5,7-二甲氧基黄酮抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞特性的体外研究

[目的]探讨5,7-二甲氧基黄酮(DMF)对人胰腺癌干细胞特性的影响.[方法]体外培养人胰腺癌PANC-1细胞系得到微球细胞,流式细胞仪检测;划痕法分析不同浓度DMF对胰腺癌干细胞自我更新、体外细胞迁移和运动能力影响;Western Blot分析不同浓度DMF干预后PANC-1细胞系胰腺癌干细胞表面标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmil、E-cad、N-cad蛋白表达变化.[结果]DMF以浓度依赖方式抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌干细胞肿瘤球形成能力及抑制细胞体外迁移能力;DMF以浓度依赖方式使胰腺癌干细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cad蛋白表达水平降低,而E-cad蛋白水平升高.[结论]DMF以浓度依赖方式显著抑制人胰腺癌PANC-1细胞系胰腺癌样干细胞自我更新、分化后细胞迁移、细胞标志物CD133、CD44、ALDH1、Bmi1、N-cadherin蛋白表达,而增强E-cadherin蛋白表达.     

尿胰蛋白酶抑制剂对重症结核病患者的免疫调节作用

目的探究尿胰蛋白酶抑制剂（UTI）对重症结核病患者的免疫调节作用。 方法选取杭州市红十字会医院2015年1月至2017年11月收治的84例重症结核病患者,采用随机数字表法分为UTI组和对照组,每组各42例。对照组给予常规治疗,UTI组在常规治疗基础上于入住ICU第2天给予UTI 10万单位静脉注射,每8小时1次,连续治疗7 d。比较两组患者的一般资料、急性病生理学和长期健康评价（APACHE）Ⅱ评分和外周血液中白细胞介素2（IL-2）、IL-6、IL-10、IL-12、干扰素γ（INF-γ）、转化生长因子β（TGF-β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、Tregs细胞及诱导性共刺激分子（ICOS）⁺Tregs细胞表达水平。 结果治疗后,UTI组及对照组重症结核病患者APACHEⅡ评分[（22.5 ± 2.2）分vs.（25.8 ± 1.5）分,t = 2.025,P = 0.043]、IL-6 [（137 ± 33）ng / L vs.（116 ± 42）ng / L,t = 2.785,P = 0.045]、IL-10 [（29 ± 6）ng / L vs.（26 ± 5）ng / L,t = 2.143,P = 0.039]、IL-12 [（84 ± 26）ng / L vs.（65 ± 22）ng / L,t = 2.009,P = 0.043]、TGF-β [（8.5 ± 2.3）ng / L vs.（9.8 ± 2.8）ng / L,t = 1.613,P = 0.045]、CD8⁺T淋巴细胞[（43 ± 13）% vs.（38 ± 12）%,t = 1.856,P = 0.043]及Tregs细胞[（5.8 ± 1.1）% vs.（5.1 ± 0.9）%,t = 1.645,P = 0.045]比率比较,差异均有统计学意义;而IL-2[（835 ± 188）ng / L vs.（744 ± 324）ng / L,t = 0.656,P = 0.458]、INF-γ [（200 ± 88）ng / L vs.（203 ± 78）ng / L,t = 0.912,P = 0.061]、TNF-α [（854 ± 256）μg / L vs.（808 ± 213）μg / L,t = 0.956,P = 0.785]、CD4⁺T淋巴细胞[（48 ± 8）% vs.（49 ± 14）%,t = 0.756,P = 0.985]及ICOS⁺Tregs细胞[（1.0 ± 0.7）% vs.（1.0 ± 0.9）%,t = 0.956,P = 0.089]比率比较,差异均无统计学意义。 结论UTI能够调节危重症结核病患者的细胞免疫,减轻重症结核病患者体内炎症因子的释放,从而改善其APACHEⅡ评分及预后。     

