探究Klotho在草酸钙肾结石大鼠模型肾组织中的表达及其意义。方法:将30只6~8周龄雄性SD大鼠随机分为结石组和对照组,每组15只,结石组采用乙二醇和氯化铵诱导法构建草酸钙肾结石模型。28 d造模完成后采集大鼠24 h尿液、血清标本,比较两组血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血Ca~(2+)、24 h尿Ca~(2+)及草酸(Ox)指标;采集肾组织标本,HE染色比较各组肾脏病理改变及草酸钙结晶的沉积情况,荧光定量PCR、Western印迹及免疫组织化学染色检测两组肾组织中Klotho m RNA及蛋白表达,并对肾脏氧化应激相关指标总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)进行测定。结果:结石组在光学显微镜观察下可见草酸钙结石晶体沉积并有伴肾小管病理性改变,血清Cr,BUN,24 h尿Ca~(2+)及Ox较对照组升高,差异有统计学意义(P0.01),血Ca~(2+)差异无统计学意义(P0.05);结石组Klotho mRNA及蛋白表达较对照组下降,差异有统计学意义(P0.01);肾脏氧化应激相关指标中,结石组T-AOC,CAT较对照组降低,MDA较对照组升高,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:草酸钙肾结石的形成与Klotho表达异常及氧化应激反应有关;Klotho可能通过调控Ca~(2+)代谢和氧化应激反应参与草酸钙肾结石的发病过程。     

山莨菪碱联合普罗布考对糖尿病大鼠造影剂肾损伤凋亡基因FAS/FASL表达的影响

目的研究山莨菪碱联合普罗布考对糖尿病大鼠造影剂肾损伤凋亡基因FAS/FASL及其蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法 SD大鼠45只,腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病模型,并随机分为对照组(N组)、造影剂肾病组(M组)、山莨菪碱组(A组)、普罗布考组(P组)、山莨菪碱联合普罗布考组(A+P组)。10周后P组及A+P组大鼠给予普罗布考灌胃,连续一周。A组和A+P组分别在注射造影剂前及注射后腹腔注射山莨菪碱。血标本检测Scr、BUN,尿标本检测NGAL、KIM-1、IL-18;取左肾组织用于病理研究,右肾组织采用RT-PCR法和Western Blot法检测FAS和FASL基因及蛋白表达水平。结果与M组比较,A组大鼠Scr、肾指数含量明显降低,而BUN、NAGL、KIM-1、IL-18含量均无明显变化;P组BUN、Scr、肾指数、NAGL、IL-18含量均明显降低,而KIM-1无明显变化;A+P组上述指标含量均明显降低。与M组比较,A组和P组大鼠肾脏组织FASL基因和蛋白表达水平均降低,而FAS基因和蛋白表达水平无变化;A+P组基因和蛋白表达水平均低于M组。结论山莨菪碱、普罗布考及两药联用均可下调CIN大鼠肾脏的FAS/FASL表达,减少肾细胞凋亡,减轻肾损伤;且两药联用具有协同作用。     

