白细胞内HBV DNA的研究

本研究对155例慢性 HBV 感染者和250例一般人群,用分子杂交技术和特异性细胞免疫方法测定血清和白细胞内 HBV DNA 及特异性细胞免疫反应。结果显示:血清 HBV DNA 阳性39%,白细胞内 HBV DNA 阳性36%,特异性细胞免疫反应34%;血清 HBV DNA 存在与否与特异性细胞免疫反应无明显关系,而白细胞内 HBV DNA 阳性者细胞免疫反应多为阴性;在80例血清 HBV 标志物全阴性正常人的白细胞内发现3例 HBV DNA 阳性,提示,HBV 有一种单独存在于白细胞内新的感染形式。因此,白细胞可能是乙型肝炎病毒的重要潜存场所,血清 HBV 标志物全阴性者不能排除 HBV的感染。     

白细胞内HBV DNA与HBV血清标志物的关系

对２５０例一般人群血清中ＨＢＶ标志物类型与白细胞内ＨＢＶ ＤＮＡ存在的关系进行了对比观察。结果显示：在ＨＢｓＡｇ及ＨＢｅＡｇ阳性９例中，４例白人ＨＢＶ ＤＮＡ阳性，抗－ＨＢｅ阳性的９例中仅１例白细胞内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性。在ＨＢｓＡｇ消失 后产生抗－ＨＢｓ的９６例中有７例白细胞内ＨＢＶ ＤＮＡ阳性。     

用分子杂交技术检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA

本世纪七十年代末,Galibert等应用DNA重组技术(DNA recombinat technology)将乙型肝炎病毒(HBV)的基因克隆成功,标志着对HBV的研究进入分子生物学的新阶段。目前,对HBV分子生物学研究的一个最重要的方法就是分子杂交技术,该技术的主要原理     

白细胞内HBV DNA与HBV血清标志物的关系

对250例一般人群血清中HBV标志物类型与白细胞内HBVDNA存在的关系进行了对比观察。结果显示：在HBsAg及HBeAg阳性9例中，4例白细胞内HBVDNA阳性，抗－HBe阳性的9例中仅1例白细胞内HBVDNA阳性。在HBsAg消失后产生抗－HBs的96例中有7例白细胞内HBVDNA阳性。血清HBV标志物全阴性而斑点杂交白细胞内HBVDNA阳性的2例，经原位杂交检测亦证实白细胞内有HBV阳性颗粒。提示：在人体HBV多器官感染中，白细胞亦是重要感染部位和潜隐场所。     

电泳印迹和分子杂交技术在肝内HBV DNA研究中的应用

应用DNA电泳转移、生物素探针Southern杂交及不同探针重复杂交等3项新技术研究肝炎肝癌的肝内HBV DNA分子状态。经过方法学比较以电泳印迹取代毛细渗吸法对65例肝炎肝癌病人的101份肝内组织DNA进行尼龙膜快速转移和HBV DNA杂交,结果检出HBV DNA分子状态里整合型15份、游离型31份、整合型合并游离型30份。其中12例乙型肝炎标本为经生物素探针杂交检测,结果全部检出游离型HBV DNA。还有3例乙型肝炎标本和2例其它肝炎标本为经重复杂交检测,即先用~(32)P探针杂交继去探针再用生物素探针杂交,结果乙型肝炎标本两次杂交HBV DNA都阳性,其它肝炎标本两次均阴性。阳性者表现为3.2kb和2.3kb电泳位置呈现杂交带,代表HBV之松弛环状和超螺旋状结构。由于两种探针各含不同序列,故结果可对待检基因进行初步序列分析。本实验表明,上述3项技术对临床医学研究有广泛的应用价值。     

DNA原位分子杂交技术的实践体会

原位分子杂交技术是近几年发展起来的一项新技术 ,我们对实际工作中的一些技术问题进行了探索 ,现总结如下供大家参考。1　ＤＮＡ原位分子杂交的实验1.1　ＤＮＡ原位分子杂交技术的实验步骤多 ,周期长 ,影响因素复杂 ,实验过程中任何一个环节稍不注意就会造成失败。因此 ,了解正确的实验步骤是完成实验的基础 ,以下就是通常的实验步骤。1.2　实验步骤 :(1)切片脱蜡至 3 0 %酒精 ,去离子水。(2 ) 3 7℃孵育 5分钟(3 )蛋白酶Ｋ3 7℃ (盖上玻片可节省试剂 ) 15分钟(4)去垢剂 (ＤＷ)洗 5分钟(5 )酒精脱水 (75 %　 95 %　 10 0 % )(6) 3 7℃孵育 …     