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体在脓毒症急性肾损伤大鼠肾脏组织的表达及其影响

目的探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白（NLRP3）炎性小体在脓毒症急性肾损伤（AKI）大鼠中的作用及其机制。 方法采用随机数字表法将18只雄性Wistar大鼠分为脂多糖（LPS）组、LPS +抑制剂组及阴性对照组3组,每组6只。LPS组大鼠给予腹腔内注射LPS（3.5 mg/kg）,LPS +抑制剂组大鼠腹腔内注射LPS（3.5 mg/kg）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）抑制剂Belnacasan（VX-765,100 mg/kg）,而阴性对照组大鼠则给予腹腔内注射0.3 mL等渗NaCl溶液。比较3组大鼠建模前及建模后24 h血清肌酐水平变化,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测3组大鼠建模24 h后血清白细胞介素1β（IL-1β）、IL-18及肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达水平,采用Western-blotting检测3组大鼠建模24 h后NLRP3及Caspase-1蛋白表达水平。 结果3组大鼠建模前后血清肌酐水平比较,差异有统计学意义（F = 146.910,P < 0.001）。进一步两两比较发现,建模后,LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠血清肌酐水平均较LPS组显著降低[（1.57 ± 0.20）、（0.54 ± 0.39）、（2.31 ± 0.24）mg/L],且阴性对照组大鼠血清肌酐水平较LPS +抑制剂组更低（P均< 0.05）;而LPS组[（2.31 ± 0.24）mg/L vs.（0.53 ± 0.16）mg/L]及LPS +抑制剂组[（1.57 ± 0.20）mg/L vs.（0.56 ± 0.08）mg/L]大鼠建模后血清肌酐水平均较建模前显著升高（P均< 0.05）。LPS组、LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠血清IL-1β [（9.33 ± 1.16）、（1.93 ± 0.30）、（1.88 ± 0.30）ng/L]、IL-18 [（23.8 ± 2.8）、（19.6 ± 1.5）（16.6 ± 1.2）ng/L]、TNF-α [（42.3 ± 2.1）、（23.9 ± 2.5）、（23.5 ± 1.3）ng/L]及NLRP3蛋白[（2.04 ± 0.25）、（2.04 ± 0.27）、（1.49 ± 0.28）]和Caspase-1蛋白[（0.62 ± 0.07）、（0.51 ± 0.09）、（0.50 ± 0.09）]表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 217.015、20.590、168.766、8.723、3.905,P均< 0.05）。进一步两两比较发现,LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠血清IL-1β、IL-18、TNF-α表达水平均较LPS组大鼠显著降低,且阴性对照组大鼠IL-18表达水平较LPS +抑制剂组更低（P均< 0.05）。阴性对照组大鼠NLRP3蛋白表达水平均较LPS组及LPS +抑制剂组显著降低,LPS +抑制剂组及阴性对照组大鼠Caspase-1蛋白表达水平均较LPS组显著降低（P均< 0.05）。 结论大鼠发生脓毒症时,通过激活炎性小体NLRP3,进而通过Caspase-1通路造成急性肾损伤。     

急性缺血性脑卒中取栓治疗后联用替罗非班静脉维持的临床研究

目的探讨替罗非班治疗作为补充手段用于未接受静脉溶栓的急性缺血性脑卒中（AIS）患者机械取栓（MT）后静脉维持治疗的可行性与安全性。 方法入选不符合静脉溶栓条件且CT血管成像证实为大动脉闭塞的87例AIS患者,其中MT+替罗非班维持（MT+ T）组44例,MT组43例。MT+ T组患者采用支架取栓并在术后立即静脉泵入0.1 μg·kg^-1·min^-1替罗非班维持24 h,之后口服抗血小板聚集药物;MT组患者采用支架取栓治疗,术后口服抗血小板聚集药物。比较两组患者术前基线资料、血管再通情况、神经功能恢复情况、术后并发症及死亡情况。 结果MT+ T组与MT组患者术后14 d美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分[（7.7 ± 2.2）分vs.（8.8 ± 3.3）分]、术后并发症[4.55%（2/44）vs. 6.98%（3/43）]及病死率[2.27%（1/44）vs. 2.33%（1/43）]比较,差异均无统计学意义（P均> 0.05）;而MT+ T组患者术后90 d改良Rankin量表（mRS）评分低于MT组[（1.7 ± 1.0）分vs.（2.2 ± 1.1）分,t = 2.479,P = 0.015]。亚组分析显示,MT+ T组取栓次数> 3次的患者术后14 d NIHSS评分[（8.6 ± 3.1）分vs.（12.5 ± 3.5）分]及术后90 d mRS评分[（1.7 ± 1.5）分vs.（2.8 ± 1.0）分]均低于MT组（t = 2.996、2.172,P = 0.006、0.040）;MT+ T组及MT组取栓次数≤ 3次的患者术后14 d NIHSS评分[（7.4 ± 1.6）分vs.（7.2 ± 1.5）分]及术后90 d mRS评分[（1.7 ± 0.7）分vs.（2.0 ± 1.1）分]比较差异均无统计学意义（t= 0.441、1.362,P= 0.661、0.178）。 结论替罗非班可作为未接受静脉溶栓的AIS患者行3次以上支架取栓治疗后的补充手段,可有效改善患者的神经功能及预后,且不增加脑出血转化风险。     

miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路调控甲状腺乳头状癌细胞凋亡

目的探讨miRNA-224-5p通过TGF-β/Smad4信号通路对甲状腺乳头状癌细胞凋亡的调控作用。 方法选取2015年7月至2017年11月新疆维吾尔自治区人民医院手术切除所得甲状腺乳头状癌组织及相应的癌旁组织冻存标本各60份。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测60例甲状腺乳头状癌组织及60例癌旁组织中miRNA-224-5p的相对表达量,二者比较采用配对资料t检验。将miRNA-224-5p（miRNA-224-5p组）与miRNA-224-5p抑制剂（miRNA-224-5p抑制剂组）分别转染到甲状腺乳头状癌细胞株GLAG-66中,通过RT-PCR检测两组中GLAG-66细胞内miRNA-224-5p的相对表达量,应用流式细胞仪检测两组GLAG-66细胞转染48 h后凋亡率,应用Western blot实验检测两组GLAG-66细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved-Caspase3、TGF-β1、Smad4蛋白的相对表达量,并采用两个独立样本t检验进行比较。 结果miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中的相对表达量与癌旁组织比较明显升高,差异具有统计学意义［（4.175±0.523）vs（1.236±0.236）,t=9.675,P=0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞中miRNA-224-5p的相对表达量与miRNA-224-5p组比较明显下降,差异具有统计学意义［（0.381±0.078）vs（1.000±0.023）,t=19.785,P<0.001）］。miRNA-224-5p抑制剂组GLAG-66细胞转染48 h后的凋亡率与miRNA-224-5p组比较明显增高,差异具有统计学意义［（18.66%±0.98%）vs（3.78%±0.36%）,t=17.561,P<0.001］。miRNA-224-5p抑制剂组和miRNA-224-5p组比较,GLAG-66细胞中Bcl-2、TGF-β1和Smad4蛋白的相对表达量明显降低,差异具有统计学意义［（0.197±0.008）vs（0.278±0.013）,t=8.259,P=0.001;（0.117±0.013）vs（0.227±0.012）,t=13.269,P<0.001;（0.268±0.012）vs（0.439±0.016）,t=9.897,P=0.001］;Bax、Cleaved-Caspase3蛋白的相对表达量明显升高,差异具有统计学意义［（0.286±0.011）vs（0.159±0.009）,t=12.569,P<0.001;（0.128±0.009）vs（0.083±0.010）,t=7.693,P=0.002］。 结论miRNA-224-5p在甲状腺乳头状癌组织中表达增高,下调miRNA-224-5p可以促进甲状腺乳头状癌细胞的凋亡,其作用机制可能与TGF-β/Smad4信号通路有关。     

抑制Smac基因表达对胰腺癌裸鼠移植瘤生长影响的研究

[目的]探讨Smac基因对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.[方法]于裸鼠腋下接种200 μL 107/mL的PANC-1细胞悬液,建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,将其分为三组：注射PBS液（A组）、转染空载体（B组）、转染Smac基因（C组）,比较三组移植瘤的大小、移植瘤细胞的凋亡率,移植瘤中Smac蛋白表达和微血管密度（MVD）.[结果]与A、B组比较,C组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小;移植瘤细胞的凋亡指数和Smac蛋白的表达率均明显增高,其差异均有统计学意义（P〈0.05）.[结论]脂质体转染Smac基因能抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导胰腺癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关.     

