PD1免疫治疗前后口腔癌患者T细胞免疫功能的变化

目的 本研究拟通过检测口腔癌患者PD1免疫治疗前后外周血中T淋巴细胞各亚群的表达情况,探讨肿瘤患者机体免疫系统发生的变化。方法 本项目拟采用2019年10月至2020年9月于河北医科大学第四医院60例经手术后病理证实口腔鳞癌的患者为研究对象,并给予PD1免疫治疗。用流式细胞仪检测CD4+T细胞和CD8+T细胞在T淋巴细胞中的百分比,计算CD4+T细胞/CD8+T细胞的比值。ELISA法检测口腔癌患者PD1免疫治疗前后血液中的IFN-γ和IL-2水平。结果 经过PD1治疗后,口腔癌患者血液中IFN-γ、IL-2含量、CD4+T细胞百分比及CD4/CD8+T细胞比值都明显升高(P<0.001);在PD1治疗后,口腔癌患者血液中CD8+T细胞百分比的含量显著降低（P<0.001）,口腔癌患者在接受PD1免疫治疗之后,患者的免疫功能显著增强。结论 运用PD1免疫治疗口腔癌患者,治疗前后患者T细胞免疫功能明显增强,具有一定的临床应用价值与应用前景,为临床上应用针对口腔癌的免疫治疗提供理论依据。     

局部注射IL-2联合化疗对口腔鳞癌浸润淋巴细胞的影响

目的　评价IL-2局部注射联合化疗对口腔鳞癌局部免疫反应的影响。方法　34例T3、T4期口腔鳞癌患者随机分成2组接受术前治疗,其中23例行免疫化疗(IL-2局部注射合并PVP化疗),11例行单纯化疗。比较 2组患者治疗前后肿瘤浸润T淋巴细胞亚群和B淋巴细胞的变化。结果　免疫化疗组治疗前后CD4+,CD8+, CD20+相对值分别为36·96,35·65,28·65和56·61,38·52,38·70。治疗后CD4+,CD20+细胞数较治疗前明显增加 (P<0·01)。单纯化疗组治疗前后CD4+,CD8+,CD20+细胞数均无显著差异(P>0·05)。结论　IL-2局部注射联合化疗对增强口腔鳞癌患者局部免疫功能具有重要意义。     

根尖牙乳头干细胞外泌体对舍格伦综合征小鼠治疗效果的实验研究

目的    探索根尖牙乳头干细胞来源的外泌体（exosomes derived from stem cells from apical papilla,SCAP-Exo）对舍格伦综合征（Sjögren syndrome,SS）小鼠的治疗效果。方法    酶消化法提取根尖牙乳头干细胞,超速离心法提取SCAP-Exo,并应用透射电镜、纳米颗粒跟踪技术及Western Blot进行鉴定。选择10周龄雌性健康ICR小鼠6只作为对照组;选择10周龄雌性NOD小鼠12只随机分为NOD组和SCAP-Exo组,每组6只。饲养2、4周后,SCAP-Exo组小鼠尾静脉注射SCAP-Exo,其他组小鼠尾静脉注射PBS。于饲养6周后检测各组小鼠唾液流率。随后收集小鼠外周血,流式细胞术检测外周血中辅助性T细胞17（T helper 17,Th17）/CD4+ T细胞比例,ELISA检测血清中白细胞介素-17A（interleukin-17A,IL-17A）表达水平。最终处死各组小鼠,通过HE染色观察下颌下腺中淋巴细胞浸润水平。结果    透射电镜下可见SCAP-Exo呈杯状的囊泡结构;纳米颗粒跟踪技术分析SCAP-Exo直径为30 ~ 150 nm;外泌体特异性标记蛋白CD9、Alix呈阳性表达,不表达细胞内质网特异性蛋白Calnexin。3组小鼠唾液流率、外周血Th17/CD4+ T细胞比例及IL-17A表达水平总的比较,差异均有统计学意义（F值分别为59.169、293.217、189.583,均P < 0.05）。其中,与对照组相比,NOD组小鼠唾液流率明显降低、外周血Th17/CD4+ T细胞比例及IL-17A表达水平明显升高;而相较于NOD组,SCAP-Exo组小鼠唾液流率明显增加、外周血Th17/CD4+ T细胞比例及IL-17A表达水平明显降低;差异均有统计学意义（均P < 0.05）。相较于NOD组,SCAP-Exo组小鼠下颌下腺淋巴细胞浸润水平显著降低,仅存在轻度散在的淋巴细胞浸润或出现极个别的淋巴细胞浸润灶。结论    SCAP-Exo能有效治疗SS小鼠,可能与其调节Th17细胞转化有关。     

