中药黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞保护作用的实验研究

目的研究中药黄芩有效成分黄芩苷对脂多糖（LPS）抑制人牙周膜成纤维细胞（HPLFs）活性及对LPS损伤HPLFs超微结构的影响，并初步探讨其可能的作用机理。方法采用原代培养人牙周膜成纤维细胞技术、四唑盐（MTT）比色试验和透射电子显微镜技术（TEM）。结果LPS浓度为100μg／ml时明显抑制细胞活性，同时加入LPS和黄芩苷后，细胞活性明显增强（P〈0．05）。100μg／ml LPS对HPLFs各超微结构均有不同程度的损伤，特别是线粒体损伤严重，同时加入LPS扣黄芩苷（10μg／ml）后，与LPS组比较，超微结构损伤减轻，细胞器结构表现也较正常。结论中药黄芩苷能显著促进成纤维细胞的增殖，对LPS抑制HPLFs活性和LPS损伤HPLFs超微结构具有保护作用，其作用机制可能与降解LPS及作用于细胞膜表面阻止LPS进入细胞内部有关。     

中药补肾固齿丸对牙周炎治疗作用机制的探讨

目的研究补肾固齿丸水提液对LPS影响人牙周膜成纤维细胞生长及分泌IL-1β作用的调节能力,初步探讨补肾固齿丸的治病作用机理,以期为更好的利用中药治疗牙周病提供理论依据。方法人牙周膜成纤维细胞分别与脂多糖LPS 50μg／ml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液12．5μg／ml、LPS 50μml＋补肾固齿丸水提液25μml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液50μg／ml共同孵育6、72h,于6h收集细胞培养上清液,应用ELISA法检测细胞IL-1β分泌水平;72h应用MTT法检测存活细胞数量,评价细胞生长增殖情况。结果LPS可显著抑制牙周膜成纤维细胞生长（OD=0．198±0．097）,并刺激细胞IL-1β分泌水平显著升高（1．122±0．370pg／ml）（P〈0．01）;而补肾固齿丸水提液25μg／ml和50μg／ml则可显著抑制LPS的细胞毒性作用（OD=0．354±0．055,OD=0．368±0．029）、细胞IL-1β泌量也显著降低（0．685±0．168pg／ml,0．525±0．143pg／ml）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论补肾固齿丸有效治疗牙周病的作用机理可能与降低细菌对宿主细胞生长抑制的毒性作用以及调节宿主免疫反应作用有关。     

黄芩苷对内毒素作用的人牙周膜细胞增殖和分泌肿瘤坏死因子-α的影响

目的:观察野黄芩苷对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和分泌肿瘤坏死因子-α的影响.方法:原代培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,采用酶联免疫方法检测培养上清液中的TNF-α水平.结果: 100 μg/ ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性、刺激人牙周膜细胞分泌肿瘤坏死因子-α.加入LPS同时分别给予0.001～10 μg/ ml不同浓度野黄芩苷,能促进人牙周膜细胞的增殖活性并能抑制LPS刺激人牙周膜细胞肿瘤坏死因子-α的分泌,其中在1 μg/ ml时作用达到最强.结论:野黄芩苷对LPS作用的人牙周膜细胞具有保护作用.     

中药黄芩苷对脂多糖介导人牙周膜细胞增殖的时间效应和细胞周期的影响

目的:观察中药黄芩苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导体外培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cell,PDLC)增殖的时间效应和细胞周期的影响.方法:采用细胞培养技术培养PDLC,应用噻唑盐比色测定法(MTT)和流式细胞仪技术测定黄芩苷对LPS介导PDLC增殖的时间效应和细胞周期.结果:加入0.01 μg/ml黄芩苷3 h后,明显促进人牙周膜细胞的增殖(P＜0.05);加入100 μg/ml LPS 3 h后,即明显抑制人牙周膜细胞的增殖(P＜0.05),抑制作用随时间的延长而增强,而同时加入0.01μg/ml黄芩苷和100μg/ml LPS 3 h后,其抑制作用则显著减弱(P＜0.05).加入0.01μg/ml黄芩苷后12 h,DNA合成前期细胞所占百分比(G1%)较对照组降低,而DNA合成期细胞所占百分比(S%)较对照组增高;加入100 μg/ml LPS后12 h,G1%较对照组增高,而s%则降低;加入0.01μg/ml黄芩苷和100μg/ml LPS后12 h,G1%较LPS组显著降低(P＜0.01),S%则有显著提高(P＜0.01).结论:中药黄芩许能显著促进PDLC增殖分化,对LPS抑制PDLC的活性关系到有保护作用,原理可能足LPS抑制静止态的G1期细胞进入S期,从而抑制细胞的增殖;而黄芩苷则相反促进细胞由G1期细胞进入S期,从而促进细胞的增殖.     

