辐射诱发白血病U937细胞凋亡基因的分离与鉴定

目的：愈来愈多的证据显示Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶在细胞凋亡执行程序中发挥重要功能，辐射可诱发肿瘤细胞凋亡，分离，鉴定辐射诱发肿瘤细胞凋亡中Ｃａｓｐａｓｅ家族成员，是肿瘤细胞凋亡调控机制关键所在，方法：根据已知的Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白保护保守的氨基酸序列，设计简并引物，逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），分离，鉴定参与辐射诱发细胞凋亡基因。结果：Ｃａｓｐａｓｅ家族蛋白酶特异的抑制剂能阻抑制线诱发的     

胚胎发生中适应性反应:(Ⅱ)产前照射小鼠出生后发育障碍

目的 :将产前接受 X射线低剂量照射后 1天再给予大剂量照射 ,观察产后小鼠发育和行为的适应性反应。方法 :将 ICR孕鼠分成未照射 (对照 )组 ,妊娠 11天经0 .3Gy照射组 ,妊娠 11天经 0 .3Gy照射 第 2天又经 5 Gy照射组和妊娠 12天经 5 Gy照射组。观察前 3组仔鼠以下生物终点指标 :1生存率和出生后 180天内体重变化 ;2身体标志 :耳廓分离、眼睛睁开、门牙长出情况 ;3新生儿反射 :正位面反射、负趋地性反射 ;4感觉功能 :视觉空间、听觉惊跳实验 ;5成年行为实验 :开放区域实验、洞板探查实验。结果 :单纯 5 Gy照射无生存小鼠。 0 .3Gy 5 G…     

辐射诱发小鼠淋巴结细胞凋亡特征和意义的研究

以淋巴细胞为主的免疫系统对电离辐射极度敏感[1 ] 。人和实验动物资料均表明 ,大剂量照射后淋巴组织的严重损伤和淋巴细胞数量的急剧减少是急性放射损伤难以治愈的重要原因之一。我们以往系统观察了电离辐射引起的小鼠外周血、胸腺和脾脏组织损伤的分子病理机理[2 4] ,本实验着重研究经不同剂量γ射线整体照射后小鼠淋巴结淋巴细胞损伤与重建的病理变化特点 ,并探讨了细胞凋亡在其中的作用及其调控凋亡的因素 ,旨在从细胞凋亡角度为放射病免疫损伤的防治提供依据。一、材料和方法1 实验动物与分组 :ＬＡＣＡ纯系雄性小鼠 2 2 5只 ,体重(2 …     

辐射诱导细胞凋亡的基因调控

ｐ５３和Ｂｃｌ－２家族在辐射诱导的细胞凋亡中起着中心作用，可调节许多凋亡相关基因的转录与表达，从而调控细胞凋亡；ｃ－ｍｙｃ是一个双向的调控基因，可因细胞生长条件的不同而不同；ＩＣＥ基因家族蛋白则在调控细胞凋亡过程中使一些有关蛋白底物酶解。这些基因及其它凋亡相关基因并不孤立存在，而是互相联系、互相作用，共同调节细胞的增殖、分化与凋亡。     

辐射诱发细胞凋亡中DNA大片段的生成

目的与方法：ＤＮＡ在核小体间断裂,琼脂糖凝胶电泳时出现梯形谱（ＤＮＡｌａｄｄｅｒ）通常被认为是细胞凋亡的特征性生化标志,利用脉冲场凝胶电泳,对人外周血淋巴细胞受照后ＤＮＡ梯形谱形成前,ＤＮＡ断裂情况进行了观察。结果人外周血淋巴细胞受照者凋亡过程中,ＤＮＡ的断裂分成两步,首先是产生３００ｋｂ到５０ｋｂ的ＤＮＡ大片段,随后才是通常所描述的ＤＮＡ梯形谱。结论;细胞凋亡中核酸内切酶对ＤＮＡ的降解不是一步完     