宿主T淋巴细胞对以脱落乳牙干细胞为基础的骨组织再生能力影响研究

目的　研究宿主T淋巴细胞对以脱落乳牙干细胞（stem cells from exfoliated deciduous teeth,SHED）为基础的骨组织再生能力的影响以及可能的机制,为揭示宿主免疫微环境在组织再生过程中的作用及机制奠定基础。方法　原代分离培养人SHED和小鼠脾脏来源CD4+ T淋巴细胞。将SHED与羟基磷灰石支架材料（HA/TCP）复合后种植于裸鼠背部皮下。实验组术前2 d,经尾静脉系统性回输小鼠CD4+ T细胞,以回输PBS的裸鼠作为对照组。分别于术后2、5、14 d收取标本,对SHED细胞种植复合物中促炎症细胞因子水平进行检测;术后8周收取标本,制备组织学切片进行HE染色观察。采用 SPSS20.0 软件对两组的检测数据进行统计学分析。结果　原代SHED细胞形态呈梭形,表达间充质干细胞表面标记物CD73、CD90、CD105、CD146,体外诱导培养具有成骨、成脂向分化潜能。免疫磁珠分选CD4+ T淋巴细胞纯度达95.7%。与对照组相比,实验组细胞种植复合物中促炎症细胞因子干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和白介素-17（interleukin-17,IL-17）表达水平显著升高（均P < 0.05）,其中IFN-γ变化较为明显,在术后5 d表达水平达峰值。细胞种植复合物种植术后8周,实验组SHED种植复合物新生骨组织面积显著降低（P < 0.05）。结论　宿主T淋巴细胞明显抑制以SHED为基础的骨组织再生,且与促炎症细胞因子的分泌水平有关,其中IFN-γ可能在宿主T淋巴细胞抑制骨组织再生中发挥重要作用。     

平阳霉素化疗对口腔癌患者端粒酶活性的影响

目的 :测定平阳霉素化疗的口腔癌肿瘤组织中的端粒酶活性 ,以探讨平阳霉素化疗效果。材料与方法 :取35例口腔癌患者的病案为资料 ,并依是否术前接受平阳霉素化疗分为用药组及对照组。分别测定两组的端粒酶活性 ,并进行统计分析。结果 :用药组端粒酶活性检出率及强阳性表达率明显比对照组的端粒酶活性检出率及强阳性表达率低 ,有显著性差异。结论 :平阳霉素化疗是一种有效的治疗鳞癌的药物。通过测定端粒酶活性变化来评估平阳霉素化疗的疗效可能是一种较为客观的方法。     

程序性死亡分子1及其配体在口腔鳞状细胞癌患者外周血中的表达及临床意义

目的 检测口腔鳞状细胞癌患者外周血中程序性死亡分子1（PD-1）及其配体（PD-L1）的表达水平,探讨其生物学及临床意义。方法 选取82例口腔鳞状细胞癌患者（口腔鳞癌组）和25例健康对照者（对照组）为研究对象,收集研究对象的外周血,采用流式细胞术检测外周血T淋巴细胞表面PD-1、PD-L1的表达及T淋巴细胞亚群计数,采用酶联免疫吸附方法检测血清中可溶性PD-1（sPD-1）和可溶性PD-L1（sPD-L1）的表达水平。采用SPSS 17.0软件对数据进行检验和相关性分析。结果 口腔鳞癌组外周血CD8+ T淋巴细胞百分数明显高于对照组（P<0.05）,而CD3+、CD4+T淋巴细胞百分数及CD4+/CD8+T亚群百分数比值均低于对照组（P<0.05）。口腔鳞癌组外周血CD4+、CD8+ T淋巴细胞表面PD-1、PD-L1的阳性表达率均高于对照组（P<0.01）。口腔鳞癌组血清sPD-L1水平高于对照组（P<0.05）,而sPD-1水平二者差异无统计学意义（P>0.05）。sPD-L1的表达与临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移状态相关（P<0.05）,与性别、年龄、肿瘤部位及大小无关。结论 口腔鳞状细胞癌患者外周血T淋巴细胞亚群存在不同程度的免疫功能抑制,CD4+和CD8+ T淋巴细胞表面PD-1及PD-L1表达显著升高。异常升高的sPD-L1可能与口腔鳞状细胞癌的发生发展有关。     