丹红注射液对脓毒症致急性肾损伤小鼠肾组织线粒体损伤和HMGB1表达水平的影响

目的探讨丹红注射液对脓毒症致急性肾损伤(AKI)小鼠肾组织线粒体损伤和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达水平的影响。方法将50只小鼠随机分为假手术组、模型组和丹红高、中、低剂量组各10只。假手术组仅打开腹腔,暴露盲肠,不进行结扎。模型组和丹红组采用盲肠结扎穿孔手术法制作小鼠脓毒症模型。术后即刻,丹红高、中、低剂量组分别腹腔注射剂量为10 ml/kg、5 ml/kg和2 ml/kg的丹红注射液,模型组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水。术后24 h,生化分析仪测定血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平,HE染色观察肾组织的病理变化和肾组织损伤评分,测定肾组织线粒体中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、Ca~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶活性,检测肾组织三磷酸腺苷(ATP)水平; Western blot检测肾组织HMGB1、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达。结果与假手术组相比,模型组小鼠的肾组织损伤评分、BUN、Scr和MDA水平均明显升高(P 0. 05),ATP含量、Ca~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶、SOD活性和GSH-Px活性均明显下降(P0. 05),HMGB1和Bax的表达明显升高(P 0. 05),Bcl-2的表达明显下降(P 0. 05);与模型组相比,丹红低、中、高剂量组小鼠的肾组织损伤评分、BUN、Scr和MDA水平均明显下降(P 0. 05),ATP含量、Ca~(2+)-ATP酶和Na~+-K~+-ATP酶、SOD活性和GSH-Px活性均明显升高(P 0. 05),HMGB1和Bax的表达明显下降(P 0. 05),Bcl-2的表达明显升高(P 0. 05),且随着剂量增加,其作用逐渐增强(P 0. 05)。结论丹红注射液可呈剂量依赖性抑制HMGB1的表达,保护线粒体结构和功能障碍,减轻脓毒症致AKI肾组织损伤。     

缺血-再灌注急性肾损伤后原位成人干/祖细胞参与肾小管上皮细胞再生

目的对急性肾损伤(AKI)模型大鼠肾小管损伤部位肾原位成人干/祖细胞(ARPC)的动态改变进行观察,探讨ARPC对AKI肾小管再生修复的影响。方法雄性SD大鼠右侧肾切除同时左侧肾动脉夹闭45 min建立缺血-再灌注肾损伤模型(AKI组),设假手术组为对照组(Sham组)。AKI组分别于设定时间处死动物,采集血及肾脏标本,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),行HE染色观察肾脏病理改变,观察肾小管损伤和修复。免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜观察ARPC标记蛋白CD24+CD133+在肾组织的表达。结果 AKI组术后短时间内Scr、BUN即迅速升高[Scr:(124.74±6.93)μmol/L;BUN:(18.27±2.38)mmol/L],第3天达高峰[Scr:(228.32±24.76)μmol/L;BUN:(26.32±3.93)mmol/L],随后缓慢降低,Sham组保持在正常水平。第7天后逐渐下降至正常,第14天肾功能基本恢复正常。光镜下可见AKI早期(第1天)肾小管上皮细胞呈灶性坏死、小管浊肿,管腔面微绒毛消失,部分刷状缘脱落,肾间质水肿使小管间隙扩大;第3~7天病变范围扩大,程度加重,部分小管空泡变性,脱落、坏死,形成蛋白管型,部分基底膜裸露。1周后在肾小管损伤部位出现再生的上皮细胞,细胞呈扁平样,细胞核大小不等,排列紊乱。免疫荧光结果显示,AKI早期仅见少许CD24+CD133+细胞,3~5 d后损伤肾小管处出现较多CD24+CD133+细胞[(7.5±2.1)个/视野,(8.3±1.7)个/视野],持续至第14天仍可见较多阳性细胞[(2.2±1.3)个/视野],与Sham组(d0)比较,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论肾缺血-再灌注可引起急性肾小管坏死损伤,但肾小管上皮细胞可通过再生而迅速修复,肾脏结构和功能再建;此过程中ARPC激活并持续表达,可能参与肾小管再生。     

Klotho蛋白早期诊断严重创伤导致AKI的价值

目的观察Klotho蛋白在严重创伤导致急性肾损伤(AKI)患者血清中的变化,探讨其早期诊断AKI的价值。方法选择2017年3-12月该院重症监护室收治的严重创伤导致AKI患者43例,创伤未导致AKI(NAKI)患者40例,分别收集术前(入院15min内),术后2、4、6h的血清样本,再随机选取同期健康对照组40例,最后统一用酶联免疫吸附测定法检测血清Klotho蛋白和肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐(Scr)水平,再进行统计学分析。结果 AKI组患者术前(入院15min内),术后2、4、6hKlotho蛋白与NAKI组和健康对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05);AKI患者术前(入院15min内)Klotho蛋白水平升高,术后2、4、6h逐渐下降。AKI组患者各时间点Scr水平比较及与NAKI组和健康对照组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论检查Klotho蛋白有助于早期诊断严重创伤导致AKI,可作为早期诊断的标志物。     

