川芎嗪对缺氧状态下视网膜血管舒缩因子表达影响的实验研究

目的:体外培养牛视网膜血管内皮细胞,观察不同浓度川芎嗪组对缺氧状态下细胞增殖及其舒缩因子表达的影响。方法:选取第6代牛视网膜血管内皮细胞进行培养。将正常培育的细胞加入100 μmol/L的CoCl₂诱导缺氧12 h后,将细胞随机分为三组。缺氧对照组(不含药物、无生长因子及血清的培养液组)、含川芎嗪0.02 μg/ml培养液组、含川芎嗪0.2 μg/ml培养液组。培养24 h后用MTT比色法检测各组视网膜内皮细胞的吸光度值,观察川芎嗪对血管内皮细胞的增殖情况。Western blot法检测各组细胞eNOS及ET-1的表达。结果:川芎嗪0.02 μg/ml组、0.2 μg/ml组的吸光度值明显高于缺氧对照组,差异有统计学意义(P<0.01),并且随浓度的增高吸光度值也增高 0.02 μg/ml组与0.2 μg/ml组间比较,差异有统计学意义(P<0.01)。与缺氧对照组比较,川芎嗪各组eNOS蛋白表达升高(P<0.01),且药物浓度与蛋白表达呈正相关 川芎嗪各组ET-1的蛋白表达均降低(P<0.01),但药物组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:川芎嗪能保护在缺氧环境下受损的视网膜血管内皮细胞,对细胞增殖有一定的促进作用,通过上调eNOS表达,下调ET-1表达,调节其分泌功能和血管舒缩功能,从而维持血管外周阻力和局部舒缩状态。     

银杏叶提取物对缺氧状态下牛视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的观察不同浓度银杏叶提取物对缺氧状态下视网膜血管内皮细胞增殖的影响。方法取第7代牛视网膜血管内皮细胞用于实验,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测血管内皮细胞的增殖情况。结果在CoCl2所诱导的化学缺氧下,视网膜血管内皮细胞增殖减少。与缺氧组比较,0.001、0.01、0.1μg/ml银杏叶提取物组作用24 h及48 h后,血管内皮细胞光密度值均增加(P<0.05)。结论银杏叶提取物对缺氧状态下的视网膜血管内皮细胞有明显的促进增殖作用,其作用与银杏叶提取物的剂量有关。     

川芎嗪、丹参对血管内皮细胞生长的影响

目的:探讨川芎嗪、丹参二种注射液对血管内皮细胞生长的影响.方法:以川芎嗪和丹参作用于血管内皮细胞,采用苔盼蓝染色排除法活细胞计数,倒置相差显微镜观察细胞形态学改变.结果:川芎嗪注射液1.5μg/ml、15μg/ml、150μg/ml作用于ECV304细胞,其计数均较对照组显著减少(P＜0.05).丹参注射液150μg/ml、15μg/ml对ECV304细胞仅有减少趋势.结论:川芎嗪注射液对血管内皮细胞的生长有明显的抑制作用,丹参注射液对血管内皮细胞的生长没有抑制作用.     

山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响

目的研究山豆根对小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6生长、增殖的影响。方法培养小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6并随机分为对照组和处理组,对照组用不含药物的RMPI1640培养基进行处理,处理组分别采用含有400μg/ml、500μg/ml、600μg/ml、700μg/ml、800μg/ml山豆根提取物的RMPI1640培养基进行处理。采用细胞增殖抑制实验、黏附实验、侵袭重组基底膜实验、趋化性运动实验观察山豆根提取物对黑色素瘤细胞B16-BL6增殖、黏附、侵袭和转移的影响。结果山豆根提取物终浓度为700、800μg/ml时,B16-BL6细胞增殖生长OD值明显低于对照组(t=2.526,4.371,P0.05);山豆根提取物终浓度为500、600、700、800μg/ml时,黏附能力OD值明显低于对照组(t=4.856,8.515,8.926,12.357,P0.05),侵袭细胞数明显低于对照组(t=4.661,9.824,12.460,16.300,P0.05),趋化性运动细胞数明显低于对照组(t=2.698,3.906,6.012,7.974,P0.05)。结论山豆根具有抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-BL6增殖、黏附、侵袭和转移的能力,且与药物剂量呈依赖性关系。     

