穿心莲内酯与rIL_2促进LAK细胞生长及细胞表型变化的研究

目的　用穿心莲内酯 (CXLNZ)和rIL2 对LAK细胞进行促增殖及细胞表型研究 ,结果表明 ,CXLNZ在少量rIL2 的协同下可以明显促进LAK细胞的增殖 ,呈现 1 1>2的生物效应 ,其在促免疫活性细胞生长方面有类似rIL2 作用 ,50 μg/ml效应相当于rIL2 2 0 0 0U/ml的生物效应 ;经CXLNZ作用的LAK细胞表型 (CD3、CD4 、CD8)明显高于对照组。研究提示 ,CXLNZ在促进免疫细胞的生长 ,调节细胞平衡 ,增强免疫功能等方面不失为一新途径。     

海参猴桃液为主激活的LAK细胞对T细胞亚群的影响

目的 :观察中药海参猴桃液(SSAP)辅以少量rIL-2激活的LAK细胞回输家兔后 ,其T细胞亚群水平情况 ,为从理论和实践探讨中药肿瘤免疫的作用及其原理提供依据。方法 :采取健康家兔下肢静脉血分离淋巴细胞作待培养细胞 ,分设实验组(中药SSAP3000ug/ml+rIL-2100u/ml)、阳性对照组(rIL -21000u/ml)、空白对照组(加等量生理盐水) ,培养第6天起回收LAK细胞分别回输给3组家免 ,回输6次后 ,采取家兔外周静脉血 ,送化验检测T细胞亚群 ,观察各组在回输LAK细胞前后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8 水平情况。结果 :在回输后各项指标中 ,实验组及阳性对照组与空白组比较 :实验组及阳性对照组的CD3、CD4、CD4/CD8 各项指标高于空白组 ,统计学P<0 05 ,差异有显著性 ;实验组及阳性对照组的CD8 值高于空白组 ,但P>0 05 ,差异无显著意义 ;实验组与阳性对照组的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8 水平相当 ,统计学P>0 05,差异无显著性。结论 :中药海参猴桃液(SSAP)辅以少量rIL -2激活的LAK细胞与单独rIL-2激活的LAK细胞回输家兔后 ,对T细胞亚群的调节具有相似的影响作用。说明SSAP液能协同少量rIL-2刺激机体免疫系统 ,增强机体的细胞免疫功能 ,提高机体的免疫力。     

海参猴桃液辅以少量rIL-2对免疫杀伤细胞活性的正向调节研究

目的 :探讨用中药海参猴桃液 (SSAP)辅以基因重组人白细胞介素 2 (rIL -2 )体外培养扩增、激活免疫杀伤细胞LAK的机理 ,观察SSAP辅以少量rIL -2能否提高及在多大程度上提高LAK细胞的杀瘤活性。方法 :通过提取健康供血者的外周血单个核细胞作为待培养细胞 ,设空白对照组 (加等量生理盐水 )、阳性对照组 (1 0 0 0U/mlrIL -2 1ml)、实验 1组 (1 0 0 0U/mlrIL -2 0 .5ml +30 0 0 μg/mlSSAP 1ml)、实验 2组 (1 0 0 0U/mlrIL -20 .1ml+30 0 0 μg/mlSSAP 1ml) ,4组在不同条件下培养LAK细胞 ,分别用H -TdR释放法检定其体外对人肝癌BEF -740 4杀伤活性。结果 :30 0 0 μg/ml的SSAP +1 0 0 0U/mlrIL -20 .1ml在培养第 3天便能测出杀伤活性 ,第 9天达峰值 [杀瘤率 (75 .5± 1 3.6 ) % ],杀瘤活性与 1 0倍量rIL -2单独诱导激活的LAK细胞杀瘤活性相近 [杀瘤率 (92 .9± 2 1 .3) % ],两组比较无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而且杀瘤活性持续 1 8天。结论 :SSAP辅以少量的rIL -2能大量扩增激活LAK细胞 ,增强其对肿瘤细胞的杀伤力 ,更重要的意义在于获得的LAK细胞杀伤力强大而持久 ,同时可减少rIL -2的用量     

红花多糖对人PBMC增殖活性及NK、LAK细胞杀伤活性的影响

目的:探讨红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)体外对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖作用及对NK细胞、LAK细胞杀伤活性的影响。方法:采集健康成人外周血,常规分离PBMC,体外与不同浓度的SPS共同培养,用3H-TdR法检测PBMC的增殖活性;MTT法检测NK、LAK细胞的杀伤活性。结果:SPS对PBMC增殖有促进作用,其促增殖作用呈现量效依赖性,以1.25mg.mL-1和0.625mg.mL-1剂量组促增殖作用明显(P0.05);SPS对NK细胞与LAK细胞的杀伤活性都有明显的提升作用(P0.05)。结论:SPS可促进PBMC的增殖,增强NK细胞、LAK细胞的杀伤活性,增强免疫功能。     

生脉散加黄芪对LAK细胞抗肿瘤活性的正向调节作用

本文用~3H释放方法检测了生脉散加黄芪对LAK细胞活性的影响。43例LAK细胞分别对8例不同型别患者的新鲜急性白血病细胞表现了明显的杀伤活性。以最适浓度(100μg/ml)生脉散加黄芪制剂协同IL-2诱生LAK细胞,其活性明显增强。最适浓度(10μg/ml)的人参总皂甙制剂作用稍强于生脉散加黄芪制剂。     