N-乙酰半胱氨酸上调Sirtuin 3蛋白表达对脓毒症小鼠急性肾损伤的保护作用及机制研究北大核心CSCD

目的探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)调控沉默信息调节因子3(Sirt3)对脓毒症致小鼠急性肾损伤(AKI)的保护作用及其机制。方法将雄性C57BL/6小鼠随机(随机数字法)分为假手术组(Sham)、盲肠结扎和穿孔术组(CLP)CLP+NAC(50 mg/kg)和CLP+NAC(100mg/kg)组,每组10只;CLP造模后24h处死小鼠,留取血液和肾组织样本;采用HE染色法评估各组小鼠肾组织病理损伤;ELISA法检测血清中肌酐(Scr)尿素氮(BUN)、肾损伤分子1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)水平;采用免疫组织化学检测肾组织Sirt3蛋白表达;RT-qPCR法测定Sirt3 mRNA水平;透射电镜下观察肾小管上皮细胞线粒体损伤情况,并计算线粒体密度,同时检测肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD)谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)水平。结果与Sham组相比,CLP导致肾组织病理损伤明显加重(P<0.001),肾功能指标Scr、BUN、KIM-1和NGAL水平均明显升高(均P<0.001),肾组织Sirt3蛋白和mRNA表达均显著降低(均P<0.001),肾小管上皮细胞线粒体结构破坏增加,线粒体密度的明显减低(P<0.001),肾皮质中抗氧化酶SOD、GSH-Px和CAT水平均显著降低(均P<0.001),同时脂质过氧化物MDA显著升高(P<0.001)。与CLP组相比,虽然50 mg/kg NAC预处理组肾损伤评分、肾功能指标Scr、BUN、KIM-1和NGAL水平均有所降低,肾组织中SOD,GSH-Px和CAT的水平均有所升高,但差异无统计学意义。然而,给予100 mg/kg NAC预处理可显著降低CLP引起的肾组织病理损伤(P<0.001),并且均明显降低Scr、BUN、KIM-1和NGAL水平(均P<0.001),显著升高肾组织Sirt3蛋白[(50.20±2.79)vs.(20.00±0.75),P<0.001]和mRNA[(0.57±0.07)vs.(0.41±0.07),P<0.001]表达水平,肾小管上皮细胞线粒体结构更加稳定,线粒体密度明显增加[(0.60±0.05)vs.(0.43±0.06),P<0.001],均显著升高SOD(U/mg)[(67.37±3.79)vs.(21.09±0.89),P<0.001]、GSH-Px(U/mg)[(265.61±9.61)vs.(180.00±3.31),P<0.001]和CAT(U/mg)[(8.58±0.65)vs.(5.19±0.58),P<0.001]水平,同时明显降低MDA(U/mg)表达水平[(40.36±1.79)vs.(83.81±1.70),P<0.001]。结论NAC可通过上调Sirt3蛋白表达显著降低脓毒症小鼠肾组织病理损伤、改善肾功能、维持线粒体结构稳定和降低氧化应激水平,对CLP诱发AKI具有显著的保护作用。     