岩大戟内酯A下调T47D细胞分泌VEGF而抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移

目的阐明岩大戟内酯A(JA)刺激的T47D细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞作用效果和机制。方法分别收集20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml浓度JA刺激的T47D细胞上清液为条件培养基(CM),以各组CM分别培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为相应浓度的条件培养基组。利用CCK-8实验观察各组T47D细胞和HUVEC的OD值;细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察各组HUVEC迁移的变化;ELISA和Western blot检测各组T47D细胞Akt、mTOR和VEGF蛋白表达。结果条件培养基组HUVEC细胞OD值、迁移率和细胞划痕面积闭合率均明显下降;各组T47D细胞Akt、mTOR和VEGF蛋白表达显著降低。结论岩大戟内酯A抑制T47D细胞内的Akt-mTOR信号通路,下调VEGF表达而抑制HUVEC的增殖或迁移。     

川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法选取12只兔建立骨关节炎动物模型,体外分离培养软骨细胞,并分为模型组、川芎嗪低剂量组、川芎嗪中剂量组、川芎嗪高剂量组,另选取3只正常兔体外分离培养软骨细胞作为正常对照组。模型组和正常对照组给予10%DMEM培养液进行培养,而川芎嗪低、中、高剂量组分别给予含10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L川芎嗪注射液的培养液进行培养。采用流式细胞仪测定兔软骨细胞周期及增殖指数,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测软骨细胞活性,采用Western-blot法检测软骨细胞中bax、bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组G0/G1期细胞所占比例及PI均明显低于正常对照组(P均<0.05),S期及G2/M期细胞所占比例均明显高于正常对照组(P均<0.05);川芎嗪中、高剂量组G0/G1期细胞所占比例、PI均显著高于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05),而S期及G2/M期细胞所占比例均显著低于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05)。川芎嗪中、高剂量组软骨细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著低于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组与正常对照组比较差异无统计学意义;川芎嗪中、高剂量组软骨细胞活性均显著高于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组仍然低于正常对照组(P<0.05)。模型组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显高于正常对照组(P均<0.05),bcl-2表达量显著低于正常对照组(P<0.05);而川芎嗪各剂量组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显低于模型组(P均<0.05),bcl-2表达量均明显高于模型组(P均<0.05),且川芎嗪高剂量组各指标改善情况均显著优于低剂量组(P均<0.05)。结论川芎嗪能够促进软骨细胞的增殖,同时还能通过上调抗凋亡因子bcl-2表达,下调软骨细胞促凋亡因子bax以及Caspase-3表达而抑制软骨细胞的凋亡。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对人脐静脉内皮细胞血管生成的作用及机制探讨

目的研究川芎嗪与黄芪甲苷配伍对缺氧诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖的影响及机制。方法建立HUVECs缺氧损伤模型,将细胞分为5组,对照组、模型组、川芎嗪(80μg/mL)组、黄芪甲苷(40μg/mL)组及川芎嗪(80μg/mL)+黄芪甲苷(40μg/mL)组,MTT法检测川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对缺氧损伤HUVECs增殖的影响;免疫组化法检测缺氧损伤HUVECs细胞VEGF、Ang-II蛋白表达,Western blotting检测VEGF和Ang-II蛋白的表达,RT-PCR检测VEGF和Ang-II mR NA表达。结果与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷均能提高细胞存活率,川芎嗪与黄芪甲苷配伍组具有极显著差异(P0.001);川芎嗪与黄芪甲苷配伍提高VEGF、Ang-II蛋白表达。同时,川芎嗪与黄芪甲苷配伍组能上调VEGF和Ang-II mR NA的表达(P0.001)。结论川芎嗪与黄芪甲苷配伍可能通过增加血管生成靶向因子VEGF和Ang-II的表达发挥促进血管生成的作用。     