由UVC诱发的人上皮肿瘤A431细胞凋亡:一系列的细胞凋亡变化与凋亡蛋白酶(-8和-3)级联反应的关系

目的 :研究细胞凋亡事件的先后顺序 ,如染色质浓缩 ,线粒体跨膜电位 (ΔΨ m)及染料的摄取量 ;另外 ,研究细胞凋亡对细胞周期的依赖关系及特殊的凋亡蛋白酶抑制剂的影响 ,以确定对于 A431细胞中紫外线 C(UVC)诱发细胞凋亡蛋白酶回路的凋亡蛋白酶特异级联反应。方法 :1细胞用磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤一次 ,再用0～ 5 0 J/ m2剂量的 U VC照射。 2用 Hoechst33342染色后用荧光显微镜鉴别及量化 ,观察 2 0 0个以上的细胞 ,测定伴有染色质浓缩的细胞片段。 3通过观察次 G1 期细胞碎片具有较低的 DNA含量来鉴定 DNA碎片 ,细胞周期状态用 M…     

辐射诱导大鼠宫内发育期胎脑细胞凋亡和p53基因表达

目的 :阐述 p5 3基因在低剂量辐射诱导胎脑神经皮质细胞凋亡中的作用 ,以揭示发育期胎脑对辐射超敏感的分子机制。方法 :每组 3～ 5只 Wistar R/ Cnb大鼠在受孕 15或 17d给予单一剂量 (10、2 0或 40 c Gy,6 7m Gy/ s) X射线全身照射 ,照后 4、2 4或 48h深麻孕鼠 ,迅速取仔鼠置冰上 ,断头取脑 ,依据组别随机取脑组织 ,立即用 4%三聚甲醛固定或冻存于液氮中 ,采用凝胶电泳分离核小体间 DNA片段 (L addeing)和原位 DNA末端标记 (TUNEL 反应 )方法分析细胞凋亡 ,采用免疫细胞化学、Wastern和 Northern印迹方法分别检测p5 3蛋白和 m RN…     

人正常细胞和肿瘤细胞的适应性反应及其变化

目的:应用6种人细胞株评价适应性反应(AR)是否可能与辐射敏感性或肿瘤和正常细胞株有关。方法:16种人细胞株分别为成纤维细胞株OMB18和S11358,人乳腺癌细胞株T47D和HTB30及人黑色素瘤细胞株Sk-Mel3和HT144。所有细胞均于25cm2培养瓶中,用DMEM/F-12(50∶50)培养,经流式细胞仪检测细胞处于坪期时用于实验。2分别用0、0.2、0.5、1.0、2.0和4.0Gy诱导剂量照射后6h(T47D细胞株另进行1～24h实验)再用1、2、4、6和8Gy攻击剂量照射,剂量率为142cGy/min,电压250kVp,滤板1.07mmAl,以存活分数来估计AR。结果:1T47D细胞株经50cGy诱导剂量照…     

p53基因状态与辐射诱导的G_1期阻滞

Ｇ１期阻滞是细胞对ＤＮＡ损伤作出的一种保护性反应，它与ｐ５３基因状态密切相关。本文对Ｇ１期阻滞的发生机制、生物学意义及ｐ５３突变对辐射诱导Ｇ１期阻滞的影响进行综述。     

p53基因状态与辐射诱导的G1期阻滞

Ｇ１期阻滞是细胞对ＤＮＡ损伤作出的一种保护性反应，它与ｐ５３基因状态密切相关，本文对Ｇ１期阻滞的发生机制，生物学意义及ｐ５３突变对辐射诱导Ｇ１期阻滞的影响进行综述。     

p53和bcl-2表达与BT325细胞辐射性凋亡的关系

目的探讨癌基因表达的变化与辐射诱导肿瘤细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化技术检测人多形性胶质母细胞瘤细胞系，经Ｘ射线处理前后ｐ５３、ｂｃｌ－２基因表达的变化；原位杂交方法检测ｐ５３基因在ｍＲＮＡ水平表达的变化。结果①凋亡组内ｐ５３蛋白表达率明显高于对照组，ｂｃｌ－２表达显著减弱，ｐ５３与ｂｃｌ－２蛋白表达呈显著性负相关。②凋亡组内ｐ５３在ｍＲＮＡ水平表达量明显高于对照组，ｐ５３基因在蛋白水平与ｍＲＮＡ水平表达呈显著性正相关。结论ｐ５３和ｂｃｌ－２基因在Ｘ射线诱导的细胞凋亡过程中具有重要作用     

