依达拉奉与东菱迪芙联合应用对急性脑缺血损伤大鼠D-二聚体的作用

[目的]探讨依达拉奉与东菱迪芙联合应用对急性脑缺血损伤大鼠D-二聚体的影响.[方法]采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞脑缺血再灌注模型.将成年健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组(缺血后30min腹腔注射给予4mL/kg生理盐水)、依达拉奉治疗组(缺血后30min,6h腹腔注射给予4mL/kg依达拉奉)、东菱迪芙治疗组(缺血后12min腹腔注射给予8BU/kg东菱迪芙)、联合用药治疗组(缺血后12min腹腔注射给予8BU/kg东菱迪芙,缺血后30min,6h腹腔注射给予4mL/kg依达拉奉).缺血再灌注24h后,断头处死大鼠,取脑组织用2%(质量分数)2,3,5氯化三苯四氮唑(TTC)缓冲液行避光染色,计算脑梗塞体积.开胸暴露心脏,采集心脏血,应用循环酶法定量D-二聚体检测水平.[结果]东菱迪芙治疗组、依达拉奉治疗组、联合用药治疗组脑梗塞体积较缺血再灌注模型组均显著缩小(P<0.05),联合用药治疗组较东菱迪芙治疗组、依达拉奉治疗组缩小明显(P<0.05).缺血再灌注模型组D-二聚体水平显著高于假手术组,与缺血再灌注模型组比较,东菱迪芙治疗组、依达拉奉治疗组、联合用药治疗组D-二聚体水平明显降低,与依达拉奉治疗组比较,东菱迪芙治疗组及联合用药治疗组D-二聚体水平均明显降低(P<0.05).[结论]东菱迪芙与依达拉奉均可降低D-二聚体水平,减少急性脑梗塞体积,降低脑部缺血损伤,具有脑保护作用;东菱迪芙与依达拉奉联合应用较东菱迪芙或依达拉奉单独应用治疗效果更为显著.     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的探讨依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响及其机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组,=20)、模型组(M组,=20)和依达拉奉组(E组,=20)。除S组外,其余两组均通过线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注损伤模型。于术前30 min分别给予相应处理。缺血120 min再灌注24 h后,对大鼠进行神经功能评分;HE染色观察病理形态学,TUNEL检测神经细胞凋亡。结果 (1)与S组比较,M组神经功能评分明显增加(<0.05);与M组比较,E组神经功能评分明显降低(<0.05)。(2)与S组比较,M组神经细胞凋亡率明显增加(<0.05);与M组比较,E组神经细胞凋亡率明显降低(<0.05)。结论依达拉奉可通过减轻形态学改变、抗神经细胞凋亡,对神经细胞发挥保护作用。     

依达拉奉对沙土鼠缺血-再灌注损伤后的脑保护作用机制的探讨

目的:探讨依达拉奉对沙土鼠全脑缺血再灌注后自由基损伤的脑保护机制。方法:实验动物随机分为正常对照组、假手术组、手术组、手术 依达拉奉组,手术 依达拉奉组给予腹腔注射依达拉奉10mg/kg,12h/次。设缺血再灌注6、12、24、36、48、60、72h7个时间点,分别检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,并观察每个时间点电镜下海马CA1区锥体细胞超微结构。结果:每个时间点手术 依达拉奉组动物脑组织中SOD活力较手术组增强,MDA含量较手术组下降,且每个时间点两组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。电镜超微结构显示手术 依达拉奉组细胞病理改变较手术组轻,48h改变最明显。结论:脑缺血缺氧早期使用依达拉奉,可增强缺血脑组织SOD活力;降低MDA含量,从而达到清除氧自由基、抗脂质过氧化、减轻再灌注损伤、保护脑细胞的作用。     

依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2的影响

目的 本试验通过观察依达拉奉对Bcl-2的影响,探讨它的保护作用及作用机制.方法 Wistar 雌、雄性大鼠共42只,随机分为假手术组、盐水对照组及依达拉奉用药组,对照组及用药组再进一步分为6h、24h、48h,根据Koizumi线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO).用免疫组化方法检测Bcl-2的蛋白表达的变化.结果 假手术组几乎无Bcl-2蛋白的表达,盐水组Bcl-2蛋白表达6h开始升高,于24h达到高峰并于48h开始下降.6h时,用药组Bcl-2蛋白表达较盐水组减少,但差异不明显(P>0.05);24h时,用药组较盐水组明显减少(P<0.01);48h时,用药组Bcl-2蛋白表达较盐水组减少,仍有明显差异(P<0.05).结论 依达拉奉可抑制Bcl-2激活,达到脑保护作用.     

