反义转染细胞HL^R60—9的c—myc基因表达及其生物大分子的…

作者构建了体外能双向转录ｃ－ｍｙｃ基因的重组质粒ＰＧＣ，以制备ＲＮＡ探针用于检测ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ转染细胞ＨＬ＾Ｒ６０－９的ｃ－ｍｙｃ及反义ＲＮＡ表达，结果显示，Ｃｄ＾２＋诱导的ＨＬ＾Ｒ６０－９细胞的ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ表达随Ｃｄ＾２＋浓度及作用时间的增加而增强，但ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达在诱导过程中逐渐减少，两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出ｃ－ｍｙｃＰ６２蛋白的表达，＾３Ｈ－ＴｄＲ，＾３Ｈ     

bcl—2反义寡核苷酸抑制HL—60细胞增殖的研究

目的 研究ｂｃｌ－２反义寡核苷酸在抑制ＨＬ－６０细胞增殖和下调细胞内ｂｃｌ－２蛋白表达水平的作用。方法 将人工合成的ｂｃｌ－２反义寡核苷酸片段与ＨＬ－６０细胞共培养,在作用的第０天,１天,３天,５天通过细胞计数和锥虫蓝染色法检测细胞的生长,存活情况,同时通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化情况,结果 ｂｃｌ－２正,反义寡核革酸均可抑制ＨＬ－７０细胞增但ｂｃｌ－２反义     

54例恶性肿瘤C－myc癌基因的扩增研究

５４例恶性肿瘤Ｃ－ｍｙｃ癌基因的扩增研究尹勇，刘岳彪，陈亚军，杨学军，杨亦静，吴德政Ｃ－ｍｙｃ癌基因的扩增是Ｃｏｌｌｉｎｓ［１］和Ｆａｖｅｒａ［２］等首次报道的，他们发现前髓细胞性白血病细胞等ＨＬ－６０和这类病人的白血病细胞中Ｃ－ｍｙｃ扩增达８～３２...     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：探讨bcl-2反义寡核苷酸诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡。方法：将人工合成的bcl-2反义寡聚脱氧苷酸片段与ＨＬ－６０,细胞共培养,在作用的第０天、３天、５天通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。结果：bcl-2反这寡核苷酸可下调ＨＬ－６０细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,同时可诱导细胞凋亡,而bcl-2反义寡核苷酸及对照无此作用。     

反义转染细胞HL_（60）~R－9的c-myc基因表达及其生物大分子的生物合成

作者构建了体外能双向转录ｃ－ｍｙｃ基因的重组质粒ＰＧＣ，以制备ＲＮＡ探针用于检测ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ转染细胞ＨＬＲ６０－９的ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ及反义ＲＮＡ表达。结果显示，Ｃｄ２＋诱导的ＨＬＲ６０－９细胞的ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ表达随Ｃｄ２＋浓度及作用时间的增加而增强，但ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达在诱导过程中逐渐减少，两者变化呈镜相关系。免疫组化法未能检出ｃ－ｍｙｃＰ６２蛋白的表达。３Ｈ－ＴｄＲ、３Ｈ－ＵＲ及３Ｈ－Ｌｅｕ掺入试验表明其ＤＮＡ、ＲＮＡ及蛋白质生物合成明显抑制。以上结果表明，ＨＬＲ６０－９细胞的恶性表型逆转及现所示的大分子生物合成抑制，与ｃ－ｍｙｃ反义ＲＮＡ阻断了ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达有关。     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡的研究

明确化疗药物诱导急性白血病细胞凋亡的规律及在急性白血病化疗中的意义。方法应用光镜、电镜,结合ＤＮＡ电泳及流式细胞仪分析技术,观察阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）诱导的急性髓系白血病细胞系ＨＬ－６０凋亡模式。结果Ａｒａ－ｃ诱导的细胞凋亡在０～３６小时过程中持续存在,逐渐增强,其诱导效率呈剂量性增强。而且,经其他６种化疗药物诱导后,ＨＬ－６０以及经ＤＡ方案化疗的１例急性髓系白血病患者外周血白细胞,均表现典型的ＤＮＡ梯形图谱。进一步分析表明,化疗诱导凋亡与其下调ｃ－ｍｙｃ、ｂｃｌ－２基因表达有关。结论化疗药物诱导的细胞凋亡是化疗的关键机制     