平阳霉素化疗对口腔癌患者端粒酶活性的影响

目的：测定平阳霉素化疗的口腔癌肿瘤组织中的端粒酶活性，以探讨平阳霉素化疗效果。材料与方法：取35例口腔癌患者的病案为资料，并依是否术前接受平阳霉素化疗分为用药组及对照组，分别测定两组的端粒酶活性，并进行统计分析，结果：用药组端粒酶活性检出率及强阳性表达率明显比对照的端粒酶活性检出率及强阳性表达率低，有显著性差异，结论：平骒霉素化疗是一种有效的治疗鳞癌的药物，通过测定端粒酶活性变化来评估平阳霉素化疗的疗效可能是一种为客观的方法。     

核因子-κB传导通路与舌癌细胞平阳霉素化疗敏感性的关系

的 探讨核因子-κB（NF-κB）/p65信号传导通路与Tca8113细胞平阳霉素化疗敏感性的关系。方法 以脂质体为载体,转染2 mg/L的p65反义寡核苷酸于Tca8113细胞 后,8 mg/L的平阳霉素处理细胞,3 h、6 h后免疫组化、Western blot法检测细胞核内p65形态和含量变化,48 h后MTT法检测细胞抑制率。结果 平阳霉素能激活细胞内的NF-κB/p65信号传导通路,而p65反义寡核苷酸转染能明显抑制该信号通路,在6 h时胞核内p65含量显著减少（P<0.05）,48 h时细胞抑制率明显提高（P<0.05）。结论 抑制NF-κB/p65信号传导通路能够提高Tca8113细胞平阳霉素化疗敏感性。     

热化疗中活性氧作用机制的研究

通过对正常ＢＡＬＢ／Ｃ鼠及实验组荷瘤鼠外周血超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及脂质过氧化物（ＬＰＯ）的测定，观察发现，热化疗组荷瘤鼠ＳＯＤ及ＬＰＯ水平与正常鼠比较无显著性差异，而与单纯热疗或化疗及未作任何处理组（ＮＴ组）比较有显著性差异，而热疗或化疗组与ＮＴ组比较无差异，本实验证实：热化疗对癌首有一定的治疗效果。热化疗可以提高癌细胞中的活性氧的量，活性氧通过本身的细胞毒作用及由其引起的脂质过氧化的作用等，     

4-1BBL-B7-H3基因对免疫重建重症联合免疫缺陷荷瘤鼠的抑瘤作用

目的 通过建立人免疫重建重症联合免疫缺陷（SCID）荷瘤鼠嵌合模型来探讨4-1BBL-B7-H3基因在非特异性抗肿瘤免疫中的作用。方法 将40只SCID鼠随机分为5组,A组（对照组）行免疫重建加注射Tca8113细胞;B组（Ad4-1BBL-B7-H3组）行免疫重建加注射含有人4-1BBL-B7-H3基因腺病毒转染的Tca8113细胞;C组（空载组）行免疫重建加注射含有空载体腺病毒转染的Tca8113细胞;D组（非免疫重建组）不给予小鼠免疫重建,注射Tca8113细胞;E组（非肿瘤组）行免疫重建加注射PBS。每周定期测量肿瘤体积;酶联免疫吸附法检测人IgG蛋白含量;流式细胞仪检测外周血中人CD3+、CD56+淋巴细胞比例;免疫组织化学法观察自然杀伤细胞2族成员D（NKG2D）和Toll样受体2（TLR2）在肿瘤中的表达;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测4-1BBL-B7-H3 mRNA的表达,实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测主要组织相容性复合体1类相关分子（M1C）A、B及TLR2的表达。结果 1）B组小鼠肿瘤体积最小（P<0.05）;2）A、B、C、E组小鼠外周血中检测到人IgG、CD3+、CD56+淋巴细胞,B组淋巴细胞比例高于A、C和E组（P<0.05）;3）B组NKG2D和TLR2的表达较其余各组明显增强;4）人4-1BBL-B7-H3基因在B组小鼠肿瘤中稳定表达;5）B组M1CA、M1CB和TLR2的表达高于A、C、D组（P<0.05）。结论 4-1BBL-B7-H3基因在肿瘤组织中的高表达能成功诱导人CD3+、CD56+细胞增殖,直接或间接活化TLR2,上调NKG2D及其配体M1CA、M1CB的表达,从而产生有效的抗肿瘤免疫应答。     

脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎性因子表达的影响

目的 观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）对人牙周膜干细胞（HPDLSCs）增殖及炎性因子表达的影响。方法 培养和鉴定HPDLSCs。实验分为3组,A组采用含有10 μg•mL-1 LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs,B组采用含有10 ng•mL-1 LPS刺激单核细胞的上清液培养HPDLSCs,C组采用α-MEM培养液培养HPDLSCs。MTT法检测HPDLSCs的增殖能力,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测HPDLSCs白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA的表达。结果 HPDLSCs具有克隆形成能力和骨向及脂向分化能力。与C组相比,A组和B组均抑制HPDLSCs的增殖,且B组比A组的抑制作用更明显（P<0.05）;A组和B组IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达均增加,且B组比A组增加更明显（P<0.05）。结论 牙龈卟啉单胞菌可通过LPS直接或间接地一方面抑制HPDLSCs的增殖,另一方面增加炎性因子的表达,从而加重牙周炎症组织的损伤,延缓牙周组织的自我修复。     

下牙槽神经缺失对下颌骨骨缺损骨痂血肿期炎症因子表达影响的实验研究

目的 探讨下颌骨骨缺损愈合过程中,下牙槽神经缺失对血肿期骨痂中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1 (IL-1)和白细胞介素-6 (IL-6)表达的影响.方法 50只中国大白兔随机分作对照组和实验组,分别建立单纯下颌骨骨缺损和失下牙槽神经下颌骨骨缺损动物模型,于术后1、2、3、5和7d获取骨痂冰冻保存,酶联...     

下牙槽神经缺失对下颌骨骨缺损骨痂血肿期炎症因子表达影响的实验研究

目的探讨下颌骨骨缺损愈合过程中,下牙槽神经缺失对血肿期骨痂中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）和白细胞介素-6（IL-6）表达的影响。方法50只中国大白兔随机分作对照组和实验组,分别建立单纯下颌骨骨缺损和失下牙槽神经下颌骨骨缺损动物模型,于术后1、2、3、5和7 d获取骨痂冰冻保存,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测骨痂中TNF-α、IL-1和IL-6蛋白表达,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测TNF-α mRNA的表达。结果骨缺损后1 d,实验组骨痂中TNF-α、IL-1和IL-6均明显低于对照组,分别为对照组的75.1%、68.3%、72.7%（P＜0.05）;骨缺损后2 d,实验组IL-1明显低于对照组,为对照组的75.5%,而TNF-α则高于对照组;骨缺损后3~7 d,TNF-α、IL-1和IL-6均呈下降趋势,2组之间无明显差异。在各时间点,实验组TNF-α mRNA表达皆低于对照组。结论在下颌骨骨缺损愈合初期,下牙槽神经缺失使神经介质分泌减少,导致局部炎症反应降低或延迟,对骨痂的正常愈合产生负面影响。     

上调Decorin对口腔鳞癌荷瘤裸鼠EGFR、C-Myc、p21表达的影响

目的: 探讨饰胶蛋白聚糖基因（decorin,DCN）过表达对口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）裸鼠荷瘤中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、骨髓细胞瘤病毒癌基因（cellular-myelocytomatosis viral oncogene,C-Myc）和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（cyclin dependent kinase inhibitor,p21）表达水平的影响。方法: 通过脂质体转染法上调人口腔鳞癌细胞（HSC-3）中DCN基因的表达,使用裸鼠作为OSCC疾病模型构建载体,建立OSCC裸鼠荷瘤模型。H-E法确定各组裸鼠荷瘤组织的病理分级,免疫组织化学染色检测DCN过表达后各组裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21蛋白的表达差异,RT-qPCR及Western印迹定量检测DCN过表达后各组裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21在转录水平和蛋白水平上的表达差异,明确DCN过表达对OSCC裸鼠荷瘤组织中EGFR、C-Myc和p21表达的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果: H-E染色结果显示,OSCC动物疾病模型构建成功。重量分析结果显示,质粒组裸鼠荷瘤组织轻于空载组和未转染组（P<0.05）。IHC结果显示,DCN、EGFR、C-Myc和p21蛋白在各组裸鼠荷瘤组织中均有表达,质粒组中DCN、EGFR和C-Myc蛋白的表达水平差异有统计学意义（P<0.05）,各组中p21蛋白的表达水平无统计学差异（P>0.05）。RT-qPCR和Western印迹结果显示,DCN、EGFR、C-Myc和p21在各组裸鼠荷瘤组织中均有不同程度表达（P<0.05）。结论: 上调DCN可抑制OSCC裸鼠荷瘤的生长。在OSCC裸鼠荷瘤组织中,DCN过表达下调EGFR及C-Myc的表达,上调p21的表达。DCN可能通过以上机制调节OSCC的发生、发展,发挥抑癌作用。     

