超高效液相色谱-串联质谱法同时测定黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白

目的 建立黑巧克力中4种牛奶过敏原蛋白的超高效液相色谱-串联质谱检测方法.方法 从Uniprot数据库筛选牛奶主要过敏原蛋白的特异肽段,用Skyline工具模拟胰酶酶切,确定各肽段的多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)方法.50mmol/L碳酸氢铵(含2mol/L尿素)提取巧克...     

质谱多反应监测技术建立质谱相对定量分析β半乳糖苷酶方法

目的利用质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术,建立不依赖抗体的质谱定量检测蛋白的方法。方法通过skyline软件选择β半乳糖苷酶(Beta-Galactosidase,BG)定量的肽段及母-子离子对并优化;通过5次重复实验计算方法的相对标准偏差RSD(%)(relative standard deviation,RSD);将BG加入到酵母提取物酶切产物中建立复杂背景下标准曲线。结果在多次实验中反复被鉴定的可用于蛋白定量分析的BG 3个唯一肽段分别为:VDEDQPFPAVPK,IDPNAWVER,GDFQFNISR;5次重复实验MRM检测BG积分峰面积的RSD均小于6%;3个肽段在0~50×10-6fmol/L的浓度范围内线性相关良好,标准曲线R2值为0.998 52~0.999 55,3个肽段在浓度为0.625×10-6fmol/L时依然可以检测到稳定的质谱峰,显示了方法的高灵敏度。结论建立了MRM质谱相对定量检测BG的方法,为MRM质谱定量检测血清标志物奠定了基础。     

血清和尿液中4种鹅膏肽类毒素的UPLC-ESI-Q-TOF分析

目的建立血清和尿液中α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、二羟鬼笔毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽毒素的超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱测定方法。方法血清样品先用乙腈沉淀蛋白,再用含0.1%TFA的二氯甲烷提取,残渣用含2mmol/L乙酸铵的甲醇-水(30∶70)溶解;尿液样品直接过0.22μm微孔滤膜;样品溶液经HSS T3色谱柱分离后用Q-TOF MS进行测定。结果毒素准分子离子准确质量数及其同位素特征、色谱峰保留时间可作为毒素定性鉴定的依据,血清和尿液样品的检出限分别为10 ng/ml和5 ng/ml,定量限为20 ng/ml和10 ng/ml,加标回收率分别为77.4%~95.6%和73.8%~103.8%,相对标准偏差在3.0%~18.0%和1.2%~25.4%之间。应用该方法测定了大鼠染毒尿液中鹅膏肽类毒素。结论本方法简便、准确、可靠,适用于中毒事件生物样品中4种鹅膏肽类毒素的检测和确证分析。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定干血点中25-羟基维生素D

目的建立干血点中25-羟基维生素D2[25(OH)D2]和D3[25(OH)D3]的超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)同时测定方法。方法干血点经过定量取样,加水超声提取后加乙腈沉淀蛋白,再使用乙酸乙酯:正己烷(2:1,V/V)萃取,氮气吹干后加PTAD试剂衍生,氮吹干后用流动相复溶,使用Waters BEH C18柱分离、电喷雾正离子(ESI+)模式和多反应监测(MRM)检测,同位素内标法定量。结果 25(OH)D2和25(OH)D3分别在全血浓度为5~167ng/m L和1.7~167ng/m L的范围内呈良好的线性关系,相关系数r0.999;检出限(LOD)分别为1.5ng/m L和0.25ng/m L,定量限(LOQ)分别为5ng/m L和1.7ng/m L;样品高低两水平的加标回收率均80%,日内精密度均9%,日间精密度均10%。结论该方法需血量少、灵敏、快速、准确,适用于人群维生素D营养状况的监测。     