亚低温联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察亚低温联合依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制备SD大鼠MCAO模型,梗死2h后再灌注,并分为假手术组、模型组、依达拉奉组及亚低温联合依达拉奉组(联合组),再灌注24 h后进行神经功能缺损评分、检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)浓度、病理变化及大脑缺血面积并比较。结果 (1)依达拉奉组与联合组的神经功能缺损评分明显低于模型组,且联合组的神经功能缺损评分明显低于依达拉奉组(P均<0.01)。(2)与假手术组相比,模型组SOD活性降低、MDA含量增加(P<0.01);与模型组相比,依达拉奉组与联合组S0D活性增高、MDA含量降低(P<0.01),且联合组与依达拉奉组相比有显著性差异(P<0.01)。(3)模型组、依达拉奉组及联合组病理学检查均较假手术组差,但联合组好于依达拉奉组好于模型组(P<0.01)。(4)模型组、依达拉奉组及联合组脑缺血面积较假手术组增大,而联合组<依达拉奉组<模型组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论亚低温联合依达拉奉对脑缺血再灌注损伤有较好保护作用。     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及bcl-2、Bax表达的影响。方法将45只健康雄性sD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,各15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血再灌注前12h,预处理组给予依达拉奉3mg／kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注后海马组织bcl-2、Bax表达及凋亡细胞。结果依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、bcl-2、Bax阳性细胞明显增加,与假手术组比较差异有显著性（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hTUNEL、Bax阳性细胞数明显少于对照组（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hbcl-2阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程,依达拉奉可能通过上调bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护和神经损伤起保护作用。     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察依达拉奉对局灶脑缺血大鼠的保护作用.方法 采用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,对照观察假手术组、模型对照组、依达拉奉治疗组脑梗死范围、脑含水量、神经功能评分、病理组织学改变等指标的变化.结果 依达拉奉治疗组以上各项指标均较MCAO对照组有显著性的改善.结论 依达拉奉对急性脑梗死有明显的保护作用.     

依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护

目的 探讨依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响和作用机制.方法 制备SD大鼠MCAO模型,梗死2h后再灌注,并分为假手术组、生理盐水(NS)组.依达拉奉低剂量组及依达拉奉高剂量组,再灌注24h后检测各组脑组织SOD、MDA浓度.结果 与假手术组相比,NS组SOD活性降低、MDA含量增加,有显著性差异;与NS组相比,依达拉奉低剂量与高剂量组SOD活性增高、MDA含量降低,且低剂量组与高剂量组相比有量著性差异.结论 依述拉奉对脑缺血再灌注损伤有保护作用.     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马细胞凋亡及hsp-70表达的影响

目的：观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后海马组织神经细胞凋亡及hsp-70表达的影响。方法：将45只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,各15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型。脑缺血再灌注前12h,预处理组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注海马组织hsp-70表达及凋亡细胞。结果：与假手术组比较比较,依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、hsp-70阳性细胞明显增加,差异有显著性（P〈0．01）。与对照组比较,依达拉奉预处理组术后24hTUNEL阳性细胞明显减少（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hhsp-70阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论：凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程,依达拉奉可能通过上调hsp-70蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护和神经损伤起保护作用。     

依达拉奉对大鼠脑缺血再灌注血小板活化因子的影响

目的：探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注后血小板活化因子（PAF）含量的影响。方法：50只健康Wistar雄性大鼠,分为5组,每组10只大鼠：Ⅰ组为假手术组;Ⅱa组为生理盐水组中缺血6 h再灌注6 h组;Ⅱb组为生理盐水组中缺血6 h组;Ⅲa组为依达拉奉组中缺血6 h再灌注6 h组;Ⅲb组为依达拉奉组中缺血6 h组。线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）及再通模型。应用ELISA检测对应血浆PAF值。结果：生理盐水组中再灌组及缺血组PAF值分别为（1 480±249）pg/ml和（1052±199）pg/ml,分别与对应假手术组（为506±55 pg/ml）比较有明显差异。依达拉奉组中再灌注及缺血组PAF值分别为（848±80）pg/ml和（743±105）pg/ml,与对应生理盐水组比较有显著差异。结论：依达拉奉可降低脑缺血再灌注后血浆中PAF含量。     

