实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用效果。方法选取2009年9月—2013年12月在我州采集的流感样病例咽拭子2489件进行分析,采用实时荧光定量PCR对流感病毒核酸进行检测,观察检测阳性率和阳性样本的类型,以分析流感的流行趋势。结果 2009年9月—2013年12月共检出流感病毒核酸阳性676件,检测阳性率为27.16%;其中甲型H1N1病毒472件,占69.82%;季节性甲3亚型病毒126件,占7.54%;季节性甲1型病毒21件,占3.11%;乙型病毒6件,占0.89%;各类型流感病毒发生率之间差异具有统计学意义（P〈0.05）。每年6-9月甲型H1N1病毒流感呈上升趋势,在10-11月达到高峰期;6-9月以季节性甲3亚型病毒为主要流行病株,10-11月甲型H1N1病毒成为主要流行病株。结论实时荧光定量PCR是一种科学有效的检测方法,可对流感病毒核酸进行快速、准确的检测,分析流感病毒的流行规律,有效预防突发公共卫生事件的发生。     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的探讨在流感病毒核酸检测中,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)这种检测方法的应用效果,通过对哨点医院2014年6月-2016年6月所采集的1 553份流感样病例咽拭子的分析,了解流感病毒的流行趋势,为预防流感提供科学依据。方法选取2014年6月-2016年6月天津市第四中心医院送至北辰区疾病预防控制中心检测的1 553份流感样病例咽拭子,采用Real-time PCR的方法进行核酸检测,分析所选取标本的阳性率以及阳性标本的类型,了解流感病毒的流行趋势。结果在2014年6月-2016年6月送至该中心检测的1 553份咽拭子中,共检出阳性标本299份,检测阳性率为19.25%;甲型病毒183份,占61.20%;乙型病毒116份,占38.80%,各类型流感病毒阳性率之间差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Real-time PCR可以快速有效地对流感病毒核酸进行检测,为分析流行趋势、预防流感提供科学有效的依据。     

实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用

目的通过对2009年6—11月北京怀柔地区流行性感冒(流感)病原学监测数据的分析,了解北京市怀柔区甲型H1N1型流感的流行趋势,为该地区甲型H1N1流感的防治提供科学依据。方法依据《全国流感监测实施方案》、《甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案》、《甲型H1N1流感监测方案(第二版)》、7500Fast型实时荧光定量PCR的SDS软件操作。结果2009年6—11月共采集流感样病例咽拭子1780件,检出流感病毒核酸阳性507件,阳性率为28.48%。阳性样本中,季节性甲3亚型92件,占18.15%;季节性甲1亚型8件,占1.58%;乙型4件,占0.79%;甲型H1N1型395件,占77.91%。结论2009年6—9月,甲型H1N1型流感的流行趋势为上升状态,但期间季节性甲3亚型仍为主要流行毒株。10—11月,甲型H1N1型流感的上升趋势达到高峰期,甲型H1N1流感病毒为流感流行主要毒株。     

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果分析

目的:通过参加湖南省2007年疾控机构分子生物学能力考核、实验室间比对试验结果,及时发现问题,启动分子生物学实验室并提高检测技术能力.方法:荧光实时定量PCR法2007年湖南省分子生物学能力考核表中的考核操作规程及7300型实时荧光定量PCR的SDS软件操作.结果:根据湖南省CDC反馈结果,本中心的考核成绩为合格.结论:建立分子生物学实验室,同时要保证实验室结果的准确性,是我们分子生物学能力考核的主要任务.     

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控效果分析

目的:探究流感病毒核酸检测中采用荧光实时定量PCR法的质控效果分析.方法:于2017年3月～2018年3月,选取本院收治的流感病例576例,全部患者都借助实时荧光定量P C R法检测流感病毒核酸,并对阳性率与阳性样本类型进行检测与总结.结果:全部病例576例经流感病毒核酸检测有136例呈阳性,阳性率23.61％;所有阳...     