HBV—DNA检测在乙肝疗效观察中的意义

用斑点杂交方法，检测ＨＢｓＡｇ携带者在接受治疗过程徊血清ＨＢＶ－ＤＮＡ存在状况。结果显示，治疗后ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率有明显下降趋势，不同疗程间有明显差异；随着疗程的延伸，其阳性百分比从高浓度向低浓度移动，直至逐步消失。     

时间分辨荧光核酸杂交分析体系的建立及其初步应用

建立时间分辨荧光核酸杂交分析体系应用于临床乙型肝炎病毒ＤＮＡ检测。采用本室自制螯合剂异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ制备铕离子标记的链霉亲和素,抽提患者血清中的ＤＮＡ,包被于聚苯乙烯微滴板中,与生物素化ＨＢＶ ＤＮＡ杂交后,以Ｅｕ＾３＋－ＳＡ为检测物,应用时间分辨荧光技术检测血清样本中的ＨＢＶ ＤＮＡ。     

乙肝DNA聚合酶在187例乙型肝炎病毒感染的各类肝病中的检测

采用免疫沉淀法对187例乙肝病毒感染患者作了DNA聚合酶(DNA--P)的测定。在各类肝炎中DNA—P的阳性检出率以慢活肝最高为66.6％,依次为急性肝炎45％,携带者33.5％,慢迁肝31.5％。本文分析了乙肝的抗原抗体系统与DNA—P检出率的关系。经统计学处理,DNA—P检出率与HBsAg滴度增高呈正相关γs=0.99,P<0.01。HBeAg阳性组DNA—P检出率为62.4％,抗—HBe阳性组DNA—P检出率为29.5％,抗—HBs阳性8例、DNA—P均为阴性。抗—HBc—IgM强阳性组DNA—P检出率为86.4％。作者认为1/3无症状携带者DNA—P活力增高表明病毒在复制,因此携带者在流行病学上的意义不可忽视。又鉴于18例抗—HBe阳性血清DNA—P活力增高,因此在判断HBeAg~-/抗—HBe~+患者病毒复制情况时,应予慎重。     

检测慢乙肝病人外周血HBV DNA含量的临床意义

目的研究荧光定量PCR法检测慢性乙型肝炎病人血清HBV DNA含量的临床意义。方法血清HBV DNA定量检测采用荧光PCR法（FQ—PCR）;采用免疫组化ABC法标记相应肝组织中aBcAg,研究二者之间的关系。结果血清HBV DNA含量较低组（A、B组）,肝组织中aacAg的表达呈阴性或少数阳性;而血清HBV DNA含量较高组（C、D组）,肝组织HBcAg表达多数呈阳性或强阳性,随着血清HBV DNA含量的升高肝组织HBcAg表达强度和范围也随之增加。结论血清HBV DNA定量检测能较好地反映乙肝病毒在体内的复制状况。     

乙肝病毒相关性肾炎肾组织中HBVDNA分布的分子生物学检测

应用原位杂交（ＩＳＨ）技术观察１２例血清乙肝病毒（ＨＢＶ）标志物阳性的肾炎病人肾组织中ＨＢＶＤＮＡ的存在状况。结果表明，采用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ全长段探针ＩＳＨ时１０例肾组织中显示有ＨＢＶＤＮＡ。这１０例用Ｓ＋Ｃ段探针检测仍阳性者８例，ＨＢＶＤＮＡ最常见于肾小管上皮细胞内，呈核型或浆核型，其次是肾小球系膜区和毛细血管袢。ＬＳＡＢ免疫组化法示ＨＢｓＡｇ与ＨＢＶＤＮＡ的存在部位相吻合。提示ＨＢＶ引起的肾脏病变不仅是免疫介导的损害，亦可能有病毒直接侵犯，从分子病理水平为探讨ＨＢＶ相关性肾炎发病机理提供了新的依据。     