电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注大鼠GRP78和Caspase-12基因表达的影响

目的 观察电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)大鼠脑GRP78和Caspase-12基因表达的影响,探讨针刺发挥脑保护作用是否与内质网应激凋亡通路有关. 方法 100只大鼠随机分为5组,每组20只,即正常组、假手术组、手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组. 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO) 脑 I/R 模型. 采用 TUNEL 染色法, 检测大鼠神经细胞凋亡指数; 采用实时定量多聚酶链式反应 (Real-Time polymerase chain reaction,RT-PCR),检测GRP78、Caspase-12 mRNA表达. 结果 与正常组和假手术组相比,手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数升高,GRP78和Caspase-12 mRNA表达增多,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01); 与手术造模组相比, 依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数和Caspase-12 mRNA表达均明显降低 (P<0.01), GRP78 mRNA表达明显升高(P<0.01);与依达拉奉组相比,针刺干预组大鼠各项指标差异无统计学意义(P>0.05). 结论 针刺内关、百会穴可以有效抑制脑缺血神经元细胞凋亡,其保护机制可能上调内质网应激保护性GRP78表达,同时抑制促凋亡Caspase-12表达有关.     

依达拉奉对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究依达拉奉对急性脑缺血再灌注损伤的保护作用.方法:将108只SD大鼠分成生理盐水组和依达拉奉高剂量组(1 mg)及低剂量组(0.5 mg),每组再各分为1 h,6 h及24 h组,每组12只.采用线栓法制造大鼠大脑中动脉再灌注模型,将依达拉奉生理盐水溶液于造模后1,6,24 h注入大鼠股静脉中,1周后断头取脑,组织做病理切片并计算梗死体积.结果:依达拉奉高剂量组(1 mg)、依达拉奉低剂量组(0.5 mg)、对照组坏死体积依次明显减少.结论:依达拉奉对脑缺血再灌注损伤组织有明显保护作用.     

高血压对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响

目的:通过观察高血压对大鼠脑缺血再灌注后神经功能和细胞凋亡的影响,探讨高血压加重缺血性脑损伤的机制。方法:将Wistar雄性大鼠随机分为肾性高血压缺血再灌注组(HIR),正常血压缺血再灌注组(IR)和假手术组(N),采用大脑中动脉线栓法造成大脑缺血再灌注模型,缺血时间为2h,再灌注24h。进行神经功能评分后取脑,采用免疫组织化学技术检测脑组织bcl-2、Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:正常血压缺血再灌注组神经功能评分低于肾性高血压缺血再灌注组(P<0.05)。肾性高血压缺血再灌注组与正常血压缺血再灌注组比较,bcl-2表达明显减少(P<0.05),Bax表达明显增多(P<0.05),神经细胞凋亡明显增多(P<0.05)。结论:高血压通过增加Bax表达、抑制bcl-2表达,促进脑细胞凋亡,加重缺血再灌注后脑损伤。     

依达拉奉对脑缺血再灌注大鼠脑组织超氧化物歧化酶、一氧化氮、丙二醛水平的影响

目的探讨依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,TUNEL法检测大鼠局灶脑缺血再灌注损伤及依达拉奉干预后海马CA1区原位凋亡情况,用试剂盒检测脑组织丙二醛(MDA)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性。结果缺血再灌注损伤后,大鼠海马CA1区神经元细胞凋亡随时间延长而增加,脂质过氧化产物丙二醛含量和一氧化氮合酶活性增高,依达拉奉干预能显著减轻海马神经元凋亡,降低MDA含量和NOS活性。结论在脑缺血再灌注损伤后,依达拉奉能通过清除自由基而减轻细胞凋亡及脂质过氧化损伤。     

氯沙坦对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性和MMP-9表达的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ受体阻断药氯沙坦对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后血脑屏障通透性和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法：采用血管内栓线阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型, 于脑缺血2h、再灌注24h后测定脑组织含水量、伊文斯蓝（EB）含量, 免疫组织化学方法测定MMP 9表达。结果：脑缺血2h、再灌注24h, 大鼠脑组织含水量及EB含量增加, MMP-9呈现高表达。 而氯沙坦组脑组织含水量、 EB含量及MMP-9表达明显低于脑缺血再灌注组（P＜0.05）。 结论：氯沙坦通过降低脑缺血再灌注大鼠基质金属蛋白酶 9的活性及血脑屏障通透性, 从而发挥其脑缺血再灌注损伤的保护作用。     