川芎嗪对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖的影响

目的:研究川芎嗪对血管内皮细胞和对VEGF诱导的血管内皮细胞生长、增殖的影响.方法:采用台盼蓝排染法测定人脐静脉内皮细胞系ECV304细胞计数,MTT法测定川芎嗪对血管内皮细胞和对VEGF诱导的血管内皮细胞增殖的抑制.结果:川芎嗪直接作用于ECV304细胞,其细胞计数、吸光度(A)值均较对照组显著减少(P＜0.05);川芎嗪作用于VEGF诱导的ECV304细胞,其A值较对照组显著降低(P＜0.05).结论:川芎嗪能直接抑制血管内皮细胞的增殖,对VEGF诱导血管内皮细胞的增殖也有抑制作用.     

穴位注射川芎嗪抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的实验研究

目的探讨穴位注射川芎嗪抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成的作用。方法将60只C57BL/6J小鼠的健康幼鼠(出生后7 d),随机分为正常对照组、模型对照组(A组)、穴位注射组(B组)、全身用药组(C组),每组15只。除正常对照组外,其余3组于75%高氧环境中饲养5 d,建立氧诱导的视网膜新生血管病变幼鼠模型。B组、C组分别予穴位注射和鼠尾静脉注射川芎嗪稀释液,A组予鼠尾静脉注射等体积的生理盐水。采用双抗体夹心法测定血清血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量,光学显微镜下观察视网膜新生血管内皮细胞核数目。结果 1.血清VEGF含量:正常对照组(9.28±1.26)μg/L、B组(13.35±2.41)μg/L、C组(12.37±3.11)μg/L,均低于A组(18.31±4.33)μg/L,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.视网膜新生血管内皮细胞核数:A、B、C组均可见视网膜新生血管芽,发生率为100%。正常对照组及A、B、C组的新生血管细胞核数分别为6.56±3.41、130.83±41.63、68.39±32.07、59.39+21.78。A组明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);B组、C组均低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B组与C组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论川芎嗪能减少血管增生性视网膜病变小鼠的血清VEGF含量,抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管形成。川芎嗪穴位注射可有效作用于视网膜新生血管病变。     

川芎嗪对高糖作用下人晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的观察川芎嗪注射液对高糖作用下人晶状体上皮细胞(HLEs)凋亡的影响。方法体外培养HLE-B_3,将传代的细胞随机分为正常对照组、高糖组、高糖+川芎嗪组,分别用含5.5 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L葡萄糖、25 mmol/L葡萄糖+0.2μg/mL川芎嗪的培养基培养48 h。TUNEL染色法检测3组HLEs的凋亡率,Western blot法检测3组促凋亡蛋白Caspase-3及抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结果高糖组HLEs凋亡率高于正常对照组及高糖+川芎嗪组(P0.05),高糖+川芎嗪组与正常对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,高糖组Caspase-3表达升高(P0.05),高糖+川芎嗪组表达无明显变化(P0.05);与正常对照组比较,高糖组Bcl-2表达降低(P0.05),高糖+川芎嗪组差异无统计学意义(P0.05)。结论川芎嗪可抑制高糖作用下HLEs凋亡的发生。     