肝X受体β在电针治疗慢性脑缺血炎性损伤中的作用研究

目的探讨肝X受体β（LXRβ）在电针治疗慢性脑缺血炎性损伤中的作用。 方法将40只雄性大鼠采用随机数字表法分为假手术组、模型组、激动剂组和电针组,每组各10只。假手术组大鼠麻醉切开颈部皮肤后,仅分离双侧颈总动脉,不进行结扎。模型组、激动剂组和电针组大鼠均给予经典二血管闭塞（2-VO）制备慢性脑缺血大鼠模型,激动剂组大鼠造模成功后喂食LXRβ激动剂T0901317（1 mg/kg,每日1次,连续7 d）,电针组大鼠造模成功后给予电针治疗,持续1周。于术后2周从各组中分别选取1只大鼠采用快速断头取脑法进行模型病理性评估。各组大鼠于术后第4周采用Morris水迷宫考察认知功能情况。水迷宫实验结束5 d后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠脑组织海马CA1区的病理形态变化,采用酶联免疫吸附测定检测海马CA1区白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平,采用Western-blotting法检测海马CA1区LXRβ、核因子κB1（NF-κB1）P50及NF-κB1 P105蛋白表达。 结果各组大鼠在定位航行实验中的平台距离与爬上平台所需时间（F = 2.960、2.945,P = 0.045、0.046）,在空间探索实验中第一次到达平台时间与穿越平台的次数间比较（F = 7.627、3.512,P = 0.001、0.024）,差异均有统计学意义。且与模型组相比,电针组及激动剂组大鼠平台距离均减小[（1 136 ± 857）、（760 ± 629）、（699 ± 702）cm],爬上平台所需时间[（49 ± 41）、（36 ± 28）、（34 ± 33）s]及第一次到达平台时间[（38 ± 19）、（29 ± 25）、（24 ± 18）s]均缩短（P均<0.05）,但在穿越平台的次数上仅电针组大鼠显著增多[（2.0 ± 1.4）vs.（3.9 ± 1.8）,P<0.05]。HE染色提示模型组大鼠海马CA1区神经元胞核染色加深,排列松散,细胞层数减少;电针组与激动剂组大鼠的神经元细胞形态结构有明显改善,神经元数量增多,细胞层数显著增多。各组大鼠海马CA1区脑组织IL-1β（F = 18.350,P < 0.001）、IL-6（F = 4.235,P = 0.018）和TNF-α（F = 4.190,P = 0.019）水平的比较差异均有统计学意义。且与模型组相比,电针组和激动剂组大鼠IL-1β[（357 ± 38）、（278 ± 45）、（232 ± 54）ng/L]、IL-6[（287 ± 45）、（188 ± 54）、（213 ± 54）ng/L]和TNF-α[（383 ± 45）、（236 ± 54）、（251 ± 91）ng/L]表达水平均显著下降（P均<0.05）。Western-blotting显示,各组大鼠海马CA1区脑组织LXRβ及NF-κB1 P50蛋白的比较,差异均无统计学意义（F=0.661、0.315,P=0.586、0.815）。而各组间NF-κB1 P105蛋白表达的比较,差异有统计学意义（F=3.940,P=0.023）,且与模型组相比,电针组及激动剂组的NF-κB P105蛋白表达显著减少[（4.0 ± 0.7）× 10^-2、（2.8 ± 1.0）× 10^-2、（2.7 ± 1.1）× 10^-2,P均<0.05]。 结论LXRβ受体的激活在抑制慢性脑缺血过度炎症反应过程中发挥重要作用,电针能起到抑制慢性脑缺血炎性损伤的作用,但电针不具备上调LXRβ表达的作用。     

