低表达DJ-1调控PI3K/AKT通路对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨低表达DJ-1对肺癌细胞增殖凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:采用Western blot检测肺癌细胞系中DJ-1蛋白的表达;以脂质体法转染干扰SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达后,MTT法检测细胞的增殖变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达水平;将PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理SK-MES-1细胞48 h后,MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达。结果:与正常肺上皮BEAS-2B细胞相比,肺腺癌A549细胞和肺鳞癌SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的相对表达量均显著升高,且SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达量高于A549细胞,差异均有统计学意义（P＜0.05）。转染后siRNA DJ-1组细胞中DJ-1蛋白的表达量明显低于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,转染24 h后siRNA DJ-1组细胞的吸光值（OD值）变化不显著（P＞0.05）,而转染48 h和72 h后细胞的OD值明显降低（P＜0.05）;转染48 h后,与对照组相比,siRNA DJ-1组细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,p-AKT/AKT值显著降低（P＜0.05）。SK-MES-1细胞经抑制剂LY294002处理48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与下调DJ-1表达的结果相一致。结论:DJ-1在肺癌细胞中高表达,下调其表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-195-5p靶向FGF2 抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞恶性生物学行为

目的：探讨miR-195-5p 通过靶向FGF2 抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的分子机制。方法：HEC-1B细胞培养与转染完成后分为4 组：HEC-1B组、miR-195-5p mimic组、pLV-FGF2 组和miR-195-5p+FGF2 组。qRT-PCR检测细胞miR-195-5p 和FGF2 mRNA水平,荧光素酶实验验证miR-195-5p 与FGF2 的靶向关系,Western blotting 检测FGF2 表达水平,CCK-8 法检测HEC-1B细胞增殖水平,流式细胞术检测HEC-1B细胞凋亡率,Transwell 实验检测HEC-1B细胞侵袭能力,划痕实验检测HEC-1B细胞迁移能力。结果：与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组miR-195-5p 表达升高、FGF2 mRNA水平下降(均P< 0.01);miR-195-5p 可直接靶向FGF2。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组FGF2 的蛋白表达水平下降,pLV- FGF2 组FGF2 的蛋白水平明显上升,且miR-195-5p+FGF2 组FGF2 的蛋白表达水平低于pLV- FGF2 组(均P< 0.01)。miR-195-5p mimic 组细胞增殖水平低于HEC-1B组,pLV-FGF2 组细胞增殖水平高于HEC-1B组(均P< 0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组细胞凋亡率增加,pLV- FGF2 组细胞凋亡率降低,且miR-195-5p+ FGF2 组细胞凋亡率高于pLV- FGF2 组(均P< 0.01)。与HEC-1B组相比,miR-195-5p mimic 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降,pLV- FGF2 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率上升,且miR-195-5p+FGF2 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于pLV- FGF2 组(均P<0.01)。结论: miR-195-5p 通过靶向FGF2 抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞的增殖、侵袭和迁移并促进细胞凋亡,其作为子宫内膜癌的治疗靶点。     

lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌T24细胞生物学特性的影响

目的探究lncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌组织中的表达和对膀胱癌T24细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响。方法QPCR检测膀胱癌组织和细胞系中lncRNA ZFPM2-AS1的表达;将阴性对照siRNA和lncRNA ZFPM2-AS1 siRNA转染至膀胱癌T24细胞中,qPCR检测转染后细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达,MTT检测细胞增殖,克隆形成检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果膀胱癌组织中lncRNA ZFPM2-AS1的水平高于癌旁组织;与正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1相比,T24、J82、56373种膀胱癌细胞株中lncRNA ZFPM2-AS1表达水平均高于正常膀胱上皮细胞,且差异有统计学意义(P<0.01)。与沉默对照组相比,沉默ZFPM2-AS1组T24细胞中lncRNA ZFPM2-AS1表达显著降低(P<0.01),细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01),细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin及其下游蛋白c-Myc和Cyclin D1表达显著降低,p-β-catenin蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论LncRNA ZFPM2-AS1在膀胱癌中高表达,沉默LncRNA ZFPM2-AS1能够抑制膀胱癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞的恶性生物学行为