姜黄素对高浓度葡萄糖诱导的RF/6A细胞血管生成的抑制作用

目的观察姜黄素对高浓度葡萄糖培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)增殖活力、迁移和管腔形成的作用。方法将RF/6A细胞分为3组进行培养:对照组(DMEM培养基)、高糖组(DMEM培养基中加入25 mmol/L D-葡萄糖)、高糖+姜黄素组(DMEM培养基中加入25 mmol/L D-葡萄糖+30μmol/L姜黄素),分组培养3 d后,分别采用CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞迁移,Matrigel法检测细胞管腔形成。结果(1)细胞增殖活力:与对照组(99.55±0.57)%相比,高糖组RF/6A细胞增殖活力(72.53±2.20)%明显降低(t=29.07,P=0.000),高糖+姜黄素组RF/6A细胞增殖活力(92.75±2.37)%比高糖组明显升高(t=15.30,P=0.000)。(2)细胞迁移:与对照组(122.00±5.48)个相比,高糖组RF/6A细胞迁移数(142.00±10.18)个明显增加(t=4.24,P=0.002),高糖+姜黄素组RF/6A细胞迁移数(76.50±7.56)个比高糖组明显减少(t=12.66,P=0.000)。(3)管腔形成数:与对照组相比(9.33±2.50)个,高糖组RF/6A细胞管腔形成数(14.83±3.06)个明显增加(t=3.41,P=0. 007),高糖+姜黄素组RF/6A细胞管腔形成数(6.33±1.37)个比高糖组明显减少(t=6.21,P=0.000)。(4)血管分支长度:与对照组相比(3169.67±270.81)μm,高糖组RF/6A细胞血管分支长度(3606.67±325.15)μm明显增加(t=2.53,P=0.030),高糖+姜黄素组RF/6A细胞血管分支长度(2556.50±301.72)μm比高糖组明显减少(t=5.80,P=0.000)。结论姜黄素可维持高浓度葡萄糖培养条件下的RF/6A细胞增殖活力,抑制细胞迁移和管腔形成,提示姜黄素对高糖诱导的RF/6A细胞损伤具有保护作用,并抑制病理性的血管生成。     

川芎嗪对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用研究

目的探讨川芎嗪对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用。方法将36只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、高眼压组和川芎嗪组,每组12只。正常组正常饲养,高眼压组和川芎嗪组应用巩膜静脉烧灼法建模。在大鼠高眼压持续1周后,川芎嗪组给予川芎嗪腹腔注射,正常组和高眼压组给予等量生理盐水腹腔注射,1次/d,连续14 d。实验结束后取大鼠眼球,HE染色观察视网膜形态,TUNEL染色检测视网膜神经节细胞凋亡情况,免疫组化法检测视网膜神经节细胞层中bcl-2蛋白表达情况。结果建模后1周、2周、3周、4周,高眼压组和川芎嗪组眼压值均明显高于正常组(P均0.05),高眼压组和川芎嗪组眼压值比较差异均无统计学意义(P均0.05)。HE染色显示,正常组视网膜各层次呈现规整排列,视网膜神经节细胞单层排列;高眼压组视网膜神经节细胞减少,视网膜萎缩;川芎嗪组视网膜结构层次清晰,视网膜神经节细胞表现与正常组类似,视网膜损伤显著减轻。正常组大鼠视网膜无TUNEL阳性细胞,川芎嗪组TUNEL阳性细胞数显著少于高眼压组(P0.05)。免疫组化检测显示,正常组大鼠视网膜神经节细胞层中可见bcl-2弱阳性表达;高眼压组bcl-2表达有所增强,光密度值明显高于正常组(P0.05);川芎嗪组bcl-2表达明显增强,光密度值明显高于高眼压组(P0.05)。结论川芎嗪能够通过促进bcl-2的表达而抑制视网膜神经节细胞的凋亡并起到保护作用。     