黄芪刺激体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的作用

目的探讨黄芪对体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的影响。方法从喂饲含0．1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4～6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞,用RT-PCR、免疫组化、Westem blot等方法对培养的细胞进行鉴定。MIT法观察不同浓度黄芪对肝卵圆细胞生长的影响；Giemsa染色法观察细胞表型的改变情况；碘化丙啶染色流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果所分出的细胞既表达干细胞标志物c-kit,也表达胚胎肝细胞标志物甲胎蛋白、胆管细胞标志物OV6和CK19,此外还表达成熟肝细胞标志物白蛋白,认为它们是大鼠肝卵圆细胞。从0．125mg/ml～4mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后都有促进其生长的作用,其中2mg/ml黄芪刺激生长作用最明显(P＜0．05)。2 mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后既出现了一些增殖能力强的细胞,也出现了一些核质比低的细胞,此时细胞周期测定结果显示处G_2-S和M期的细胞比未用黄芪处理的对照细胞增多。结论黄芪具有明显的刺激体外培养的肝卵圆细胞生长的作用。     

黄芪皂苷II抗肝癌肺转移效应及作用机理的研究

目的:研究黄芪皂苷对原发性肝癌肺转移抑制效应及作用机理。方法:建立H22肝癌肺转移模型,随机分为荷瘤模型组、黄芪皂苷II 0.3 mg/kg、1 mg/kg组和黄芪皂苷II 0.3 mg/kg+抗CD45 1000 mg/kg抗体组。药物干预后,检测肺内肿瘤转移数和肺病理损伤程度;酶联免疫吸附(ELISA)法检测Th1细胞因子(IL-2和IFN-γ)产生水平;流式细胞术检测脾淋巴细胞Ki-67和胞内Th1细胞表达水平;Western blot检测脾淋巴细胞LCK (phospho-Tyr505)和STAT1磷酸化水平。结果:与模型组比较,黄芪皂苷0.3 mg/kg、1 mg/kg药物干预组肺转移灶数目显著减少,肺转移病理损伤减轻,荷瘤小鼠淋巴细胞的增殖功能(CD4~+Ki67+T细胞)明显增加,Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的产生明显增加,肝癌肺转移荷瘤小鼠淋巴细胞Th1细胞(CD4~+IFN-γ)比例明显上调,促进LCK (phospho-Tyr505)去磷酸化。抗CD45抗体干预显著阻断黄芪皂苷II抗肺转移效应和促增殖作用,明显减少黄芪皂苷II促Th1型细胞因子(IFN-γ和IL-2)的产生和Th1细胞表达水平。同时抗CD45抗体干预显著阻断黄芪皂苷II促LCK 505位去磷酸化。结论:黄芪皂苷具有显著抗肺转移效应,其作用机理与激活CD45蛋白酪氨酸磷酸酯酶,从而促进Th1细胞因子释放及T淋巴细胞的激活有关。     

黄芪成分F3增强低剂量白介素Ⅱ诱导LAK细胞的细胞毒效应

在对黄芪免疫调节有效成分 F3的研究过程中发现:(1)F3加入100u/ml 白介素Ⅱ(rIL-2),其所诱导的 LAK 细胞对人类黑色素瘤 A375P 的杀伤率可达80%,与1000u/ml rIL-2单独使用时的效果(76%)相似,减少 rIL-2用量的90%。(2)使用 F3后,所需 LAK细胞数量减少50%。提示运用其他生物反应调节剂(BRMs)来增强 rIL-2所诱导的 LAK 细胞杀伤活性是一个值得探索的方向。     

天花粉多糖促人外周血单个核细胞增殖和对人乳腺癌细胞人子宫颈癌细胞的生长抑制作用

目的 研究天花粉多糖促人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)增殖作用和对人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)、人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)生长抑制作用.方法 分离健康人PBMC,采用MTT法测定不同浓度天花粉多糖(0.5,1.0,2.0,5.0,10.0,20.0 mmol·L-1)作用于人PBMC 72h后,对人PBMC的促增殖作用;不同浓度天花粉多糖对MCF-7细胞和HeLa细胞生长的抑制作用.结果 2.0～20.0 mmol·L-1天花粉多糖具有显著促进人PBMC增殖(P<0.05),且呈一定的浓度依赖关系;5.0,10.0,20.0 mmol·L-1天花粉多糖均能有效抑制MCF-7细胞和HeLa细胞生长(P<0.05).结论 天花粉多糖具有促人PBMC的增殖作用,并可显著抑制肿瘤细胞MCF-7和HeLa细胞的生长.     

艾灸血清对肿瘤浸润淋巴细胞增殖和表型的影响

目的；观察“艾灸血清”(MS)对肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor Infiltrating Lymphocytes,TIL)增殖和表型的影响。方法：用“艾灸血清”培养TIL，通过流式细胞术进行检测。结果：发现“艾灸血清”能明显促进TIL的增殖，加快其进入指数生长期，“艾灸血清”能协同细胞因子rIL－2持续升高TIL中CD3^ 阳性细胞数，维持CD4^ 阳性细胞，显著提高CD8^ 阳性细胞，使CD4^ /CD8^＋出现倒置，这种协同作用存在穴位相对特异性。结论：“艾灸血清”有利于从细胞增殖和表型两方面促进TIL的生长。