目的：探索miR-149-3p 对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其机制。方法: HeLa 细胞随机分为5组：未转染(HeLa)组、mimic-scramble 组、miR-149 mimic 组、FOXP3 过表达(pc-FOXP3)组、共转染(mimic+pc-FOXP3)组,Mimicscramble为miR-149 mimic 的阴性对照随机序列。荧光素酶实验验证miR-149-3p 与FOXP3 的靶向结合关系。实时定量PCR(qRT-PCR)检测HeLa 细胞中miR-149-3p 表达及FOXP3 的mRNA水平,Western blotting 检测FOXP3 的蛋白水平。CCK-8 检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell 实验检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。结果: 荧光素酶实验显示miR-149-3p可靶向结合FOXP3。与未转染组相比miR-149 mimic 组miR-149-3p 表达升高、FOXP3 mRNA水平下降(P<0.01),而且miR-149mimic 组FOXP3 蛋白水平低于未转染组(P<0.01)、pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平降低(P<0.01)。miR-149 mimic 组细HeLa 胞增殖倍数低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组细胞增殖倍数高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组细胞增殖倍数下降(P<0.01);miR-149 mimic 组HeLa 细胞凋亡率高于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组细胞凋亡率低于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3组细胞凋亡率上升(P<0.01);miR-149 mimic 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于未转染组(P<0.01),pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率高于未转染组(P<0.01),与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降(P<0.01)。结论：miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移,同时促进细胞凋亡。     

过表达miR-125b对子宫内膜癌HEC-1B细胞周期、增殖和凋亡的影响及其可能的机制

探讨miR-125b过表达对子宫内膜癌（endometrial carcinoma, EC）HEC-1B细胞增殖及凋亡的影响及其可能的机制。方法：收集2012年11月至2013年11月间四川省妇幼保健医院收治的30例子宫内膜样腺癌患者肿瘤及其癌旁组织标本,Real-time PCR检测肿瘤组织及培养细胞中miR-125b的表达水平。脂质体转染法分别将miR-125b模拟片段（mimic）与无关序列（scramble mimic）转染入HEC-1B细胞作为miR-125b组和对照组,以野生型HEC-1B细胞为未处理组。流式细胞术和CCK-8法分别检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞周期、凋亡和增殖的影响,Western blotting检测过表达miR-125b对HEC-1B细胞中PIK3CD、p-AKT以及总AKT表达的影响。结果：人EC组织中miR-125b表达量较癌旁组织显著下调（P<005）。HEC-1B细胞转染mimic片段后,其miR-125b的表达上调820倍以上。转染48 h后,miR-125b组细胞的增殖能力显著低于对照组和未处理组（0.53±0.06 vs 0.82±0.07、0.89±0.08,P<0.01）、细胞凋亡率显著升高[（21.5±3.2）% vs （142±2.3）%、（13.5±2.1）%,均P＜0.01],并且miR-125b组细胞周期阻滞于G1期;miR-125b组HEC-1B细胞中PIK3CD及其下游p-AKT蛋白表达较对照组和未处理组显著降低（均P<0.01）,而总AKT表达无明显变化（均P＞0.05）。结论：miR-125b在EC组织中普遍低表达,其在HEC-1B细胞中过表达能够明显抑制细胞增殖和周期进程,促进细胞早期凋亡,这可能与miR-125过表达抑制细胞内PI3K/AKT信号通路有关。     

RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响#br#

目的探讨RNA干扰UHRF1基因表达对脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。 方法采用脂质Attractene reagent将靶向沉默UHRF1的质粒LV UHRF1 shRNA和阴性对照质粒LV scramble shRNA分别转染至U251细胞（LV UHRF1 shRNA组和LV scramble shRNA组）,以仅转染脂质体的细胞为对照组;采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测各组转染48 h后的UHRF1 mRNA水平,采用MTT法检测各组转染24、48、72 h的增殖情况,BrdU染色法检测转染12、24、48、72 h后的BrdU阳性率,Annexin V FITC／PI双染流式细胞术检测转染48、72 h后的凋亡率,Western blotting检测转染72 h后的凋亡相关蛋白（Bax、caspase 3和Bcl 2）水平。 结果QPCR检测结果显示对照组、LV scramble shRNA组和LV UHRF1 shRNA组的UHRF1水平分别为1098±0136、1127±0193和0309±0073,LV UHRF1 shRNA组的UHRF1水平低于对照组和LV scramble shRNA组（P＜005）。与对照组和LV scramble shRNA组相比,LV UHRF1 shRNA组在以上时间点细胞增殖率和BrdU阳性率均降低,差异有统计学意义（P＜005）;LV UHRF1 shRNA组的凋亡率为（2571±187）％,均高于对照组的（773±066）％和（786±059）％,差异有统计学意义（P＜005）;Western blotting检测结果显示与对照组和LV scramble shRNA组相比,LV scramble shRNA组的Bax、caspase 3水平升高,而Bcl 2水平降低,差异有统计学意义（P＜005）;对照组和LV scramble shRNA组以上指标的差异均无统计学意义（P＞005）。 结论在U251细胞中的下调UHRF1可抑制增殖并诱导凋亡,UHRF1发挥类似癌基因的作用,可作为脑胶质瘤的治疗的候选基因。     

miR-141-3p靶向TGF- β2 对人前列腺癌C4-2B 细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-141-3p 与转化生长因子-β2(transforming growth factor β2, TGF-β2)基因的靶向关系及其对人前列腺癌细胞株C4-2B 恶性生物学行为的影响。方法：转染miR-141-3p mimic 后,qRT-PCR 检测C4-2B 细胞miR-141-3p 和TGF-β2mRNA的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p 与TGF-β2 的靶向关系。miR-141-3p mimic 与TGF-β2 过表达载体单独或共转染C4-2B细胞后, Western blotting 检测转染C4-2B细胞中TGF-β2 蛋白的表达水平,Hoechst33258 染色检测细胞凋亡情况,Transwell 实验检测各组细胞的侵袭能力。结果：miR-141-3p mimic转染后,C4-2B细胞miR-141-3p 的相对表达水平明显提高、TGF-β2 mRNA的相对表达水平明显降低（均P<0.01）。miR-141-3p mimic 与野生型报告载体共转后,荧光素酶的活性显著降低（P<0.01）;miR-141-3p mimic 与突变型报告载体共转后,荧光素酶的活性没有明显变化（P>0.05）;miR-141-3p mimic 添加到pc-TGF-β2 转染的C4-2B细胞后,细胞增殖倍数明显降低、凋亡细胞数目显著增加、细胞侵袭能力显著降低（均P<0.01）。结论：miR-141-3p 与TGF-β2 存在靶向关系,且两者协同影响人前列腺癌C4-2B细胞增殖、侵袭能力并诱导其凋亡。     

下调UHRF1的表达在抑制肝癌进展中的作用

目的 探讨UHRF1的异常表达在肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）进展中的作用机制。方法 采用RT-PCR和Western blot法检测UHRF1在20例HCC标本中的mRNA和蛋白表达水平, Western blot法检测不同转移潜能的肝癌细胞HepG2、SMMC7721、MHCC97L和HCCLM3中的UHRF1 的表达水平;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,MTT法检测细胞增殖,Western blot 法检测BAX和BCL-2表达水平的改变,流式细胞术检测HCCLM3细胞周期和细胞凋亡的变化。结 果 UHRF1在肺癌组织中的表达水平较癌旁组织显著上调（P<0.05）,随着肝癌细胞转移潜能升高而UHRF1表达水平也依次升高（P<0.01）;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,HCCLM3细胞生长速度明显下降（P＜0.05）,HCCLM3细胞的促凋亡蛋白BAX表达水平明显上升,而抑凋亡蛋白BCL-2表达水平明显下降;UHRF1-siRNA干扰HCCLM3细胞48 h时,细胞周期分布无明显影响（P＞0.05）;但UHRF1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 UHRF1基因在肝癌组织中表达上调,下调UHRF1的表达能够抑制肝癌进展,可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。     