超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱分析沼虾过敏原蛋白

目的建立超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱法,分析沼虾中的过敏原蛋白。方法基于Bottomup(自下而上)蛋白分析策略,采用Tris-HCl提取罗氏沼虾样品中的目标蛋白,胰蛋白酶40℃消化6 h,肽段经过色谱分离后采用四极杆静电场轨道离子阱质谱(Full MS/dd-MS~2监测模式,TopN=10)测定,利用UniProt蛋白数据库和Proteome Discoverer软件鉴定过敏原蛋白。结果获得4种过敏原蛋白,分别为原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌浆钙结合蛋白和血蓝蛋白,肽段覆盖率分别为53%、36%、12%和12%,翻译后修饰的位点有天冬氨酸(D)的甲基化,天冬酰氨(N)和谷氨酰氨(Q)的脱酰氨化以及蛋氨酸(M)的氧化。结论超高效液相色谱-四极杆静电场轨道离子阱质谱能获得丰富的肽段及碎片信息,灵敏度和分辨率较高,可用于虾及虾制品的过敏原蛋白鉴定和分析。     

气体辅助液/液微萃取-气相色谱-三重四极杆质谱联用法测定生活饮用水中的15种邻苯二甲酸酯

目的建立气体辅助液/液微萃取(AALLME)-气相色谱-三重四极杆质谱(GC-MS)测定水中15种邻苯二甲酸酯(PAEs)的方法。方法采用气体辅助液/液微萃取技术(AALLME)富集,离心分离,使用EI源,选择离子扫描(SIM)模式下外标法定量检测。结果 15种邻苯二甲酸酯的浓度为100.0 ng/L~1 000 ng/L时,线性关系良好,相关系数(r)为0.994 9~0.999 9,方法的检出限为10.9 ng/L~37.4 ng/L,定量限为38.9 ng/L~100.0 ng/L,加标回收率为75.9%~124.6%,相对标准偏差为7.6%~16.5%。方法的富集倍数为759倍~1 246倍。结论本方法简单、快速、可靠,免去了分散剂的使用,提高了富集倍数,减少了复杂基质的干扰,提高了目标化合物的灵敏度,可以用于生活饮用水中的15种邻苯二甲酸酯的测定。     

饮用水中12种抗生素残留的固相萃取-超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱快速测定法

目的建立了饮用水中12种抗生素残留的固相萃取(SPE)-超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLCQTOF)快速测定法。方法水样经过HLB小柱浓缩萃取之后以ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)为分析柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱;质谱采用高分辨质谱、正离子模式,以精确质量数和二级特征离子定性,以准分子离子峰面积定量。结果在0.1~500 ng/L的线性范围内,所得12种抗生素的回归方程均呈较好的线性关系,r0.99;该方法的检出限为0.018~6.0 ng/L,定量下限为0.06~20 ng/L,回收率为65.4%~84.7%,RSD为4.5%~11.7%。结论该法操作简单、快速、准确、灵敏、适用于饮用水中抗生素的快速筛查测定。     

全血中痕量雷公藤红素的液相色谱／质谱联用法测定研究

目的:建立了一种灵敏、准确的全血中痕量雷公藤红素的液相色i普/质谱联用测定方法.方法:全血样品经醋酸乙酯提取后,在XDB C18反相色谱柱(150 mm×4.6 mm i.d.,5 pμm)上,以0.05%醋酸一醋酸铵(5 mmol/L)溶液/甲醇(25:75,v/v)为流动相,以氢化可的松为内标,采用大气压化学电离源(APCI)在选择离子监测(SIM)模式下进行检测,定量离子为m/z[M-H]-449.4.结果:雷公藤红素在1.0～200.0ng/ml范围具有良好的线性,检出限为1.0 ng/ml,其日内和日间RSD分别小于9.1%和10.5%.结论:本方法可用于全血中痕量雷公藤红素的测定.     

液液微萃取-气相色谱-三重四级杆质谱联用法测定生活饮用水中的20种多氯联苯

目的建立饮用水中20种多氯联苯(PCBs)的液液微萃取-气相色谱-三重四极杆质谱联用(GC-MS/MS)测定方法。方法采用液液微萃取富集,离心分离,13C内标法定量。采用EI源,在多反应监测(MRM)模式下进行检测。结果 20种PCBs在5.0 ng/L~200 ng/L(高氯联苯20.0 ng/L~200.0 ng/L)时,线性关系良好,相关系数(r)为0.997 5~0.999 7,方法的检出限为0.35 ng/L~6.60 ng/L,定量限为1.04 ng/L~19.7ng/L。在0.020μg/L和0.10μg/L 2种水平下的加标回收率为78.2%~114.0%,相对标准偏差为4.6%~10.5%。方法的富集倍数为301倍~632倍。结论本方法采用液液微萃取前处理,气相色谱-三重四级杆质谱联用法多反应监测,水样处理简单、快速、可靠。通过应用7种13C同位素内标物,减少了基质干扰,使目标物得到较好的分离。用GC-MS/MS检测特征离子的二级离子,提高了灵敏度,增强了定性、定量的准确度。可用于生活饮用水中20种PCBs的测定。     

