大鼠原代肝细胞分离培养的实验研究

目的:探讨胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞及培养的可行性.方法:取10只SD大鼠,按照改良Seglen原位两步胶原酶灌流法分离培养原代肝细胞.以SD大鼠作为肝细胞供体,采用Ⅳ型胶原酶经门静脉灌注,下腔静脉封闭保留胶原酶消化分离肝细胞,经200目筛过滤,滤液以200 r/min离心3～5 min,重复3次,纯化肝细胞.台盼蓝拒染实验检测分离细胞活性.将10只SD大鼠分离得到的肝细胞混合,稀释50倍后接种于包被有鼠尾胶原的培养皿或培养板中,倒置显微镜下观察分离肝细胞的形态特征,糖原染色法(PAS法)鉴定分离肝细胞,MTT法测定肝细胞在培养不同时期的增殖情况.结果:平均每只大鼠肝脏分离获得(1.8±0.14) ×108/mL肝细胞,细胞活率＞85％.肝细胞内因有大量的糖原颗粒,经PAS染色后被染成红色.MTT实验结果表明在培养的第八天肝细胞增殖达到峰值,培养的第九天细胞活力开始下降.结论:采用胶原酶经肝门静脉灌流分离肝细胞是一种简单、高效的获得肝细胞的方法.     

对巨幼细胞性贫血和再生障碍性贫血有核红细胞过碘酸—雪夫染色分析

糖原是在体内的重要贮存形式 ,是细胞代谢的能量来源 ,与过碘酸—雪夫 (PAS)试剂反应形成紫红色的染料沉积于含糖原的细胞质中 ,过去理论上认为巨幼细胞性贫血(巨幼贫 )和再生障碍性贫血 (再障 )幼红细胞 PAS染色为阴性 ,我们经过对 5 0例巨幼贫和 12例再障做 PAS染色分析 ,发现两者均有阳性反应。1　资料和方法1.1　临床资料 :为 1998年 6月至 2 0 0 1年 8月我院住院的初诊患者 ,经过骨髓细胞学分析 ,血清叶酸、B12测定并用叶酸、B12治疗后治愈的巨幼贫患者 5 0例 ;经过骨髓细胞学分析、骨髓活检等确诊的再障患者 12例 ;经过骨髓细胞…     

胃幽门螺杆菌改良Giemsa染色法

我们用改良Giemsa染色法显示胃幽门螺杆菌(HP)取得满意效果,现将方法介绍如下。 材料与方法 1.材料为我院因上消化道症状接受胃镜检查的60例患者的胃粘膜活检标本。 2.方法(1)标本处理:用10%福尔马林固定,梯度乙醇脱水,石腊包埋,常规切片厚4μm,HE染色1张,留2张白片做特染。(2) 2% Giemsa。试剂配制:Giemsa 2g蒸馏水100ml。(3)染色步骤:石腊切片常规脱脂至水,入2%　Giem-sa液染30分,自来水冲3～5分,迅速入纯酒精内脱水。二甲苯透明,树胶封固。(4)60例胃镜标本同时做快速尿素酶检测和革兰氏染色,后者做为对照。 结果 本组60例胃粘膜活检…     

PAS组织化学染色的几点体会

过碘酸雪夫反应（PAS）染色是一种常见的组织化学染色方法，病理科常将其用于组织中多糖、脂质、淀粉样物、软骨、霉菌、脑垂体等的染色。例如，PAS染色可将组织中的黏多糖类物质染成樱桃红色，从而判定肿瘤细胞是否分泌糖原，并推断出肿瘤细胞的起源及肿瘤细胞是否发生血管浸润，因此，PAS染色在病理诊断中有着重要作用。但是PAS染色常受诸多因素干扰而影响实验结果。笔者通过实践取得了较好的染色结果，现报告如下。     

信息

2005-A-87 酵母微胶囊包埋油脂新技术 日本开发成功利用酵母微胶囊包埋油脂新技术，可应用于食品与水产饲料中包埋油脂。被酵母微胶囊包埋油脂十分稳定，不会氧化，也不会泄漏；而其消化吸收性与未经包埋油脂相同，优于用其它如蛋白质等包埋微胶囊材料。酵母微胶囊制法是以啤酒或面包酵母用自溶法或其它方法制成。     

电镜样品半薄切片HE染色前脱树脂的技术处理

为了克服电子显微镜样品超薄切片的盲目性和电镜视野的局限性，我们首先对样品半薄切片，(其厚度0.5~2μm)，进行HE染色，然后光学显微镜下观察，定位，再超薄切片。由于电镜样品是由树脂包埋的，半薄切片直接采用常规的甲苯胺兰染色使观察视野呈现单一的蓝色，细胞内各种结构分辨不清，给半薄切片定位和筛选带来一定的困难，效果不理想。我们根据多年来实践经验，总结出一种半薄切片的HE染 色及染色前脱树脂处理的新方法。 1 半薄切片制备的步骤与方法 ①用上海产KCQ—2型切片机进行半薄切片或超薄切片，常规手工制做硬质玻璃刀，切出2…     

吉姆萨染液应用于塑料包埋制片的探讨

吉姆萨染液应用于塑料包埋制片的探讨福建医科大学附属第二医院柳悦莲王莉莉一、材料与方法（一）材料：骨髓穿刺标本用小镊子挑起，于干净载玻片上印片二张，用电吹风吹干，固定于９５％酒精１０ｍｉｎ。一张ＨＥ染色，另一张ＨＧＦ染色，染色前用Ｂｏｕｉｎ再固定３０ｍ...     

