3种方法鉴定单核细胞增生李斯特菌比较

[目的]采用分子生物学方法(accuprobe和PCR)对传统方法经ATB鉴定为单核细胞增生李斯特菌和疑为单核细胞增生李斯特菌的菌株进行鉴定比较,建立灵敏,快速,可靠的鉴定方法。[方法]对经传统方法结合ATB鉴定分离的菌株(单核细胞增生李斯特菌)分别采用accuprobe和PCR试剂盒进行鉴定比较。[结果]对10株经传统方法结合ATB鉴定的Lm菌(包括疑似Lm菌)经PCR鉴定,3株为阳性,7株为阴性,与accuprobe法鉴定结果一致。[结论]分子生物学方法检测单核细胞增生李斯特菌是对传统方法的有效补充,可用于大批量样品中致病菌的快速鉴定     

单核细胞增生李斯特菌检测技术研究进展

单核细胞增生李斯特菌是一种人畜共患病的病原菌。本文对当前检测方法：传统分离技术、显色培养基鉴定技术、数值分类鉴定与新型计数技术、免疫检测技术以及分子检测技术作了简要概述；指出了单核细胞增生李斯特菌传统检测耗时，免疫学检测单克隆抗体制备困难，分子检测易产生假阴性和假阳性等若干问题；最后对检测技术未来的发展作了展望。     

显色培养基在单核细胞增生李斯特菌快速检测中的应用研究

目的:研究显色培养基对单核细胞增生李斯特菌的检测效果,探讨建立新型快速检测方法。方法:检测按国标GB4789-33程序进行。结果:人工污染样品和实际样品检测中,显色培养基CHROM agar L isteria和HKL isteria与传统平板OXA和MMA可以达到相同的检测限和灵敏度,且具有更高的特异性。结论:用显色培养基检测单核细胞增生李斯特菌是一种新途径,可大大提高检测效率。     

不同方法检测食品中单核细胞增生李斯特菌比较

单核细胞增生李斯特菌广泛分布于自然界,污染肉禽类、乳类、鱼贝类及蔬菜等食品引发食物中毒。新生儿、高龄孕妇和免疫力低下者易感染,主要引起脑膜炎和败血症,死亡率较高。美国、英国、加拿大等国多次爆发由该菌污染空心菜、奶酪等引起食物中毒,病死率达30％。     

单核细胞增生李斯特菌研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocyto-genes)是一种人畜共患病的病原菌。李斯特菌属内共有6种菌:单增李斯特菌(L.monocytogenes)、绵羊李斯特菌(L.ivanovii)、西尔李斯特菌(L.seeligeri)、英诺克李斯特菌(L.innocua)、威尔李斯特菌(L.welshimeri)和格式李斯特菌(L.grayi);其中单增     

单核细胞增生李斯特菌研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Lm)是一种重要的食源性致病菌,全国各地都对Lm在食品中的污染情况进行调查,建立简单快速、具有良好的稳定性和重复性、灵敏度高、特异性强的检测方法显得非常重要。本文就Lm的病原学、流行病学及检测方法等的研究进展进行介绍。     

高特异性单核细胞增生李斯特菌显色培养基性能研究

目的研究不同分离培养基对纯菌及实际样品中单核细胞增生李斯特菌的分离效果。方法根据GB 4789.30—2010单核细胞增生李斯特菌检验方法,比较了本实验室制备的单核细胞增生李斯特菌显色培养基(L.MONO)、PALCAM及4种商品化显色培养基(CHROMagar、厂家Ⅰ、厂家Ⅱ和厂家Ⅲ)的性能。结果 6种培养基的选择性之间差异有统计学意义(P0.01),L.MONO和Ⅲ最好,其次为CHROMagar和厂家Ⅰ,厂家Ⅱ和PALCAM较差。49份样品阳性率为28.57%,L.MONO和厂家Ⅲ检出阳性符合率为100%,无假阳性和假阴性;CHROMagar阳性符合率为92.9%,厂家Ⅰ和厂家Ⅱ阳性符合率最差,PALCAM阳性样品完全检出,但有太多假阳性。结论 L.MONO性能达到甚至更优于CHROMagar,采用特异性更高的水不溶性显色剂可有效避免非特异性菌β葡萄糖苷酶的表达及脂肪沉淀环扩散引起的干扰和假阳性,也能有效解决现有显色培养基制备中配套试剂混匀困难的问题,是一种更为高效的单核细胞增生李斯特菌显色培养基。     

进口三文鱼单核细胞增生李斯特菌污染检测

目的对2003~2006年由北京口岸挪威进口的三文鱼进行单核细胞增生李斯特菌污染情况监控,并对分离的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型。方法采用美国食品药品管理局颁布的检测方法对单核细胞增生李斯特菌进行分离和血清分型。结果挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的检出率为1.2%~6.3%,在2003~2006年呈下降趋势;血清分型结果显示,分离自三文鱼的单核细胞增生李斯特菌的血清型主要是1/2a、1/2b和4b型,分别占分离菌株的85%,6%和6%。结论首次对分离自挪威三文鱼的单核细胞增生李斯特菌进行血清分型,所分离的菌株中97%是引起人类李斯特菌病的菌株。     