辐射所致畸形发生危险的阈效应取决于剂量率和p53依赖的细胞凋亡

目的 :证明 p5 3基因在以降低剂量率来减少高剂量率照射所致高畸形的发生到零的危险度这一个过程中是必不可少的。方法 :源于同一遗传学背景的 3种野生型 p5 3(+/ +)、p5 3(+/ - )和 p5 3(- / - )小鼠 ,分别于妊娠第 9.5～ 10 .5天接受高剂量率 (1.0 6 Gy/ m in)和低剂量率 (0 .7或 1.2 m Gy/m in) 1 3 7　 Csγ射线照射。孕鼠于妊娠第 18.5天颈部脱臼处死 ,取出胎鼠 ,分别记录植入数、早期胚胎死亡数 (妊娠第 9天 ,胎盘完全形成前 )、晚期死亡数 (妊娠 10 d之后 )以及形态结构正常和异常的活胎 ,胎儿死亡阶段根据死胎及其胎盘大小来确定 …     

辐射诱发人染色体初始断裂端相互作用的分析 Ⅰ.重接(修复)时间

辐射诱发染色体断裂后,断裂端之间重接(修复)几率是受到时间因素和空间因素制约的。所以,断裂端能够保持相互作用的平均重接时间(T)和距离,是两个基本的生物学参数。这对研究辐射诱发染色体畸变的剂量效应关系,特别是在低剂量率及分次照射     

转染野生型p53基因介导的HL—60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的：探讨野生型p53基因对HL－60细胞的作用机制,并检测p21的表达,探讨二者在白血病中的关系。方法：用脂质体介导的方法将野生型p53基因导入p53基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL－60中,用形态学,电镜,流式细胞仪,间接免疫荧光等方法检测p53对HL－60细胞的促凋亡作用及对p21表达的调节作用。结果：野生型p53基因能促进HL－60细胞凋亡及上调p21表达。结论：p21可能在p53促HL－60细胞凋亡中起协同作用。     

HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 研究HAVCR2基因沉默对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响。方法 利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术沉默辐射诱发基因组不稳定肝细胞中HAVCR2基因的表达,通过流式细胞术检测HAVCR2基因沉默对细胞周期及凋亡的影响;利用实时荧光定量PCR方法检测HAVCR2基因沉默后p53基因的表达变化。结果 慢病毒介导的RNAi技术能有效沉默HAVCR2基因的表达（t=19.21,P<0.05）,与对照组相比,HAVCR2基因的沉默可导致基因组不稳定肝细胞G₂期阻滞（t=-3.41,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=3.65,P<0.05）;实时荧光定量PCR检测结果表明,HAVCR2基因的沉默诱发基因组不稳定肝细胞p53基因的表达下调（t=4.82,P<0.05）。结论 HAVCR2siRNA使辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡率降低,使基因组不稳定肝细胞发生G₂期的阻滞。     

宫颈癌P~(53)基因蛋白表达和细胞增殖活性的研究

目的：研究宫颈癌患者的Ｐ５３基因蛋白表达和细胞增殖活性。方法：对５６例正常宫颈粘膜、宫颈上皮内瘤变、宫颈浸润性鳞癌用免疫组化ＡＢＣ法和图像分析法检测Ｐ５３蛋白、ＰＣＮＡ和ＤＮＡ含量。结果：Ｐ５３表达阳性率、ＰＣＮＡ细胞增殖指数和ＤＮＡ含量随癌组织分级依次增高。结论：Ｐ５３含量和细胞活性增高与宫颈粘膜癌变发生及恶性程度有关；ＰＣＮＡ增殖指数、ＤＮＡ含量和多倍体细胞的出现，对早期宫颈癌的诊断有一定意义；Ｐ５３蛋白在宫颈癌发生中不是一个早期事件。