新生儿高胆红素血症诊治中T淋巴细胞和白介素-6变化的研究

目的探讨新生儿高胆红素血症诊治过程中患儿体内胆红素、T淋巴细胞亚群以及白介素-6（IL-6）水平的变化及其临床意义。 方法选择2015年1~12月内蒙古医科大学第三附属医院住院的40例高胆红素新生儿作为高胆组,再根据对高胆红素新生儿采取的治疗方法不同,分为高胆1组20例（常规蓝光治疗）和高胆2组（常规蓝光治疗加妈咪爱）;选取同期与高胆组日龄相匹配的20例健康足月新生儿（无黄疸或血清胆红素水平≤205.2 μmol/L）作为对照组。采用方差分析比较各组血清胆红素、T淋巴细胞亚群、IL-6水平的差异,并进行组间的两两比较,采用Pearson相关性分析分析高胆1、2组胆红素与IL-6及CD4^＋/CD8^＋比值的相关性。 结果治疗前,高胆1组及高胆2组新生儿T淋巴细胞亚群与对照组比较：CD3^＋［（48.00±5.28）% vs （46.60±5.57）% vs （60.54±4.66）%］、CD4^＋［（31.05±5.09）% vs （33.50±4.80）% vs （44.86±3.75）%］及CD4^＋/CD8^＋比值（0.93±0.21 vs 0.95±0.23 vs 1.32±0.17）均较对照组降低,差异具有统计学意义（P<0.001）;而高胆1组与高胆2组新生儿的IL-6值与对照组比较均升高［（21.73±2.35）ng/ml vs （22.05±2.58）ng/ml vs （10.85±2.11）ng/ml］,差异具有统计学意义（P<0.001）;治疗后,高胆1、2组患儿CD3^＋［（46.15±7.17）% vs （55.15±6.89）% vs （60.54 ±4.66）%］、CD4^＋［（29.45±5.64）% vs （37.85±5.49）% vs （44.86 ±3.75）%］、CD4^＋/CD8^＋比值（0.92±0.22 vs 1.12±0.25 vs 1.32±0.17）,较对照组比较仍较低,IL-6水平与对照组比较仍偏高［（23.83±3.34）ng/ml vs （14.91±2.31）ng/ml vs （10.85±2.11）ng/ml］,差异具有统计学意义（P<0.01）;但高胆2组与高胆1组CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋/CD8^＋比较却明显升高,IL-6水平也下降明显,差异具有统计学意义（P<0.01）。治疗前总体的血清胆红素水平与高胆1、2组CD4^＋/CD8^＋比值呈负相关（r=-0.780、-0.594,P<0.01）,而与IL-6水平呈正相关（r=0.752、0.591,P<0.01）。 结论新生儿高胆红素血症时患儿体内存在细胞免疫功能紊乱及细胞因子分泌紊乱情况,光疗在降低高间接胆红素的同时对新生儿的免疫功能改善不明显,口服免疫调节剂妈咪爱可有效弥补光疗的不足。     

转化生长因子-β1基因多态性与高血压心房颤动相关性研究

[目的]研究转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）基因＋869T／C多态性与高血压心房颤动发生的关系,探讨TGF-β1基因＋869T／C基因型对高血压心房颤动发生的影响。[方法]采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）,检测99例高血压患者（其中47例伴心房颤动）及49名对照组TGF-β1基因＋869T／C。[结果]在高血压心房颤动组中＋869T／C位点的CC基因型频率高于高血压无心房颤动组及对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,高血压心房颤动组＋869C等位基因频率高于高血压无心房颤动组及对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,与高血压无心房颤动组比较,携带C等位基因的个体患心房颤动的相对风险度（0R）为2．044（95％CI：1．157～3．612）。[结论]TGF-β＋869CC基因型是高血压心房颤动的易感基因型;C等位基因可能是高血压心房颤动发病的遗传易感基因。     

外周血Tcm和Treg在胰腺癌中的表达及其与临床病理因素的关系

目的探讨胰腺癌患者外周血中央型记忆T细胞(central memory T cells,Tcm)和调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)的表达情况,及其与临床病理因素的关系。方法选取2014年6月—2016年1月解放军总医院普通外科收治的128例未治胰腺癌患者作为胰腺癌组,另选取同期48例体检健康者作为健康对照组。两组均采集外周血5 ml,分离单个核细胞,以荧光标记的抗CD3、CD4、CD8、CD45RO、CD62L、CD25、FOXP3抗体染色,运用流式细胞术检测Tcm及Treg表达率。并进一步分析胰腺癌组Tcm和Treg表达及其与临床病理因素的关系。结果胰腺癌组Tcm及Treg表达率均显著高于健康对照组[(19.38±5.42)%vs(12.22±3.21)%,t=8.60,P=0.00;(2.34±0.89)%vs(0.17±0.03)%,t=16.87,P=0.00]。胰腺癌组Tcm及Treg表达率均与临床分期及淋巴结转移相关(P均0.05),Tcm表达率还与患者年龄相关(χ2=28.00,P=0.00)。结论未治胰腺癌患者外周血Tcm和Treg高表达,提示存在一定程度的抗肿瘤预存免疫记忆,但呈现为免疫抑制状态;其表达与肿瘤临床分期及淋巴结转移相关。     