两种方法鉴定单核细胞增生李斯特氏菌比较研究

<正>单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病病原菌,被列为目前4大食源性致病菌之一,存在于肉类、蛋类、禽类、海产品及即食食品等,对该菌的检测多年来沿用传统的分离培养生化鉴定。本实验室通过经传统方法结合API-Listeria与miniVIDAS检测技术对一定量菌株作比较,结果miniVIDAS检测技术更加快速、简便、特异、灵敏,可用于食源性突发公共卫生事件及大批量样品中致病菌的快速鉴定,是对传统方法的有效补充。     

五种选择性培养基检测铜绿假单胞菌效果比较

目的确定分离检验铜绿假单胞菌最适选择性培养基。方法依照GB 4789.28-2013分别对五种选择性培养基进行初步评价并参照GB/T 8538-2008检验人工污染样品和实际样品。结果实验表明十六烷三甲基溴化胺琼脂特异性最差;假单胞菌CFC选择性培养基选择性较弱;乙酰胺琼脂选择性强但目标菌太小,CN选择性培养基上容易出现菌落成片无法计数的情况,假单胞显色培养基选择性、特异性均优于其他四种培养基,因此适合作为定性或定量用培养基。结论与其他四种培养基相比,假单胞显色培养基最适合定性分离及定量分离。     

三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果比较

【目的】比较三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果。【方法】分别使用BairdParker培养基(BP)、兔血浆纤维蛋白原培养基(RPF)和科玛嘉葡萄球菌显色培养基(CHROMagar~(TM) Staph aureus)对标准菌株、食品分离株以及食品样品进行对比检测。【结果】三种选择性培养基对金黄色葡萄球菌的回收率均达到95%以上;RPF和CHROMagar~(TM) Staph aureus培养基的检测效率明显高于BP培养基;且两种培养基敏感性、特异性均优于传统的BP培养基。【结论】应用RPF和CHROMagar~(TM) Staph aureus培养基检测食品中金黄色葡萄球菌,较传统的BP培养基具有更好的检测效果,建议将RPF和CHROMagar~(TM) Staph aureus培养基作为可靠的分离检测培养基应用于食品中金黄色葡萄球菌的分离检测。     

单核细胞增生李斯特菌生物学研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)隶属于李斯特菌属,根据《伯杰氏鉴定细菌学手册》第9版,将李斯特菌属分为7种:单核细胞增生李斯特菌、伊氏李斯特菌、无害李斯特菌、威氏李斯特菌、利斯氏李斯特菌、格氏李斯特菌、默氏李斯特菌。原隶属于李斯特菌属的反硝化李斯特菌已成为一个新属,称为琼斯菌属。对人和动物具有致病力的有LM和伊氏李斯特菌,其余均为非致病型。此外,郭仰霖等[1]研究发现一种产H2S型李斯特菌,对动物具有高度致死性,牲畜病死率高达98·48%,对人存在潜在性威胁。1生物学特性1.1形态与染色李斯特菌(以下简称…     

单核细胞增生性李斯特菌研究进展

李斯特菌属（1isteria）现在有2个群7个种，分别是单核细胞增生性李斯特菌（L.monocytogenes，LM）（亦称产单核细胞李斯特菌）、伊氏李斯特菌（L.ivanovii）（亦称绵羊李斯特菌）、英诺克李斯特菌（L.innocua）（亦称无害李斯特菌）、韦氏李斯特菌（L.welshimei）、塞氏李斯特菌（L.seeligeri）、格氏李斯特菌（L．grayi）和莫氏李斯特菌（L．murrayi）。     

单核细胞增生李斯特菌测试片检测性能研究

目的评价单核细胞增生李斯特菌测试片的检测性能。方法将本实验室研制的单核细胞增生李斯特菌测试片与李斯特菌培养基和国家标准方法进行对比。通过接种单核细胞增生李斯特菌和10种其他标准菌株,评价了测试片敏感性和特异性。使用测试片定量检测单核细胞增生李斯特菌标准菌悬液和15个人工染菌样品,并与李斯特菌培养基进行对比,对结果进行统计分析。定性试验测试了150个自然样品,并与国家标准方法进行对比。结果测试片特异性良好;灵敏度可以达到2 cfu/ml;标准菌悬液和15个人工染菌样品定量检测结果显示,测试片与李斯特菌培养基比较差异有统计学意义(P0.05)。对150个自然样品测试结果与国家标准方法总符合率为96.00%,无假阴性。结论单核细胞增生李斯特菌测试片定量检测标准菌与李斯特菌培养基效果有差异,可用于自然样品中单核细胞增生李斯特菌的快速初筛。     

荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌

目的研制荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌。方法采用双抗夹心免疫吸附法筛选7株抗单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体,获得最佳配对抗体10E7H6和10A11。以生物素化的10A11为检测抗体,10E7H6为捕获抗体,建立了基于链霉亲和素标记荧光微球为检测探针的荧光免疫吸附法检测单核细胞增生李斯特菌。结果该方法中最佳捕获抗体浓度为10μg/mL,最佳检测抗体浓度为5μg/mL,反应最佳pH为7.4;在该条件下,单核细胞增生李斯特菌最低检测限为10~5 CFU/mL,比传统酶联免疫吸附法提高了两个数量级;与李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌有一定的交叉反应,与其他非李斯特菌属的主要致病菌无显著交叉反应。结论该方法可用于纯培养液中单核细胞增生李斯特菌的检测,也可用于李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌的免疫学快速筛查检测。     

单核细胞增生李斯特菌概况及检测技术进展

近年来世界范围内食源性致病菌污染带来的食品安全事故不断被报道,单核细胞增生性李斯特菌(LM)是常见的食源性致病菌,是有着强大致死能力的食源性致病菌之一,感染后可引起免疫缺陷患者、新生儿及孕妇出现败血症甚至死亡,严重危害人类安全及健康。我国对食源性LM的检测十分重视,作为国家食品污染物和有害因素风险监测必检微生物指标,研究食品中LM的特性及相关检测方法,探索更加快速、便捷、准确、安全的检测方法对减少食源性疾病事件,及时有效控制病原菌传播以及严重后果的发生具有重要的现实意义。     

单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法建立

[目的]建立单核细胞增生性李斯特氏菌(Lm)快速检测(PCR)方法.[方法]用PCR特异性检测方法,根据Lm的inlA、 plcA、 plcB、 hlyA基因设计4对相应的引物,检测不同浓度Lm纯培养物、金黄色葡萄球菌和乙型副伤寒沙门氏菌标准菌株的纯培养物以及Lm模拟污染的牛奶样品.[结果]Lm扩增出4个相应的产物(分别为255bp、 129bp、 260bp、 234bp),金黄色葡萄球菌和乙型副伤寒沙门氏菌菌株均未扩增出特异性的片段,其中inlA基因最低检出限为25.5μg/ml,其他3对引物最低检测限达2.55μg/ml.对模拟污染的牛奶TSBYE增菌培养液用PCR检测,只扩增出3个相应基因的产物(plcA、 plcB、 hlyA).[结论]扩增plcA、 plcB、 hlyA基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点,可用于食品的Lm的分离.     

鲜乳中单核细胞增生李斯特氏菌的检测

单核细胞增生李斯特氏菌(以下简称单增李氏菌)在自然界中广泛存在,该菌污染食品后可引起食物中毒。我们对鲜乳中单增李氏菌进行了检测。现将结果报告如下。1　材料与方法11　样品来源　鲜乳来自绍兴市各个乳品加工厂。12　增菌培养基为蛋白胨水(ｐｗ)、ＥＢ肉汤、ＬＢ1肉汤、ＬＢ2肉汤,选择性培养基为改良ＭｃＢｒｉｄｅ琼脂,以上培养基由浙江省卫生防疫站提供。微量生化培养基由浙江省军区后勤部提供。羊血琼脂平板自制。13　检验方法　增菌,鲜乳经ｐｗ及ＬＢ130℃24ｈ增菌后,取1ｍｌｐｗ培养物转种于50ｍｌＥＢ增菌液中,另取1ｍｌＬＢ1培…     

深圳南山区食品中单核细胞增生李斯特菌检测

目的了解各类食品中单核细胞增生李斯特菌的污染情况。方法以GB/T4789.30-2003方法为基础,分离培养改用PALCAM培养基,生化鉴定改用API生化试剂条,结合VIDS免疫荧光或实时荧光PCR等试验进行确证。结果从生肉及水产品中共检出5株。结论PALCAM-Listeria分离培养基和API Listeria生化鉴定试剂条在细菌的分离及鉴定中起关键作用,实时荧光PCR和VIDS试验从基因学和免疫学上确证。     

李斯特菌选择性增菌培养分离比较研究

近20年，单核细胞增多性李斯特菌(L．monocytogenes，Lm)被认为是危害公共卫生和食品行业一种重要的人畜均可感染的致病菌。目前Lm的快速检测方法有PCR、ELISA、核酸探针等。但当样品中的Lm数量低手10^2cfu／g，或由于受生产、包装、贮运等条件影响。导致Lm的毒力缺失或变异、核糖体退化、酶活性减弱等，均可限制快速检测食品中Lm。因此要准确检出Lm.就要有效地将样品中少量或受损的李斯特菌进行增菌复苏。本文对欧洲通用的荷兰食品监察局(NGFIS)的PALCAM肉汤方法进行改良，并与美国食品药品管理局(FDA)方法和国标法进行比较，以便于食品和环境样品中李斯特菌的增菌分离。