Quantitative determination and pattern recognition analyses of bioactive marker compounds from Dipsaci Radix by HPLC

In this study, quantitative and pattern recognition analyses were developed using HPLC/UV for the quality evaluation of Dipsaci Radix. For quantitative analysis, five major bioactive compounds were assessed. The separation conditions employed for HPLC/UV were optimized using ODS C₁₈ column (250 × 4.6 mm, 5 μm) with a gradient of acetonitrile and water as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min and a detection wavelength of 212 nm. These methods were fully validated with respect to linearity, accuracy, precision, recovery, and robustness. The HPLC/UV method was applied successfully to the quantification of five major compounds in the extract of Dipsaci Radix. The HPLC analytical method for pattern recognition analysis was validated by repeated analysis of 17 Dipsaci Radix and four Phlomidis Radix samples. The results indicate that the established HPLC/UV method is suitable for quantitative analysis.     

牛膝甾酮25位差向异构体的分离与鉴定

目的分离并确定苋科植物怀牛膝(Achyranthes bidentata Blume.)中牛膝甾酮25位差向异构体的结构。方法利用色谱技术分离纯化牛膝甾酮25位差向异构体，用波谱(IR,UV,MS,NMR)方法及化学方法确定结构。结果从怀牛膝的乙酸乙酯部位分离得到3个化合物，分别鉴定为25S-牛膝甾酮(1, 25S-inokosterone)，25R-牛膝甾酮(2, 25R-inokosterone)，β-蜕皮甾酮(3, ecdysterone)。结论化合物1和2为首次从怀牛膝中分离得到的25位差向异构体，首次确定了25位绝对构型和发表该25位差向异构体的¹³CNMR数据。     

不同配比何首乌、牛膝药对指纹共有模式和基于主成分分析的等级评价研究

目的:通过比较有效成分含量及共有峰的主成分,对不同配比何首乌牛膝药对的等级进行评价。方法:采用RP-HPLC梯度洗脱法同时测定10个不同比例何首乌牛膝药对中4种成分含量,同时标定共有峰,采用SPSS进行聚类分析和主成分分析。结果:有效成分含量测定结果显示,何首乌牛膝药对1∶1、2∶1、4∶3、5∶2比例较好。何首乌、5∶2药对可聚为一类,1∶1和3∶2药对可聚为一类,3∶4与4∶3药对可聚为一类。主成分分析显示何首乌牛膝药对2∶1、4∶3、1∶1评分较高。结论:不同配比药对对有效成分溶出影响较大,从有效成分角度考虑1∶1、2∶1和4∶3比例何首乌牛膝药对评分较高。     

基于ITS序列鉴别特色民族药材土牛膝及其混伪品的研究

目的:利用DNA条形码对特色民族药材土牛膝(粗毛牛膝、野生牛膝和柳叶牛膝)及其混伪品进行分子鉴定。方法:利用DNA条形码方法,分别对土牛膝及其混伪品的ITS和MatK基因片段进行扩增并双向测序,使用Codon Code Aligner软件对扩增序列进行拼接,用MEGA软件对数据比对分析,并基于K2P模型进行遗传距离分析,构建邻接(NJ)系统聚类树鉴定分析。结果:3种植物基原土牛膝药材粗毛牛膝、野生牛膝和柳叶牛膝的ITS序列种内最大K2P距离均小于其种间最小K2P距离;所构建的系统NJ聚类树图显示土牛膝药材与其混伪品可明显区分开,表现出良好的单系性;而基于MatK序列构建的系统聚类树图不能将不同基原土牛膝区分。结论:ITS作为DNA条形码可方便快捷地鉴别土牛膝及其混淆品。     

牛膝的化学成分

目的研究中药牛膝的化学成分。方法采用大孔树脂、硅胶柱色谱、制备型HPLC色谱等方法分离中药牛膝中的化学成分,依据这些化合物的理化性质和1H-NMR1、3C-NMR等波谱数据进行结构鉴定。结果从牛膝中分离鉴定了5个化合物,分别为:旌节花甾酮A(stachysterone A,1)、podecdysone C(2)、β-蜕皮甾酮(β-ecdysterone,3)、25-R-膝甾酮(25-R-inokosterone,4)、25-S-牛膝甾酮(25-S-inokosterone,5)。结论化合物1、2为首次从牛膝中分离得到。     

牛膝多糖工艺研究

牛膝根经热水提取、乙醇分级沉淀，鞣酸去除蛋白质，再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｎｓｅｇｆａｔ－ｆｌｏｗ柱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤，洗液对蒸馏水稼析、冻干。所得的经纯化的牛膝多糖分子量为１．４４ｋｄ，纯度９８．６％。     

