芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用研究＊

目的：探讨芪卫颗粒干预糖尿病肾病小鼠足细胞损伤的作用机制。方法：28只8周龄KK-Ay小鼠成模后分为模型组和芪卫低剂量组、芪卫中剂量组及芪卫高剂量组,另8只C57BL/6J小鼠设为正常对照组。实验中纪录小鼠一般状况、血糖、24 h尿蛋白定量。治疗10周后检测小鼠肾功能指标血清肌酐及尿素氮,并称取小鼠肾脏,固定后行小鼠肾组织苏木精-伊红（HE）、Masson、过碘酸希夫（PAS）染色,并制作肾母细胞瘤基因（WT-1）免疫组化,结合软件分析计算小鼠肾小球足细胞数。蛋白质印迹法（Western Blot）检测小鼠肾脏中nephrin蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测nephrin mRNA的表达。结果：与模型组相比,芪卫颗粒治疗10周后小鼠体质量、血糖、24 h尿蛋白定量及血肌酐明显降低,并有效改善肾小球系膜增生等病理损害,保护足细胞数目。芪卫颗粒治疗后的nephrin蛋白表达量及mRNA表达量均显高于模型组。结论：芪卫颗粒可能通过调节nephrin表达而改善糖尿病肾病小鼠足细胞损伤。     

芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin表达影响的实验研究

目的探讨芪卫颗粒对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达的影响。方法随机选取10只健康雄性SD大鼠为正常组,其余30只采用腹腔注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、西药组以及芪卫颗粒组,将西药组按缬沙坦10 mg/(kg·d)灌胃、芪卫颗粒组按生药10 g/(kg·d)灌胃,连续给药。于给药第24周检测大鼠血肌酐、血尿素氮及内生肌酐清除率;24周后将大鼠处死,采用PAS染色法将肾组织染色,在光镜下观察大鼠肾组织病理改变;采用western blot法检测肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠血肌酐、血尿素氮水平显著升高,内生肌酐清除率及足细胞nephrin表达水平显著下降(P0.05);与模型组相比,各给药组大鼠血肌酐、血尿素氮水平明显下降,内生肌酐清除率及nephrin表达水平明显上调(P0.05)。结论芪卫颗粒能够上调糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞nephrin的表达,减轻足细胞损伤,保护肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展。     

芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织转化生长因子β1蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨芪卫颗粒对KK-Ay小鼠肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响。方法采用自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠模型。将KK-Ay小鼠随机分为模型组、中药组、西药组,以C57BL/6J小鼠作为正常组,每组15只,连续治疗12周,用HE、PAS及Masson染色法观察肾脏病理改变。采用免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法,检测肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白及mRNA表达。结果模型组小鼠肾脏病理改变呈现肾小球肥大,系膜基质区增宽,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞空泡样变性,肾小管扩张,灶状萎缩,偶见坏死,可见较多蛋白管型,间质内炎性细胞浸润,间质纤维化表现。肾脏细胞内的TGF-β1的蛋白及mRNA表达较正常组明显增多。经芪卫颗粒、缬沙坦处理后,小鼠肾脏病理改变较模型组明显减轻,TGF-β1的蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05)。结论芪卫颗粒可通过抑制TGF-β1的蛋白及mRNA表达起到防治糖尿病肾病的作用。     

芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾功能的影响及机制

目的观察芪卫颗粒对自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠肾功能的影响及机制。方法 8周龄雄性KK-Ay小鼠高脂饲料喂养至12周制备糖尿病肾病模型,将造模成功的KK-Ay小鼠随机分为模型组、西药缬沙坦组、芪卫颗粒组,PERK抑制剂GSK2656157组各8只,并以C57BL/6J小鼠8只作为正常对照组。各组小鼠每日予相应药物灌胃。动态监测小鼠空腹血糖(FBG)、24 h尿微量白蛋白排泄率(UAER)。连续给药8周后,麻醉处死取血尿及肾组织,测定血尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)含量,并取肾皮质行HE染色观察病理变化;Western blotting法检测肾组织内质网应激相关蛋白GRP78、PERK及P-PERK的表达。结果与模型组比较,芪卫颗粒组能明显减轻小鼠蛋白尿及改善肾功能(P0.05),肾组织GRP78和P-PERK的蛋白表达明显下降(P0.05),肾组织病理变化改善显著。结论芪卫颗粒可减少自发性2型糖尿病KK-Ay小鼠尿蛋白,改善其肾功能,其作用机制可能与抑制内质网应激PERK通路相关。     