生长停滞特异性蛋白6调控巨噬细胞极化在小鼠创面修复中的作用

目的:探讨生长停滞特异性蛋白6（growth arrest-specific protein 6,Gas6）调控巨噬细胞极化在创面修复中的作用。方法:采用清洁级雄性B6小鼠随机（随机数字法）分为正常组、皮肤缺损组、皮肤缺损组+生理盐水组、皮肤缺损+Gas6(1 μg)组、皮肤缺损+Gas6(5 μg)组和皮肤缺损+Gas6(10 μg)组,每组16只,其中10只用来观察各组小鼠皮肤创面愈合情况,剩余6只于造模后第5天分离创面组织巨噬细胞,酶联免疫吸附法（ELISA）检测IL-6,IL-10水平,RT-PCR检测精氨酸酶-1（Arg-1）、诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA表达水平,流式细胞术检测巨噬细胞M1型标记物CD197和M2型标记物CD163、F4/80的表达,HE染色检测皮肤创面病理改变,Masson染色分析创面肉芽组织及胶原沉积情况。结果:皮肤缺损造模后第3天伤口表面开始结痂。Gas6治疗组伤口面积小于PBS组,伤口愈合情况优于PBS组。与正常组相比,皮肤缺损组小鼠第5天巨噬细胞CD197的比例升高明显（ P=0.0049）、CD163和F4/80双阳性的比例明显降低（ P=0.0086）、IL-6水平明显升高（ P=0.0013）、IL-10水平明显升高（ P=0.0014）、iNOS mRNA水平明显升高（ P=0.008）、Arg-1 mRNA水平明显降低（ P=0.0121）、组织炎症浸润加重。与PBS对照组相比,Gas6治疗组CD197的比例明显下降（ P=0.000）、CD163和F4/80双阳性比例明显升高（ P=0.000）、IL-6水平明显降低（ P=0.000）、IL-10水平明显升高（ P=0.0003）、iNOS mRNA水平明显降低（ P=0.0018）、Arg-1 mRNA水平明显升高（ P=0.001）、组织炎性细胞减少,胶原纤维增多。 结论:Gas6可促使皮肤缺损小鼠巨噬细胞由M1向M2转化,加快缺损皮肤创面愈合。     

CD8 ＋ T淋巴细胞在急性脑梗死后肺炎发病中的作用

目的采用实验室检测结合临床评估手段,探索CD8^＋ T淋巴细胞在急性脑梗死后肺炎发病中的作用。 方法收集2014年12至2016年12月在同济大学附属上海东方医院神经内科和东南大学医学院附属江阴市人民医院神经内科住院治疗的急性脑梗死患者60例为研究对象。在脑梗死发病48 h内收集患者静脉血,分离外周血单核细胞,检测细胞表面CD107a,细胞内干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）。依据入组后住院期间是否发生肺炎将60例病例分为发生肺炎组和未发生肺炎组,采用t检验比较肺炎组混合病毒多肽干预及未干预患者、未发生肺炎组混合病毒多肽干预及未干预患者四者之间的外周血单核细胞层细胞表面CD107a脱颗粒、细胞内IFN-γ和TNF-α表达的差异。 结果在混合病毒多肽刺激CD8^＋ T淋巴细胞后,肺炎组细胞表面CD107a^＋表达低于未发生肺炎组［（10.6±3.7）% vs （15.6±4.3）%）］,细胞内IFN-γ^＋表达低于非肺炎组［（15.3±4.3）% vs （20.0±5.1）%］,TNF-α^＋表达低于未发生肺炎组［（15.1±4.4）% vs （19.3±4.7）%］,差异均具有统计学意义（t=3.192,P=0.004;t=4.127,P<0.001;t=3.621,P<0.001）;在未经混合病毒多肽刺激时,肺炎组细胞内IFN-γ^＋表达低于非肺炎组［（3.0±1.2）% vs （3.6±1.7）%）］,TNF-α^＋表达低于未发生肺炎组［（3.3±1.4）% vs （4.1±2.1）%］,差异也具有统计学意义（t=3.734,P<0.001;t=3.189,P=0.004）。 结论CD8^＋ T淋巴细胞的细胞毒性作用抑制可能是急性脑梗死患者发生肺炎的重要机制之一。     