安吖啶诱导白血病细胞程序化死亡及bcl—2表达的研究

目的探讨安吖啶诱导不同分化阶段的人急性粒白血病细胞株ＨＬ－６０（ＡＭＬ２）及ＮＢ４细胞（ＡＭＬ３）程序化死亡的作用。方法应用光镜、ＤＮＡ电泳及流式细胞术检测程序化死亡细胞,应用免疫组化法检测ｂｃｌ－２基因表达。结果１～２０μｇ／ｍｌ的安吖啶作用６～１２小时后,ＮＢ４细胞的形态学改变较ＨＬ－６０细胞更明显;ＮＢ４细胞的ＤＮＡ梯带较ＨＬ－６０细胞明显;流式细胞术检测ＮＢ４程序化死亡细胞数较ＨＬ－６０细胞多;ＨＬ－６０细胞ｂｃｌ－２蛋白的平均水平明显高于ＮＢ４细胞。结论ＨＬ－６０细胞对安吖啶诱导程序化死亡作用的敏感性较低,可能与ｂｃｌ－２基因高表达有关。     

反义c—myc寡核苷酸抑制人肝癌细胞SMMC—7721生长

用逆转录病毒载体将反义ｃ ｍｙｃ质粒通过ＰＡ317包装后转染人肝癌细胞 ,能够抑制人肝癌细胞的生长[1 ] ,本研究采用反义ｃ ｍｙｃ核酸技术初步观察了反义ｃ ｍｙｃ寡核苷酸(ＯＤＮ)对人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1生长的抑制作用。材料和方法一　寡核苷酸的合成及修饰　正义、错配及反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ(均为 15 ｍｅｒ)的合成和硫代磷酸化修饰均由上海生物工程公司完成。二　人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1培养和基因转染　人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1在 37℃、5 %ＣＯ2 条件下 ,用 10 %胎牛血清(ＦＢＳ) 16 40液进行培养。选取对数生长期ＳＭＭＣ …     

重组RA538,反义c—myc腺病毒对bcl—2高表达细胞系的作用及分子 …

目的 研究重组ＲＡ５３８（Ａｄ－ＲＡ５３８）、反义ｃ－ｍｙｃ腺病毒（Ａｄ－ＡＳｃ－ｍｙｃ）在ｂｃｌ－２高表达细胞系中的作用及其分析机制。方法 采用细胞形态学观察、ＭＴＴ、ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ等方法,研究ＲＡ５３８,反义ｃ０ｍｙｃ重组腺病毒在ｂｃｌ－２高表达的人宫颈癌细胞系ＨｅＬａ－ｂｃｌ２和ＳｉＨａ－ｂｃｌ２以及在其亲本细胞中的生物学作用及其分子机制。结果 以ｌｉｐｏｆｅｃｔｉ     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL-60、K_(562)生长的抑制作用

目的探索肿瘤抑制基因ｐ５３对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０、Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ｃＤＮＡ表达。转染后Ａｄ／ｐ５３病毒对ＨＬ－６０细胞和Ｋ５６２细胞的生长有抑制作用。随着Ａｄ／ｐ５３病毒浓度加大,ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的ＯＤ值越低即生长抑制程度越大。经Ａｄ／ｐ５３病毒转染的ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞均有明显的细胞凋亡峰出现,对照细胞则无。细胞周期分析无明显异常发现。结论重组腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因在体外对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ５６２的生长有抑制作用,能导致细胞凋亡的发生。     

rhTNF—α对AML原代白血病细胞c—myc原癌基因表达的影响

采用细胞总ＲＮＡ斑点杂交技术，以＾３２Ｐ标记的ｃ－ｍｙｃＤＮＡ片段为探讨针，研究了８例急性髓细胞白血病原代白血病细胞ｃ－ｍｙｃ原癌基因的表达及其径小剂量重组人肿瘤坏死因子处理后ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ水平的变化。     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL—60,K562生长的抑制作用

目的 探索肿瘤抑制基因Ｐ５２对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法 选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体，体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０，Ｋ５６２。通过细胞生长曲线，ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果 ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ ｃＤＮＡ表达。     

细胞因子对HL—60白血病细胞分化作用的研究

目的 研究细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ及ＩＬ－６对白血病细胞的分化作用的影响。方法 以ＨＬ－６０白血病细胞为模型，采用几种细胞因子单一或联合作用于ＨＬ－６０细胞。通过检测细胞分化抗原、ＮＢＴ试验和细胞内酶α－ＮＡＥ指标，观察细胞因子对白血病细胞的单一和联合促分化作用。结果 ＴＮＦ－α可显著增加ＮＢＴ还原率和α－ＮＡＥ阳性细胞数；ＩＬ－６无诱导ＨＬ－６０细胞分化作用；ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α可协同作     

急性白血病细胞p53,c—myc基因表达及其临床意义

用ＤＮＡ－ＲＮＡ斑眯杂交技术分析４０例急性白血病中ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ基因的ＲＡ水平表达，结果表明：８５％的病例ｃ－ｍｙｃＲＮＡ表达水平显著升高，粒、淋白知病细胞间无显著差异，粒系白血病中５９．４％Ｐ５３基因的表达异常，ｃ－ｍｙｃ过高表达可作为预测疗效的指标。     

