实时荧光PCR技术在预防性健康检查沙门菌与志贺菌检测中的应用

目的将实时荧光PCR技术应用于食品及公共场所从业人员肛拭标本的沙门菌与志贺菌检测,评价其作为快速检测方法的适用性。方法采集肠道门诊粪便与肛拭标本分别利用实时荧光PCR法与传统培养法进行平行对照实验,验证实时荧光PCR法的灵敏度与特异度;然后将此法与列联表结合应用于从业人员肛拭标本的检测。结果 515份肠道门诊标本的检测结果表明,实时荧光PCR法阳性率高于培养法(P0.05),沙门菌与志贺菌的灵敏度均为100.00%,特异度分别为98.98%、97.02%。检测2013年采集的从业人员肛拭标本21 590份,检出沙门菌18株,阳性率为0.83‰;未检出志贺菌。实时荧光PCR法检出率高于2014年同期传统培养法检出率。结论实时荧光PCR技术有助于提升预防性健康检查中沙门菌与志贺菌的检出率,而且特异度强、灵敏度高,兼具时效性与客观性,适合基层实验室对从业人员进行沙门菌与志贺菌的快速筛查。     

实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌结果分析

目的 了解双重实时荧光PCR快速同时检测从业人员沙门菌和志贺菌的效果.方法 采集从业人员肛拭子样本,用双重实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌,检出的疑似阳性样本按国标法进行培养鉴定.结果 采用双重实时荧光PCR反应体系共检测从业人员39 974人次,荧光PCR检测出沙门菌阳性41份,阳性率1.22‰,培养法检测出31份,阳性率为0.78‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100％,特异性为99.95％.荧光PCR检测出志贺菌10份,阳性率为0.25‰,培养法检测出3份,阳性率为0.08‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100％,特异性为99.98％.从样品处理到检测结果仅需要时间2h～ld.结论 双重实时荧光PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于从业人员体检的快速诊断和肠道传染病的初筛,为肠道传染病的分子流行病学调查提供新的检测手段.     

沙门菌和志贺菌双重实时荧光定量PCR的应用效果评价

目的研究沙门菌和志贺菌双色实时荧光PCR法的应用价值。方法收集2017年8月到2018年4月深圳市西丽人民医院临床肛拭子样本2700份,运用双色实时荧光PCR法检测沙门菌与志贺菌,统计阳性检出率,并与培养法的检测结果进行对比。结果 2700份样本中,培养法检出沙门菌与志贺菌阳性分别为2株、0株,检出率分别为0.07%、0.00%,双色实时荧光PCR法检出沙门菌与志贺菌阳性分别为6株、3株,检出率分别为0.22%、0.11%,双色实时荧光PCR法检出率高于培养法,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论双色实时荧光PCR法检测沙门菌和志贺菌的临床效果显著,具有较高的特异性、敏感度及准确率,值得临床推广与应用。     

实时PCR筛查、培养法确认方案在从业人员肠道致病菌检测的研究

目的:了解与培养法相结合的实时PCR方案在食品及公共场所从业人员肠道致病菌检测中的应用价值。方法:19818份从业人员肛拭子标本用荧光PCR检测,同时用经典分离培养方法进行确认。结果:在19818份标本中,荧光PCR检测出沙门菌阳性6份,阳性率为0.30‰,培养法检测出5份,阳性率为0.25‰,沙门菌荧光PCR检测法的灵敏度为100%,特异性为99.99%。荧光PCR检测出志贺菌20份,阳性率为1.01‰,培养法检测出5份,阳性率为0.25‰,志贺菌荧光PCR法的灵敏度为100%,特异性为99.94%。结论:在基层应用此方案可提高从业人员带菌检出率及检测准确性并大大降低工作强度,且为从采样到出报告全过程的实验室间比对提供良好基础。     

从业人员肠道沙门菌检测结果分析及PCR技术的应用

目的:了解南京市江宁区餐饮和服务行业从业人员肠道沙门氏菌携带和菌型分布情况,为防止肠道传染病的发生提供依据;探讨PCR技术在从业人员肠道沙门菌检测中的应用。方法:采用传统培养法和荧光PCR法对2016年餐饮和服务行业从业人员肛拭子标本进行沙门氏菌检测。结果:检测样品71694份,检出沙门氏菌118株,检出率为0.16%。男性和女性肠道沙门菌检出率分别为0.19%和0.15%,差异无统计学意义(x2=1.68,P0.05);全年中检出阳性菌株数量较多的在三、四季度,以夏秋季节为主;118株沙门阳性菌株共分布为6个血清群(亚群)。其中C2群所占比例最高为29株(24.58%),其余依次为B群25株(21.19%)、C1群21株(17.80%)、E4群20株(16.95%)、D群13株(11.02%)、E1群10株(8.47%);荧光PCR法和传统法结果一致。结论:江宁区从业人员携带的沙门氏菌菌型复杂,人群带菌率与季节密切相关。荧光PCR技术具有较好的特异性和敏感度,可以在从业人员肠道沙门菌检测工作中推广使用。     