实时荧光定量PCR法在流感病毒暴发疫情病原学检测诊断中的应用

目的对疑似流感病毒患者标本进行病毒核酸检测诊断,探讨实时荧光定量PCR法在流行性感冒检测诊断中的意义。方法采用WHO标准实时荧光定量PCR法对2010年10月本地区采集的8份疑似甲型H1N1流感患者咽拭子标本进行病毒核酸检测。结果 8份咽拭子标本中有6份呈甲型H1N1流感病毒核酸阳性,阳性率75%。结论实时荧光定量PCR法操作相对简单,耗时短,特异性强,灵敏度高,可作为基层疾控中心流感疫情可靠的快速诊断方法。     

实时荧光定量RT-PCR、细胞培养法和鸡胚培养法在流感检测中的对比分析

目的比较本实验室已有的3种流感病毒检测方法的差异,以确定它们在不同情形下的适用方向。方法通过实时荧光定量反转录PCR、细胞培养和鸡胚培养3种方法同时检测488份流感样病例(ILI)鼻咽拭子样本,计算出它们的灵敏度和特异度,并进行统计分析。结果实时荧光定量RT-PCR、细胞培养和鸡胚培养的阳性检测率分别为16.80%、6.76%、3.07%;相对于实时荧光定量RT-PCR,细胞培养的灵敏度为40.24%,特异度为100.00%,鸡胚培养的灵敏度为18.29%,特异度为100.00%;与细胞培养相比,鸡胚培养的灵敏度为45.45%,特异度为100.00%。结论3种方法在灵敏度方面差异很大,但在特异性上没有差异。由于实时荧光定量RT-PCR具有很高的灵敏度,并且检测速度快,适用于暴发疫情的应急检测;细胞培养和鸡胚培养作为经典的病毒分离方法,可以获得流感毒株,用来开展抗原性、基因特性和耐药性等深入研究。     

探讨实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析

目的:探讨实时荧光定量P C R仪器对流感病毒检测效果.方法:选择2019年6月～2020年6月本中心采集的流感病毒咽拭子及血液样本各116份,根据检测方法将其分为三个不同的组别,分别用实时荧光定量P C R仪、普通PCR仪、酶标仪进行检测、最终采用病毒分离培养法进行验证.结果:本次实验研究结果显示,使用实时荧光定量P...     

实时荧光PCR用于流感病毒检测的效果分析

目的探讨和研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应在流感病毒检测中的应用效果。方法采用实时荧光PCR对617例流感样病例患者的咽拭子标本进行流感病毒核酸的测定,对检测出的阳性标本采用MDCK进行培养并分离,对两种方法的检测结果进行分析,对比特异性及灵敏度。结果本组617例标本中实时荧光PCR共检测出阳性标本152例,阳性率24.6%;细胞培养法在此152例阳性标本中共分离出流感病毒79例,阳性率12.8%,实时荧光PCR检测阳性率显著高于细胞培养法,差异具有统计学意义(P0.05)。结论实时荧光PCR能够快速有效的检测出流感病毒核酸,是实验室快速诊断的有效手段。     

流感病毒分型及亚型实时荧光定量PCR检测能力验证结果分析

目的通过对相关实验室开展流感病毒分型及亚型检测能力验证,不断提高各实验室的流感病毒分型及亚型的检测水平。方法通过分发盲样,采用统一的能力验证方案,使用实时荧光定量PCR方法进行检测,并对流感病毒分型及亚型检测结果进行分析。结果 2014年流感病毒分型能力验证初测满意率为91.49%,补测后满意率为97.87%。结论本次能力验证活动表明,大多实验室整体上具备较好的流感病毒分型及亚型实时荧光定量PCR检测能力和质量管理水平,可以为有关部门做好技术支撑工作。     

