黄芩苷对内毒素作用的人牙周膜细胞增殖和分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的:观察野黄芩苷对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和分泌肿瘤坏死因子-α的影响.方法:原代培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,采用酶联免疫方法检测培养上清液中的TNF-α水平.结果: 100 μg/ ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性、刺激人牙周膜细胞分泌肿瘤坏死因子-α.加入LPS同时分别给予0.001～10 μg/ ml不同浓度野黄芩苷,能促进人牙周膜细胞的增殖活性并能抑制LPS刺激人牙周膜细胞肿瘤坏死因子-α的分泌,其中在1 μg/ ml时作用达到最强.结论:野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞具有保护作用.     

中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖（LPS）抑制人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响，并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐（MTT）比色试验和透射电子显微镜技术（TEM）。结果LPS浓度为100μg／ml时明显抑制细胞活性，同时加入LPS和黄芩苷后，细胞活性明显增强（P〈0．05）。100μg／ml LPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤，特别是线粒体损伤严重，同时加入LPS扣黄芩苷（10μg／ml）后，与LPS组比较，超微结构损伤减轻，细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖，对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用，其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。     

柚皮苷对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响

目的探讨柚皮苷(naringin,NRG)对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖及炎症因子表达的影响。方法以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(100μg/mL)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)损伤,采用MTT法检测NRG对LPS诱导HPDLF损伤的保护作用,利用ELISA法和Western blotting法检测NRG对LPS诱导的HPDLF中白介素(interleukin,IL)-6、IL-8、IL-1β等炎症因子蛋白表达的影响,同时利用Real-time PCR方法检测NRG对LPS诱导的HPDLF组IL-6、IL-8、IL-1β等炎症因子基因表达的影响。结果经LPS(100μg/mL)刺激后,HPDLF增殖受到抑制,与CON组比较,LPS组细胞存活率显著降低,细胞周期进程受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的NRG(40,20,10μg/mL)可显著抑制LPS诱导的HPDLF损伤,并可降低细胞内炎症因子表达;与LSP组比较,LPS+NRG 40μg/mL组、LPS+NRG 20μg/mL组、LPS+NRG 10μg/mL组HPDLF存活率显著提升,细胞周期进程加快,抑制IL-6、IL-8、IL-1β蛋白及基因表达水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论NRG对LPS诱导的HPDLF损伤具有保护作用,并可通过抑制LPS诱导的HPDLF中IL-6、IL-8、IL-1β的蛋白及基因表达水平,促进HPDLF增殖。     

肿瘤坏死因子－α对人牙周膜纤维细胞碱性磷酸酶活性的抑制效应

为探讨肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－α，ＴＮＦ－α）在尖周病、牙周病发病中的作用，以寻求新的治疗途径。本研究采用人基因重组型ＴＮＦ－α在体外培养下，观察其对人牙周膜纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＰＬＦ）碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＬＰ）活性的影响。结果发现，ＨＰＬＦ经ＴＮＦ－α作用后，ＡＬＰ活性显著低于空白对照组，该抑制效应有明显的浓度依赖性。研究表明，ＴＮＦ－α对人牙周膜纤维细胞的碱性磷酸酶活性有显著抑制作用。     

补肾固齿丸对人牙周膜成纤维细胞分泌白细胞介素-6的影响

牙周病是在致病菌和宿主免疫反应失衡情况下发生的感染性疾病。多种炎性介质和细胞因子参与了牙周病的发生发展过程,其中白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）是一种重要的细胞因子,其分泌增多时会产生明显的致炎作用。牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament cell,PDLC）是牙周组织中合成分泌IL-6的重要细胞,在受到细菌刺激时,合成分泌IL-6的能力增强。     

尼古丁对人牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响

目的：体外研究尼古丁对人牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响。方法：用不同浓度的尼古丁与体外培养的人牙周膜成纤维细胞作用不同时间,用MTT比色法测定细胞的生长情况,流式细胞分析法测定尼古丁对细胞周期的影响。结果：各浓度的尼古丁组均能抑制人牙周膜成纤维细胞的生长,但不同浓度尼古丁对牙周膜细胞的抑制作用无明显差异;各浓度组尼古丁均能降低G1的比例,高浓度尼古丁（5×10^-1g/L）组G1期比例降至84.62%,G2/M期升高至12.83%。结论：尼古丁能抑制人牙周膜成纤维细胞的生长,并影响其细胞周期的进程。     

复方丹参滴丸通过调控凋亡相关蛋白的表达抑制TNF-α诱导的人牙周膜成纤维细胞凋亡

目的 探讨复方丹参滴丸(compound danshen dripping pills,CDDP)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPLFCs)凋亡和凋亡相关蛋白的影响.方法 体外...     