牛膝中牛膝甾酮25位异构体构型的确定及其抗肿瘤活性的研究

目的牛膝 (AchyranthesbidentataBl.)中牛膝甾酮 2 5位异构体的分离、鉴定、构型确定以及肿瘤抑制活性的测定。方法利用硅胶吸附柱色谱和HPLC法进行分离 ,利用理化性质和波谱分析对化合物进行鉴定 ;利用体外实验法测定其活性。结果 2个非对映异构体化合物分别鉴定为 2 5 R牛膝甾酮 (2 5 Rinokosterone ,1)和 2 5 S牛膝甾酮 (2 5 Sinokosteone ,2 )。化合物 1具有一定的肿瘤抑制活性。结论 2个化合物均为首次从牛膝中分离得到 ,首次确定了其绝对构型 ,并首次对牛膝甾酮 2个 2 5位异构体进行了1H NMR、13 C NMR数据归属。牛膝中发挥肿瘤抑制作用的成分主要应为皂苷类成分。     

脉络宁胶囊质量标准研究

目的建立脉络宁胶囊的质量标准控制方法。方法采用TLC法对本品中的牛膝、石斛、金银花进行鉴别;采用HPLC法对本品中的肉桂酸进行含量测定。结果在TLC色谱图中可检出牛膝、石斛、金银花;肉桂酸在0.1124~0.562μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为96.51%,RSD=0.60%。结论所建立的方法可靠、准确、专属性强,可有效控制脉络宁胶囊的质量。     

Triterpene Saponins from the Roots of Achyranthes bidentata

Three saponins, oleanolic acid-28- O -ß-D-glucopyranoside (1), chikusetsusaponin V (2), and 3- O -ß-D-glucopyranosyl-oleanolic acid-28- O -ß-D-glucopyranoside (3) were isolated from the roots of Achyranthes bidentata Blume (Amaranthaceae). No activity was shown in the granulocyte phagocytosis test nor in the test of the potentiation of the cytotoxicity of cisplatin in human colon cancer cells. This is the first report of compounds 1, 2 and 3 isolated from Achyranthes species. Furthermore, the NMR data of 2 completed the partially published data.     

柱前衍生化HPLC-UV测定牛膝中齐墩果酸的含量

目的建立牛膝中齐墩果酸的柱前衍生化高效液相色谱测定法。方法以对硝基苯甲酰氯为衍生化试剂,对齐墩果酸分子中的羟基进行苯甲酰化,以乙腈-0.2%磷酸水溶液（95∶5）为流动相,在254nm波长处检测。结果齐墩果酸衍生化产物线性回归方程为：Y=85197X＋22550（r=0.9998）,表明齐墩果酸衍生产物在2.0～6.0μg内线性关系良好。结论所建立的柱前衍生化HPLC-UV可用于牛膝中齐墩果酸的含量测定,齐墩果酸与对硝基苯甲酰氯反应,衍生物为对硝基苯甲酸齐墩果酸酯,紫外检测波长由210nm红移至254nm,与以往方法比较,大幅改善了测定效果,提高了检测灵敏度。该方法准确,灵敏度高,为牛膝药材的质量评价提供了参考依据。     

天麻药材高效液相色谱指纹图谱研究

目的研究天麻药材的高效液相色谱指纹图谱,为其质量控制提供可靠的方法。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Ultimate XB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-1%冰醋酸水溶液(梯度洗脱),柱温为30℃,流速1 mL/min,检测波长270 nm。结果初步建立了天麻药材的高效液相色谱指纹图谱,标定出16个共有峰;天麻素的加样加收率为102.66%,RSD<2.5%(n=6)。结论高效液相色谱指纹图谱为天麻药材质量控制提供了一种新方法,并为未知天麻样品的鉴别提供一个准确、快捷的工具。     

复方益肾胶囊质量标准的建立

建立复方益肾胶囊质量控制方法.采用薄层色谱法对制剂中当归、黄芪、牛膝进行定性鉴别;用HPLC法测定制剂中淫羊藿苷含量.     

怀牛膝中总皂苷含量测定

目的 建立怀牛膝中总皂苷含量测定方法.方法 采用高氯酸-香草醛比色法,其原理是怀牛膝中总皂苷与该显色剂反应后,可在相应波长处(544 nm)进行测量.结果 比色法所测定的线形范围为0.2～1.2 mg,相关系数r=0.998 4.平均回收率96.0%,RSD＝3.23%.结论 本法简便、准确,可用于怀牛膝总皂苷含量测定.     