双色实时荧光PCR法快速检测感染性腹泻人群中的沙门菌和志贺菌

目的调查沙门菌和志贺菌在南京市腹泻人群中的分布情况,为做好防治工作提供资料。方法对监测哨点医院腹泻患者的粪便样本提取核酸,采用双色实时荧光PCR方法对携带SsaR毒力基因的沙门菌属和携带Ipah毒力基因的志贺菌属进行检测,阳性样本再采用传统分离培养方法进行分离,获得的可疑菌株采用ATB生化鉴定,血清凝集确认血清型,从而了解这2种病原菌在腹泻人群中的检出率和相应菌型的分布情况。结果在检测的1 558份样本中,检出沙门菌25株,检出率为1.60%;志贺菌9株,检出率为0.58%。结论本市2012年-2013年肠道门诊腹泻中,分离志贺菌属以福氏志贺菌为主,宋内志贺菌次之,无鲍氏志贺菌和痢疾志贺菌。沙门菌属以D群和C1群血清型为相对优势血清型,血清型分布较广。     

Real-time PCR技术与传统培养法检测肠道沙门菌和志贺菌的比较

目的：Real-time PCR技术与传统培养法检测肠道致病菌的比较.方法：根据沙门菌、志贺菌的基因保守区设计特异性引物和Taqman探针,建立Real-time PCR技术,检测样本中的沙门菌、志贺菌,与传统培养法检测作对比.结果：Real-time PCR技术显示出特异性强、灵敏度高、操作简便快捷等优点.结论：Real-time PCR技术相比传统培养法更适用于肠道致病菌的检测和筛选.     

多重实时PCR快速同时检测沙门菌和志贺菌

目的 建立改良分子信标，多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法，应用于食源性致病菌的快速诊断。方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因，分别设计一对引物和改良分子信标探针，用同色荧光标记，用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列，设计引物和改良分子信标探针，加入沙门菌检测体系中，建立三重实时PCR一改良分子信标检测体系，应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果 改良分子信标一多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69～93fg/μl。菌液灵敏度为32～64CFU／ml或1～2CFu／PCR反应体系，无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌，均出现特异的荧光信号，两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测，569份沙门菌实时PCR阳性，其中551份沙门菌培养阳性；42份志贺菌实时PCR阳性，其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2h至1d。结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断，伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

环介导技术在感染性腹泻沙门菌检测中的应用与研究

目的建立并应用环介导等温扩增法(LAMP)检测肠道门诊感染性腹泻中的沙门菌。方法通过在线软件Primer Explorer V5设计针对沙门菌的保守区引物,建立LAMP检测方法,采用荧光定量PCR法、LAMP法和分离培养法,对本院2015年肠道门诊137例患者的粪便标本进行检测。对建立的方法进行特异度、灵敏度试验,与荧光定量PCR法和培养法进行比对。结果 137份标本中,荧光定量PCR法检出28份阳性,LAMP法检出28份阳性,分离培养法检出23份阳性。3种方法的检测结果差异无统计学意义(P0.05)。LAMP对6株沙门菌属扩增的结果均为阳性,而对志贺菌等5株致病菌株扩增的结果均为阴性。LAMP检测方法具有良好的灵敏度和特异度。结论 LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,比荧光定量PCR法更适用于基层疾病预防控制机构,有着较为广泛的发展前景。     

实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用

目的 探究实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清分型中的应用。方法 选取2010—2015年无锡市健康从业人员肠道分离得到的144株沙门菌，分别采用传统玻片凝集法和实时荧光PCR法进行血清分型，以前者为金标准，比较两种方法的一致性。结果 144株沙门菌利用传统玻片凝集法均可分型，共鉴定出28个型别。两种方法鉴定结果一致的有134株菌，符合率为93.06%,Kappa值为0.68,具有高度一致性。结论 实时荧光PCR法对沙门菌进行血清分型与玻片凝集法鉴定结果一致性高，且检测时间较短，操作简单；对不常见血清型或存在交叉情况时，建议两种方法联合使用，可提高沙门菌血清分型检测效率。     

