日本血吸虫发育过程中副肌球蛋白的免疫定位

在血吸虫疫苗研究中,副肌球蛋白(一种97kDa蛋白)被认为是一种有效的疫苗靶抗原。本文对日本血吸虫各发育阶段副肌球蛋白的免疫定位进行了研究。 各期日本血吸虫分别取自湖北钉螺和感染血吸虫的BALB/c小鼠。压螺收集菲律宾株尾蚴,用尾蚴逸出法收集中国株尾蚴;肺期童虫从感染3天后的小鼠肺部取得;感染40     

日本血吸虫副肌球蛋白的克隆和部分核苷酸序列:一种血吸虫病的候选疫苗抗原

副肌球蛋白是多数无脊椎动物肌肉中的主要结构蛋白,脊椎动物则无副肌球蛋白,若用作疫苗候选抗原将不会发生自身免疫反应。已证明曼氏血吸虫的副肌球蛋白(Sm97)有希望成为曼氏血吸虫病疫苗候选抗原,其部分及全部cDNA已得到。本文报告编码日本血吸虫副肌球蛋白的cDNA的克隆及测序。作者从日本血吸虫菲律宾株成虫     

日本血吸虫Sj97疫苗研究进展

日本血吸虫疫苗研制已作为我国防治该病的重要组成部分。副肌球蛋白是WHO提出的血吸虫疫苗较为理想的候选抗原之一,已用于日本血吸虫疫苗的研究。本文主要对日本血吸虫副肌球蛋白的概况、重组蛋白疫苗和DNA疫苗研究进展进行综述。     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因克隆

目的 :克隆日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因。方法 :用 PCR方法根据已发表日本血吸虫菲律宾株副肌球蛋白基因部分核苷酸序列扩增大陆株副肌球蛋白基因。结果 :获得一日本血吸虫大陆株 72 0 bp基因克隆。结论 :经核苷酸序列分析证实 ,本克隆基因与菲律宾株基因核苷酸同源性为 99.0 3%。     

日本血吸虫副肌球蛋白小鼠免疫试验

应用生物化学方法从日本血吸虫成虫中提取虫体副肌球蛋白,并把它结合佐剂FCA/FIA或BCG免疫两批BALB/c小鼠,获得了32.18%—48.52%的减虫率,但统计学上大都无显著差异.两次实验结果还表明,应用虫体副肌球蛋白结合FCA/FIA进行肌肉注射,和应用等量抗原结合BCG皮内注射免疫的BALB/c小鼠,获得的减虫率相当.     

显微镜检查在抗日本血吸虫疫苗候选分子——副肌球蛋白研究中的作用

在抗血吸虫疫苗的研究中,副肌球蛋白正备受关注。近来在超微与形态学方面对副肌球蛋白的定位研究表明,该蛋白在虫体上有多种功能,并为这种非表面蛋白能提供宿主抗血吸虫感染的免疫保护机制作出解释。 副肌球蛋白是一种分子量为97kDa、广     

东方田鼠天然抗体相关的日本血吸虫抗原基因筛选和克隆

目的　研究东方田鼠对日本血吸虫感染天然抵抗力的蛋白分子基因。　方法　用未感染日本血吸虫的东方田鼠血清免疫筛选日本血吸虫成虫 c DNA文库 ,将阳性重组子克隆及测序。利用软件和互联网对核酸序列进行分析 ,确定目的基因。　结果　筛选出编码东方田鼠天然抵抗力相关的 7种蛋白分子基因 :三磷酸甘油醛脱氢酶、丝氨酸蛋白酶抑制剂、热休克蛋白、 2 2 .6 k Da膜相关抗原、副肌球蛋白、细胞色素 C及组织蛋白酶 B。　结论　东方田鼠对日本血吸虫的天然抵抗力可能有许多蛋白分子参与。     

日本血吸虫及其中间宿主原肌球蛋白免疫小鼠的保护作用

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分离的天然原肌球蛋白（分别称为SjcTM和OhTM）免疫小鼠后对日本血吸虫尾蚴攻击感染的保护作用。方法：参照Cote和Smilie文献改进的方法从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分别提取天然原肌球蛋白（TM）抗原，用SDS－PAGE分析其纯度和分子量，并以所提纯之TM抗原加福氏佐剂皮下多点注射免疫C57BL／6雌性小鼠，共免疫3次，攻击感染后6wk解剖小鼠，门脉灌注收集成虫，并分类计数小鼠肝脏和肠组织内的未成熟和成熟虫卵。同时设立佐剂对照组。结果：日本血吸虫大陆株成虫和湖北钉螺TM分子量相似约40kDa。与佐剂对照组相比，日本血吸虫和湖北钉螺TM 免疫组: 减虫率分别为21.1% 和28.2%; 平均每对成虫肝脏减卵率分别为20.1%和52.2% , 肠组织减卵率分别为32.8% 和28.1%; 肝脏成熟虫卵减少率分别为25.9% 和46.8% ,在肠组织的减少率分别为39.7% 和66.8%。结论: 日本血吸虫和湖北钉螺TM 抗原具明显的免疫原性, 免疫小鼠后具有抗感染和抗血吸虫病免疫的作用。可作为血吸虫病候选疫苗分子作进一步研究。     