头颈鳞癌患者血清6种细胞因子含量与临床相关性分析

目的:了解头颈鳞癌患者血清中IL-4I、L-10I、L-12I、L-18I、NF-γ、TGF-β细胞因子的水平及其与患者病情的相关性,探讨6种细胞因子在头颈鳞癌患者疾病发生、发展过程中的变化规律。方法:收集2003-2004年经病理诊断确诊的26例头颈鳞癌患者的空腹血清标本,用双抗体夹心法定量检测血清中IL-4I、L-10I、L-12I、L-18I、NF-γ、TGF-β水平;用流式细胞术定量分析外周血中CD4+/CD8+绝对数量和相对比值,以22例健康成人为对照组。结果采用非参数检验T检验以及非参数秩相关分析进行统计学处理。结果:血清中IL-12I、L-10I、L-4I、FN-γ在实验组和对照组均低于最低检出水平而未检出;头颈鳞癌患者的血清IL-18水平高于正常对照组,且临床分期越晚,病情越重,IL-18水平越高;头颈鳞癌患者组与对照组血清TGF-β1水平无显著性差异;经流式细胞仪检测,头颈鳞癌患者CD3+T细胞总数,CD4+/CD8+比值,NK细胞数量均在正常范围内。结论:血清IL-18水平可能成为头颈部鳞癌诊断和疗效评估的标志物,目前对于头颈部鳞癌患者血清IL-18水平升高途径及其作用机制尚不清楚,进一步了解免疫学途径或许能为头颈部鳞癌患者应用免疫治疗策略提供新的选择。     

T细胞免疫和细胞凋亡在口腔扁平苔藓发病中的作用

目的通过探讨口腔扁平苔藓（OLP）中细胞凋亡情况及CD4＋、CD8＋T细胞和CD4/CD8比例的变化分析细胞免疫与细胞凋亡的关系,进一步了解OLP的发病机制。方法应用免疫组化SP法检测27例OLP组织中CD4＋、CD8＋T细胞的表达水平,并用原位末端转移酶标记法（TUNEL）定位检测17例OLP中细胞凋亡情况。结果OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞明显高于对照组（P＜0.05）,CD4/CD8值降低。OLP组中上皮内细胞凋亡指数高于对照组,固有层淋巴细胞凋亡指数明显低于对照组。结论OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞浸润的增加、CD4/CD8比值的变化及OLP中上皮细胞和固有层淋巴细胞凋亡异常,说明细胞免疫功能紊乱和细胞凋亡异常在OLP发病中起重要作用。     

双氯芬酸钠对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞IL-1β和TNF-α表达的影响研究

目的 探讨双氯芬酸钠对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法 本研究于2013年3—5月在山西医科大学口腔实验室进行。将复苏培养冻存的HPDLFs进行形态学鉴别后,用10 μg/mL的LPS进行诱导,分别以0.1、1、10、50、100 mg/L的双氯芬酸钠进行干预,酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测HPDLFs表达IL-1β和TNF-α水平的变化。结果 对同一质量浓度LPS诱导的HPDLFs而言,双氯芬酸钠能下调HPDLFs表达IL-1β和TNF-α的水平,并且随着双氯芬酸钠质量浓度的增加,IL-1β和TNF-α的表达量呈逐渐减弱的趋势（P＜0.05）。结论 双氯芬酸钠可能对于LPS诱导的HPDLFs IL-1β和TNF-α的表达有重要的抑制作用,这为牙周病的临床治疗提供了新的思路。     

B7-H3在口腔鳞癌细胞中的表达及其意义

目的：研究B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的表达差异,以及B7-H3对口腔鳞癌细胞生物学的影响。方法：RT-qPCR、免疫组化检测B7-H3在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织的表达差异;构建B7-H3腺病毒表达载体,感染人舌鳞癌细胞Tca8113,CCK-8、PI染色流式细胞仪检测B7-H3高表达对Tca8113细胞增殖和细胞周期的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学处理。结果：RT-qPCR结果显示,口腔鳞癌组织B7-H3 mRNA表达为3.021±0.2310,显著高于正常口腔黏膜组织（0.6002±0.1010）;与对照组比较,10、50、100感染复数组在作用24h呈现促进细胞增殖作用,S期细胞比例显著增加,72h时增殖作用最强（P〈0.05）;与感染复数1组比较,同时间段50、100组促细胞增殖作用和S期细胞比例显著增加（P〈0.05）,50与100组比较无显著差异（P〉0.05）。结论：口腔鳞癌组织B7-H3mRNA和蛋白表达显著高于正常口腔黏膜组织;B7-H3高表达,可促进口腔鳞癌细胞增殖。