药用百合鳞叶中总DNA提取方法的研究

目的:对药用百合DNA的提取过程进行改良和优化,筛选出较理想的DNA提取方法。方法:在传统十六烷基三甲基氯化铵(CTAB)提取方法基础上,进行改良和优化,寻找出一种实用的DNA提取方法。结果:用改良CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280在1.6~2.0之间,电泳条带清晰,其含量和纯度完全满足引物扩增分析的要求。结论:本试验中的百合鳞叶总DNA的提取方法简便实用,所得DNA的产量和纯度均能满足基因工程操作的要求。     

贝母的分子生物学鉴定方法的研究

用ＤＮＡ指纹图谱、ＲＡＰＤ和ＤＮＡ测序等技术鉴定中药材已有不少报道[1～ 5] 。ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增是分子生物学最基本的操作步骤之一。但是由于商品药材多数经过加工处理 ,ＤＮＡ可能会受到不同程度的降解 ,再者植物药材中含有的次生代谢产物如多糖很难与ＤＮＡ和ＲＮＡ分开 ,而多糖对酶有抑制作用 ,因此将会影响ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增。本文以贝母为研究对象 ,探讨不同ＤＮＡ提取方法、不同扩增条件对ＰＣＲ产物的影响 ,为生药的分子生物学鉴定提供参考。材料与方法1　材料　托里贝母Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａｔｏｒｔｉｆｏｌ…     

不同产地贝母总生物碱含量的比较

通过紫外分光光度计对市场上不同产地的贝母总生产碱进行测定，并对其含量进行比较，为临床应用提供依据，确保临床用药安全，有效。     

湖北贝母与川贝母总生物碱含量的比较

采用紫外分光光度法测定湖北贝母总生物碱含量，并与川贝总生物碱含量作比较，结果两者总生物碱含量有显著性差异（Ｐ〈０．０５），为湖北贝母不宜作川贝的代用品提供了依据。     

人外周血DNA提取方法比较

分子生物学技术已经广泛应用于生物学、基础医学、临床医学和预防医学等多个学科领域,人外周血DNA的提取是分子生物学的一项基础研究技术,从全血中提取高浓度、高纯度和高质量的DNA在实验研究中尤为重要[1～3].张宁等[4]提出的酚抽提法、甲酰胺裂解法以及异丙醇沉淀法是提取DNA最为经典的实验方法,但其操作繁琐,耗时较长,且所用试剂具有一定的毒性.目前,很多学者针对不同实验样品的传统DNA提取方法都提出了改良方法[5-7],应用试剂盒提取人外周血DNA被广泛应用于现在的实验研究,本文针对试剂盒提取人外周血DNA方法的操作过程以及其注意事项等展开讨论,以期为其他研究者提供参考.     

常用外周血DNA提取方法的比较

目的比较目前常用的外周血DNA提取的三种方法。方法用三种方法提取全血DNA,通过吸光度检测、PCR扩增分析各自优缺点。结果三种方法提取的DNA纯度和作为模板PCR扩增无显著差别,只是操作时间和成本不同。结论天根离心柱型试剂盒应用比较广泛,Promega试剂盒操作时间最短,Chelex-100方法最经济,适合微量提取。     

贝母属植物的化学成分和药理作用研究进展

贝母属植物归属于百合科,野生资源丰富,种类繁多,是一种极有开发利用价值的药用植物。目前发现贝母属植物中有效成分包括生物碱类、二萜类以及甾体和多糖等。其具有广泛的药理作用,尤其在止咳、平喘、祛痰、抗炎、抗肿瘤、降血压、神经保护、镇痛、抗氧化等方面。本文通过文献检索,对近年来国内针对贝母属植物的主要化学成分和药理作用的研究进展进行归纳。全面综述了贝母属植物的有效成分和药理作用的最新研究进展,并对今后的研究方向进行了展望,以期为贝母属植物的研究利用提供借鉴。     

一种党参高质量总RNA的提取方法

目的建立提取高质量党参叶片总RNA的有效方法。方法以山西陵川(药材生产管理规范)GAP基地栽培党参为材料,分别用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试剂盒法提取党参总RNA,通过紫外光谱分析和甲醛变性凝胶电泳对提取的总RNA进行鉴定。结果 3种方法提取的RNA差异有统计学意义;Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试剂盒法所提总RNA完整性较差,且有小分子盐类杂质,不能满足进一步的分子生物学研究;采用CTAB法提取的总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值约为2.0,A260/A230>2.0,电泳28S、18S条带清晰,比值为1.5～2.0,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测,可以满足下游分子生物学实验要求。结论改良CTAB法提取的总RNA完整性好、纯度高,是一种提取高质量党参叶片总RNA的有效方法。     

川芎DNA提取方法的研究

目的 以伞形科蒿本属植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.叶为材料,研究川芎DNA的提取方法 .方法 分别采取CTAB法、高盐低pH法、木本植物DNA提取法、改良高盐低pH法提取基因组DNA,并对4种方法进行了改进.通过0.9%琼脂糖凝胶电泳和RAPD两种方法检测所提取的DNA样品.结果 比较DNA产量、质量等,确定了木本植物DNA提取法最佳.结论 木本植物DNA提取法为最佳方法.     