红芪多糖对人牙周膜细胞增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响

目的：研究红芪多糖（HPS）对人牙周膜细胞（hPDLCs）增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响。方法：采用改良组织块酶消化法培养人牙周膜细胞,经免疫组化SP法进行鉴定,MTT法检测细胞增殖情况,荧光实时定量PCR和酶联免疫法检测红芪多糖对LPS作用的hPDLCs分泌IL－1β、IL－6的影响。结果：10μg／mL HPS能够促进人牙周膜细胞增殖（P＜0．05）;10μg／mL LPS可显著刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6（P＜0．01）,而给予10μg／mL HPS能抑制LPS刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6,且与LPS组具有显著性差异（P＜0．01）。结论：适宜浓度的红芪多糖能够促进体外培养的人牙周膜细胞增殖,并抑制LPS作用的人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6。     

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。     

2-羟丙基三甲基氯化铵脱乙酰壳多糖和碱性成纤维细胞生长因子对白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α的影响

目的观察在脂多糖（LPS）刺激下,2-羟丙基三甲基氯化铵脱乙酰壳多糖（HTCC）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）分泌白细胞介素（IL）-1β和肿瘤坏死因子（TNF）-α的影响。方法在50mg·L-1的LPS刺激下,采用酶联免疫吸附测定观察质量浓度为1g·L-1的HTCC和100μg·L-1的bFGF对50mg·L-1的LPS刺激hPDLF分别于24、48和72h分泌IL-1β和TNF-α的质量浓度变化。结果1g·L-1的HTCC具有促进LPS刺激hPDLF分泌IL-1β和TNF-α的作用,分泌量48h达高峰。在100μg·L-1的bFGF的作用下,LPS介导的hPDLF分泌IL-1β和TNF-α的质量浓度明显下降。HTCC与bFGF联合较单独应用时,IL-1β和TNF-α的质量浓度下降显著（P≤0.001）。结论HTCC对LPS介导hPDLF分泌IL-1β和TNF-α具有促进作用,HTCC与bFGF联合应用能有效地抑制IL-1β和TNF-α的分泌。     

年龄对小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4表达水平及功能的影响

目的：观察不同年龄组小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4（TLR2/4）表达水平的差别,以及该细胞在脂多糖（LPS）刺激下,炎症因子TNF-α分泌水平的差别。方法：采用real-time PCR和流式细胞技术,检测低龄组和高龄组小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平的差异;同时检测1μg/mL大肠杆菌（E.coli）LPS或1mg/L牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）LPS刺激后,两组细胞TLR2/4表达水平的变化;采用ELISA技术检测炎症因子TNF-α分泌水平的变化。结果：刺激前,两组细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达水平均无明显差别。E.co-li LPS或P.gingivalis LPS刺激后,低龄组细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达水平均明显高于高龄组（P〈0.05）,其分泌的TNF-α水平也显著高于高龄组（P〈0.05）。结论：年龄对小鼠腹腔巨噬细胞TLR2/4表达水平没有显著影响,但增龄性变化可能导致TLR2/4功能的减退。     

槟榔碱对血管内皮细胞增殖和分泌NO的影响

目的：观察去除槟榔碱干预后血管内皮细胞（EC）增殖和分泌一氧化氮（NO）的变化。方法：采用MTT法检测去除槟榔碱干预后的EC存活率，硝酸还原酶法检测EC分泌NO量。结果：30μg／ml～90μg／ml槟榔碱干预EC 24h，去除刺激并继续孵育48h，EC的增殖能力可恢复，且分泌NO增多（p〈0．05）；但120μg／ml槟榔碱干预24h、30μg／ml～120μg／ml槟榔碱干预48h并继续孵育48h，EC的增殖能力难以恢复（P〈0．05）。结论：去除低浓度、短时间槟榔碱干预后EC增殖能力的恢复可能与具有自我保护效应的NO分泌量增加有关。     