MiR-124对食管癌细胞增殖和侵袭的作用及机制研究

摘 要：［目的］检测miR-124及其靶基因CREB1在食管癌组织中的表达情况,探讨miR-124/CREB1在人食管鳞癌细胞KYSE-150体外增殖和侵袭中的作用及机制。［方法］ 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测32例食管鳞状细胞癌(ESCC)组织及周围正常组织的miR-124和CREB1表达。Targetscan分析miR-124与CREB1的结合位点,荧光素酶基因报告实验验证miR-124 与CREB1是否结合;过表达或抑制miR-124后,采用Western blot检测KYSE-150细胞中CREB1的表达;在KYSE-150细胞中转染miR-124 mimic为miR-124 mimic或转染miR-124抑制剂为anti-mi-R124,转染后24h、48h、72h收集细胞计数,检测细胞增殖情况;转染24h后通过体外侵袭实验检测过表达或抑制miR-124对KYSE-150细胞侵袭的影响。在KYSE-150细胞中转染CREB1 siRNA后24h、48h、72h收集细胞计数,检测细胞增殖情况;转染CREB1 siRNA 24h后检测KYSE-150细胞侵袭能力的变化;在KYSE-150细胞中共同转染anti-miR-124和siCREB1,检测细胞增殖和侵袭能力变化情况。［结果］ MiR-124在食管癌组织表达降低(P<0.001),而CREB1在食管癌组织中表达升高(P<0.001);CREB1是miR-124下游分子,过表达miR-124抑制KYSE-150细胞中CREB1的表达(P=0.016),抑制miR-124促进KYSE-150细胞中CREB1的表达(P<0.001)。在食管癌细胞中,过表达miR-124抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05),抑制miR-124促进KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05);敲低CREB1抑制KYSE-150细胞的增殖和侵袭(P均<0.05)。敲低CREB1可抑制anti-miR-124对KYSE-150细胞增殖和侵袭的促进作用(P均<0.05)。［结论］过表达miR-124通过靶向CREB1抑制食管癌细胞的增殖和侵袭。     

miR-198靶向MAPK1调控宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和侵袭

目的 探究miR-198对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制。方法 用miR-198 mimic转染HeLa细胞,qRT-PCR检测miR-198和丝裂原活化蛋白激酶1 （Mitogen-activated protein kinase1, MAPK1）的mRNA水平;荧光素酶实验检测miR-198和MAPK1的靶向关系;用pcDNA3.0-MAPK1（pc-MAPK1）和miR-198 mimic转染细胞,CCK-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测蛋白的表达。结果 miR-198 mimic转染细胞后,miR-198表达水平明显升高,MAPK1 mRNA表达水平明显降低;荧光素酶报告实验表明miR-198序列上存在MAPK1结合位点;miR-198过表达能显著降低宫颈癌细胞增殖倍数、诱导细胞凋亡,同时还能明显降低HeLa细胞侵袭能力;此外,miR-198 mimic能显著抑制MAPK1下游基因核糖体S6激酶2（Ribosomal S6 kinase 2, RSK2）、c-Myc和c-fos的蛋白表达;pc-MAPK1能明显减弱miR-198 mimic对HeLa细胞增殖、凋亡、侵袭及对MAPK1下游蛋白表达的调控作用。结论 miR-198过表达能通过靶向MAPK1抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力并诱导细胞凋亡。     

微小RNA-106 a靶向PTEN通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用

目的 探讨微小RNA-106a(miR-106a)靶向磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)通路对胃癌细胞的增殖与凋亡的调控作用.方法 对数生长期的胃癌BGC-823细胞为三组:miR-106a组、对照组与空白组,分别转染miR-106a mimic、miR-NC与等体系的磷酸盐缓冲液.采用CCK法检测细胞增殖,流式细胞仪...     

miR-186通过下调垂体瘤转化基因1的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖侵袭并诱导其凋亡