实时荧光定量PCR在神经梅毒检测中的应用

目的探讨脑脊液实时荧光定量PCR对于神经梅毒的诊断价值。方法对大连市皮肤病医院2011年1月-2016年1月155例疑似神经梅毒患者的临床资料及脑脊液等进行综合分析,同时用实时荧光定量PCR、TP-ELISA、VDRL法检测所有待测者脑脊液;比较分析检测结果的敏感度与特异度。结果共诊断31例神经梅毒患者(1例待观察最终确诊),TP-ELISA检测神经梅毒的敏感度与特异度分别为96.88%和38.71%,实时荧光定量PCR检测神经梅毒的敏感度与特异度分别为64.52%和100.00%,VDRL检测神经梅毒的敏感度与特异度分别为93.55%和100.00%。结论脑脊液实时荧光定量PCR虽然具有高敏感度、高特异度等优点,但对脑脊液标本要求较高,是否可作为神经梅毒的临床诊断标准有待进一步研究。     

实时荧光定量PCR技术在食品检测中的应用

阐述了实时荧光定量技术的原理、特点以及在食品微生物检测、研究和转基因食品检测方面的应用情况，并提出了目前存在的问题。     

实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

随着经济的全球化,食品安全已经越来越受到人们的关注,而微生物污染已成为食品安全的首要问题。食品致病菌是引发食物中毒和食源性疾病暴发的重要因素。传统的检测方法必须经过细菌的分离、培养与鉴定,不但耗时耗力而且不适于大量样品同时检测,不能满足食物中毒和食源性疾病暴发时的检测需要。近年来随着P C R检测技术的快速发展,其在微生物检测中的应用也越来越广泛,实时荧光定量PCR作为PCR检测方法中的一种,因其具有较强的特异性和灵敏度并且还有检测速度快、准确性高等优点,在检测食品微生物的应用中有较强优势。本文介绍实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌、沙门菌、志贺菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠埃希菌等几种常见食源性致病菌检测中的应用。     

实时荧光定量PCR检测普氏立克次体

目的 采用新型TaqMan—MGB探针建立检测普氏立克次体的实时荧光定量PCR方法。方法 根据普氏立克次体外膜蛋白B的基因（ompB）序列设计引物和探针，以克隆的ompB基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI7900型）上建立实时荧光定量检测方法。结果 建立的定量标准曲线的循环阈值（Q）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．999）；与巢式PCR相比较，荧光定量PCR检测敏感性是其100倍。用荧光定量PCR检测莫氏立克次体及其他相关立克次体和细菌DNA，检出结果均为阴性。用荧光定量PCR检测普氏立克次体感染的豚鼠血标本，某些样本检测为阳性，而用巢式PCR检测的结果均为阴性。结论 研究中建立的检测普氏立克次体实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性，适合于快速检测样本中微量普氏立克次体DNA，可用作临床实验室快速确诊流行性斑疹伤寒。     

实时荧光定量PCR在血站核酸检测中的应用效果

目的：观察并分析在血站核酸检测中实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）的应用效果。方法：选取2023年1月～2023年6月17564分无偿献血者样本,都是经过乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎病毒抗体、人类免疫缺陷病毒抗体初检和复检都合格的样本,对其进行实时荧光定量PCR的核酸检测。结果：在17564无偿献血者的血液样本中,经过实时荧光定量PCR技术检测,共有25例乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸阳性,0例丙型肝炎病毒核糖核酸和人类免疫缺陷病毒（1型）核糖核酸阳性。在临检中心举行的室间质评中,所有检验结论均正确,得分为100分。结论：在血站核酸检测中采用实时荧光定量PCR技术,可有效减短病毒检测窗口期,有助于血液安全水平的提高。     