三种包埋材料对全口义齿蜡型形变大小的影响

目的 研究不同包埋材料对全口义齿蜡型包埋前后的形变影响.方法 采用普通石膏、超硬石膏、超硬石膏+硅橡胶三种不同包埋材料,分别包埋下颌全口义齿蜡型,按随机数字表法分三组,各8个.采用金属型盒包埋及传统水浴加热,测量四个标记点在包埋前蜡型上及热处理后甲基丙烯酸酯树脂基托上的标记点间距离并观察义齿表面光滑度.结果 普通石膏组对标记点形变量的改变最大,平均值在175～267μm,超硬石膏组与硬膏硅胶组标记点形改变量接近,AB间距离(F=3.768,P=0.040)及总均数(F=4.830,P=0.019)的改变量在三种材料间差异有统计学意义,两两比较显示,普通石膏组AB间距离及总均数的改变量均大于超硬石膏组和硬膏硅胶组,但超硬石膏组与硬膏硅胶组间差异均无统计学意义.三组间光滑度差异有统计学意义(x2=17.575,P＜0.01),硬膏硅胶组的光滑度最好.结论 普通白石膏组在包埋形变上最大且表面光滑度最差,超硬石膏组包埋的形变最小,而超硬石膏+技工用硅橡胶联合包埋组的形变与单纯超硬石膏包埋组接近且表面光滑度最好.     

一种新型的弱碱大孔型阴离子交换树脂吸着链霉素的静力学和动力学

近年来,我国研制成功了一种大孔弱碱型阴离子交换树脂,用在抗生素生产中精制链霉素。研究这种树脂吸着链霉素的过程,对发展基础理论和改进生产工艺都有一定的作用。本文初步研究了这种树脂吸着链霉素的静力学和动力学,此外,对这种树脂的理化性质以及它吸着链霉素的机制也作了一些测定和探讨。 1.树脂吸着链霉素的静力学静力学实验方法用静态法和动态法两种。静态法用树脂3克,链霉素溶液30毫     

固定剂对肾组织染色的影响

众所周知,组织的正确固定具有重要意义,选择理想的固定剂不仅能保持细胞与生活时的形态相似、成份相仿,而且对染色也有良好的、微妙的助染作用。本文用三种固定剂对人、大鼠肾组织固定后,在HE、PAS、Masson及PASM-Masson 等染色方面进行观察比较,借以探讨不同固定剂对肾组织染色的影响。     

注射用对氨基水杨酸钠细菌内毒素检验探讨

用<中国药典>2000年版附录细菌内毒素检验法对PAS进行细菌内毒素检测并建立实验方法.实验结果表明用TAL试剂对PAS最大无干扰浓度为5mg/ml,无干扰作用,提示用细菌内毒素检查法检查PAS中的内毒素是可行的.     

知母聚糖降糖作用及其机理研究

目的研究知母聚糖的降血糖作用和作用机理。方法利用葡萄糖氧化酶法测血糖 ,用蒽酮法测定肝糖原含量 ,用放射免疫法测定血浆胰岛素水平和骨骼肌对3H 2 脱氧葡萄糖摄取能力 ,并在光镜下做胰岛组织的形态学观察。结果知母聚糖能降低正常小鼠和对四氧嘧啶诱发的高血糖大鼠的血糖、增高肝糖原含量、增加骨骼肌对3H 2 脱氧葡萄糖摄取能力。结论知母聚糖具有降血糖作用 ,其降血糖作用与其增加肝糖原合成、减少肝糖原分解 ,增加骨骼肌对葡萄糖摄取等因素有关     

PAS与其分解产物间氨基酚共存时的分光光度测定法

对氨基水杨酸(PAS)及其钠盐在温度升高时迅速分解间氨基酚并释出二氧化碳。PAS的法定测定法有重氮化法、酸碱或非水滴定法。这些方法均不能区分PAS或是其分解产物。     

皮肤组织冰冻切片在直接免疫荧光法中包埋剂的改良应用

目的用普通胶水代替OCT包埋皮肤组织来制作冰冻切片,不仅降低了成本,而且所制切片与用OCT包埋剂包埋所制切片在制片质量与染色效果上无异。方法行冰冻切片时,用普通胶水代替OCT对皮肤组织起支托固定作用。结果用普通胶水包埋制作的冰冻切片,在制片质量及染色效果上均与用OCT包埋剂包埋制片无异。结论冰冻切片行直接免疫荧光法要求冰冻切片质量优良,且在制片过程中快捷、力求保持抗原的完整性。质量优良的包埋剂在制片过程中可以达到以上要求,但其价格昂贵;用普通胶水代替质量优良的包埋剂,不仅在制片质量及染色效果上与前者无异,且价格便宜,值得推广使用。     