Toll样受体4对人牙周膜成纤维细胞表达p-IRAK1和p-IκB-α的影响

目的：观察Toll样受体4（toll—likereceptors4,TLR4）对人牙周膜成纤维细胞（humanperiodontalligamentcells。HPDLCs）在内毒素脂多糖（1ipopolysaccharides,LPS）刺激下表达磷酸化IRAK1（phospho—IRAK1,P—IRAKl）和磷酸化IκB-α（phospho—IκB-α,p-IκB-α）的影响。方法：采用Western印迹和图像分析技术,检测HPDLCs受大肠杆菌LPS（1μg／m1）刺激2．5、5、10和15min后表达P—IRAK1和p—IκB-α的水平;同时检测1：100滴度的抗TLR4单克隆抗体对HPDLCs在1μg／mlLPS刺激下表达p-IRAK1和P—IκB-α的影响。采用SPSS10．0软件包对结果进行单因素方差分析。结果：LPS刺激HPDLCs5min后,HPDLCs表达p-IRAK1和P—IκB-α的水平最高．条带灰度与3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）条带的比值分别由0．054、0．19增加到0．785、0．809（P〈0．05）。抗TLR4单克隆抗体预处理的HPDLCs在LPS刺激下表达p-IRAK1和P—IκB-α的水平均降低,条带灰度与GAPDH条带的比值分别南0．82、0．874降低到0．099、0．201（P〈0．05）。结论：TLR4参与了HPDLCs受LPS刺激后的信号传导过程,可能介导了牙周病的发生和发展。     

黄芩苷调控的IKKα对HOKs炎症反应的保护作用

目的: 观察黄芩苷对HOKs炎症反应中IKKα介导的MASPIN的调控作用,探讨黄芩苷对口腔黏膜炎症的分子调控机制。方法: 以脂多糖（LPS）刺激人口腔角质细胞（human oral keratinocytes, HOKs）,体外局部模拟口腔黏膜上皮细胞炎性环境。CCK-8法检测黄芩苷对HOKs的毒性作用;在LPS刺激的HOKs中预先加入不同浓度黄芩苷,应用ELISA法检测黄芩苷对LPS刺激的HOKs中IL-6和TNF-α分泌的调控作用;利用RT-PCR及Western免疫印迹检测黄芩苷对LPS刺激的HOKs中IKKα介导的MASPIN基因及蛋白表达水平的调控作用。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 以10 μg/mLLPS刺激HOKs,可作为口腔黏膜上皮细胞炎症模型。黄芩苷（1~20 μg/mL）对HOKs无毒性作用;随着黄芩苷浓度的升高,MASPIN在LPS刺激的HOKs中的表达逐渐升高,而IKKα及炎性细胞因子TNF-α、IL-6的表达逐渐降低（P<0.05）。结论: 在LPS刺激的HOKs中,黄芩苷可降低炎性因子表达,下调IKKα,上调MASPIN。     

淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对体外培养人牙龈成纤维细胞的作用

目的：探讨不同浓度淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素对细菌内毒素脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激人牙龈成纤维细胞（human gingival fibroblasts,HGF）产生前列腺素E：（prostaglandin E2,PGE2）的影响。方法：以培养的人牙龈成纤维细胞为实验模型,用MTT试验检测淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素抑制LPS对牙龈成纤维细胞毒性作用的效果,初步筛选其作用浓度：然后用酶联免疫法检测三种提取物对LPS刺激牙龈成纤维细胞产生重要的骨吸收因子PGE：的影响。结果：LPS对HGF有明显的细胞毒性,三种提取物均可显著提高细胞成活率。LPS作用6h后培养上清中PGE,含量上升,而同时加入淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素各浓度组PGE：含量显著低于对照组qo〈o．01）。结论：淫羊藿苷、黄芩苷和大黄素均可抑制LPS对HGF的细胞毒性作用,并且可抑制LPS刺激HGF产生PGE2。     

中药黄芩有效成分黄芩苷对IL—1β人牙周膜细胞产生PGE2的影响

目的 :探讨不同浓度黄芩苷对白细胞介素 - 1 β(Interleukin - 1 β,IL - 1 β)刺激人牙周膜细胞(periodontalligamentcells,PDLC)产生前列腺素E2 (prostaglandinE2 ,PGE2 )的影响。方法 :运用细胞培养技术和酶联免疫检测方法 ,观察IL - 1 β刺激PDLC分泌PGE2 的量以及不同浓度的黄芩苷对其产生PGE2 量的影响。结果 :在 1ng/mLIL - 1 β的刺激下 ,PDLC产生PGE2 的量随时间的延长而增加。 0 .0 1～ 1 0 μg/mL的黄芩苷均能显著抑制 1ng/mLIL - 1 β对PDLC的刺激作用 (P <0 .0 1 ) ,而不同浓度组之间比较 ,抑制作用无显著性差异。结论 :①PDLC具有合成和分泌PGE2 的功能 ,IL - 1 β能有效刺激PDLC产生PGE2 。②黄芩苷对IL - 1 β刺激PDLC合成和分泌PGE2 有显著抑制作用     