川芎嗪对高转移性人肺巨细胞癌PG-BE1干细胞样细胞黏附能力的影响

目的研究川芎嗪对高转移性人肺巨细胞癌PG-BE1干细胞样细胞黏附能力的影响及可能作用机制。方法采用无血清成球培养法分选PG-BE1细胞中的干细胞样细胞,并检测其表面OCT-4、SOX-2、Nanog蛋白表达及平板克隆形成实验进行验证。再采用人造基底膜黏附实验比较PG-BE1干细胞样细胞在不同环境(常氧和低氧环境)与其原代细胞黏附能力的差异,同时观察不同浓度川芎嗪(终浓度分别为100、300、500μg/ml)及顺铂(2μg/ml)干预后各组干细胞样细胞的黏附能力,以及干预后各组干细胞样细胞表面黏附分子β整合素、CD44V6的表达量。结果与原代细胞相比,PG-BE1干细胞样细胞克隆灶形成能力更强,干细胞样细胞表面的SOX-2、OCT-4及Nanog蛋白的表达相对光密度更强(P0.05或P0.01)。常氧干细胞样细胞和低氧干细胞样细胞黏附能力均明显高于原代细胞(P0.05或P0.01),川芎嗪中、高剂量组及顺铂组干细胞样细胞黏附能力低于对照组(P0.01),川芎嗪高剂量组细胞黏附抑制率最高达42.2%。常氧干细胞样细胞和低氧干细胞样细胞β整合素、CD44V6表达量均高于原代细胞(P0.01),川芎嗪低、中、高剂量组及顺铂组β整合素表达均较对照组下调(P0.01),川芎嗪高剂量组CD44V6表达较对照组亦明显降低(P0.01)。结论 PG-BE1干细胞样细胞对基底膜的黏附能力强于其原代细胞,川芎嗪可抑制其黏附能力,其机制可能与抑制细胞表面β整合素、CD44V6蛋白的表达有关。     

扶芳藤益心方对缺氧/复氧后人心内膜微血管内皮细胞的增殖作用

目的:研究扶芳藤益心方对缺氧/复氧后人心内膜微血管内皮细胞(HUMCE)增殖的影响。方法:取体外培养的第4代HUMCE分为造模组:扶芳藤益心方组(FY)、益心方组(Y)、卡托普利高、中、低浓度组(10-2μmol/L、10-3μmol/L、10-4μmol/L)、对照组(H/R)和非造模组(N)。造模组行缺氧/复氧(H/R)处理,非造模组不做缺氧/复氧处理,两组均添加相应的含药血清干预培养24h后,通过MTT法测定各组OD值,流式细胞仪检测细胞Caspase-3阳性细胞数,酶联免疫法(ELISA)检测各组血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果:与造模组比较,非造模组OD值大(P0.05),VEGFR-2、VEGF含量与Caspase-3阳性细胞数均高于造模组(P0.05)。与对照组比较,扶芳藤益心方组OD值高(P0.05);Caspase-3阳性细胞数升高9.87%(P0.05);VEGFR-2、VEGF浓度升高(P0.05)。与扶芳藤益心方组比较,益心方组、卡托普利中、低剂量组OD值低,卡托普利高剂量组OD值高(P0.05);卡托普利低剂量组VEGFR-2、VEGF浓度低(P0.05),卡托普利高、中剂量组均高于扶芳藤益心方组(P0.05);益心方组、卡托普利中、低剂量组Caspase-3阳性细胞数分别较扶芳藤益心方组降低6.77%、2.49%、5.7%,卡托普利高剂量组升高4.39%(P0.05)。结论:扶芳藤益心方可以提高内皮细胞在缺氧/复氧后的增殖活性,降低内皮细胞的凋亡率,优于益心方组、卡托普利低、中剂量组,且提高缺氧/复氧损伤后内皮细胞VEGFR-2、VEGF浓度,优于卡托普利低浓度组和益心方组,改善内皮功能。     