液质联用多肽识别技术用于龟甲的鉴别研究

目的建立龟甲(乌龟)专属性特征肽鉴别方法,用于区分常见8种混淆品(黄喉拟水龟、黄缘闭壳龟、中华花龟、巴西龟、小鳄龟、缅甸陆龟、马来闭壳龟和印度楞背龟)。方法样品以水提法提取,胰蛋白酶酶解,采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)和数据统计软件查找龟甲特征肽,并利用蛋白质搜库技术测序。利用找到的特征肽段,建立超高效液相色谱-串联四级杆质谱(UPLC-QQQ)的专属性龟甲特征肽鉴别方法。结果建立了以m/z 442.7(双电荷)→560.0,631.0为特征肽离子对的UPLC-QQQ专属性鉴别方法,阴性样品无干扰,最低检出浓度为0.4 g/L。对市售44批样品进行检测,其中仅14批样品检出龟甲特征肽。结论该方法的专属性强,符合分析检测的方法技术要求,可用于龟甲与混淆品的鉴别。     

气相色谱-质谱法测定血浆中氟吡酰草胺

目的建立血浆中氟吡酰草胺的气相色谱-质谱测定方法。方法血浆中的氟吡酰草胺经乙腈提取,DB-5MS毛细管气相色谱柱分离,采用气相色谱-质谱联用仪检测,选择离子模式,定性离子质荷比(m/z)376,定量离子m/z 238。结果血浆中氟吡酰草胺在质量浓度为10.00~1 200.00μg/L范围内线性关系良好,相关系数为0.999 4,检出限为2.5μg/L,定量下限为7.5μg/L(取血浆0.20 m L)。批内相对标准偏差(RSD)为0.39%~6.52%,批间RSD为0.93%~8.80%,加标回收率为95.25%~99.48%,样品在-18℃条件下至少可以保存10 d。结论本方法灵敏度高、精密度和准确度好、操作简便,可作为氟吡酰草胺代谢研究中血浆中氟吡酰草胺水平的检测方法。     

超高效液相色谱串联质谱法测定人尿中美沙酮

目的建立快速测定人尿中美沙酮的超高效液相色谱串联质谱测定方法。方法尿样采用0.10 mol/L氢氧化钠溶液碱化后,经乙醚漩涡提取、离心,吸取上清液浓缩吹干,用80%甲醇定容后进液相色谱-质谱系统分析,同位素内标法定量。色谱柱采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸,流速为0.4 ml/min,柱温为35℃,进行梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子源,在正离子多反应监测模式(MRM)下进行检测。结果美沙酮在1 ng/ml~100 ng/ml时线性关系良好(r0.999);检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.003 mg/L和0.01 mg/L;低、中、高3个浓度(2 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml)的回收率分别为99.8%、100.1%、100.3%,精密度(RSD)分别为1.51%、2.72%、2.25%。结论该方法简便、灵敏、准确、稳定,适用于人尿中美沙酮的测定,可满足美沙酮临床研究尿样监测的要求。     

阑尾炎患者血清免疫球蛋白及多项白介素、CRP、ICAM-1、TNF-α水平研究

目的探讨阑尾炎患者血清免疫球蛋白及多项白介素、CRP、ICAM-1、TNF-α水平的变化规律。方法选取2009年1月-2011年5月于本院进行治疗的82例阑尾炎患者为研究对象,将其设为观察组,同时选取82名健康人为对照组,将两组人员的免疫球蛋白、血清IL-6、IL-8、IL-10及CRP、ICAM-1、TNF-α水平进行统计及比较。结果观察组IgM(1.88±0.17)g/L、IgG(12.75±1.29)g/L、IL-6(126.42±15.43)pg/ml、IL-8(131.68±27.84)ng/ml、IL-10(59.97±4.52)pg/ml及CRP(11.08±1.29)mg/L、ICAM-1(440.57±24.65)ng/ml、TNF-α(154.37±25.6)ng/ml水平均高于对照组,IgA(5.62±1.01)g/L水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阑尾炎患者血清免疫球蛋白及多项白介素、CRP、ICAM-1、TNF-α水平呈现一定的变化规律,可为其治疗诊断提供依据。     