中医药对糖尿病肾病足细胞损伤的干预作用研究进展

糖尿病肾病是糖尿病最常见并发症之一,足细胞是附着在肾小球基底膜外的高度分化的细胞,它与GBM、肾小球内皮细胞共同构成了肾小球滤过屏障,近年来研究[1]证明足细胞损伤在糖尿病肾病发生发展过程中起着重要作用.中医药在糖尿病肾病中对足细胞干预的研究已经取得一定成果,向人们展现了其广泛的应用前景.     

芪卫颗粒调控miRNA-155减轻高糖诱导小鼠足细胞转分化的研究

目的 观察中药芪卫颗粒对体外高糖诱导的小鼠肾小球足细胞转分化的作用及对细胞miRNA-155表达的影响,探讨其保护足细胞的可能机制.方法 以小鼠肾足细胞株作为研究对象,采用高糖刺激构建细胞转分化模型,分为正常组(空白血清培养)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖+空白血清培养)、芪卫颗粒组(30 mmol/L葡萄糖+含药...     

益肾化湿颗粒对糖尿病肾病小鼠足细胞保护机制研究

目的观察益肾化湿颗粒对糖尿病肾病(DN)小鼠肾脏足细胞裂孔隔膜蛋白(Nephrin、Podocin)、血小板衍生生长因子受体β(PDGFRβ)表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制。方法通过高脂膳食建立DN小鼠模型,随机分为正常组、模型组、益肾化湿治疗组、缬沙坦组,并每周称重。干预4周后处死小鼠,分别检测各组24 h尿蛋白量、血糖、肌酐,光镜观察肾脏病理变化,免疫荧光染色检测肾脏PDGFRβ的表达,Western Blot检测Nephrin、Podocin、PDGFRβ的表达。结果与模型组相比,益肾化湿治疗组小鼠血糖降低[模型组(37.04±2.72)mg/d L;益肾化湿组(32.51±4.65)mg/d L],尿微量白蛋白肌酐比降低[模型组(4.95±1.36)μg/mg;益肾化湿组(1.41±0.17)μg/mg],肾脏病理变化有明显改善,Nephrin、Podocin的表达显著增高(P0.01),PDGFRβ的表达显著降低(P0.01)。结论益肾化湿颗粒通过上调足细胞Nephrin、Podocin及降低肾脏PDGFRβ的表达,减轻DN小鼠尿蛋白排泄,具有肾功能保护作用。     

糖尿病肾病足细胞损伤机制及中药干预研究进展

糖尿病肾病是糖尿病常见并发症,发病率逐年上升。作为肾小球滤过屏障的组成部分,足细胞在糖尿病肾病的发生发展过程中起着重要作用。文章从足细胞的结构功能、损伤表现出发,探讨糖尿病肾病状态下足细胞损伤的机制,并总结近年来中药在干预糖尿病肾病足细胞损伤中发挥的作用。     

中西医修复足细胞损伤防治糖尿病肾病研究进展

<正>糖尿病是世界上最常见的慢性疾病之一,对人类的身体健康造成极大威胁。近几年来,糖尿病的患病率呈上升趋势,儿童和青少年的发病占比增加^[1]。目前糖尿病患者的人数预计有4亿多人,而且预计到2045年患病人数将增加到6亿多人^[2]。由糖尿病引起的慢性肾脏病(chronic kidney disease CKD)被诊断为糖尿病肾病(diabetic kidney disease DKD),是糖尿病患者的常见并发症之一,     