实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌

目的建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法,以提高对该菌的检验速度和准确性,为公共卫生,食源性致病菌监测,突发性群体性食物中毒事件提供技术支持。方法采用实时荧光PCR法和培养法对40份不同类食品进行沙门菌和志贺菌的检测,并对分离的菌株进行血清分型和定量检测,比较两种方法的特异性,灵敏度,准确性。结果采用实时荧光PCR法检测40份样本,其中8份沙门菌核酸阳性,阳性率20%;采用培养法检测这40份样本,4份样品分离出沙门菌,阳性率10%,且4份样品经核酸检测均为阳性,32份核酸阴性样本采用培养法检测,均未分离到沙门菌和志贺菌。结论实时荧光PCR法结合传统分离培养法适宜食品中沙门菌,志贺菌的快速筛查鉴定及食物中毒等突发事件的快速诊断。     

实时荧光PCR检测志贺菌特异基因ipaH

目的：建立一种灵敏、快速检测志贺菌的实时荧光PCR方法,研究志贺菌在腹泻病人中的感染情况。方法：针对志贺菌特异性基因ipaH设计引物、探针,应用培养分离的志贺菌进行验证,同时检测360例临床标本并与培养法进行对照。结果：应用实时荧光PCR方法,10株志贺菌检测结果均为阳性,10株非志贺菌结果均为阴性;检测灵敏度达到4 cfu/test。360例临床标本中实时荧光PCR方法检测出29例阳性,培养法检测出12例阳性。结论：实时荧光PCR法检测志贺菌具有灵敏度高、快速方便的特点,可用于检测腹泻病人志贺菌感染。     

荧光定量PCR技术检测肠道志贺菌的临床应用

目的:比较荧光定量PCR技术和传统培养方法检测肠道志贺菌的效果。方法:利用中山大学达安基因股份有限公司研制开发的志贺菌核酸检测试剂盒,检测我院诊治的腹泻病人332份大便中的志贺菌核酸,并以传统的沙门志贺菌(SS)培养基进行细菌培养的结果作为对比。结果:332份腹泻病人大便标本,用培养方法检测,志贺菌阳性59例;用志贺菌核酸试剂盒检测有107例阳性。荧光定量PCR检测方法与培养方法对比,敏感度为100.00%,特异性为82.43%。结论:荧光定量PCR技术敏感度高、特异性强、适合于临床大标本量的检测。     

服务行业从业人员肠道致病菌检测结果分析

目的:了解和分析三门县2004~2007年26318份饮食和公共场所从业人员肠道致病菌携带情况及菌型分布。方法:对从业人员粪便及肛拭标本进行肠道菌增菌、分离、生化及血清分型鉴定。结果:合计检测标本26318份,共检出阳性菌72株,总检出率0.27%;其中沙门菌69株,检出率0.26%;志贺菌2株,检出率0.008%;霍乱弧菌1株,检出率0.004%。69株沙门菌经生化和血清学鉴定分为9个血清群12个血清型,另有5株菌型未定,其中B群德尔卑沙门菌共检出37株,占沙门菌检出率53.6%,排在第一位;其次为D3群吉韦沙门菌检出6株,占沙门菌检出率8.7%;第三位的E1群纽兰沙门菌检出5株,占沙门菌检出率7.3%。结论:三门县饮食和公共场所从业人员沙门菌检出率最高,应加强健康体检,及时调离沙门氏菌带菌者。     

上海市奉贤区服务行业从业人员肠道致病菌检测结果分析

目的了解和分析上海市奉贤区2004-2008年饮食服务和公共场所从业人员肠道致病菌携带情况及菌型分布。方法对从业人员肛拭标本进行肠道菌检测及血清分型鉴定。结果共检测标本154 097份,检出阳性菌株545份,总检出率0．35％。其中检出沙门菌537株,志贺菌8株。537株沙门菌经生化及血清学鉴定分为6个血清群46个血清型。其中E群占的比例为38．79％。最常见的血清型依次为伦敦,山夫登堡,德比。结论奉贤区饮食服务和公共场所从业人员沙门菌检出率较高,应加强健康检查,及时调离阳性者。     