血浆转化生长因子β_1与肾功能的相关研究

目的:分析血浆转化生长因子β1(TGF-β1)与肾功能间的相关关系。方法:对63例慢性肾功能不全及105例肾功能正常者应用定量酶联免疫吸附试验测定TGF-β1,采用荧光偏振免疫分析法测定同型半胱氨酸,同时测定血清肌酐。结果:肾功能不全组TGF-β1明显高于肾功能正常组犤(6.50±5.89)μg/Lvs(3.88±3.32)μg/L,t=3.82,P=0.000〗。血清肌酐133～339μmol/L组TGF-β1水平最高,血清肌酐≤132μmol/L与血清肌酐≥340μmol/L两组间差异无显著性犤(7.35±6.81)μg/L,(3.88±3.32)μg/L,(4.89±3.56)μg/L,F=11.70,P=0.001〗。结论:血浆TGF-β1与血清肌酐、血红蛋白、同型半胱氨酸相关。TGF-β1可能是导致肾功能损害的重要原因。     

应用TGF-β_1从rhG-CSF动员的外周血采集物中诱导产生CD4~+ CD25~+调节性T细胞

目的探讨在人重组的粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的外周血单个核细胞中诱导产生CD4+CD25+调节性T细胞可行性及其表型和功能。方法收集本院外周血干细胞移植术供者rhG-CSF动员前外周血(PB组)和动员后的外周血采集物(G-PB组)各10例,用免疫磁珠法分选出CD4+CD25?T细胞,并用转化生长因子β1(TGF-β1)进行诱导,分别应用流式细胞术、RT-PCR和细胞增殖、抑制试验测定诱导后细胞的CD25、Foxp3表达和免疫抑制功能,比较2组之间CD4+CD25+T细胞转化率、抑制功能的差异。结果1)G-PB和PB来源的CD4+CD25?T细胞在抗-CD3 M cAb和TGF-β1作用下CD25+分子表达不同,分别为:(77.9±2.3)%和(65.7±4.2)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)TGF-β1诱导产生的CD4+CD25+T细胞高表达Foxp3;3)PB、G-PB来源的TGF-β1诱导产生的CD4+CD25+T细胞具有免疫抑制功能,cpm值分别为:11 739±352和18 732±437(P<0.05)。结论G-CSF动员的外周血可作为CD4+CD25+调节性T细胞的重要来源。     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者血清转化生长因子β1测定的意义

目的 探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)在慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)中的临床意义.方法 采用ELISA法检测38例初治CITP患者治疗前后TGF-β1水平.结果 CITP患者治疗前TGF-β1水平[(132.57±5.17)μg/L]明显高于对照组[(76.81±4.42)μg/L],差异有统计学意义(P<0.01).经治疗缓解后血清TGF-β1水平[(81.26±3.78)μg/L]与治疗前相比明显下降(P<0.01).未缓解者TGF-β1水平[(123.49±4.31)μg/L]与初诊患者无明显差异(P>0.05).TGF-β1水平与血小板数呈负相关(r=-0.342,P<0.05),与巨核细胞数呈正相关(r=0.409,P<0.01).结论 TGF-β1参与了CITP的发病,检测TGF-β1水平变化有助于CITP病情判断,可作为疗效观察的辅助指标.     