A study on the Appearance of HBV DNA in the Liver and Serum of Patients with HDV/HBV Infection

The appearance of HBV DNA in the liver and serum of 15 patients with hepatitisB conifected with HDV was observed and compared with that of 13 HDV-negative cases.Itwas found that HBsAg titer was lower than or equal to 1:4 in 8 HDV-positive patients,inwhom it was temporally negative in 5,and negative during the,two-day hospitalization in 1.No similar result could be observed in the HDV-negative cases.The detection rate of HBVDNA in both the HDV positive and negative groups was 20.0％ (3/15) and 25％ (3.12) in se-rum,and 46.7％ (7/15) and 61.5％ (8/13) in the liver rcspectively.There was no signif-icant statistical difference between the 2 groups.The HBV DNA grains detected with in situ hybridization,with biotinylated HBV DNAprobe were demonstrated in the sparse type of distribution in 3 cases and lightly stained in 2.Itis believed that HBV DNA replication activity might be suppressed by HDV.However activeHRV DNA replication was also present in some HDV-positive patients and HBV DNA was posi-tive in both the liver and serum in 3 such patients.It was concluded that the difference of the detection rate of HBV DNA in HDV-positivepatients might be related to the different stages of HDV infection.     

聚合酶链反应和原位杂交检测成人肾炎肾组织HBV DNA

目的 探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染与成人肾小球肾炎（肾炎）之间的联系,及研究ＨＢＶ对肾脏的致病作用。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和原位杂交（ＩＳＨ）技术检测３９例血清ＨＢＶ标志物阳性的成人肾有活检组织ＨＢＶ ＤＮＡ的存在状态。结果 用ＰＣＲ法测定肾活检组织抽提物ＨＢＶ ＤＮＡ１７／３９例阳性（４３．６％）,其中５例ＰＣＲ阳性者再且地高辛素标记的ＨＢＶ ＤＮＡ探针原位杂交,测定肾活检石腊包埋切     

HBV M和HBV DNA的关系探讨

目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。     

非放射性分子杂交法检测HBV感染

用非放射性标记的ＨＢＶ－ＤＮＡ探针检测３７１份至少有一项ＨＢＶ免疫学标志阳性血清和５１０份对照血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明：５１０份对照血清和７９份仅抗－ＨＢｓ阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ均为阴性，８２份ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阳性血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率为１００％，１０３份ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ阴性血清的检出率为７９．６％，７６份ＨＢｓＡｇ阳性。ＨＢｅＡｇ阴性、但抗－ＨＢｅ阳性血清的检出率为８０．３％，２９２份ＨＢＶ不同感染阶段血清总检出率为７５％。非放射性分子杂交法可直接检测出ＨＢＶ的复制，由于该法亦可定量，故还可用于判断血清传染程度和血清病毒的含量。     

乙型肝炎病毒感染者HBV DNA与血清病毒标志物的关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者HBVDNA检出情况及其与血清病毒标志物的关系。方法　采用实时荧光定量PCR(FQ PCR)检测 2 0 0份HBV感染者血清中HBVDNA含量 ,同时用全自动免疫分析仪检测HBV 5项血清标志物。结果　 2 0 0份血清中 ,乙型肝炎病毒标志物不同组合组的HBVDNA阳性率有差异 ,HBsAg、HBeAg和 (或 )HBcAb阳性组阳性率约为 98.1% ,其中 96 %以上HBVDNA≥ 10 4copy/ml;HBsAg、HBcAb和 (或 )HBeAb阳性组HBVDNA阳性率约为 76 .5 % ,但其中 90 %以上HBVDNA≤ 10 4copy/ml;单纯HBV抗体阳性组HBVDNA阳性率约为13.0 % ,但均为HBVDNA≤ 10 3 copy/ml。三组间HBVDNA阳性率及分布均有明显差异 (P <0 .0 5 )。而且HBVDNA含量与疾病严重程度相关。结论　FQ PCR检测HBVDNA含量结合血清病毒标志物的检测结果对乙型肝炎的临床诊断与病情判断有重要意义