超声辅助固相微萃取-超快速液相色谱串联质谱法测定尿液中五氯酚

目的建立准确、灵敏的超声辅助固相微萃取-超快速液相色谱串联质谱(SPME-UFLC-MS/MS)测定尿液中五氯酚(PCP)的方法。方法采用聚离子液体膜(PIL)进行固相微萃取,XR-ODS II色谱柱(100 mm×2.0 mm,2.5μm)为分离柱,以甲醇-乙腈-5 mmol/L乙酸铵水溶液(15∶50∶35,V/V/V)为流动相进行分离,采用电喷雾电离负离子多反应监测模式(MRM)测定。结果尿液中PCP在1.0 ng/L~200.0 ng/L线性相关系数为0.999 1,加标回收率为89.5%~94.9%,日内相对标准偏差(RSDs)为1.3%~4.1%,日间RSDs为2.9%~6.8%,最低定量检出限为1.0 ng/L,与固相萃取方法比较差异无统计学意义。结论建立的方法简便、干扰少、特异性强,可用于尿液中痕量PCP的测定。     

气相色谱-质谱联用法测定生活饮用水中的土臭素和2-甲基异莰醇

目的建立饮用水及水源水中土臭素和2-甲基异莰醇的液液萃取气相色谱-质谱联用测定方法。方法土臭素和2-甲基异莰醇经过正己烷液液萃取、浓缩、进样,经气相色谱-质谱联用法分析测定,选择离子模式定量。结果该方法分离效果好,土臭素和2-甲基异莰醇的浓度为2.5 ng/L~100.0 ng/L时,线性关系良好,线性方程分别为y=1 335.72x+390.6(r=0.999 2)和y=1 130.80x+287.8(r=0.999 3),检出限分别为1.0 ng/L和2.0 ng/L。标准样品添加量为10.0 ng、20.0 ng、50.0 ng时,方法的加标回收率为83%~94%,相对标准偏差(RSD)为3.0%~4.9%。对待测组分在水中的稳定性进行了研究,样品于4℃保存7 d后仍可获得较准确的结果。结论该方法简便,灵敏度高,可用于饮用水及水源水中土臭素和2-甲基异莰醇的测定。     

液相色谱-串联质谱法检测食品中的桔霉素

目的:建立食品中桔霉素的液相色谱-质谱测定方法。方法:样品经处理后,以水(含0.1%甲酸) 乙腈=40 60作流动相,在HypersilGold液相色谱柱(150×2.1 mm,3μm)上进行分离;用三级四极质谱检测器:电喷雾源(ESI),正离子方式,选择反应监测(SRM)对桔霉素的母离子和子离子进行监测并定性定量。结果:本方法桔霉素的标准在0.01~100μg/L范围内线性良好,Y=1042863X-588493,r=0.9998,方法的精密度(RSD)为2.8%,样品回收率95.6%~98.0%,以母离子(m/z 251),子离子(m/z 233和m/z 205)为定性定量离子,检测限为0.01μg/L,取样品5 g,处理定容体积10.0 ml,样品中桔霉素最小检测浓度达0.02μg/kg。结论:本方法简便快速、灵敏、定性定量准确,适合食品中桔霉素的测定。     