rhBMP-2诱导成肌细胞表达成骨表型的研究

目的：检测不同浓度rhBMP-2对诱导成肌细胞成骨表型表达的影响，探索诱导成肌细胞表达成骨表型的rhBMP-2的最适浓度。方法：采用双重酶消化法获取SD大鼠乳鼠的成肌细胞，纯化后，在含15％胎牛血清的DMEM培养液中培养。取第3代培养细胞，按培养液中不同rhBMP-2浓度分组，分为0、0．1、0．5、1．0、1．5和5．0μg／ml共6组（0μg/ml组为对照组1，培养1、2和4周。收集不同时期细胞培养上清液和细胞爬片进行检测，检测指标为：细胞形态和数量、碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙素（OCN）含量、Ⅰ型胶原合成量和钙化结节染色。采用SPSS10．0统计软件包进行统计分析。各组间比较采用方差分析（ANOVA）。结果：应用rhBMP-2后，梭形成肌细胞减少，圆形或多突形成肌细胞明显增加，细胞呈集结性生长，培养4周可形成不透光结节。低、中浓度（0．1-1．5μg／ml）rhBMP-2组细胞数量和对照组之间无显著性差异（P〉0．05），但高浓度（5．0μg／ml）rhBMP-2组细胞数量显著下降（P〈0．05）。0．1～1．5μg／ml 4组rhBMP-2均能促进成肌细胞合成分泌ALP、OCN和Ⅰ型胶原（所有组与对照组比较，P〈0．05），其中0．5和1．0μg/ml 2组促进作用更显著。细胞培养4周后，茜素红S染色法示结节呈红色钙阳性反应。结论：低、中浓度（0．1～1．51μg／ml）rhBMP-2对成肌细胞增殖无显著影响，但高浓度（5．0μg/ml）rhBMP-2可显著抑制成肌细胞增殖。rhBMP-2可有效诱导成肌细胞表达成骨细胞各项表型并能体外成骨，其中0．5～1．01μg／ml是一个较为适宜的诱导浓度。     

中药复方对牙龈卟啉单胞菌内毒素及细菌超微结构的影响

目的研究黄芩、大黄、五倍子、蛇床子4种药物及其配伍组合的中药复方对牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）生成内毒素脂多糖（lipopolysaccharicle，LPS）和细菌超微结构的影响。方法采用鲎实验榆测中药处理咏后LPS含量，透射电镜观察中药处理后尸窖形态结构的改变。结果黄芩、大黄、五倍子、蛇床子及其中药复方处理瞻后LPS生成量分别为（0．0161±0．0003）EU／mL、（0．0201±0．0006）EU／mL、（0．0167±0．0001）EU／mL、（0．0240±0．0000）EU／mL和（0．0095±0．0005）EU／mL，显著低于空白对照组的（0．0271±0．0000）EU／mL（P〈0．05），中药复方组LPS含量显著低于4种单味药组（P〈0．05），经中药复方处理后，坛胞壁失去原有结构而明显变薄，细胞变形，大部分胞浆溶解消化、漏出呈空泡，少数变性，胞浆中可见黑色沉淀。结论 中药复方可有效抑制咏生成LPS，同时导致细菌结构改变。     

依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究

目的　观察依那西普（Etanercept）对牙龈卟啉菌内毒素（lipopolysaccharide,LPS)作用下体外培养的人牙周膜细胞(HPDLCs)的增殖能力的影响。方法　体外原代培养人牙周膜细胞,经免疫细胞化学鉴定,加入LPS和1 μg/ml Etanercept+LPS,LPS浓度分别为10、50、100、200、300 μg/ml检测（吸光度）A值。采用MTT法测定细胞增殖能力。结果　 人牙周膜细胞原代细胞生长状态良好。第3代细胞进行鉴定,Vimentin染色呈阳性,Ck(pan)染色呈阴性。MTT法检测加入梯度浓度的LPS 24 h后,HPDLCs增殖率随着LPS浓度的增加,对HPDLCs的增殖抑制逐渐增强,200 μg/ml LPS能最大程度抑制HPDLCS的增殖,抑制率为46.21%(P<0.01)。Etanercept + LPS组对HPDLCs细胞作用相对增殖率与LPS组比较（P＜0.01）,能明显抑制LPS对HPDLCs的抑制作用。结论　TNF-α抑制剂Etanercept能明显抑制牙周膜细胞在内毒素刺激下的死亡。     

