肝细胞癌组织和癌周组织中p53基因密码子249突变的比较研究

目的：本研究通过比较研究ＨＣＣ 癌组织和癌周组织中ｐ５３ 基因密码子２４９ 特征性突变来进一步阐明该基因在ＨＣＣ 发生机制中的意义。方法：收集９ 份癌组织中经单链构型多态性分析研究证实存在密码子２４９ 突变的ＨＣＣ 标本和１１ 例无此突变的ＨＣＣ 标本,采用等位基因特异性ＰＣＲ（ＡＳ－ ＰＣＲ） 方法比较研究癌组织和癌周组织中密码子２４９ 突变情况。结果：２０ 例ＨＣＣ 中,癌周组织中密码子２４９ 特征性突变检出率为７０ ％ 。９ 例ＳＳＣＰ 阳性者的癌周组织中的特征性突变检出率达１００ ％ 。１１ 例阴性患者的癌组织和癌周组织也能检出一定水平的突变。结论：ｐ５３基因密码子２４９ 突变在非癌肝组织中广泛存在。癌组织中密码了２４９ 特征性突变可能发生在肿瘤形成之前。     

银染PCR—SSCP方法检测恶性纤维组织细胞瘤P53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法检测常规石蜡包埋恶性纤维组织细胞瘤（ＭＦＨ）中ｐ５３基因点突变。结果显示，１６例ＭＦＨ中，９例ＳＳＣＰ阳性，表明这些病例相应ＤＮＡ片段中发生了点突变，其中第５、６、７、８外显子ＳＳＣＰ阳性出现的例次数分别为１、４、４、３次（２例转移的病例同时有６、７、８三个外显子异常）。微波处理ＡＢＣ法检测突变型ｐ５３蛋白表达，１０例为阳性，ＳＳＣＰ与ｐ５３蛋白表达的阳性符合率为９０．０％，ｐ５３基因点突变及蛋白表达与ＭＦＨ的组织学亚型无关。ｐ５３基因突变可能在ＭＦＨ的发生发展及转移中起作用。本研究结果表明，银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法。     

采用PCR—RFLP技术分析石蜡包埋胃癌组织ras和p53基因点突变

采用多聚酶链延伸反应一限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）法对福尔马林固定、石蜡包埋胃癌组织ｒａｓ和ｐ５３基因点突变进行分析，结果表明，Ｃ—Ｈａ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１３．６％（１２／８８），第６１位密码子为３．８％（３／８０）；Ｃ—Ｋｉ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为７．２％（５／６９），第１３位密码子未发现有点突变者；Ｎ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为１．４％（１／６８）。ｐ５３基因第２４８位密码子点突变率为７．４％（５／６８），第２４９位密码子未见有点突变者。以上提示采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ技术可对多数从石蜡包埋胃癌组织提取的ＤＮＡ进行ｒａｓ和ｐ５３基因点突变分析。     

银染PCR－SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５～８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加。ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突变的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预后的一项指标。我们的结果还显示银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法是检测基因突变的有效、快速、简便的方法。     

p53基因点突变与肝细胞癌侵袭性的关系

研究了Ｌ０２人肝细胞株、Ｂｅ１７４０２、ＳＭＭＣ７７２１人肝癌细胞株和１９例肝细胞癌标本及其癌周肝组织中ｐ５３基因第２４９密码子点突变的发生率及其与肝细胞癌侵袭性的关系。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增从细胞株、癌及非癌肝组织中提取的ＤＮＡ中的ｐ５３基因第７外显子，结合ＨａｅⅢ酶切研究ｐ５３基因点突变发现３种细胞株（ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性）中ｐ５３均无突变，１９例癌组织（８４．２％ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性）中，１０例有ｐ５３点突变（５２．６％），其中包膜不完整、有肝内播散或多发结节者ｐ５３突变率明显高于包膜完整（７０％ｖｓ３３．３％，Ｐ＜０．０５）、无肝内播散（７１．４％ｖｓ４１．６％，Ｐ＜０．０５）或单发结节者（８３．３％ｖｓ３８．５％，Ｐ＜０．０５）；而其癌周肝组织则均无突变。提示：第２４９密码子是中国大陆人肝癌ｐ５３基因的突变热点，可能与ＨＢＶ感染有关。ｐ５３突变可能与肝癌的侵袭性密切相关，可望成为防治肝癌复发的较理想的靶基因。     