日本血吸虫副肌球蛋白分子及其抗感染免疫研究进展

副肌球蛋白是最有希望的血吸虫候选疫苗之一,本文就副肌球蛋白分子的来源与分布、分子生物学、蛋白分子和核酸疫苗的免疫保护力及其免疫机制等方面的研究进展进行了综述。     

日本血吸虫副肌球蛋白分子及其抗感染免疫研究进展

副肌球蛋白是最有希望的血吸虫候选疫苗之一，本就副肌球蛋白分子的来源与分布，分子生物学，蛋白分子和核酸疫苗的免疫保护力及其免疫机制等方面的研究进展进行了综述。     

人对曼氏血吸虫特定免疫原的免疫应答:巴西两个流行区粪检阴性者的副肌球蛋白抗体水平持续增高

为了解在血吸虫免疫动物模型中诱导保护性免疫的副肌球蛋白(parmyosin)和谷胱甘肽转移酶(GST)在人群中的应答。作者检测和分析了巴西曼氏血吸虫病流行区人群对副肌球蛋白GST和成虫可溶性抗原(SW     

日本血吸虫原肌球蛋白编码基因克隆和表达

目的　克隆和表达日本血吸虫大陆株原肌球蛋白 (tropomyosin ,TM)编码基因。方法　应用RT PCR方法体外扩增日本血吸虫原肌球蛋白编码基因 ,并采用T载体对该PCR产物直接进行克隆并用于核苷酸序列的测定。将目的基因亚克隆入原核表达载体pQE30 ,以IPTG诱导重组原肌球蛋白的表达。结果　PCR扩增产物约 82 3bp ,符合预计大小 ,并成功地克隆入T载体 ,对其中一克隆pGSjcTM12的插入片段的核苷酸序列分析表明 ,该序列和推测的氨基酸序列与曼氏血吸虫原肌球蛋白基因分别有 91 1%和 98 1%的同源性。该编码基因亚克隆入原核表达载体pQE30获得高效表达 ,分子量约 32kDa,并能被日本血吸虫天然原肌球蛋白免疫血清特异识别。结论　日本血吸虫原肌球蛋白编码基因克隆和原核表达成功。     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因的表达

为了表达日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因，作者用PCR方法从日本血吸虫基因组DNA扩增出这一副肌球蛋白部分基因，然后将该基因重组于质粒体pBV220中，使其在大肠杆菌中表达。结果获得一32kDa的表达蛋白。免疫印迹分析表明感染兔血清可识别这一表达蛋白。该蛋白的纯化将有利于血吸虫病疫苗的进一步研究。     

日本血吸虫肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗的构建与小鼠保护性研究

目的研究日本血吸虫肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗对小鼠的保护效果。方法用致弱童虫免疫血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,获得的阳性克隆之一与曼氏血吸虫肌球蛋白重链基因同源。PCR法扩增该片断基因,产物克隆入真核表达载体pcDNA3中,构建成肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗。将50μg肌球蛋白(myosin)核酸疫苗注射C57BL/6小鼠的两侧股四头肌,免疫3次,间隔2周,末次免疫后2周经腹部皮肤攻击感染尾蚴30条/鼠,感染6周后用门静脉灌注法收集成虫,计算核酸疫苗免疫组减虫率与空质粒对照组减虫率。结果核酸疫苗免疫组获得了33.02%的减虫率,空质粒对照组获得了24.50%的减虫率,经t检验,两组差异无显著性。结论肌球蛋白部分重链基因核酸疫苗在小鼠中未能诱导出保护力。     