内毒素耐受对共培养的中性粒细胞和单核细胞分泌TNF-α和IL-8的影响

目的 观察脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的耐受对共培养的中性粒细胞和人单核细胞株THP-1细胞表达抗炎因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和趋化因子白介素-8（Inter leukin-8, IL-8)水平的影响。 方法 采用1 μg/mL牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis, P. gingivalis）LPS 或1 μg /mL大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）LPS分别刺激共培养的中性粒细胞和THP-1细胞24 h,洗脱后,再次刺激24 h,诱导细胞产生耐受。采用ELISA技术检测细胞条件培养液中 TNF-α 和 IL-8 表达水平的变化。 结果 P.gingivalis LPS或E.coli LPS单次刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌TNF-α和IL-8的水平均较刺激前明显增高（P＜0.05）;P.gingivalis LPS和E.coli LPS重复刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌的TNF-α水平较单次刺激后明显降低（P＜0.05）,但IL-8水平较单次刺激后明显增高（P＜0.05）。 结论 共培养的中性粒细胞和单核细胞产生的内毒素耐受可能抑制TNF-α表达,促进IL-8表达,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。     

淫羊藿苷对腺样囊性癌细胞Bcl－2、Bax表达的影响

目的：①探讨淫羊藿苷体外抑制涎腺腺样囊性癌细胞（SACC－M）的最佳浓度和时间点及作用于SACC－M后相关细胞因子Bcl－2、Bax的表达变化。方法：①以不同浓度（0μg／mL、6．25μg／mL、12．5μg／mL、25μg／mL、50μg／mL、100μg／mL、200μg／mL、400μg／mL、800μg／mL）的淫羊藿苷分别作用于SACC－M（24 h、48 h、72 h）,选择淫羊藿苷对高转移SACC－M细胞株的最佳作用浓度和作用时间,通过形态学观察淫羊藿苷对SACC－M细胞形态的改变。②正常对照组中加入同种剂量的药物溶剂,实验组中加入不同浓度的淫羊藿苷处理高转移SACC－M细胞株,免疫组化检测Bcl－2、Bax表达量的变化。结果：①与对照组（0μg／mL）相比较,淫羊藿苷在不同浓度（50、100、200、400、800μg／mL）对SACC－M细胞株的增殖具有抑制作用（P＜0．05）。在同一药物浓度下,从50μg／mL浓度开始,与同浓度24 h淫羊藿苷比较有统计学意义（P＜0．05）,但到了800μg／mL浓度时已经没有时间依赖性（P＞0．05）。当用（50、100、200、400μg／mL）作用于细胞24 h后,显微镜下观察显示ACC－M细胞具有典型的凋亡细胞形态学特征。②淫羊藿苷能呈浓度依赖性下调ACC－M中Bcl－2同时上调Bax蛋白的表达。结论：体外淫羊藿苷可以抑制ACC－M的增殖,其机制可能与下调Bcl－2和上调Bax的表达有关。     

IL-lβ和TNF-α对人牙周膜细胞内LIF表达的影响

目的：探讨白细胞介素-lβ（IL-lβ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对牙周膜细胞内白血病抑制因子（LIF）表达的影响。方法：体外分离培养鉴定人牙周韧带细胞（HPDLC）,取第3代细胞用于实验,利用牙周改建中高表达因子TNF-α和IL-1β刺激HPDLC后,实时定量反转录-聚合酶链反应检测LIF mRNA的表达。结果：IL-1β在浓度为0．1 ng/mL和5 ng/mL时,均显著促进LIF的分泌（P ＜0．01）。TNF-α在浓度为10 ng/mL时,明显促进LIF的分泌（P ＜0．05）。结论：牙周改建中高表达细胞因子IL-1β和TNF-α可促进牙周膜细胞中LIF的表达。     

Pg-LPS对束缚应激大鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的：检测牙龈卟啉菌内毒素（Pg-LPS）对束缚应激大鼠腹腔巨噬细胞凋亡情况的影响，初步探讨应激影响牙周疾病的机制。方法：采用束缚应激方式，将大鼠随机分为正常对照组、应激组，于应激结束时处死动物，常规收集腹腔液。巨噬细胞于贴壁纯化后分别用RPMI-1640培养液，RPMI-1640培养液＋0．01μg／ml Pg-LPS，RPMI-1640培养液＋1μg／ml Pg-LPS继续培养。于24h后收集细胞爬片，采用荧光染色法、原位末端标记法（TUNEL）观察巨噬细胞凋亡情况。结果：1μg／ml Pg-LPS刺激后，正常对照组及应激组巨噬细胞的凋亡率明显增加，应激组巨噬细胞凋亡率显著高于正常对照组。结论：一定浓度的即LPS刺激后，大鼠腹腔巨噬细胞发生凋亡；束缚应激能加重这种异常。