原发性肝癌组织癌基因ras和抑癌基因P~（53）点突变研究

应用多聚酶链延伸反应──限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对４３例福尔马林液固定、石蜡包埋肝癌组织癌基因ｒａｓ和抑癌基因Ｐ（５３）点突变进行分析。结果表明，ｒａｓ基因总突变率为４１．９％（１９／４３），其中Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为３７．２％（１６／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２位密码子突变率为６．９％（３／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１３位、Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２和６１位密码子未发现有突变者。Ｐ~（５３）基因第２４９密码子突变率为２０．９％（９／４３），第２４８密码子未发现有突变者。结果提示Ｎ－ｒａｓ第１２密码子和Ｐ（５３）第２４９密码子突变与肝癌的发生和发展有关。     

采用PCR—RFLP技术分析石蜡包埋胃癌组织ras和P53基因点突变

采用多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析（ＰＣＲ—ＲＦＬＰ）法对福尔马林固定、石蜡包埋胃癌组织ｒａｓ和Ｐ５３基因．点突变进行分析，结果表明．Ｃ－Ｈａ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１３．６％（１２／８８），第６１位密码子为３．８％（３／８０）；Ｃ－Ｋｉ—ｒａｓ第１２位密码子点突变率为７．２％（５／６９），第１３位密码子未发现有点突变者；Ｎ—ｒａｓ第１２位密码子突变率为１．４％（１／６８）。Ｐ５３基因第２４８位密码子声、突变率为７．４％（５／８８），第２４９位密码子未见有点突变者。以上提示采用ＰＣＲ—ＲＦＬＰ技术可对多数从石蜡包埋胃组织提取的ＤＮＡ进行ｒａｓ和Ｐ５３基因。点突变分析。     

肝癌非高发区安徽省肝细胞癌p53基因249密码子点突变的研究

目的：研究ｐ５３基因２４９密码子在肝癌非高发区安徽省的点突变的发生率。方法：应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术肝细胞癌ｐ５３基因２４９密码子突变的频率。结果：所检测的３８例肝细胞癌均无出现ｐ５３基因第七外显子纯合性缺失,４例有ｐ５３基因２４９密码子的点突变,且均为杂合型突变,突变率为１０．５％（４／３８）。结论：本资料说明,在肝细胞癌非高发区中,肝细胞癌中ｐ５３基因第七外显子发生的点突变并非为高发事件。提示     

银染PCR—SSCP法检测人纤维源性肿瘤p53基因点突变

应用银染ＰＣＲ－ＳＳＣＰ法检测８７例良恶性人纤维源性肿瘤ｐ５３基因５￣８号外显子点突变。结果显示：人纤维源性肿瘤ｐ５３基因总的点突变率为２１．８％，其中５、６、７、８号外显子所占百分率分别为７．７％、３８．５％、２６．９％和２６．９％。随着肿瘤恶性程度的增加，ｐ５３基因点突变增加，ｐ５３基因点突变与肿瘤的分化程度及转移有密切关系，ｐ５３基因点突的检测有可能成为判断纤维源性肿瘤恶性程度，转移潜能及预     

横纹肌肉瘤P53,MDM2基因及p53,p21,p185蛋白表达检测比较

目的：探讨ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白表达及ｐ５３、ＭＤＭ２基因与横纹肌肉瘤（ＲＭＳ）分化和预后的关系，并对几种检测方法进行了比较。方法：应用免疫组化方法检测ＲＭＳｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白表达，银染ＰＣＲＳＳＣＰ检测ＲＭＳｐ５３的突变，原位杂交检测ＲＭＳｐ５３和ＭＤＭ２基因。结果：ｐ５３、ｐ２１、ｐ１８５蛋白在ＲＭＳ的阳性率分别为６７２％（４１／６１）、６８（３４／５０）、６０％（３０／５０）；检测３０例ＲＭＳ，ｐ５３基因７例发生点突变原位杂交检测ＲＭＳ的ｐ５３、ＭＤＭ２基因突变的检出率分别为６６７％和７７４％；上述结果均与年龄、性别、肿瘤组织类型无关，而与肿瘤分化转移和预后有关。结论：ｐ５３、ｐ２１、ＭＤＭ２蛋白表达及癌基因检测均有助于判断肿瘤恶性程度和肿瘤预后，上述３种方法比较，免疫组化与原位杂交检测的阳性结果基本相符，提示免疫组化方法同样能反映肿瘤恶性程度和预后，是一种简便可行的检测方法。     