芪卫颗粒对2型糖尿病KK-Ay小鼠肾脏内质网应激IRE1通路的影响

目的观察芪卫颗粒对2型糖尿病KK-Ay小鼠肾组织内质网应激IRE1通路相关因子表达的影响。方法将12周龄的雄性KK-Ay小鼠随机分为模型组、缬沙坦组和芪卫颗粒组,每组12只;设同周龄12只雄性C57BL/6J小鼠作为正常对照组。连续灌胃12周后,检测各组空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)及24小时尿白蛋白排泄率(24 hours urinary albumin excretion rate,24h UAER); HE染色光镜下观察小鼠肾脏基本病理形态学改变; Western blot法检测大鼠肾组织GRP78、P-IER1及XBP1蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组FBG、BUN、Scr及24h UAER水平均明显升高(P 0. 05),肾脏组织中GRP78和P-IRE1及XBP1的蛋白表达水平明显升高;与模型组组比较,芪味颗粒组的FBG、BUN、Scr及24h UAER水平均明显降低(P 0. 05),肾脏组织中GRP78和P-IRE1及XBP1的蛋白表达水平明显下降(P 0. 05)。肾脏病理结构得到改善。结论芪卫颗粒可通过降低2型糖尿病KK-Ay小鼠的FBG、BUN、Scr、24h UREA,改善肾功能,缓解肾脏病理改变;芪卫颗粒可以抑制内质网应激相关因子GRP78、P-IRE1及XBP1的表达,抑制IRE1通路激活,保护DN足细胞损伤,改善肾功能。     

黄芩苷对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的修复作用研究

目的：研究黄芩苷对糖尿病肾病（DN）大鼠血液AngⅡ及肾脏TGF-β1表达的影响,从细胞因子角度探讨黄芩苷通过修复足细胞损伤防治DN的作用机制。方法：应用链脲佐菌素（STZ）单次腹腔注射法建立DN模型,并随机分为DN模型对照组和黄芩苷治疗组,另设空白对照组。黄芩苷治疗组腹腔注射黄芩苷水溶液40 mg/kg,DN模型组每天腹腔注射注射用水1mL/只,干预42 d后,所有大鼠眼眶取血,用放射免疫法检测血浆AngⅡ;并称体质量、肾脏质量,计算肾脏指数;收集大鼠24 h尿液,测微量蛋白质、尿肌酐值;以3%戊二醛固定液固定右肾行电镜检查,4%多聚甲醛固定液固定左肾行病理学检测,观察肾小球足细胞形态改变及肾脏TGF-β1表达变化。结果：黄芩苷治疗组DN大鼠肾脏指数减小,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;尿微量蛋白含量明显减少,尿肌酐排泄量增加,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;电镜下足细胞损伤程度减轻;血浆AngⅡ降低,与模型组相比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;TGF-β1表达数量减少,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：黄芩苷可通过降低血浆AngⅡ的含量来抑制TGF-β1的表达,改善肾小球足细胞损伤等非血压依赖机制减少蛋白尿,延缓DN进程。     

益气活血方防治糖尿病肾病足细胞损伤的实验研究

目的:研究益气活血方对链脲菌素(Streptozocin,STZ)诱导的糖尿病肾病(Diabetic nephrology,DN)足细胞损伤的保护作用。方法:8周龄雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠采用STZ造模成功后随机分为模型组和益气活血方组,同时设立正常对照组,每组8只,益气活血方组给予黄芪颗粒0.8 g/(kg·d)联合三七颗粒0.4 g/(kg·d)生理盐水溶液灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水溶液灌胃,连续12周。12周末,收集24 h尿液检测尿微量白蛋白浓度,光镜观察肾脏病理改变,电镜观察足细胞超微结构变化,并采用免疫组织化学方法检测肾组织中nephrin表达。结果:与模型组相比,益气活血方组可明显减轻DN大鼠尿蛋白排泄(P<0.05)和肾脏病理改变,并减轻足细胞足突融合及改善足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin表达。结论:益气活血方能减轻DN足细胞损伤和蛋白尿,改善肾脏病理损伤,从而发挥肾脏保护作用。     