急性心肌梗死患者基质金属蛋白酶3及N末端脑钠肽前体水平检测结果分析

目的探讨血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)和N末端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平在急性心肌梗死(AMI)诊断中的意义。方法选择AMI患者61例为AMI组及同期在海盐县人民医院体检的50名正常成年人作为对照组,分别测定两组研究对象血清MMP-3和NT-pro BNP水平,并进行比较。AMI患者再根据是否发生主要心血管事件(MACE)分组,比较患者的血清MMP-3和NT-pro BNP水平;分析AMI患者血清MMP-3和NT-pro BNP水平与心肌梗死相对面积的相关性。结果 AMI组患者血清MMP-3为(75.8±36.2)ng/m L,NT-pro BNP为(3.37±0.21)ng/m L均高于对照组的(29.5±12.4)ng/m L和(0.15±0.08)ng/m L(P0.01);AMI患者中,MACE组患者的血清MMP-3为(89.9±39.5)ng/m L、NTpro BNP为(3.88±0.23)ng/m L均高于非MACE组患者的(67.6±29.8)ng/m L和(3.41±0.20)ng/m L(P0.05);血清MMP-3(r=0.623,P=0.012)和NT-pro BNP水平(r=0.712,P=0.001)均与心肌梗死相对面积呈正相关。结论血清MMP-3和NT-pro BNP水平的升高可能发生AMI,检测MMP-3和NTpro BNP水平对MACE发生可能有预测作用。     

血清中雷公藤甲素的液相色谱/质谱联用法测定研究

目的:建立一种新型、灵敏、准确的人血清中雷公藤甲素的液相色谱/质谱联用测定方法。方法:血清经醋酸乙酯提取后,在Waters C18反相色谱柱(150 mm×3.9 mm i.d.,5μm)上,以醋酸-醋酸铵溶液(5 mmol/L)/乙腈/甲醇(60:30:10,v/v/v)为流动相,以泼尼松龙为内标,采用大气压化学电离(APCI)离子化方式在选择离子监测(SIM)模式下进行检测,定量检测离子为m/z[M-H]-359.1。结果:血清中雷公藤甲素测定的日内与日间精密度分别小于10.7%和11.3%,其在1.0～200.0 ng/ml范围具有良好的线性,检出限为1.0 ng/ml。结论:本方法可用于血清中痕量雷公藤甲素残留的测定。     

多发性硬化症患者血清INF-γ、MMP-9及TIMP-1水平检测的临床意义

目的探讨多发性硬化症患者血清干扰素-γ(INF-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶一1组织抑制因子(TIMP-1)水平检测的临床意义。方法选择2015年8月—2017年3月收治的46例多发性硬化症患者作为观察组,另选择同期行健康体检的健康人30例作为对照组。两组均检测INF-γ、MMP-9及TIMP-1指标水平。同时分别统计观察组急性发作期和缓解期INF-γ、MMP-9及TIMP-1指标水平,与对照组进行比较分析。结果观察组INF-γ、MMP-9、TIMP-1[(11.35±4.58)pg/m L、(22.04±11.24)ng/m L、(4.74±1.13)ng/m L]与对照组[(3.14±1.05)pg/m L、(15.68±4.43)ng/m L、(5.31±1.32)ng/m L]比较,差异有统计学意义(均P0.05)。急性发作期患者INF-γ、MMP-9[(15.32±5.24)pg/m L、(24.05±4.97)ng/m L]指标水平均高于缓解期[(6.28±4.25)pg/m L、(20.13±5.67)ng/m L)]和对照组,差异有统计学意义(均P0.05);缓解期患者INF-γ、MMP-9指标水平高于对照组(均P0.05)。急性发作期TIMP-1指标[(4.48±1.23)ng/m L]水平低于缓解期[(5.20±0.47)ng/m L]和对照组,(均P0.05);但缓解期TIMP-1指标水平与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多发性硬化症存在血清INF-γ、MMP-9及TIMP-1指标异常改变,可作为临床诊断的参考依据,各指标临床检验意义重大。     

LC-MS/MS法直接测定水中甲苯二异氰酸酯

目的建立水中2种甲苯二异氰酸酯异构体的痕量测定方法。方法水中甲苯二异氰酸酯采用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)直接测定,进样量为50μL,样品由T3柱分离,流动相为甲醇和水等度洗脱,串联质谱测定。方法考察了基体效应。结果在质量浓度为0.01 ng/m L^10 ng/m L时线性关系良好相关系数大于0.995。不同水体中甲苯二异酯酸酯检出限为0.01 ng/m L^0.14 ng/m L,精密度在97%~100%,相对标准偏差小于5%。结论应用该方法测定水中甲苯二异氰酸酯的含量,方法准确快速。