葛根素对脑缺血-再灌注损伤细胞凋亡和p53表达的影响

目的 观察葛根素对预处理后大鼠局灶性脑缺血时海马区凋亡细胞和p53蛋白表达的影响.方法 利用大脑中动脉栓线阻断法制作大鼠局灶性脑缺血2h后再灌注损伤模型.72只SD大鼠随机分为假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）和葛根素组（P组）.依术后处死动物时间不同,每组分为3个亚组（n=8）.用免疫组化法检测p53蛋白和TUNEL法检测凋亡细胞的表达.结果 P组P2h组p53蛋白表达增高,P24h组显著增高,P72h组p53蛋白表达有所下降,但仍低于IR组（P＜0.01）;P组凋亡细胞数显著低于相应IR组（P＜0.01）.结论 葛根素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与葛根素抗细胞凋亡、下调p53蛋白有关.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织中活性氧自由基表达的时程变化

目的 采用大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion, MCAO)再灌注模型,研究缺血脑组织再灌注后活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)的时程变化,探讨ROS在脑缺血损伤中的作用。方法 采用数字表法将25只健康雄性SD大鼠随机分为5组:假手术(Sham)组,MCAO组(缺血90 min,再灌注3、6、12、24 h),每组5只大鼠。使用线栓法制作大鼠缺血90 min再灌注模型,术中监测大鼠平均动脉压及肛温,使其保持在正常范围。每组大鼠分别于再灌注后3、6、12、24 h时处死,迅速取脑组织进行TTC染色,检测大鼠脑梗死体积,并制作新鲜脑组织冰冻切片,采用ROS特异性染色方法——H₂DCF-DA荧光染色法,检测再灌注后不同时间点缺血半暗带区ROS的表达。结果 1) 在MCAO手术过程中,Sham组以及MCAO组大鼠的平均动脉压及肛温差异无统计学意义。2)Sham组大鼠脑内无缺血半暗带区,其相应脑区内只可见极少量的H₂DCF-DA阳性染色细胞。而MCAO组大鼠再灌注后3,6,12,24 h 4个时间点,脑组织半暗带区域均可见大量的H₂DCF-DA阳性染色细胞。且从再灌注3 h起,MCAO组大鼠脑组织半暗带区域H₂DCF-DA阳性染色细胞数量持续增加,其中再灌注6 h与3 h相比,差异有统计学意义(P<0.05),再灌注24 h与12 h相比,差异有统计学意义(P<0.05)。3)TTC染色结果显示,Sham组大鼠无脑梗死发生。MCAO组大鼠脑组织随再灌注时间的延长(从3 h 到24 h),相对梗死体积逐渐增大,差异有统计学意义(P<0.05)。4) MCAO组大鼠脑组织H₂DCF-DA阳性细胞数目与脑梗死体积比率呈正相关(r=0.833,P<0.01)。结论 局灶性脑缺血模型大鼠再灌注后缺血侧脑组织中ROS量随再灌注时间延长递增,ROS在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用。     

依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠E、L-选择素表达的影响

目的:探讨依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中E-选择素和L-选择素表达的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、再灌注组、依达拉奉治疗组,线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型。再灌注后24h断头取脑,免疫组织化学和RT-PCR法观察脑组织E-选择素和L-选择素表达的变化。结果:大鼠脑缺血再灌注损伤后,E-选择素和L-选择素表达明显高于假手术组(P<0.05);与再灌注组相比,依达拉奉治疗组E-选择素和L-选择素表达明显下调(P<0.05)。结论:依达拉奉的脑缺血保护作用可能与抑制E-选择素和L-选择素表达有关。     

依达拉奉对大鼠肠部分缺血再灌注后肝损伤保护作用的实验研究

目的观察依达拉奉（edaravone）对大鼠肠部分缺血再灌注所致肝损伤的保护作用。方法选择健康雄性SD大鼠30只，体重240—280g，随机分为三组，假手术组（C组）、肠部分缺血再灌注组（IR组）、依达拉奉治疗组（E组），每组10只。除C组外，用自行设计的血流阻断器阻断SMA血流量70％左右，缺血60min，然后开放SMA，再灌注120min，E组于开放SMA同时静脉内给予依达拉奉3mg／kg，在试验过程中均以生理盐水10ml／kg／h持续输注。光镜下观察肝组织的损伤情况，测定血和肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）和一氧化氮（NO）水平。结果IR组肝组织产生明显损伤，血和肝组织中SOD活性明显下降，MDA和NO水平明显升高，与C组比较差异具有显著性（P〈0．05）．与IR组比较，E组肝组织损伤程度较轻，血和肝组织中SOD活性升高，MDA和NO的水平明显降低。结论依达拉奉对大鼠肠部分缺血再灌注所致肝损伤具有良好的保护作用，与其清除自由基，抑制脂质过氧化，降低NO的释放有关。