静压力对体外人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究静压力对体外人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs)增殖活性的影响。方法用静压力加载装置对第4代HPDLFs分别施加0、15、30、45 kPa的持续性静压力,加力时间为1 h。加力后采用流式细胞术及噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法观察HPDLFs增殖活性。结果流式细胞术检测结果显示0、15、30 kPa静压力下HPDLFs增殖指数分别为(40.11±0.59)%、(49.89±0.75)%、(55.77±1.57)%,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,HPDLFs增殖指数有所降低,为(35.35±0.85)%。MTT法检测结果显示在0、15、30 kPa静压力下吸光度值分别为0.30±0.04、0.35±0.05、0.40±0.07,呈递增趋势(P<0.05);静压力达到45 kPa时,吸光度值有所降低,为0.25±0.04。结论适当大小的静压力能促进HPDLFs的增殖,过大的静压力会抑制HPDLFs的增殖。     

中药黄芩苷对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响

目的 :探讨在不同浓度的黄芩苷作用下 ,人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的变化。方法 :运用细胞生物学方法 ,MTT法和考马斯亮蓝染色法 ,观察黄芩苷对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响。结果 :黄芩苷浓度在 1× 10 -5～ 1μg/ml,明显促进人牙周膜细胞增殖 ,且 1× 10 -2 μg/ml作用效应最大。黄芩苷浓度在 1× 10 -3 ～ 1μg/ml,明显增加人牙周膜细胞总蛋白的合成 ,且 1× 10 -1μg/ml作用效应最大。黄芩苷的作用显示出一个明显的浓度依赖效应和时间依赖效应。结论 :黄芩苷明显促进牙周膜细胞增殖及增加细胞总蛋白 ,作为一种中药有效成分 ,有望用于辅助牙周病的防治     

环孢素A联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的探讨环孢素A(CsA)联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Pg-LPS)对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)增殖的影响。方法改良组织块法培养hPDLFs,分别用CsA(10、100、200、400ng/ml),Pg-LPS(10、100、1000ng/ml),CsA(100ng/ml)加Pg-LPS(100ng/ml),CsA(100ng/ml)加Pg-LPS(1000ng/ml)作用于生长良好的第3～5代细胞,MTT法测其药物作用用下的增殖情况。结果细胞经上述浓度CsA或Pg-LPS作用后形态无明显变化,CsA在100ng/ml浓度情况下,促细胞增殖作用最明显;高浓度Pg-LPS(1000ng/ml)显著抑制细胞增殖,100ng/mlCsA能够显著降低Pg-LPS(1000ng/ml)对细胞增殖的抑制效应;CsA(100ng/ml)与Pg-LPS(100ng/ml)联合作用于细胞时,对细胞的增殖无明显影响。结论在一定的浓度下,CsA促PDLF增殖作用明显;CsA能对抗脂多糖(LPS)抑制细胞增殖的效应。     

肿瘤坏死因子对培养人牙周膜成纤维细胞c-fos表达的诱导作用

目的：深入探索肿瘤坏死因子对人牙周膜成纤维细胞的生物学功能影响的机制。方法：将５０００Ｕ／ｍｌ肿瘤坏死因子作用于培养至第三代的人牙周膜细胞３ｈ后，进行ＦＯＳ免疫组化反应。结果：几乎所有的ＰＤＬＦｓ核均染为棕黄色，为ＦＯＳ免疫组化反应阳性，对照组细胞核未见着色。结论：由于ｃ－ｆｏｓ的表达可以提示核内基因的进一步改变，因而从更深的层次上说明肿瘤坏死因子对牙周膜成纤维细胞的生物学功能的影响     

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。     

中药黄芩苷对脂多糖介导人牙周膜细胞增殖的时间效应和细胞周期的影响

目的:观察中药黄芩苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导体外培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cell,PDLC)增殖的时间效应和细胞周期的影响.方法:采用细胞培养技术培养PDLC,应用噻唑盐比色测定法(MTT)和流式细胞仪技术测定黄芩苷对LPS介导PDLC增殖的时间效应和细胞周期.结果:加入0.01 μg/ml黄芩苷3 h后,明显促进人牙周膜细胞的增殖(P＜0.05);加入100 μg/ml LPS 3 h后,即明显抑制人牙周膜细胞的增殖(P＜0.05),抑制作用随时间的延长而增强,而同时加入0.01μg/ml黄芩苷和100μg/ml LPS 3 h后,其抑制作用则显著减弱(P＜0.05).加入0.01μg/ml黄芩苷后12 h,DNA合成前期细胞所占百分比(G1%)较对照组降低,而DNA合成期细胞所占百分比(S%)较对照组增高;加入100 μg/ml LPS后12 h,G1%较对照组增高,而s%则降低;加入0.01μg/ml黄芩苷和100μg/ml LPS后12 h,G1%较LPS组显著降低(P＜0.01),S%则有显著提高(P＜0.01).结论:中药黄芩许能显著促进PDLC增殖分化,对LPS抑制PDLC的活性关系到有保护作用,原理可能足LPS抑制静止态的G1期细胞进入S期,从而抑制细胞的增殖;而黄芩苷则相反促进细胞由G1期细胞进入S期,从而促进细胞的增殖.     