川芎嗪促进放射损伤小鼠骨髓微环境修复VEGF/flk-1途径作用的研究

目的:探讨川芎嗪对放射损伤小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及其意义.方法:采用蛋白免疫印迹(Western blot)法、免疫组化法及流式细胞术,对放射损伤小鼠BMSCs中VEGF蛋白表达水平、骨髓组织中VEGF受体胎肝激酶-1(flk-1)表达变化、BMSCs凋亡率及细胞周期改变进行分析,同时观察川芎嗪的影响.结果:放射损伤后小鼠BMSCs中VEGF和骨髓组织中flk-1表达均明显低于正常水平,随时间推移而逐渐升高,但照射后第14 d仍未恢复正常;而川芎嗪组在第14 d时已接近正常水平.放射损伤后BMSCs停滞于G0/G1期,S期合成减少,凋亡率明显增加;随时间推移G0/G1期细胞比例呈由高到低变化,凋亡率也逐渐降低,但第14 d时仍未恢复正常;用川芎嗪治疗后,BMSCs的S期合成活跃,凋亡率明显下降,第14 d时恢复更明显,接近正常水平.骨髓切片苏木素-伊红(HE)染色也证实川芎嗪组小鼠造血恢复明显较对照组快.结论:川芎嗪促进BMSCs中VEGF的表达,通过VEGF/flk-1途径改善放射损伤小鼠骨髓微环境,是其促进造血功能恢复的机制之一.     

玻璃体内注射灯盏细辛对糖尿病小鼠视神经再生的影响及相关机制研究

目的 研究玻璃体内注射灯盏细辛对糖尿病小鼠视神经再生的影响及相关机制。方法 取60只小鼠采用高脂高糖饮食和链脲佐菌素(STZ)结合的方法诱导糖尿病模型,以随机数字表法随机分为6组(n=10):①实验组:视神经损伤小鼠,玻璃体内注入灯盏细辛注射液;②对照组:视神经损伤小鼠+磷酸盐缓冲溶液(PBS)注射;③正常组/空白对照组:视神经未损伤小鼠+PBS注射;④沉默+灯盏细辛组:视神经损伤小鼠+GAP-43沉默载体+灯盏细辛注射;⑤沉默组:视神经损伤小鼠+GAP-43沉默载体+PBS注射;⑥阴性对照组:视神经损伤小鼠+阴性对照载体+PBS注射。给药后7、14、21 d,采用苏木精-伊红(HE)染色测量视网膜厚度及视网膜神经节细胞(RGC)的存活数量,Western blotting测量GAP-43蛋白表达水平。结果 与正常组相比,实验组和对照组给药后7、14、21 d RGC数量、视网膜厚度和GAP-43蛋白表达水平均显著降低(P 0. 05);与对照组相比,实验组给药后7、14、21 d RGC数量、视网膜厚度和GAP-43蛋白表达水平均显著增加(P 0. 05)。与空白对照组和阴性对照组相比,沉默组和灯盏细辛干预组小鼠给药后7、14、21 d RGC的数量和视网膜厚度均显著减少(P 0. 05);灯盏细辛干预组小鼠给药后7、14、21 d RGC的数量和视网膜厚度则较沉默组显著增加(P 0. 05);而空白对照组和阴性对照组给药后7、14、21 d以上指标相比差异均无统计学意义(P 0. 05)。灯盏细辛干预组小鼠视神经RGC的数量、视网膜厚度以及GAP-43蛋白相对表达水平均随其干预时间逐渐增加(P 0. 05)。结论 糖尿病引起的视神经损伤可能与GAP-43蛋白的低表达或不表达有关,而通过玻璃体内注射灯盏细辛可通过提高GAP-43蛋白促进糖尿病小鼠的视神经再生。     