中药贝母类的研究——ⅩⅦ.贝母鳞叶上表皮显微观察

本文对浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.等20种贝母的鳞叶上(内)表皮进行了显微观察,发现种间在表皮细胞形状、大小和垂周壁部位角质栓(cuticular peg)的形状,大小和排列等方面有一定区别,可作为新的鉴别依据。全文除描述外,列出检索表,并附主要特征图。     

浊点萃取法提取青蒿中青蒿素的工艺研究

目的优选浊点萃取法提取青蒿中青蒿素的最佳工艺。方法采用浊点萃取法提取青蒿素,并用紫外分光光度法测定含量。用正交试验法确定表面活性剂浓度、离子强度、液固比、平衡时间等因素对提取率的影响,优选最佳提取工艺。结果采用非离子表面活性剂聚氧乙烯脂肪醇醚(Genapol-X 80),浓度为15.0%,液固比为100∶1,NaCl浓度为2.0 mol/L,在60℃下萃取40 min,可达到最高的提取率。相对于传统工艺,浊点萃取法的提取率大大提高。结论该方法稳定易行,且操作简单、绿色环保、避免高温破坏、提取率高。     

浙贝母鳞茎总RNA提取方法的研究

建立适合功能基因分析的浙贝母Fritillaria thunbergiiMiq.鳞茎总RNA的提取方法,将为后续与药效成分相关功能基因的分析奠定良好的工作基础。本研究通过紫外分光光度法、非变性琼脂糖电泳法以及DDRT-PCR方法比较异硫氰酸胍法、改良的异硫氰酸胍法、改良的SDS法和改良CTAB法提取浙贝母鳞茎总RNA的质量。结果表明,通过改良的CTAB法提取出的总RNA的完整性好(28 s/18 s约为2),纯度高(其A260/A280和A260/A230分别为1.95和2.30),以其为模板进行DDRT-PCR分析时能获得清晰的差异条带。通过本研究建立的改良CTAB法可于浙贝母鳞茎总RNA的提取,并可为其它植物鳞茎的总RNA提取提供参考。     

Box-Behnken效应面法优化龙葵中总生物碱的提取工艺

目的 优选龙葵中总生物碱的提取工艺。方法 采用单因素试验结合Box-Behnken 效应面法,以总生物碱提取率为指标,考察乙醇体积分数、料液比、提取时间、提取次数等因素对提取工艺的影响,采用酸性染料比色法,利用紫外分光光度计测定总生物碱的含量。结果 确定龙葵中总生物碱提取的最佳工艺条件：乙醇体积分数为63.72%,料液比为1∶41.23,提取时间为54.93 min,提取2次,总生物碱提取率为1.40 mg·g^-1。结论 Box-Behnken 效应面法用于龙葵中总生物碱提取工艺条件的优选是可行的,模型预测效果较好。     

植物类药材基因组DNA提取与纯化的方法学研究

本文探讨了菊科9种植物和地胆草的4种对口商品药材基因组DNA提取与纯化的原理、方法，通过对3种常用植物基因组DNA提取方法（CsC1梯度超速离心法、CTAB／CsC1梯度超速离心法和DTAB微量提取法）的条件摸索，在DNA产率、纯度以及提取纯化过程中影响PCR扩增因子方面进行比较，认为CTAB微量提取法是植物类药材基因组DNA一种比较省时、有效、经济的提取方法。     

地榆中熊果酸的提取

研究了从地榆中提取熊果酸的方法和工艺，地榆经乙醇回流提取地榆皂苷，再经水解可得熊果酸。工艺研究结果显示用乙醇作溶剂提取所得总皂苷量较甲醇高，得率可达3.5％。水解时酸的浓度为7％左右，得率较高。     

Methodological Studies on Genomic DNA Extraction and Purification from Plant Drug Materials

本文探讨了菊科９种植物和地胆草的４种对口商品药材基因组ＤＮＡ提取与纯化的原理、方法通过对３种常用植物基因组ＤＮＡ提取方法（ＣｓＣｌ梯度超速离心法、ＣＴＡＢＣｓＣｌ梯度超速离心法和ＣＴＡＢ微量提取法）的条件摸索在ＤＮＡ产率、纯度以及提取纯化过程中影响ＰＣＲ扩增因子方面进行比较，认为ＣＴＡＢ微量提取法是植物类药材基因组ＤＮＡ一种比较省时、有效、经济的提取方法     

酶解-溶剂联合提取洋葱中槲皮素的研究

目的:研究酶解与溶剂联合提取洋葱中槲皮素的最佳工艺条件。方法:以槲皮素得率为考察指标,通过单因素试验及正交实验确定最佳提取工艺。结果:酶解-溶剂联合提取槲皮素的最佳工艺条件是:酶解pH为5.5,酶解浓度为0.5mg.ml-1,酶解温度为45℃,酶解时间为2 h,液固比为20∶1,提取温度为65℃,提取时间为1.5 h,乙醇浓度为60%,槲皮素平均得率为0.046%。结论:采用酶解-溶剂联合提取槲皮素,工艺方法简单,可大大提高原料利用率。     

平贝母中总生物碱含量测定方法学研究

建立酸性染料比色法测定平贝母中总生物碱含量的方法。以三氯甲烷-甲醇(4∶1)混合溶剂提取总生物碱,以酸性染料比色法测定平贝母中总生物碱,并计算总生物碱含量总生物碱浓度在0.03~0.51 mg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9989);平均回收率为101.3%,RSD为4.0%(n=5);10批平贝母样品的测定结果为0.06%~0.21%。本方法简便、可靠、准确,可用于平贝母总生物碱含量测定。     

绿藻石莼多糖的提取工艺

用正交设计法对绿藻石莼多糖成分提取工艺进行研究。采用苯酚-硫酸法测定石莼提取液中石莼多糖含量。结果显示在pH4、温度100℃条件下提取的提取液中石莼多糖含量最高，达55.19％。溶液pH和提取温度是提取石莼多糖的关键影响因素，提取次数和时间长短的影响不大。