糖尿病肾病中足细胞损伤的信号通路及中药的干预研究进展

足细胞(podocyte)位于肾小球基底膜外侧,具有高度的结构、功能特异性,在维持肾小球滤过膜的结构和功能中起重要作用。足细胞损伤在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)中起重要因素,以足细胞损伤为靶点的治疗已成为治疗糖尿病肾病的新手段,对信号通路的干预可能为其治疗提供新方向,目前关于足细胞损伤机制研究较多的有自噬与PI3K-Akt/m TOR信号通路、Notch信号通路、TGF-β/Smad、NF-κB信号通路、Rho/ROCK信号通路和Wnt/β-catenin信号通路等。临床上尚无控制糖尿病肾病的特异性药物,最新研究发现,中医药在足细胞损伤具有一定的保护作用,主要通过增加足细胞数量、密度,调节足细胞相关蛋白、因子等途径保护足细胞。因此,本文就糖尿病肾病中足细胞损伤相关的信号通路及中医药的干预作用做一综述,为更好地防治糖尿病肾病提供研究策略。     

熊果酸对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的:通过复制糖尿病肾病大鼠模型,探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:SPF级大鼠采用链脲霉素(streptozocin,STZ)及高糖高脂饲料联合复制糖尿病肾病大鼠模型,实验分为正常组,模型组,阳性药组(厄贝沙坦,15 mg·kg-1),UA高剂量组(UA-H,60 mg·kg-1)和UA低剂量组(UA-L,30 mg·kg-1);观察大鼠血糖、尿蛋白量、肾指数的变化,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法和过碘酸-希夫(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏病理变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和肾脏中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量,试剂盒检测肾脏组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织足细胞裂孔膜CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)和podocin蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠的血糖,24 h尿蛋白量,血清和肾脏IL-1β,IL-6及TNF-α含量,肾脏组织中MDA含量,肾指数均显著增加,体质量,肾脏组织SOD活性,肾脏中podocin,CD2AP蛋白表达量均显著降低(P0.01);与模型组比较,UA明显降低血糖值和尿蛋白量,肾指数,肾脏MDA含量,血清和肾脏IL-1β,IL-6及TNF-α水平,能够升高模型组大鼠体质量,肾脏SOD活性,肾脏中podocin,CD2AP蛋白的表达(P0.05,P0.01),逆转糖尿病所致大鼠肾小球病变。结论:UA可通过保护肾脏足细胞作用及调节裂孔膜蛋白CD2AP和podocin表达而抑制高血糖对肾脏的病理损害、降低尿蛋白和保护肾功能。     

足细胞巢蛋白与糖尿病肾病蛋白尿发生机制的研究新进展

<正>在过去的数十年,糖尿病(DM)的发病率迅速增加。DM常伴有多种严重的并发症,包括肾脏病变、神经病变、视网膜病变以及加速心血管病变等。其中,糖尿病肾病(DN)是DM最常见的微血管并发症,同时也是DM最常见的致死性并发症。在发达国家,DN常常是引起终末期肾病(ESRD)的首要     

糖尿病肾病足细胞损伤的病理机制及中药的干预作用

在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)进程中,足细胞损伤与蛋白尿密切相关。足细胞损伤的病理特征主要是指足细胞形态和功能的改变,包括足突融合、足细胞数量和密度减少、足细胞凋亡、足细胞上皮-间充质转分化以及足细胞肥大等。这些病理性损伤受控于肾组织内多条信号调控途径,如哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)/自噬通路、转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1通路以及Notch通路等。以雷公藤制剂为代表的一些中药提取物,如雷公藤多苷(multiglycoside of Tripterygium wilfordii,GTW)、雷公藤甲素(triptolide,TP)、黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)、黄芪甲苷(astragaloside IV,AS-IV)以及三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在体内外对DN模型鼠足细胞病变或高糖诱导的足细胞损伤都具有一定的保护作用。国内的初步研究表明,GTW很可能通过调控DN模型鼠肾组织m TORC1信号通路活性而改善足细胞损伤。因此,基于DN足细胞损伤的信号调控途径而探讨中药干预作用的研究是今后的发展方向。     