散血草乙醇提取物对小鼠血管内皮瘤细胞生长影响的研究

目的通过研究散血草乙醇提取物对体外培养的血管内皮瘤细胞(EOMA细胞)生长和凋亡的影响,探讨散血草治疗血管瘤的细胞学基础及理论依据。方法利用小鼠血管内皮瘤细胞株进行体外细胞培养,将实验细胞分为阴性对照组:B1(单纯PBS溶液处理)和不同浓度散血草乙醇提取物干预组:B2、B3(添加药物分别为100μg/m L、1mg/m L的散血草乙醇提取物)。用散血草乙醇提取物干预培养的细胞。观察比较三组体外培养的EOMA细胞在药物干预24h、48h、72h后的细胞生长情况。结果干预后对照组血管内皮瘤细胞生长旺盛,而散血草提取物干预组细胞生长相对缓慢,尤以1mg/ml组为甚。在干预后第24,48,72h时间点上,100μg/ml药物组和1mg/ml药物组细胞Ki67平均荧光强度较对照组低(P0.05);1mg/ml药物组细胞平均荧光强度值较100μg/ml药物组低(P0.05)。在干预后第24,48,72小时时间点上,100μg/ml药物组、1mg/ml药物组细胞凋亡率均较对照组高(P0.05);1mg/ml药物组细胞凋亡率较100μg/ml药物组高(P0.05)。在干预后72h,100μg/ml药物组、1mg/ml药物组VEGFmRNA的表达较对照组低(P0.05)。在干预后72h各组间单个细胞上的VEGFR免疫荧光检测表达无明显差异,但同样大小视野内VEGFR表达对照组最多,1mg/ml组最低。结论散血草乙醇提取物在体外有抑制EOMA细胞生长、促进其凋亡的作用。其对EOMA细胞的作用机制可能与其下调EOMA细胞VEGF的表达水平有关。     

人参皂苷Rb1干预长春新碱抑制骨髓基质细胞增殖的研究

目的:探讨人参皂苷Rb1(GS Rb1)促进小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长及干预长春新碱(VCR)抑制小鼠BMSCs增殖的作用。方法:正常对照组,GS Rb1(1.0、5.0、10.0、15.0μg/ml)诱导BMSCs增殖组,VCR(2.5、5.0、10.0、15.0μg/ml)抑制BM-SCs增殖组,GS Rb1干预VCR抑制BMSCs增殖组,应用MTT法测定BMSCs增殖。结果:①与正常对照组比较,GS Rb1 1.0～10.0μg/ml随浓度升高其促进BMSCs增殖也增加,GS Rb1为10.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);VCR 2.5～15.0μg/ml随浓度的升高抑制BMSCs增殖也增强,VCR 5.0～15.0μg/ml时差异具有显著性(P<0.05);GS Rb1 1.0～15μg/ml各组与VCR 5.0～15.0μg/ml各组比较,以及GS Rb1 10.0μg/ml组与VCR 2.5μg/ml组比较其BMSCs增殖显著增加(P均<0.05)。②GS Rb1 5.0μg/ml、10.0μg/ml1、5.0μg/ml分别与VCR 5.0μg/ml培养,其能显著干预VCR对BMSCs增殖的抑制(P均<0.05)。结论:长春新碱明显抑制骨髓基质细胞生长;人参皂苷Rb1可促进骨髓基质细胞生长且具有干预长春新碱对骨髓基质细胞增殖的抑制作用。     

川芎嗪对缺氧复氧诱导H9C2细胞损伤及凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨川芎嗪在缺氧复氧诱导H9C2细胞损伤中的保护作用。方法:体外培养H9C2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧损伤及川芎嗪预处理模型。细胞随机分为5组:对照组(NC组)、缺氧复氧损伤组(HR组)、川芎嗪预处理L组(TMP-L组,60μg/mL),M组(TMP-M组,200μg/mL)和H组(TMP-H组,800μg/mL)。心肌细胞损伤程度以心肌细胞活力(OD值)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量表示;细胞凋亡程度通过细胞凋亡率测定,并检测bcl-2和bax基因的表达。结果:与NC组比较,HR组细胞活力显著减弱,LDH释放量显著增加,SOD活性降低,MDA含量增多,出现大量心肌细胞凋亡,bcl-2 mRNA表达显著下降,bax mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05);与HR组比较,TMP-M组和TMP-H组细胞活力显著增强,LDH释放量显著减少;SOD活性增强,MDA含量下降;TMP-L组、TMP-M组和TMP-H组心肌细胞凋亡率及bcl-2 mRNA表达显著下降,bax mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:川芎嗪预处理能减轻心肌细胞的缺氧复氧损伤,其作用可能与提高心肌细胞活力、增强SOD活性、降低LDH释放量、减少MDA生成、抑制心肌细胞凋亡有关。     