原发性肝癌组织癌基因ras和抑癌基因P^53点突变研究

应用多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）对４３例福尔马林液固定、石蜡包埋肝癌组织基因ｒａｓ和抑癌基因Ｐ＾５３点突变进行分析，结果表明，ｒａｓ基因总突变率为４１．９％（１９／４３），其中Ｎｒａｓ第１２位密码子突变率为６．９％（３／４３），Ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１３位、Ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２位和６１位密码子未发现有突变者。Ｐ＾５３基因第２４９密码子突变率为２０．９％（９／４２３     

大肠癌的p53基因点突变

作者以改良的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ的ＰＣＲ直接测序方法，分析了２２例大肠癌原发灶和１例转移淋巴结组织中ｐ５３基因第七外显子的基因结构变化。发现２７％（６／２２）大肠癌原发灶和检测的１例转移淋巴结中存在ｐ５３基因第七外显子点突变，突变位点分别为２４５、２５１、２５９和２６０密码子。５０％点突变是２４５密码子中碱基Ｇ∶Ｃ向Ａ∶Ｔ转换，其它突变形式是碱基插入和碱基缺失。本研究ｐ５３点突变阳性标本均为结肠癌，其中低分化腺癌突变率高于高、中分化腺癌（Ｐ＝０．０１７８），ＤｕｋｅｓＣ１期突变率高于ＤｕｋｅｓＡ２、Ｂ期（Ｐ＝０．０３６１）。此结果提示，临床检测大肠癌原发灶和转移淋巴结中是否存在ｐ５３基因第七外显子突变，可有助于识别高度恶性的大肠癌和判断大肠癌病员的预后。     

甲状腺癌组织中H-ras基因突变及蛋白表达的预后价值

对５４例甲状腺癌标本分别用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测Ｈ－ｒａｓ基因第１２位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ２１ｒａｓ蛋白，并用时序检验分析ｒａｓ基因突变和ｐ２１ｒａｓ蛋白表达与甲状腺癌的关系。结果发现，甲状腺癌中１８例（３３．３％）有ｒａｓ基因突变和４９例（９０．７％）有ｐ２１ｒａｓ蛋白过度表达。临床分期晚、分化程度低的甲状腺癌突变率较高，具有Ｈ－ｒａｓ原癌基因突变和ｐ２１ｒａｓ蛋白阳性的病例有较高的复发率和死亡率。表明ｒａｓ基因突变及其蛋白过度表达在甲状腺癌的发生和发展过程中发挥作用，是预后不良的标志     

中国高发区肝细胞癌p53基因热点突变的规律性

目的 研究同发区肝细胞癌（ＨＣＣ）Ｐ５３基因２４９密码子高频度突变的规律性,为探寻癌及基于Ｐ５３的基因和免疫治疗提供依据。方法 用巢工ＰＣＲ结合测序和限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析的方法,研究１９９４－１９９７年收集的９７例启东和２２便北京的肝细胞癌标本中,Ｐ５３基因２４９密码子的突变率及突变的基因型。用免疫组化法研究癌及癌周细胞中Ｐ５３蛋白的表达程度。 １９９４－１９９７年,启东肝细胞癌中,     

卵巢上皮性癌p53基因改变,蛋白过度表达及临床意义

目的：检测卵巢上皮性癌ｐ５３基因改变、蛋白过度表达，探讨其与临床病理和预后的关系。方法：应用ＡＢＣ免疫组化法检测５６例卵巢上皮性肿瘤ｐ５３蛋白表达，对其中４０例应用聚合酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）溴乙锭染色法检测ｐ５３基因５～８外显子突变及杂合性缺失（ＬＯＨ）。结果：（１）ｐ５３蛋白表达阳性率：良性肿瘤０／１０；交界性肿瘤１／４；卵巢上皮性癌２２／４２（５２．３８％），浆液性与粘液性癌表达相似，且３例原发灶与转移灶表达一致。（２）ｐ５３基因突变率：良性肿瘤０／１０；交界性肿瘤１／３；卵巢上皮性癌１３／２７（４８．１５％），其中８例杂合型基因的病例中４例基因突变伴等位基因杂合性缺失。本研究１３例ｐ５３基因突变者中１２例ｐ５３蛋白过度表达。ｐ５３蛋白过度表达与卵巢上皮性癌组织学类型、临床分期及预后无关（Ｐ＞０．０５）。而与卵巢上皮性癌病理有关（Ｐ＜０００５）。结论：ｐ５３基因改变及蛋白过度表达在卵巢癌中较常发生，且与卵巢上皮性癌病理分级有关，这些改变可能是卵巢上皮性癌的早发事件，亦在卵巢上皮性癌的发生发展过程中起重要作用。     