无创正压通气联合雾化吸入对慢性阻塞性肺疾病加重期患者的疗效分析

目的分析慢性阻塞性肺疾病加重期（AECOPD）患者行无创正压通气联合布地奈德、异丙托溴铵雾化吸入治疗的临床疗效及患者血清中肺部活化调节趋化因子配体18（CCL-18）和生长分化因子15（GDF-15）表达水平变化情况。 方法将在常州市中医医院门诊就诊的80例AECOPD患者采用随机信封法分为观察组及对照组,每组各40例。对照组采用正压通气治疗,观察组采用无创正压通气联合布地奈德、异丙托溴铵雾化吸入治疗。对两组患者的临床疗效、治疗前及治疗结束后72 h的呼吸困难评分、肺功能、动脉血气分析以及血清中的CCL18和GDF-15水平进行评估,记录两组患者不良反应发生情况。 结果观察组患者的临床有效率较对照组显著提高[80.00%（32/40）vs. 67.50%（27/40）,χ²= 4.036,P= 0.045]。两组患者治疗后的第一秒用力呼气容积（FEV1）[（1.69 ± 0.23）L vs.（1.43 ± 0.19）L]、FEV1占用力肺活量（FVC）百分比[（71 ± 4）% vs.（65 ± 4）%]、最大呼气流速（PEF）[（3.98 ± 0.27）L/s vs.（3.15 ± 0.31）L/s]、呼吸困难评分[（1.02 ± 0.27）分vs.（1.65 ± 0.32）分]、肺泡氧分压（PaO₂）[（87.4 ± 1.8）mmHg vs.（70.2 ± 2.0）mmHg]、动脉血二氧化碳分压（PaCO₂）[（41 ± 5）mmHg vs.（59 ± 3）mmHg]、pH值[（7.43 ± 0.03）vs.（7.33 ± 0.02）]、动脉血氧饱和度（SaO₂）[（95.7 ± 2.1）% vs.（91.2 ± 2.1）%]、CCL-18[（1.13 ± 0.12）μg/L vs.（1.68 ± 0.21）μg/L]及GDF-15[（0.61 ± 0.12）μg/L vs.（1.02 ± 0.22）μg/L]水平比较,差异均有统计学意义（t= 3.968、8.011、9.387、6.870、47.220、19.562、13.519、12.385、10.386、10.347,P均< 0.05）;观察组患者治疗前后FEV1、FEV1/FVC、PEF、呼吸困难评分、PaO₂、PCO₂、pH、SaO₂、CCL-18及GDF-15水平比较,差异均有统计学意义（t= 6.311、21.727、12.276、20.406、68.100、27.028、14.952、24.845、21.361、35.294,P均< 0.05）。两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义[12.50%（5/40）vs. 17.50%（7/40）,χ²= 0.980,P= 0.322]。 结论采用无创正压通气联合布地奈德、异丙托溴铵雾化吸入治疗AECOPD患者可显著提高临床疗效,并改善血清中CCL-18及GDF-15水平。     

免疫性血小板减少症患者的细胞免疫功能研究

目的探讨免疫性血小板减少症（ITP）患者免疫功能状态。 方法选取2016年5月至2017年2月在中国中医科学院西苑医院与北京中医药大学东方医院门诊就诊的ITP确诊患者40例,其中慢性22例（慢性组）、新诊断9例（新诊断组）、持续性9例（持续性组）,24名健康者作为对照（对照组）。应用流式细胞仪分析Th1、Th2、Th17、Treg、Breg细胞的表达。ITP组与对照组比较采用Wilcoxon检验,多组之间的比较采用Kruskal-Wallis检验。 结果ITP患者Th1、Th1/Th2高于健康对照组[（16.88±9.02）% vs（8.83±5.30）%、（10.9±9.08）% vs（4.61±3.13）%],差异具有统计学意义（Z=-3.753,P=0.001;Z=-3.596,P=0.001）,Th17、Breg、Th17/Treg低于对照组[（1.02±0.37）% vs（1.41±0.38）%、（1.35±1.37）% vs（2.07±0.86）%、（1.01±0.37）% vs（0.3±0.05）%],差异具有统计学意义（Z=-3.141,P=0.002;Z=-5.963,P=0.001;Z=-1.693,P=0.009）。新诊断组、持续性组和慢性组3组的Th1、Th1/Th2均高于健康对照组[（16.12±7.72）% vs（13.11±3.83）% vs（18.75±10.38）% vs（8.83±5.3）%、（11.63±8.77）% vs（7.77±3.43）% vs（12.03±10.65）% vs（4.61±3.13）%],差异具有统计学意义（Z=14.83,P=0.002;Z=13.363,P=0.004）;3组的Th17、Breg、Th17/Treg均低于健康对照组[（0.91±0.28）% vs（0.98±0.54）% vs（1.07±0.33）% vs（1.41±0.38）%、（1.77±1.58）% vs（1.14±0.52）% vs（1.26±1.54）% vs（2.07±0.86）%、（0.15±0.07）% vs（0.16±0.09）% vs（0.18±0.01）% vs（0.3±0.05）%],差异具有统计学意义（Z=10.04,P=0.018;Z=35.731,P=0.001;Z=3.200,P=0.030）;3组Th2细胞和Treg细胞与健康对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。3组之间Th1、Th1/Th2、Th17、Breg、Th17/Treg等指标比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论ITP免疫发病机制包括T和B细胞功能紊乱,T细胞表现为Th1/Th2与Th17/Treg失衡。不同分型ITP患者免疫细胞表现差异性不明显。