齐留通及塞来昔布对小鼠肿瘤组织血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶2表达影响

目的 观察本噻羟脲(齐留通)、塞来昔布单独及联合应用时对荷瘤小鼠肿瘤血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase,MMP-2)基因及蛋白表达的影响.方法 用小鼠结肠癌CT26细胞建立荷瘤小鼠模型,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织中VEGF和MMP-2的基因表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测肿瘤组织中VEGF和MMP-2蛋白的表达.结果 联合用药治疗组、塞来昔布治疗组和齐留通治疗组及相应的干预组VEGF和MMP-2基因、蛋白表达水平均低于其各自对照组(P ＜0.05),两组联合用药组与各单独应用塞来昔布及齐留通组相比VEGF、MMP-2的基因、蛋白表达水平降低(P ＜0.05).联合用药、单独应用塞来昔布及齐留通3组干预组与各自治疗组相比VEGF、MMP-2的基因表达下降(P ＜0.05).结论 齐留通与塞来昔布都可以抑制肿瘤组织VEGF与MMP-2基因及蛋白的表达,且齐留通与塞来昔布各自的剂量减半联合应用抑制效果优于单用任意一种全剂量药物;无论联合用药还是单用任意一种药物,其干预组对VEGF、MMP-2的基因及蛋白表达的抑制作用均优于治疗组.     

MIF依赖性巨噬细胞在顺铂诱导的急性肾损伤中的作用

目的 探讨巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）依赖性巨噬细胞在顺铂诱导的急性肾损伤（AKI）中的作用和机制。方法 MIF基因敲除（MIF^-/-）小鼠被随机分为正常对照组（n = 6）和实验组（n = 18）。正常对照组小鼠尾静脉注射生理盐水,实验组小鼠腹腔注射顺铂建立AKI模型。建模6 h后小鼠被随机分为AKI模型组、巨噬细胞对照组和MIF^-/-巨噬细胞组（每组n = 6）,尾静脉分别注射生理盐水、野生型C57BL/6J小鼠的巨噬细胞、MIF^-/-小鼠的巨噬细胞。3 d后处死小鼠,收集血清和肾脏组织标本。评估肾功能、肾组织病理学改变以及肾组织中单核细胞趋化蛋白（MCP-1）和TNF-α的分布与表达,检测肾组织中Mincle、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、F4/80的蛋白表达。结果 与AKI模型组相比,巨噬细胞对照组小鼠血清肌酐升高（P < 0.001）、肾小管坏死加重（P < 0.001）,肾脏中MCP-1和TNF-α的蛋白表达增加（P均< 0.01）,M1型巨噬细胞增多（P < 0.001）。与巨噬细胞对照组相比,MIF^-/-巨噬细胞组小鼠血清肌酐降低（P < 0.001）,肾小管损伤减轻（P < 0.001）,肾脏中MCP-1和TNF-α的蛋白表达降低（P均< 0.01）,M1型巨噬细胞减少（P < 0.001）。结论 在顺铂诱导AKI的过程中,MIF通过激活Mincle促进巨噬细胞活化并增加炎性细胞因子的产生,导致肾脏炎症损伤加重。     

降钙素原在脓毒症致急性肾损伤患者病情及预后评估中的作用

目的：研究降钙素原（PCT ）在脓毒症致急性肾损伤患者病情及预后评估中的作用。方法选择脓毒症致急性肾损伤患者（AKI组）、脓毒症无急性肾损伤患者（SEP组）和体检健康者（CON组）为研究对象,比较血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、PCT、慢性健康状况评价（APACHEⅡ）评分和序贯器官衰竭估计（SOFA ）评分组间差异,分析PCT和Scr、BUN、APACHEⅡ评分和SOFA评分的相关性,比较不同 PCT 水平患者的病死率。结果AKI组和SEP组Scr、BUN和PCT水平均显著高于CON组（P＜0．05）;AKI组Scr、BUN、PCT、APACHEⅡ评分和SOFA评分显著高于SEP组（P＜0．05）。AKI组PCT水平与Scr、BUN、APACHEⅡ评分和SOFA评分均呈正相关（P＜0．05）,SEP组PCT水平与Scr和BUN无相关性（P＞0．05）,与APACHEⅡ评分和SOFA评分均呈正相关（P＜0．05）。脓毒症致急性肾损伤患者血清PCT越高,病死率越高（P＜0．05）。结论PCT 可作为脓毒症致急性肾损伤患者病情及预后评估的血清标志物。     