目的:探讨miR-186对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法:实时荧光定量PCR检测骨肉瘤细胞HOS、U2-OS、Saos-2及成骨细胞NHOst中miR-186表达,并运用人工合成的miR-186模拟片段及对照scramble mimic转染至人骨肉瘤HOS及U2-OS细胞内,运用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-186的表达水平;分别运用CCK-8法、流式细胞检测技术及Transwall体外侵袭实验检测过表达miR-186对HOS及U2-OS细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响;运用Westem blotting及实时荧光定量PCR检测miR-186过表达对细胞中垂体瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的蛋白及mRNA表达水平的影响.结果:骨肉瘤细胞中miR-186呈现低表达;转染人工合成的miR-186片段可上调HOS及U2-OS细胞中miR-186的表达;miR-186过表达组细胞的增殖能力较scramble组明显下降(P＜0.01),转染组HOS[(16.9±2.1)％ vs(10.4±1.6)％,P＜0.05]及U2-OS[(22.6±2.9)％ vs (14.1±2.2)％,P＜0.05]细胞的凋亡比例明显高于scramble组,转染组HOS及U2-OS细胞的穿膜数明显低于scramble组(P＜0.01);转染组细胞中PTTG1的蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P＜0.01),而scramble组无明显变化(P＞0.05);结论:miR-186能够抑制骨肉瘤细胞的增殖及侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PTTG1表达相关.     

siRNA沉默STMN1基因抑制肺癌细胞增殖与侵袭的机制探讨

目的:观察下调肺癌细胞中STMN1基因的表达对癌细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:以人正常肺细胞MRC-5作为对照,通过Western bloting检测人肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中STMN1的蛋白表达;STMN1的siRNA转染A549细胞为实验组,另设空白组和阴性组,转染48 h后,Western bloting检测转染效果;CCK8法及Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力;Western bloting检测增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）的蛋白表达。结果:STMN1在肺癌A549、SPC-A1和H322细胞中的蛋白表达均显著高于在MRC-5细胞中的表达（P<0.05）,选择A549细胞为研究对象。转染STMN1 siRNA的A549细胞STMN1的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）。与空白组比较,实验组细胞增殖及侵袭能力均显著降低,PCNA、MMP-2、PI3K、p-AKT蛋白表达均显著降低（P<0.05）。结论:siRNA沉默STMN1的表达通过下调PI3K/AKT信号通路降低肺癌细胞增殖及侵袭能力。     

Exogenous expression of UHRF1 promotes proliferation and metastasis of breast cancer cells

In the present study, we investigated the role of UHRF1 (ubiquitin-like protein containing PHD and RING finger domains 1) in proliferation, invasion and migration of breast cancer cells, and the potential mechanisms were also explored. Cell proliferation was examined by 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) assay; cell cycle distribution and apoptosis were evaluated using flow cytometry; protein expression was determined by western blotting; angiogenesis of xenografts was assessed by microvessel density (MVD); cell invasion was measured using transwell chamber; cell migration was determined by wound scratching assay. Our results demonstrated that UHRF1 transfection conferred serum independence to MDA-MB-231 cells, G1 phase shortage and apoptosis suppression, accompanied with an increased expression of cyclin D1 and decreased expression of Bax. Significant pro-invasion and pro-migration activity was observed, with no obvious effect on the expression of PTEN and maspin. Co-expression of the UHRF1/PTEN or UHRF1/maspin degraded the role of UHRF1 in regulating invasion and migration. UHRF1 induced growth of MDA-MB-231 cells by promoting tumor vessel formation in vivo. In conclusion, UHRF1 promoted the proliferation of breast cancer cells by apoptosis inhibition, G1 phase shortage and promotion of tumor vessel formation, and pro-invasion and pro-migration activity was also observed by interacting with PTEN and maspin. Thus, UHRF1 may serve as a new therapy target for breast cancer.     