丹参注射液对兔软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察丹参注射液对兔软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法:取健康4周龄新西兰大白兔24只,取膝关节软骨组织并建立兔膝软骨细胞体外培养体系,采用四甲基偶氮噻唑蓝比色法(MTT)检测软骨细胞2-5代的增长曲线;采用梯度时间法优化丹参注射液干预软骨细胞活性的时效及量效关系;采用RT-PCR法检测各组软骨细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bax的表达。结果:第2-5代细胞的增殖曲线趋势:第1天各代细胞光密度值(OD值)没有显著差异(P0.05),第2天增殖缓慢,第3天增殖逐渐加快,第4天进入生长期,第5、6天增殖变慢,第7、8天增殖进入平台期,第9、10天增殖抑制。OD值随细胞传代,呈减低趋势,第1、3代OD值高于第4、5代,但没有显著差异(P0.05)。时效关系:2组干预24小时OD值没有显著差异(P0.05),干预48小时OD值中剂量组大于对照组(P0.05),干预72、96小时OD值中剂量组大于对照组(P0.01),中剂量组干预72小时OD值显著大于24、48、96小时(P0.05),故选择细胞干预72小时作为以后实验检测时间点。量效关系:第3代软骨细胞用不同丹参注射液终浓度的10%FBS DMEM溶液干预,干预前细胞OD值没有明显差异(P0.05);干预72小时后,400、200、100、50、25μg/L浓度细胞的OD值显著大于0μg/L浓度的OD值(P0.01);50μg/L浓度的OD值显著大于400、200、100、25μg/L浓度的OD值(P0.01);100μg/L浓度的OD值显著大于400、200、25μg/L浓度的OD值(P0.01);100μg/L与50μg/L比较细胞OD值没有显著差异(P0.05)。Bcl-2、Bax表达:诱导凋亡的第3代软骨细胞,加丹参注射液干预24小时后,细胞Bax表达中、高剂量组小于模型组(P0.05),高剂量组小于低剂量组(P0.05);细胞Bcl-2表达中、高剂量组大于模型组(P0.05),高剂量组大于低剂量组(P0.05)。结论:丹参注射液能抑制软骨细胞调亡;可能通过下调软骨细胞促凋亡因子Bax的基因表达,上调软骨细胞促凋亡因子Bcl-2的基因表达,抑制软骨细胞线粒体调亡通路的信号转导实现。     

川芎嗪对1,3-丁二烯致PC12细胞损伤的保护作用

目的：研究川芎嗪对由1,3-丁二烯损伤的PC12细胞生物学特性的影响。方法：用MTT法测定川芎嗪对损伤后PC12细胞活力的影响;流式细胞仪检测川芎嗪对损伤后PC12细胞凋亡和增殖的影响。结果：20、30、50μg/ml川芎嗪均能够提高1,3-丁二烯损伤的细胞活力,能使凋亡细胞比例减少,S和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少,其中30μg/ml浓度的川芎嗪作用最强（F=88.14,P〈0.01）;90μg/ml川芎嗪无明显作用。结论：川芎嗪能抑制由1,3-丁二烯引起的PC12细胞损伤,促进PC12增殖。     

通心络抑制缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡及机制研究

目的 :研究通心络对缺氧诱导的血管内皮细胞凋亡及Caspase 3活性的影响。方法 :培养的牛主动脉内皮细胞分为三组 :正常对照组 ,缺氧组和缺氧加通心络组 ,2 4h后检测凋亡细胞数并计算凋亡百分比 ,以及Caspase 3蛋白的表达与活性。结果 :三组细胞凋亡百分比分别为 7± 0 12 % ,2 8 85± 2 4 6 %和 11 4 8± 1 4 % (P <0 0 5 ) ;通心络对缺氧后血管内皮细胞的Caspase 3蛋白表达无影响 ,但可抑制其活性增高 (41 2± 5 5U/mlvs 6 7 8± 7 2U/ml,P <0 0 5 )。结论 :通心络减少缺氧所致血管内皮细胞凋亡与抑制Caspase 3的活性有关。