三芪口服液对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞及其蛋白表达的影响

目的 观察三芪口服液对实验性糖尿病肾病(DN)模型大鼠足细胞计数及足细胞标志性蛋白PCX及足细胞裂孔膈膜蛋白的影响.方法 SD雄性大鼠,予STZ单次腹腔注射及高脂饲料造模,筛选DN成模大鼠,随机分组,药物干预;6周后采集大鼠尿测尿蛋白,处死大鼠取肾组织以免疫组化方法测定PCX、nephrin的蛋白表达、足细胞计数.结果 三芪口服液组肾小球足细胞数较模型组多(P＜0.05);定量分析结果显示;模型组PCX平均荧光密度、nephrin蛋白表这均低于三芪口服液组(P＜0.05);Pearson相关分析结果显示,24小时UMA与肾小球足细胞PCX平均荧光密度、nephrin蛋白表达呈负相关(P＜0.01).结论 益气活血中药复方三芪口服液能够上调肾足细胞裂孔隔膜nephrin、足细胞特异性标志蛋白PCX的蛋白表达,从而改善足细胞的损伤,减少尿蛋白,延缓DN进程.     

藏药灰兜巴对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的改善作用

目的探讨藏药灰兜巴对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的改善作用。方法采取高脂高糖饮食喂养和腹腔注射65 mg/kg链脲佐菌素法诱导糖尿病肾病大鼠模型。大鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍组、灰兜巴组,每组8只,灌胃给药6周。分别于药物干预前后进行口服葡萄糖耐量实验(oral glucose tolerance test,OGTT),收集24小时尿液并检测mAlb与Ucr比值;PASM观察肾组织病理学改变情况;Western blot法和免疫荧光法检测足细胞标志蛋白Nephrin表达;透射电子显微镜观察足细胞和肾小球基底膜损伤。结果与对照组比较,模型组大鼠时间-血糖曲线下面积及mAlb/Ucr升高(P<0.01),足细胞标志蛋白Nephrin表达减少(P<0.01),透射电镜下可见肾小球基底膜明显增厚及广泛足突融合。与模型组比较,灰兜巴可改善糖尿病肾病大鼠空腹葡萄糖耐量受损,降低mAlb/Ucr(P<0.01),上调足细胞标志蛋白Nephrin表达(P<0.01),减少足细胞丢失,改善足细胞和肾小球基底膜超微结构改变情况。结论益气养阴藏药灰兜巴可减轻糖尿病肾病大鼠足细胞损...     

论糖尿病肾病足细胞损伤的中医病机

目前,现代医学对糖尿病肾病（DKD）的认识局限于足细胞损伤导致大量蛋白尿及肾功能下降的阶段,控制血糖、降压、调脂、降低蛋白尿等仍是DKD治疗的基石。中医学对糖尿病肾病病机的认识基本上沿袭了消渴病“阴亏燥热”理论,临床以此立论治疗往往取效不足。王茂泓主任中医师认为该病病机关键在于“风火相煽、肾精亏虚”,从虚实角度阐述足细胞损伤的中医病因病机,并从厥阴入手,虚实共治,取得了较好的疗效,为治疗糖尿病肾病提供了新思路。     

中药有效成分对糖尿病肾病足细胞裂空隔膜蛋白干预作用的研究进展

肾小球足细胞裂孔隔膜(SD)蛋白是SD的重要组成成分,其在维持SD结构和功能的完整性方面发挥着关键性作用,并且与蛋白尿的发生密切相关。从中药中提取有效成分对SD蛋白的结构、功能及其作用机制进行干预,已成为防治糖尿病肾病研究的一个热点。本文就近年来足细胞SD蛋白的研究现状、中药有效成分对SD蛋白的干预作用及其作用机制作一综述,主要阐述了雷公藤、黄芪、积雪草、川芎、绞股蓝、三七、冬虫夏草、红参、五味子等多种中药的有效成分对SD蛋白,尤其是nephrin、podocin蛋白等的干预作用及其防治蛋白尿的作用机制,为更好地设计早期蛋白尿防治方案以及为预防肾病综合征提供新的研究策略。