MTSS1在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞增殖凋亡的作用研究

目的 探讨肿瘤转移抑制候选基因(MTSS1)在胃癌组织中的表达水平及对胃癌细胞增殖凋亡的作用.方法 Western Blot检测胃癌组织及对应的癌旁组织中MTSS1蛋白表达水平.通过细胞转染的方法 将过表达载体pEGFP-N1-MTSS1、空载体pEGFP-N1转染至胃癌细胞中,MTT法检测转染48 h的细胞增殖情况,流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡情况,Western Blot检测转染48 h细胞中Cleaved Caspase-3、HES1、NICD1、NICD2蛋白表达水平.胃癌细胞与NOTCH信号通路抑制剂S2188作用48 h后,检测细胞凋亡及细胞中Cleaved Caspase-3、HES1、NICD1、NICD2蛋白表达水平.结果 胃癌组织中MTSS1蛋白水平明显低于癌旁组织(P=0.000);pEGFP-N1-MTSS1组细胞存活率明显低于pEGFP-N1组(P=0.000);pEGFP-N1-MTSS1组细胞凋亡率明显高于pEGFP-N1组(P=0.000);pEGFP-N1-MTSS1组细胞中Cleaved Caspase-3、HES1、NICD1、NICD2表达水平与pEGFP-N1组比较,差异均有统计学意义(P=0.000);NOTCH信号通路抑制剂S2188作用胃癌细胞48 h后,抑制剂组的细胞凋亡率明显高于对照组(P=0.000),两组的Cleaved Caspase-3、HES1、NICD1、NICD2蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(P=0.000).结论 MTSS1在胃癌组织中表达下调.MTSS1能促进胃癌细胞凋亡,抑制胃癌细胞增殖,作用机制与NOTCH信号通路有关.     

Knockdown of UHRF1 by Lentivirus-mediated shRNA Inhibits Ovarian Cancer Cell Growth

Human UHRF1 (ubiquitin-like PHD and RING finger domain-containing 1) has been reported to beover-expressed in many cancers, but its role in ovarian cancer remains elusive. Here, we determined whetherknockdown of UHRF1 by lentivirus-mediated shRNA could inhibit ovarian cancer cell growth. Lentivirusmediatedshort hairpin RNAs (lv-shRNAs-UHRF1) were designed to trigger the gene silencing RNA interference(RNAi) pathway. The efficiency of lentivirus-mediated shRNA infection into HO-8910 and HO-8910 PM cells wasdetermined using fluorescence microscopy to observe lentivirus-mediated GFP expressionand was confirmed to beover 80 percent. UHRF1 expression in infected HO-8910 and HO-8910 PM was evaluated by real-time PCR andWestern blot analysis. The Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay was used to measure cell viability; flow cytometryand Hoechst 33342 assay was applied to measure cell cycle arrest and apoptosis. Cell invasion was assessedusing transwell chambers. Our results demonstrated that the loss of UHRF1 promoted HO-8910 and HO-8910PM cell apoptosis, while inhibiting cell proliferation. In addition, UHRF1 knockdown significantly inhibitedthe invasion of human ovarian cancer cells. In the present study, we also showed that depleting HO-8910 cellsof UHRF1 caused activation of the DNA damage response pathway, with the cell cycle arrested in G2/M-phase.The DNA damage response in cells depleted of UHRF1 was illustrated by phosphorylation of CHK (checkpointkinase) 2 on Thr68, phosphorylation of CDC25 (cell division control 25) on Ser 216 and phosphorylation ofCDK1 (cyclin-dependent kinase 1) on Tyr 15.     

Survivin基因调控Notch1信号通路抑制骨髓瘤细胞增殖及侵袭的机制

目的 探讨Survivin基因调控Notch1信号通路对骨髓瘤细胞增殖及侵袭的影响.方法 RT-PCR检测42例骨髓瘤组织及正常骨髓组织中Survivin基因的mRNA表达;NC-siRNA和Survivin-siRNA转染人骨髓瘤细胞株RPMI8226,Western blot检测48 h后各组细胞中Survivin蛋白的表达;台盼蓝拒染法和Transwell小室分别检测细胞活率及侵袭能力;Western blot检测MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白的表达.结果 Survivin基因在骨髓瘤组织中的mRNA表达显著高于正常骨髓组织(P﹤0.01);转染siRNA后RPMI8226细胞中Survivin蛋白的表达显著降低(P﹤0.01);与对照组及NC-siRNA组的比较,Survivin-siRNA组细胞活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达均显著降低(P﹤0.01).结论 RNA干扰Survivin基因的表达可降低RPMI8226细胞活率及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关.