反义c—fos,c—jum对CNE—2Z细胞增殖及PCK—α表达的影响

为探讨反义ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ对ＣＮＥ－２Ｚ细胞生长的影响及ＰＫＣ－α表达的关系。本研究联合应用反义ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ寡核苷酸作用于ＣＮＥ－２Ｚ细胞，ＭＴＴ法检测细胞生长指数，流式细胞仪（ＦＣＭ）检测细胞ＰＫＣ－α表达。结果显示，ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ反义寡核苷酸在Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（ＩＰ）冒险氏有效浓度１．７×１０＾－６μｇ／ｍｌ作用下，对ＣＮＥ－２Ｚ细胞抑制作用随浓度增大而增强，最低有     

膀胱癌多基因和增殖细胞核抗原的表达及其临床意义

目的：研究癌基因和抑癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌组织中的异常表达与其病理分级、临床分期的关系。方法应用免疫组织化学方法检测９６例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｎｍ２３、ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ的表达水平。结果９６例膀胱移行细胞癌中ｐ５３、ｎｍ２３、ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ的阳性表达率分别为６０．４％、７２．３％、６８．８％、８１．３％、６６．７％和     

人大肠癌细胞中内质网分子伴侣Grp94与c—myc癌基因在表达上的相关性

探讨人大肠癌细胞中表达缺失性内质网分子伴侣Ｇｒｐ９４产物（Ｇｒｐ９４β）的生物学意义。方法应用地高辛标记ｃ－ｍｙｃｃＤＮＡ探针的斑点杂交,和以Ｇｒｐ９４基因近３′端一对寡核苷酸为引物的ＲＴ－ＰＣＲ技术,比较了人大肠癌细胞系ＣＣＬ２２９、ＣＸ－１以及经维甲酸诱导的ＣＣＬ２２９细胞中Ｇｒｐ９４和ｃ－ｍｙｃ癌基因在表达上的关系。结果Ｇｒｐ９４和ｃ－ｍｙｃ癌基因在ＣＣＬ２２９细胞中的表达水平明显高于ＣＸ－１细胞,且随维甲酸诱导ＣＣＬ２２９细胞时间的延长,二者呈一致性地下降,并于诱导后第６天降至最低水平;而原来于ＣＣＬ２２９细胞中检测到的Ｇｒｐ９４基因的正常表达产物（Ｇｒｐ９４α）,随维甲酸诱导时间的延长逐渐增加。结论提示Ｇｒｐ９４和ｃ－ｍｙｃ癌基因产物之间可能存在一定联系,Ｇｒｐ９４可能与癌细胞的某些生物学特性如侵袭性相关     

Bromelain对HL—60细胞的诱导分化作用

为获得对ＨＬ－６０细胞具有高效低毒作用的天然诱导分化剂而进行的研究。方法；以菠萝酶Ｂｒｏｍｅｌａｉｎ为药物，对人前髓细胞性白血病细胞株ＨＬ－６０进行作用，通过不同浓度及不同作用时间的药物作用，统计ＨＬ－６０细胞的增殖率，生化变化有形态不的变化。     

番荔枝内酯化合物squamocin诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究番荔枝内酯化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ诱导白血病ＨＬ－６０细胞凋亡作用。方法：采用ＭＴＴ法检测番荔枝内酯单体化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ对白血病细胞株ＩＬ－６０细胞增殖的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１,磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的蛋白水平变化。结果：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞５天后,细胞生长受到明显的抑制,ＩＣ５０为０．１７μｇ／ｍｌ。ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的ＤＮＡ梯形带。ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果呈现ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白表达无明显变化,而磷酸化的ＭＡＰＫ量显著减少。结论：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,且与ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白     

异搏定促进VP16诱导HL—60细胞凋亡机制的初步探讨

目的 深入了解异搏定对鬼臼乙叉甙增敏作用的机制。方法 以人急性髓性白血病细胞株ＨＬ－６０为研究对象,运用ＤＮＡ电泳、流式细胞仪两种方法观察细胞凋亡现象,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ方法测定凋亡相关蛋白ｂｃｌ－２表达水平。结果 ５ｍｇ／ＬＶＥＲ可增强ＶＰ１６的诱导细胞凋亡作用,并可下调ｂｃｌ－２蛋白表达。结论 ＶＥＲ对ＶＰ１６具有增敏作用与其具有增强ＶＰ１６诱导ＨＬ－６０细胞凋亡作用有关,Ｂｃ