实时荧光定量PCR在手足口病原体检测中的应用探讨

目的：：对手足口病患儿施行病原体检测时运用荧光定量PCR实时测定法（FQ-PCR法）的效果及有关情况探析。方法：以2016年5月-7月因疑似感染手足口病进入本院施行病原体测定的患儿127例为评估对象,依据年龄段情况将其划分成A组（年龄不超3岁者）77例、B组（年龄间于3-6岁间者）50例,运用FQ-PCR法对疑似患儿的疱疹液、咽拭子实施相应指标值的测定;并以ELISA法对患儿血清展开检测,经比对两法的检出率数据情况,系统评估FQ-PCR医疗检测效果。结果：127例患儿咽拭子样本、疱疹液样本在FQ-PCR法测定下,EV检测有101例显阳性,占79.53%;当中A组有67例,占87.01%,B组有34例,占68.00%。A组患儿阳性检出率超出B组,差异明显（P＜0.05）。咽拭子样本检出阳性率是69.60%,疱疹液样本检出阳性率是81.97%。FQ-PCR法检出EV71阳性病例超出ELISA法,差异显著（P＜0.05）,检出COXA16阳性病例和ELISA法较接近,没有较大差异（P＞0.05）。结论：FQ-PCR 法践行于HFMD病原体测定及评估中,能强化病原学指标监控力度,以辅助当地HFMD疫情预测、防范工作的有效进行。     

实时荧光定量PCR法与常规PCR法检测沙门菌的比较

目的:比较实时荧光定量PCR法、常规PCR法检测沙门菌的灵敏度与特异性。方法:采用建立的实时荧光定量PCR、常规PCR方法,同时对沙门菌等细菌进行检测。结果:实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达33 cfu/m l,且有很高的特异性,对金黄色葡萄球菌等10种相关细菌均无交叉反应,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右。结论:实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是2种方法中最为快速敏感的方法,适用于临床实验室的快速诊断。     

实时荧光定量PCR法检测NG、CT和UU的临床意义

目的应用实时荧光定量PCR（real-time fluorescent quantitativePCR，FQ—PCR）法检测淋病奈瑟菌（NG）、沙眼衣原体（CT）和解脲支原体（UU），探讨该法的阳性检出率、敏感性和特异性。方法对临床疑似性病患者，取尿道或宫颈分泌物，同时用分离培养法和FQ—PCR法检测NG、CT、UU。结果168例患者中，培养法阳性检出数46例，阳性率27．38％，FQ—PCR法阳性检出数72例，阳性率42．86％。FQ—PCR法特异性为76．61％，灵敏度为97．83％。分别用FQ—PCR法和培养法检测NG、CT和UU，前者阳性率均高于后者。结论用实时荧光定量PCR法检测NG、CT以及UU，具有快速、敏感、特异、检出率高等优点，对临床诊断治疗及流行病学调查有重要意义。     

实时荧光PCR和RT-PCR方法检测甲型流感病毒的比较

目的比较实时荧光PCR检测(FQ-PCR)与RT-PCR在鉴定甲型流感病毒中的优劣,建立能快速简便、特异地从临床标本中检测并鉴定流感病毒的新方法。方法对200份临床采集的咽拭子样本进行FQ-PCR与RT-PCR检测,综合比较2种监测方法之间的差异。结果 FQ-PCR检测200份临床咽拭标本,96份甲型阳性,阳性率为48.0%;从RNA提取到检测结果仅需3～3.5 h。RT-PCR检测200份临床咽拭标本,69份阳性,阳性率为34.5%;从RNA提取到检测结果约需8 h。结论 FQ-PCR方法快速、特异、灵敏,在甲型流感病毒检测中具有较大的应用价值。     

实时荧光定量PCR法与基因芯片法检测HPV的比较

目的比较基于PCR的基因芯片方法和实时荧光定量PCR方法检测女性子宫颈脱落细胞HPV DNA的相关性。方法收集2050份样本采用基因芯片法和实时荧光定量PCR方法进行比对试验,两者结果不符的进行测序验证,并对检测结果进行一致率及阳性率统计分析。结果两种方法总一致率、阳性一致率及阴性一致率都在95.0%以上;荧光定量PCR法检测HPV16阳性率50.0%,HPV18阳性率13.9%。结论两种方法检测的一致性良好,本实验中所使用的新型12+2高危型人乳头状瘤病毒核酸检测试剂盒适合应用于育龄期妇女的宫颈癌筛查及随访。