应用LAMP同时快速检测沙门菌和志贺菌的效果评价

目的探讨环介导等温扩增（LAMP）方法同时快速检测沙门菌和志贺菌的应用价值。方法通过通用增菌培养,应用LAMP方法和分离培养法分别对76份食堂从业人员粪便标本进行沙门菌和志贺菌检测。结果LAMP方法检出1份标本沙门菌阳性,阳性率为1．32％;分离培养法检出1份都柏林沙门菌,阳性率为1．32％;2种方法的检测结果一致。LAMP方法可在3h内检出沙门菌、志贺菌,而分离培养法需要3-5d,鼠伤寒沙门菌LAMP方法的灵敏度为170CFU／ml,福氏志贺菌LAMP方法的灵敏度为190CFU／ml,与常见的食源性致病菌均无交叉反应。结论与分离培养法相比,LAMP方法特异性高,灵敏度高,不需要特殊仪器,能够在简易的实验条件下,快速、简便地同时检测沙门菌和志贺菌,LAMP方法适用于基层疾病控制实验室开展沙门菌和志贺菌的快速筛查检测。     

成都市食品和公共场所从业人员肠道沙门菌带菌状况调查分析

目的了解成都市食品和公共场所从业人员肠道沙门菌带菌状况,为加强卫生管理、防控肠道传染病提供科学依据。方法对2016-01/09成都市疾病预防控制中心15 613名食品和公共场所从业人员预防性健康检查肛拭样品中沙门菌的检出结果进行回顾性分析。结果检出沙门菌6株,共5个血清型,总检出率0.38‰;食品从业人员检出率0.35‰,公共场所从业人员检出率0.49‰,二者差异无统计学意义(P0.05);男性检出率0.29‰,女性检出率0.45‰,二者差异无统计学意义(P0.05)。结论成都市食品和公共场所从业人员肠道沙门菌阳性携带率较低,但应考虑到从业人员体检前预防性用药及沙门菌传统检验方法检出率相对较低的因素;为防止食物中毒和肠道传染病的发生,应加强对食品、公共场所从业人员的肠道致病菌携带状况检查和卫生知识培训。     

实时荧光PCR检测沙门菌特异基因

目的：建立一种灵敏、快速检测沙门菌的实时荧光PCR方法.方法：针对沙门菌特异性基因invA设计引物、探针,在实时荧光PCR仪上进行扩增、检测和结果分析.结果：应用该实时荧光PCR方法,30株沙门菌检测结果均为阳性,19株非沙门菌结果均为阴性,96个肛门拭子样本增菌前后的PCR结果一致;检测灵敏度达到4 cfu/test,定量结果与培养计数无显著差异.结论：该方法检测沙门菌具有灵敏度高、快速方便的特点,且可用于定量检测.     

实时荧光定量PCR在预防性健康体检沙门菌快速筛查中的应用效果

目的探讨real-time PCR在从业人员沙门菌快速筛查中的应用效果。方法采集从业人员肛拭子样本,分别用real-time PCR方法及分离培养法对沙门菌进行检测,并比较检测结果。结果以分离培养法为金标准,real-time PCR进行筛检试验,结果灵敏度为100.0%,特异度为98.1%,阳性似然比为51.63,阴性似然比为0,符合率为98.2%,Kappa值为0.87,阳性预测值为78.1%,阴性预测值为100.0%。从成本效益分析来看,real-time PCR虽在检测成本上略高于分离培养法,但可节省大量的人力,缩短健康证办证时间,提高办证效率。结论 real-time PCR方法结果判读客观性强,且灵敏度高、特异性强,省时省力,可用于从业人员沙门菌的快速筛查中。     

服务行业从业人员肠道致病菌检测结果分析

目的：了解和分析杭州市下城区饮食和公共场所从业人员肠道致病菌携带情况及菌型分布状况。方法：对从业人员粪便及肛拭标本进行肠道菌增菌、分离、生化及血清学分型鉴定。结果：合计检测标本32914份，共检出阳性菌129份，总检出率为0．39％，其中检出沙门菌114株，占总检出率的88．4％；志贺菌11株，占总检出率的8．5％；霍乱弧菌4株，占总检出率的3．1％。114株沙门菌经生化和血清学鉴定分为7个血清群21个血清型，其中B群占33．3％，最常见的血清型依次为阿哥纳、山夫登堡和伦敦沙门菌。结论：杭州市下城区饮食和公共场所从业人员沙门菌检出率较高，应加强健康检查，及时调离阳性者。