日本血吸虫及其中间宿主原肌球蛋白免疫小鼠的保护作用

目的：探讨从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分离的天然原肌球蛋白（分别称为ＳｊｃＴＭ和ＯｈＴＭ）免疫小鼠后对日本血吸虫尾蚴攻击感染的保护作用。方法：参照Ｃｏｔｅ和Ｓｍｉｌｉｅ文献改进的方法从日本血吸虫大陆株成虫及其中间宿主湖北钉螺头足部分别提取天然原肌球蛋白（ＴＭ）抗原，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其纯度和分子量，并以所提纯之ＴＭ抗原加福氏佐剂皮下多点注射免疫Ｃ５７ＢＬ／６雌性小鼠，共免疫３次，攻击感染后６ｗｋ解剖小鼠，门脉灌注收集成虫，并分类计数小鼠肝脏和肠组织内的未成熟和成熟虫卵。同时设立佐剂对照组。结果：日本血吸虫大陆株成虫和湖北钉螺ＴＭ分子量相似约４０ｋＤａ。与佐剂对照组相比，日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ免疫组：减虫率分别为２１．１％和２８．２％；平均每对成虫肝脏减卵率分别为２０．１％和５２．２％，肠组织减卵率分别为３２．８％和２８．１％；肝脏成熟虫卵减少率分别为２５．９％和４６．８％，在肠组织的减少率分别为３９．７％和６６．８％。结论：日本血吸虫和湖北钉螺ＴＭ抗原具明显的免疫原性，免疫小鼠后具有抗感染和抗血吸虫病免疫的作用。可作为血吸虫病候选疫苗分子作进一步研究。     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因的表达

为了表达日本血吸虫大陆副肌球蛋白部分基因，作者用ＰＣＲ方法从日本血吸虫基因组ＤＮＡ扩增出这一副肌球蛋白部分基因，然后将该基因重组于质粒体ｐＢＶ２２０中，使其在大肠杆菌中表达。结果获得－３２ｋＤａ的表达蛋白。免疫印迹分析表明感染高兔血清可识别这一表达蛋白，该蛋白的纯化将有利于血吸虫病疫苗的进一步研究。     

日本血吸虫副肌球蛋白全基因克隆、测序及体内表达

目的： 将日本血吸虫大陆株副肌球蛋白（ Ｓｊｃ９７） 编码区全基因克隆及测序, 并研究 Ｓｊｃ９７ 全基因核酸疫苗在小鼠体内的表达。方法： 抽提日本血吸虫成虫总 Ｒ Ｎ Ａ, 逆转录 聚合酶链反应 （ Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ） 扩增编码 Ｓｊｃ９７的全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 双脱氧链末端终止法测 Ｄ Ｎ Ａ 序列。构建含 Ｓｊｃ９７ 全基因的质粒表达载体 （ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７） , 并用免疫荧光染色法研究ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 在小鼠体内的表达特性。结果与结论： 用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 扩增获得了 Ｓｊｃ９７ 的编码区全基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ, 并测定了该基因编码区的全序列。与日本血吸虫菲律宾株、日本株及曼氏血吸虫副肌球蛋白编码区全基因比较, 核苷酸序列同源性分别为： ９９４ ％ 、９９２ ％ 和９１０ ％ ; 推导的氨基酸序列同源性分别为：９９７ ％ 、９９８ ％ 和９６０ ％ 。ｐ Ｃ Ｍ Ｖ Ｓｊｃ９７ 核酸疫苗能在注射的小鼠局部肌肉组织表达 Ｓｊｃ９７ 。     

使用日本血吸虫(亚洲种)基因的DNA接种

使用日本血吸虫cDNAs包括3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、22.6kDa的体表膜相关抗原(22.6kDa Teg·Ag)、副肌球蛋白片段、全长的副肌球蛋白、14kDa脂肪酸结合蛋白(FABP)、26kDa谷胱甘肽-S-转移酶(GST26)、28kDa谷胱甘肽-S-转移酶(GST28)。26kDa谷胱甘肽-S-转移酶和副肌球蛋白部分片段融合基因克隆到真核细胞表达载体且免疫实验动物。已知核酸疫苗可诱     

血吸虫97kDa副肌球蛋白分子的研究进展

血吸虫副肌球蛋白是虫体可溶性抗原的有效成分,可刺激机体的免疫系统,通过细胞免疫方式诱导机体产生对再感染的较高的抵抗力,是颇具希望的疫苗候选分子。本文概要介绍了对97kDa副肌球蛋白分子的初步分析和确定、该蛋白分子所诱导的保护性免疫、免疫机制及其基因克隆、核酸序列分析和重组多肽等方面的研究进展。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的检测

目的探讨重组日本血吸虫副肌球蛋白(rSj97)免疫小鼠产生抗感染保护力的机制.方法用ELISA法对每次免疫前、攻击感染前的免疫小鼠血清中特异性抗体的动态及滴度进行检测.结果第1次免疫后即产生了特异性抗体,第2次加强免疫后抗体水平进一步上升,攻击感染前达最高.攻击感染前的血清抗体滴度测定结果显示,平均抗体滴度达151200.结论rSj97免疫小鼠可引起明显的体液免疫应答.