天麻胶囊的质量标准研究

目的建立天麻胶囊的质量控制方法。方法用TLC法对当归、川芎、牛膝、杜仲进行定性鉴别。结果 TLC法检出了当归、川芎、牛膝、杜仲特征斑点,天麻素进样量在0.05009～1.008μg范围内线性关系良好r=0.9998,(n=6),平均加样回收率为98.93%,RSD为1.11%(n=9)。结论所建立的方法简便、稳定、准确、重现性好,可作为本品的质量控制方法。     

怀牛膝多糖的柱前衍生化-HPLC指纹图谱建立及单糖成分含量测定

目的:建立怀牛膝多糖的柱前衍生化-高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,测定其主要单糖成分的含量,为怀牛膝饮片的质量评价提供参考.方法:以10批不同生产厂家的怀牛膝饮片为样品,采用水提醇沉法提取其多糖后,以三氟乙酸进行水解,再采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化处理后,进行HPLC分析.色谱柱为Hanbon Hede...     

Discriminating between Achyranthis Bidentatae Radix and Cyathulae Radix in Chinese medicine preparations by nested PCR and DNA sequencing methods

The widely used Achyranthis Bidentatae Radix (Niu Xi) in Chinese medicine preparation is easily misused and confused with Cyathulae Radix (Chuan Niu Xi). Taiwan authority has ruled that Achyranthis Bidentatae Radix and Cyathulae Radix should be individually entered in the given preparations. In this study, with the internal transcribed spacer (ITS) as a DNA marker, nested PCR and DNA sequencing were used to distinguish the two herbs in preparations. Authentic Achyranthis Bidentatae Radix and Cyathulae Radix were collected from the original country, mainland China, and twenty two samples of Chinese medicine preparations labeled with Niu Xi as the ingredient were purchased locally. The total DNA of all samples were extracted by organic solution and purified using a kit. For a standard, ITS regions of authentic Achyranthis Bidentatae Radix and Cyathulae Radix were amplified with PCR and analyzed by an auto-sequencer. The ITS regions of preparation samples of DNA were amplified by nested PCR and the data of sequences received from an auto-sequencer. We compared the ITS sequences of preparation samples with the sequences of a standard and Genbank database to check which Achyranthis Bidentatae Radix or Cyathulae Radix is in the preparation samples. The results showed that only one sample contained Achyranthis Bidentatae Radix and the others contained Cyathulae Radix. The Cyathulae Radix components in four preparation samples do not fit into Taiwan authority rules. And our method can be applied for the differentiation of Achyranthis Bidentatae Radix and Cyathulae Radix in Chinese medicine preparations.     

血府逐瘀软胶囊中药材的鉴别及芍药苷的含量测定

目的建立血府逐瘀软胶囊的鉴别和含量测定方法。方法采用TLC法和HPLC法。结果TLC鉴别了样品中的赤芍、枳壳、牛膝、甘草等药材;HPLC测定了芍药苷的含量,芍药苷在0.1~0.9 mg范围内,线性关系良好(r=0.9999)。平均回收率为96.4%,RSD=1.4%。结论鉴别方法重复性好,专属性强;含量测定方法简便、准确。     

乌芪舒筋通络片质量标准的研究

目的 建立乌芪舒筋通络片的质量控制方法。方法 用薄层色谱法鉴定方中续断、黄芪、防已、牛膝,用高效液相色谱法测定方中细辛的细辛脂素含量。结果 续断、黄芪、防已、牛膝的薄层色谱法鉴别专属性强,阴性无干扰;细辛脂素在46.05~460.5 ng（r=1.000）内呈良好的线性关系,平均加样回收率为100.4%（n=9）,RSD为1.86%。结论 本方法简便,专属性强,重复性好,可作为乌芪舒筋通络片的质量标准。     

中药牛膝中的植物甾酮类成分

目的对牛膝(Achyranthes bidentataBl.)中的植物甾酮类成分进行分离、鉴定。方法采用各种色谱分离手段,利用理化性质及NMR、MS等波谱技术对化合物进行结构鉴定。结果得到5个化合物,分别鉴定为漏芦甾酮B(rhapontisterone B,1)、旌节花甾酮D(stachysterone D,2)、红苋甾酮(rubrosterone,3)、β谷甾醇(βsitosterol,4)和胡萝卜苷(daucosterol,5)。结论化合物1、2为首次从牛膝中分离得到。     

白芍的高效液相色谱指纹图谱研究

利用HPLC-DAD方法，研究白芍的高效液相色谱指纹图谱，为科学评价及有效控制其质量提供可靠方法。测定了28批白芍药材样品，并应用LC-MS，MS/MS技术指认指纹图谱共有模式中共有峰的归属。结果表明，28批白芍样品得到的色谱指纹图谱有11个共有峰，并指认了9个峰，分别为(+)-儿茶素，没食子酸甲酯，芍药内酯苷，芍药苷，四没食子酰葡萄糖，没食子酰芍药苷，五没食子酰葡萄糖，牡丹皮苷I和苯甲酰芍药苷。可见，白芍的指纹图谱特征性及专属性强，可结合含量测定用于全面控制白芍的质量。