糖原合成酶激酶3β转基因细胞模型的建立

目的建立GSK3β(糖原合成酶激酶3β)转基因细胞模型。方法RT-PCR方法扩增GSK3β基因片段;分子克隆技术构建哺乳动物细胞表达载体;脂质体法转染PC12细胞;Western blot验证稳定株;染色质染色法和流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法确定细胞接种条件。结果成功获得GSK3β融合载体;并建立GSK3β转基因细胞株;转基因组中GSK3β蛋白表达量明显高于对照组,染色质明显浓染甚至出现凋亡小体,去血清后该变化更加明显;GSK3β转基因组早期凋亡的细胞含量比对照组明显增多;确立了转基因细胞筛选化合物的接种条件。结论成功建立GSK3β转基因细胞模型。     

苯海拉明抑制对氨基水杨酸钠的胃肠道吸收

本文指出药物的相互作用可发生于药物的吸收部位。给大鼠腹腔注射苯海拉明2～25毫克/公斤体重,接着口服对氨基水杨酸(PAS)200毫克/公斤,以后隔不同时间处死动物,收集血样及部分动物的肝、肌肉、脂肪、肺、脑及肾等组织,测定PAS的浓度,另外用透析法测定PAS的血浆蛋白结合率,并在服用PAS后45分钟,检查胃肠道内PAS的存留量。结果表明,苯海拉明能降低PAS的血浓度,其作用大小与剂量成正比。注射苯海拉明25毫克/公斤体重后1小时内,PAS的血浓度显著低于对照组,但PAS的血浆蛋白结合率略高于对照组,除脂肪外,PAS在上述     

庆大霉素珠链的释放度及其治疗作用

人造树脂应用于骨科置换手术已有多年的历史,但由于局部防御机能降低,它可能导致严重感染并发症。究其原因不外空气污染,手术污染及菌血症等。1970年,Duc-hhote等曾选择性地把抗生素类药物加入到树脂中,使其在埋植组织周围缓慢释放,以防止和治疗术后骨感染,临床实验表明这种局部用抗生素新剂型可以大大降低术后感染     

PAS法对动脉粥样硬化的临床研究

目的对采用PAS法治疗动脉粥样硬化的临床治疗效果进行分析研究。方法抽取存在动脉粥样硬化病变的临床患者病例88例,并将这88例患者分成A、B两组。分别采用拜阿司匹林与阿托伐他汀和PAS法进行治疗。结果通过对两组患者的临床疗效进行比较发现,B组患者显著优于A组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用PAS法对患有动脉粥样硬化的患者进行治疗的临床效果非常明显。     

五环三萜抑制A549细胞生长与促进糖原累积作用的相关性研究

目的:研究五环三萜化合物(齐墩果酸和山楂酸)对人肺腺癌A549细胞的生长是否有抑制作用并对其可能的作用机制即抑制糖原磷酸化酶进行探讨。方法:用MTT法测定不同浓度的化合物对A549细胞生长的抑制作用;通过测定细胞中的糖原含量的变化证实化合物抑制了细胞中糖原磷酸化酶的活性。结果:MTT法测得化合物对A549细胞生长具有抑制作用。同时,测得齐墩果酸和山楂酸对A549细胞的糖原磷酸化酶具有抑制活性,其IC50分别是5.98和4.01μmol.L-1。进一步经化合物处理后的细胞内糖原含量呈现剂量依赖性增加。结论:齐墩果酸和山楂酸具有抑制A549细胞生长的作用,其作用可能是通过抑制细胞内的糖原磷酸化酶活性而实现的。     

防溢液画蜡笔的制作和使用

借鉴中国蜡染艺术用蜡壶将熔蜡画在织物上防染原理 ,设计了防溢液画蜡笔 ,用于组化或免疫组化染色 ,效果满意 ,介绍如下。1　材料2 0～ 2 5Ｗ电烙铁一把 ,一段细铁丝(10ｃｍ) ,蘸水笔尖一个 ,包埋用石蜡。组装方法 :将蘸水笔尖附于电烙铁头 ,用铁丝缠拧紧。2　使用方法2 .1　将画蜡笔插电源烧热 (5～ 10ｍｉｎ) ,备包埋用石蜡一块。2 .2　免疫组化染色切片常规脱蜡至水 ,行微波或其它抗原修复。2 .3　待抗原修复液温度降至室温 ,用烧热的画蜡笔的笔尖侧缘刮取石蜡 ,笔尖下倾 ,熔蜡流注笔尖 ,即可在载玻片上的组织切片周围依形画出 1ｍｍ粗细…