脓毒症合并急性肾损伤患者外周血USF2、USP10表达水平及临床意义

目的 探讨脓毒症合并急性肾损伤(AKI)患者外周血上游转录因子2(USF2)、泛素特异性蛋白酶10(USP10)的表达水平及临床意义。方法 选择2018年1月至2022年12月该院收治的259例脓毒症患者,根据是否合并AKI将患者分为AKI组(107例)和非AKI(NAKI)组(152例)。收集临床一般资料,检测外周血中USF2、USP10的表达水平。Pearson分析USF2、USP10与肾功能的相关性。二元Logistic回归分析影响脓毒症患者合并AKI的因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析USF2、USP10诊断脓毒症患者合并AKI的价值。结果 AKI组血清USF2表达水平高于NAKI组,差异有统计学意义(P<0.05),USP10表达水平低于NAKI组,差异有统计学意义(P<0.05)。AKI组USF2表达与尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、胱抑素C(CysC)呈正相关(P<0.05),USP10表达与BUN、Scr、CysC呈负相关(P<0.05)。高序贯器官衰竭(SOFA)评分、脓毒症休克、高表达USF2是脓毒症患者发生AKI的危险因素(P...     

骨髓间充质干细胞联合超短波对大鼠脊髓损伤后早期AQP-4和GAP-43的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)联合超短波(ultrashort wave,USW)治疗对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后功能恢复、水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP-4)和生长相关蛋白43(growth associated protein 43,GAP-43)表达的影响。方法:30只雌性SD大鼠,随机分为5组:sham组、control组、USW组、BMSCs组、USW+BMSCs联合治疗组,采用改良Allen's法制作大鼠SCI模型,术后1d、1周、2周、3周、4周用BBB评分法评价后肢运动功能的恢复情况。术后4周取材行AQP-4和GAP-43的免疫组化染色,并行阳性细胞计数,进行比较分析。结果:术后4周BBB评分各组比较有显著性意义,USW组、BMSCs组、USW+BMSCs组与control组比较P0.001、P0.05、P0.001。USW组、BMSCs组、USW+BMSCs组AQP-4表达水平明显低于control组,有显著性意义(P0.001、P0.05、P0.001)。GAP-43的表达上,BMSCs组、USW+BMSCs组明显多于control组及USW组,分别比较均有显著性意义(P0.001)。结论:单纯USW治疗即可明显改善SCI后神经功能;单纯USW治疗及BMSCs移植治疗均可减轻水肿,以USW作用最为显著;而在促进轴突再生方面,BMSCs组意义更为明显。二者联合治疗在促进功能恢复上并未显现出协同作用,但是在减轻水肿和促进轴突生长方面有协同作用。     

乌司他丁对脂多糖导致的小鼠肺血管高通透性的保护作用及血管内皮钙黏蛋白表达的影响

目的:探讨乌司他丁(UTI)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺血管高通透性的作用及血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)表达水平的变化。方法:选择C57BL/6小鼠40只,随机分为生理盐水对照组(CON组)、ALI模型组(LPS组)、UTI单独给药组(UTI组)、UTI治疗组(UTI+LPS组),每组10只。其中CON组小鼠腹腔注射生理盐水0.2ml;LPS组小鼠腹腔注射LPS 10mg/kg建立ALI模型;UTI组腹腔注射UTI 50 000U/kg;UTI治疗组小鼠腹腔注射LPS 10mg/kg和UTI 50 000U/kg,12h后检测各组小鼠肺血管通透性,并用Western blot方法检测各组小鼠肺组织VE-cadherin的表达。结果:建模后12h,LPS组小鼠肺组织洗脱的伊文思蓝含量明显高于CON组(P0.01),UTI+LPS组小鼠肺组织洗脱的伊文思蓝含量明显低于LPS组(P0.01)。LPS组小鼠肺组织的VE-cadherin表达水平均明显低于CON组(P0.01),而UTI+LPS组VE-cadherin表达水平明显高于LPS组(P0.01)。结论:UTI对LPS导致的小鼠肺血管通透性增高有保护作用,可能是通过上调肺组织VE-cadherin表达水平实现的。     