静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响

目的：研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在机械拉伸应变作用下，细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况，探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系。方法：采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上，通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况，并进行统计分析。结果：在8％、12％、16％力值组，细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增，肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗，排列更有规律；而在20％力值组，其结果则反之。结论：静态拉伸应变可影响牙周膜成纤维细胞的骨架。     

糖基化终产物对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨糖基化终产物在糖尿病牙周病形成中的作用。方法：原代培养牙周膜成纤维细胞,将糖基化终产物修饰的人血清白蛋白及未修饰人血清白蛋白与牙周膜成纤维细胞在体外共同培养,MTT法测定细胞增殖,用碱性磷酸酶测定法测定ALP。结果：糖基化终产物修饰的人血清白蛋白能以浓度依赖的方式抑制牙周膜细胞的增殖（p〈0.05）,而未修饰人血清白蛋白可使细胞增殖,但两种白蛋白均不诱导ALP的表达。结论：糖基化终产物可通过抑制牙周膜成纤维细胞的增殖,降低糖尿病病人牙周组织对损伤的修复能力,导致牙周病。     

炎症微环境对人牙周膜成纤维细胞增殖与成骨分化的影响

目的: 观察脂多糖模拟的炎症微环境对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（periodontal ligament cells, PDLCs）增殖与成骨分化的影响。方法: 体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、0.1、10 μg/mL脂多糖作用于细胞,采用MTT法观察脂多糖对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western印迹法检测脂多糖模拟的炎症微环境对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 0.1 μg/mL脂多糖促进PDLCs增殖,增强成骨标志物mRNA和蛋白的表达;10 μg/mL脂多糖可抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原、骨形态发生蛋白2的表达,其结果有统计学意义。结论: 高浓度脂多糖（10 μg/mL）模拟的炎症微环境对PDLCs增殖及成骨分化有抑制作用,低浓度脂多糖（0.1 μg/mL）对PDLCs的增殖和成骨分化有促进作用。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和超微结构影响的实验研究

目的:体外培养人牙周膜成纤维细胞(HPLFS),观察缺氧对其生长增殖能力的影响.方法: 分离培养 HPLFS,随机分为 21% O2对照组和10%、5%、2% O2缺氧组,采用四唑盐(MTT)比色法检测 HPLFS增殖情况,透射电镜下观察细胞超微结构改变.结果:MTT 法检测,与对照组比,12 h、24 h,缺氧对细胞增殖随缺氧程度呈依赖性增强,但重度缺氧(2% O2)24 h组具有统计学差异;48 h、72 h,重度缺氧组细胞增殖与对照组相比明显降低,差别具有统计学意义.透射电镜下,重度缺氧24 h细胞胞质内粗面内质网和线粒体明显增多,细胞突起增多;72 h细胞发生退变,溶酶体增多.结论:长期重度缺氧条件下,牙周膜的改建和修复功能降低,可能是高原牙周疾病多发、牙周组织破坏较重的重要原因.     

缺氧对人牙周膜成纤维细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同程度缺氧对人牙周膜成纤维细胞(HPLFS)增殖、分化的影响.方法:随机将HPLFS分为4组;210mL/LO2对照组、100、50、20mL/LO2缺氧组(轻中重缺氧组),用MTT法、碱性磷酸酶试剂盒分别检测HPLFS的增殖和碱性磷酸酶(ALP)的活性.结果:第24小时,重度缺氧可促进HPLFS细胞增殖,第48、72小时,重度缺氧则明显抑制r细胞增殖;中、重度缺氧对细胞碱性磷酸酶活性表达随缺氧时间则明显受到抑制.结论:缺氧时间、程度对HPDLFs增殖和ALP活性表达存在效应关系,长期中、重度缺氧不利HPLFS的生长及向成骨分化能力,提示牙周组织改建修复功能降低.     

Er：YAG 激光照射对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的：观察离体培养的人牙周膜成纤维细胞在 Er：YAG 激光照射后其增殖能力的变化。方法：离体培养的人牙周膜成纤维细胞,进行常规免疫组化染色,鉴定细胞来源。选用第5代人牙周膜成纤维细胞,随机分为5组,A 组为对照组,不接受激光照射。实验组分别接受频率为10 Hz 的不同能量 Er：YAG 激光照射,参数分别为 B 组：50 mJ,C 组：100 mJ,D 组：150 mJ,E 组：200 mJ。分别于1、3、5、7、9 d 使用 CCK-8法测定细胞生长情况,分析其增殖能力的变化。结果：培养第5天时 B～E 组细胞增殖率高于 A 组（P ＜0．05）。结论：低能量,短时间的 Er：YAG 激光照射能促进牙周膜成纤维细胞的增殖能力。