SIL和宫颈癌中p21^H—ras表达与H—ras第12位密码子突变的临床意义

目的探讨ｐ２１Ｈ－ｒａｓ表达水平及第１２位密码子突变与宫颈鳞状上皮内病变（Ｓｑｕａｍｏｕｓｉｎ－ｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｌｅｓｓｉｏｎ,ＳＩＬ）、宫颈癌的关系及预后价值。方法同时用ＡＢＣ免疫组织化学、两步ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对２９例慢性宫颈炎、６８例ＳＩＬ及１７１例宫颈癌石蜡包埋组织进行ｐ２１Ｈ－ｒａｓ表达及Ｈ－ｒａｓ第１２位密码子突变检测。结果（１）ｐ２１Ｈ－ｒａｓ过度表达率和３＋强过度表达率依ＬＳＩＬ分别为２５．０％、０．０％,ＨＳＩＬ分别为６４．６％、３５．４％和宫颈癌分别为６６．１％、４９．７％顺序递增。（２）宫颈癌Ｈ－ｒａｓ第１２位密码子突变仅出现在Ⅱ、Ⅲ期中,突变率分别为２７．０％、５２．５％。有突变宫颈癌患者的５年存活率（２０．３％）显著低于无突变患者（７９．７％）,且与淋巴结转移关系密切。结论ｐ２１Ｈ－ｒａｓ表达水平有助于宫颈癌的早期诊断,一旦Ｈ－ｒａｓ第１２位密码子突变发生,宫颈癌的恶性侵袭性行为显著增高,可作为判断预后的一项指标。     

甲状腺组织中H—ras基因突变及蛋白表达的预后价值

对５４例甲状腺癌标本分别用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测Ｈ－ｒａｓ基因第１２位密码子的突变及免疫组化法检测ｐ２１ｒａｓ蛋白，并用时序检验分析ｒａｓ基因害变和ｐ２１ｒａｓ蛋白表达与甲状腺癌的关系，结果发现，甲状腺癌中１８例有ｒａｓ基因突变和４９例有ｐ２１蛋蛋白过度表达。     

结直肠癌内镜活检组织p53基因变异的PCR—SSCP分析

目的 探讨结直肠癌ｐ５３基因变异情况及其意义。方法 采用ＰＣＲ技术扩增内镜下活检的结直肠癌组织中ｐ５３基因第５～９外显子，再以银染色单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术分析其变异情况。结果 ２０例结直肠癌组织ｐ５３基因的ＰＣＲ扩增均获成功；银染色ＳＳＣＰ分析发现其中５例有异常条带，阳性率为２５．０％，主要见于第５、７外显子，第９外显子未见阳性带；３例升结直肠癌中有２例阳性。结论 结直肠癌ｐ５３基因变异率     

肺癌组织中p53,K—ras,p53,p16基因的改变

目的 探讨ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ、ｐ１５、ｐ１６基因在肺癌组织中改变情况及多基因联合检测在肺癌诊断中的价值。方法 对５９例肺癌组织和１４例肺部良性组织,应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测ｐ５３基因第５～８外显子突变情况;应用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法对Ｋ－ｒａｓ基因突变进行检测;并应用ＰＣＲ法检测ｐ１５、ｐ１６基因纯合缺失情况。结果肺癌组织中ｐ５３、ｐ１５、ｐ１６基因改变频率分别为３７．３％、１１．９％、２３．     

胆管癌ras癌基因,p53抑癌基因突变及表达的研究

应用免疫组化法及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法，检测２８例肝外胆管部ｐ２１、ｐ５３蛋白过表达，及ｋ－ｒａｓ第１２位点、ｐ５３第２４８、２４９位点的突变。结果表明：胆管癌ｐ２１、ｐ５３蛋白阳性率为７８．６％和３５．７％，显著高于慢性炎症胆管壁粘膜，其中８例有两种蛋白的共同表达。