Klotho与自噬在脓毒症急性肾损伤小鼠中的表达趋势北大核心CSCD

目的研究脓毒症急性肾损伤小鼠中Klotho与自噬的关系。方法选用清洁级健康雄性Balb／c小鼠,用盲肠结扎穿刺术（cecalligationandpuncture,CLP）建立小鼠脓毒症急性肾损伤模型,分别在CLP造模后3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d处死小鼠（n=12只）;假手术组（Sham）（n=6）1d处死,正常组（Normal）（n=6）同时处死。留取血清检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,肾组织行HE和PAS染色,观察光镜病理结果,电镜超微结构观察自噬体的形成,Westernblot和免疫组化检测肾组织Klotho蛋白、LC3蛋白和P62蛋白的表达以及分布。SPSS23．0软件采用独立样本资料的t检验进行统计学分析。结果CLP术后Scr和BUN明显升高,1d时达高峰,分别为（165．64±20．56）~mol／L和（45．51±d．05）mmol／L;HE和PAS染色显示肾小管刷状缘上皮细胞脱落,基底膜暴露,间质炎症细胞浸润,电镜显示肾脏可见自噬小体和吞噬泡。与Sham组相比,Klotho蛋白浓度从3h开始逐渐变淡,至1d时达最低值（t=51．851,P〈0．01）,2d时有所恢复,然后逐渐转浓;LC3-Ⅱ呈相反的变化趋势,从3h开始逐渐增浓,至1d时达峰值（t=-22．676,P〈0．01）,2d时有所下降,然后逐渐变淡,而P62（t=6．43,P=0．002）作为自噬的相关蛋白与LC3-Ⅱ反应相反,表明自噬的激活作用,在1d这个时间点最显著。免疫组化显示Klotho蛋白和LC3-II蛋白主要分布于肾小管胞浆内。CLP术后1d,Klohto蛋白明显减弱（t=-8．371,P〈0．01）,LC3-Ⅱ蛋白明显增浓（t=4．995,P=0．001）。结论脓毒症急性肾损伤是Klotho减少,自噬增强的一个过程,Klotho和自噬的表达具有一定的时间依赖性。     

川芎嗪对糖尿病肾病大鼠肾组织GSK-3β、VEGF和ICAM-1表达的影响

目的探讨川芎嗪对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织糖原合成酶激酶(GSK-3β)、血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和川芎嗪组各10只,模型组和川芎嗪组饲喂高脂高糖饮食,腹腔注射小剂量链脲佐菌素(25 mg/kg)建立DN大鼠模型。川芎嗪组灌胃150 mg/(kg·d)的川芎嗪,1次/d,持续8周,模型组和对照组分别灌胃等量的生理盐水。于治疗前后,测定各组大鼠空腹血糖(FBG);治疗后,测定肾功能相关指标血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的水平和24 h尿蛋白含量;采用Western Blot测定GSK-3β、VEGF和ICAM-1的蛋白表达水平; HE染色观察肾脏组织病理变化。结果与对照组相比,模型组和川芎嗪组大鼠FBG显著升高(P 0. 05),肾功能相关指标SCr、BUN和24 h尿蛋白含量显著升高(P 0. 05),GSK-3β、VEGF和ICAM-1的蛋白表达显著升高(P 0. 05);与模型组相比,川芎嗪组大鼠FBG显著降低(P 0. 05),肾功能相关指标SCr、BUN和24 h尿蛋白含量显著降低(P 0. 05),GSK-3β、VEGF和ICAM-1的蛋白表达显著下降(P 0. 05),HE染色显示肾脏病理变化明显减轻。结论川芎嗪可能通过抑制GSK-3β、VEGF和ICAM-1的表达,改善DN大鼠的肾脏功能。